全 文 ：西北林学院学报 ２０１６，３１（３）：１６５～１６９
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
　　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－７４６１．２０１６．０３．２８
双片苣苔的离体培养
　收稿日期：２０１５－１２－０２　修回日期：２０１６－０１－１６
　基金项目：广东省林业科技创新项目（２０１５ＫＪＣＸ０３７）；绍兴文理学院校级项目（２０１４ＬＧ１０１８）；绍兴文理学院元培学院院级项目
（Ｚ２０１５００１４）。
　作者简介：罗　洁，女，硕士，研究方向：植物应用和植物造景。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｊ２６ｗｌｘｙ＠１６３．ｃｏｍ
＊通信作者：杨　国，男，硕士，研究方向：植物资源开发。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｇｅｌｉｔｅ＠１６３．ｃｏｍ
罗　洁１，杨　国２＊，陈红锋３
（１．绍兴文理学院 元培学院，浙江 绍兴３１２０００；２．绍兴文理学院 生命科学院，浙江 绍兴３１２０００；
３．中国科学院 华南植物园，广东 广州５１０６５０）
摘　要：以珍稀植物双片苣苔（Ｄｉｄｙｍｏｓｔｉｇｍａ　ｏｂｔｕｓｕｍ）叶片和叶柄为外植体，以 ＭＳ为基本培养
基，研究了外植体的消毒方式，不同生长调节剂及其组合对不定芽诱导及生根的影响，探讨不同光
照、ｐＨ、叶片放置方式等因素对不定芽诱导的影响。结果表明：适量的链霉素有利于外植体消毒，
叶片诱导不定芽发生的适宜培养基为ＭＳ＋２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＴＤＺ＋０．２μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＮＡＡ，叶柄诱导
不定芽发生的适宜培养基为 ＭＳ＋２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＴＤＺ＋１．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＢＡ，ｐＨ为５．６～６．０，叶
背面朝下接种有利于叶片不定芽的诱导发生，适当增强光照有利于芽苗的生长；适宜生根培养基为
１／２ＭＳ＋２μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＩＢＡ＋２μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＮＡＡ，生根率达１００％，根系生长较好；试管苗移栽到腐
殖质和黄泥（２∶１）的混合基质中，置于半荫温室中，成活率达１００％。
关键词：双片苣苔；珍稀植物；离体快繁；组织培养
中图分类号：Ｓ７２２．８９　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００１－７４６１（２０１６）０３－０１６５－０５
Ｒａｐｉｄ　Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｏｆ　Ｄｉｄｙｍｏｓｔｉｇｍａ　ｏｂｔｕｓｕｍ
ＬＵＯ　Ｊｉｅ１，ＹＡＮＧ　Ｇｕｏ２＊，ＣＨＥＮ　Ｈｏｎｇ－ｆｅｎｇ３
（１．Ｓｈａｏｘｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｙｕａｎｐｅｉ，Ｓｈａｏｘｉｎｇ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ３１２０００　Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｈａｏｘｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，
Ｓｈａｏｘｉｎｇ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ３１２０００，Ｃｈｉｎａ；３．Ｓｏｕｔｈ　Ｃｈｉｎａ　Ｂｏｔａｎｉｃａｌ　Ｇａｒｄｅｎ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ５１０６５０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｌｅａｖｅｓ　ａｎｄ　ｐｅｔｉｏｌｅｓ　ｏｆ　Ｄｉｄｙｍｏｓｔｉｇｍａ　ｏｂｔｕｓｕｍ ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｆｏｒ　ｒａｐｉｄ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ
ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｕｌｔｕｒａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｗｅｒｅ　ｅｘａｍｉｎｅｄ，ｓｕｃｈ　ａｓ　ｉｌｕｍｉ－
ｎａｔｉｏｎ，ｐＨ，ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ，ｐｌａｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ，ｅｘｐｌａｎｔ　ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｉｎ－
ｄｕｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ　ｗａｓ　ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ　ｔｏ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ＭＳ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ
ｗｉｔｈ　２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＴＤＺ　ａｎｄ　０．２μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＮＡＡ　ｗａｓ　ｍｏｓｔ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｓｈｏｏｔ　ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｆ
ｅｘｐｌａｎｔｓ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ＭＳ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＴＤＺ　ａｎｄ　１．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＢＡ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｆｏｒ
ｓｈｏｏｔ　ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｆｒｏｍ　ｐｅｔｉｏｌｅ　ｅｘｐｌａｎｔｓ，ｌｅａｆ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｐｌａｃｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｄａｘｉａｌ　ｓｉｄｅ　ｉｎ　ｃｏｎｔａｃｔ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｍｏｒｅ
ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｓｈｏｏｔｓ．ＭＳ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＴＤＺ　ａｎｄ　０．２μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＮＡＡ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｆｏｒ
ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ，ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｐＨ　ｗａｓ　５．６－６．０，ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ
ｗａｓ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｂｙ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｌｉｇｈｔ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ．Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔｓ　ｗａｓ　ａｃｈｉｅｖｅｄ　ｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｎ　ｈａｌｆ－ｓｔｒｅｎｇｔｈ　ＭＳ
ｓａｌｔｓ　ａｎｄ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ　ｗｉｔｈ　２μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＩＢＡ　ａｎｄ　２μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＮＡＡ．Ｐｌａｎｔｌｅｔｓ　ｗｅｒｅ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ　ｔｏ　ｐｏｔ－
ｔｉｎｇ　ｍｉｘｔｕｒｅ（１∶２，ｙｅｌｏｗ　ｓｏｉｌ∶ｈｕｍｕｓ）ｉｎ　ｈａｌｆ－ｓｈａｄｏｗ　ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ　ｗｉｔｈ　ａｂｏｕｔ　１００％ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｄｉｄｙｍｏｓｔｉｇｍａ　ｏｂｔｕｓｕｍ；ｒａｒｅ　ｐｌａｎｔ；ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｒａｐｉｄ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ
　　苦苣苔科（Ｇｅｓｎｅｒｉａｃｅａｅ）植物大多株型秀美、花
色艳丽，有较高观赏价值，国外已选育出大量优秀观
赏花卉，如大岩桐属、非洲堇属、芒毛苣苔属等，在世
界各地得到广泛的应用［１］，中国野生的苦苣苔科资
源极为丰富，但开发利用较少。双片苣苔（Ｄｉｄｙ－
ｍｏｓｔｉｇｍａ　ｏｂｔｕｓｕｍ）是双片苣苔属多年生草本，叶片
正面深绿，叶背紫红色，花冠蓝紫色略带些黄白色，
开花时异常美丽，有极高的观赏价值，在广东、福建
等地有少量分布，生境受人为干扰比较严重，为我国
易危种植物［２］。双片苣苔属为中国特有属，对研究
苦苣苔科系统演化与亲缘关系有较大的科学价
值［３］。双片苣苔野外种群数量少，种子较小，而且分
布在贫瘠山地中，自然条件下自我更新能力较差。
本研究以双片苣苔叶片为材料，研究该植物的组织
培养和植株再生体系，旨在为该物种的大规模繁殖、
保护和利用奠定基础。
１　材料与方法
１．１　试验材料及培养条件
供试材料双片苣苔小苗采集于广东省南昆山
（１１３°９１′Ｅ、２３°６４′Ｎ）。以 ＭＳ［４］为基本培养基，附加
蔗糖３０ｇ·Ｌ－１，琼脂５．５ｇ·Ｌ－１，ｐＨ　５．８，附加多
种植物生长调节剂，所有培养基均在１２１℃条件下
高压灭菌１５ｍｉｎ，培养室温度（２５±１）℃，光照４０
μｍｏｌ·ｍ
－２·ｓ－１，光周期１２ｈ·ｄ－１。
１．２　试验方法
１．２．１　外植体消毒　取带叶柄的叶片为外植体，用
软毛刷轻刷叶面，自来水洗净后，在超净工作台上用
７５％乙醇擦拭３０ｓ，再用０．１％ ＨｇＣｌ２ 溶液分别消
毒５、６ｍｉｎ与７ｍｉｎ，２％ ＮａＣｌＯ溶液消毒１５ｍｉｎ，
外植体用２％ ＮａＣｌＯ溶液消毒１５ｍｉｎ，无菌水清洗
干净，再用１％链霉素（重庆永川农药有限公司）溶
液消毒２０ｍｉｎ（表１），无菌水冲洗５次，无菌纸将水
吸干，将叶片接种至不含植物生长调节剂的 ＭＳ培
养基上。
１．２．２　不定芽的诱导和生长　以无污染的双片苣
苔叶片和叶柄为外植体，将叶片剪成０．７ｃｍ×０．７
ｃｍ的小块，叶柄长１ｃｍ，依次接入９种诱导培养基
（表１）：ＭＳ为对照，２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＢＡ （６－Ｂｅｎｚｙ－
ｌａｄｅｎｅｉｎｅ），２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＴＤＺ （Ｔｈｉｄｉａｚｕｒｏｎ），
２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＫＴ（Ｋｉｎｅｔｉｎ），２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＴＤＺ
＋０．２μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＮＡＡ，２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＢＡ＋０．２
μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＮＡＡ，２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＫＴ＋０．２μｍｏｌ·
Ｌ－１　ＮＡＡ，２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＴＤＺ＋１．０μｍｏｌ·Ｌ
－１
ＢＡ，２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＢＡ＋１．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＴＤＺ（表
２）。培养３０ｄ后，观察外植体生长状况，统计不定
芽诱导情况及每个外植体诱导的芽数量。
芽诱导率＝分化出芽的外植体数／未污染的外
植体总数×１００％ （１）
每处理统计２０个外植体，重复３次。将较大的
丛芽切割成小丛芽（４～６芽·丛－１），接入含０．５
μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＢＡ的 ＭＳ培养基中继代培养和生长。
１．２．３　生根和移栽　选取高３ｃｍ左右的芽苗，将
基部清洗干净，接入不同的生根培养基，１／２ＭＳ（对
照），１／２ＭＳ＋２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＩＢＡ（Ｉｎｄｏｌｅ－３－ｂｕｔｙｒ－
ｉｃ　ａｃｉｄ），１／２ＭＳ＋２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＮＡＡ （α－Ｎａｐｈ－
ｔｈａｌｅｎｅａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ），１／２ＭＳ＋２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＩＢＡ＋
２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＮＡＡ。２０ｄ后观察结果，记录植株
生长状况并计算生根率。将生根的小苗移栽至遮阴
温室的混合基质（腐殖质∶黄泥＝２∶１）中，每４ｄ
浇１次水，３０ｄ后观察幼苗生长状况，并计算成活
率。
１．２．４　不同光照强度对不定芽诱导和生长的影响
　以 ＭＳ＋２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＴＤＺ＋０．２μｍｏｌ·Ｌ
－１
ＮＡＡ为基本培养基，叶片外植体培养瓶分别放入
光照为０、４０μｍｏｌ·ｍ
－２·ｓ－１、７０μｍｏｌ·ｍ
－２·
ｓ－１、１３０μｍｏｌ·ｍ
－２·ｓ－１的培养室，培养３０ｄ后，
观察不定芽的生长状况，统计不定芽的诱导率和个
数。
１．２．５　不同ｐＨ对双片苣苔不定芽诱导和生长的
影响　以 ＭＳ＋２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＴＤＺ＋０．２μｍｏｌ·
Ｌ－１　ＮＡＡ为基本培养基，叶片外植体分别接种在
ｐＨ５．２、５．４、５．６、５．８、６．０、６．２、６．４与６．６的诱导
培养基，培养３０ｄ后，观察不定芽的生长状况，统计
不定芽的诱导率和个数。
１．２．６　叶片不同放置方式对不定芽诱导的影响　
以 ＭＳ＋２．０μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＴＤＺ＋０．２μｍｏｌ·Ｌ
－１
ＮＡＡ为培养基，叶片背面贴向培养基和叶正面贴
向培养基２种方式进行培养，培养２０ｄ与４０ｄ后，
统计不定芽的诱导率和数量（表５）。
１．３　数据分析
每处理２０个外植体，重复３次。数据分析和数
据处理采用Ｅｘｃｅｌ　２００７和ＳＰＳＳ１６．０软件，同列数据
后不同小写英文字母表示经ＬＳＤ法检验差异显著（ｐ
＜０．０５），百分数的差异显著性分析经过反正弦转换。
２　结果与分析
２．１　不同消毒处理对外植体的影响
０．１％ ＨｇＣｌ２ 溶液消毒的外植体污染率随消毒
时间的增加而降低，但成活率均较低，最高仅为
２．５％，可见双片苣苔叶片和叶柄对 ＨｇＣｌ２ 溶液较
敏感，容易致死。当单独使用２％ ＮａＣｌＯ溶液消毒
１５ｍｉｎ时，成活率显著提高，成活率达５４．８％，但污
染率为５１．２％，２％ ＮａＣｌＯ溶液和１％链霉素溶液
结合使用时能减低外植体的污染率，保证较高成活
率，成活率约为６３．５％（表１）。
６６１ 西北林学院学报 ３１卷　
表１　不同消毒处理对外植体消毒效果的影响
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｓｈｏｏｔ　ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｆｒｏｍ
ｌｅａｆ　ａｎｄ　ｐｅｔｉｏｌｅ　ｅｘｐｌａｎｔｓ
消毒处理 污染率／％ 成活率／％
０．１％ ＨｇＣｌ２溶液５ｍｉｎ　 ８８．９　 １．１ｂ
０．１％ ＨｇＣｌ２溶液６ｍｉｎ　 ６５．５　 ２．５ｂ
０．１％ ＨｇＣｌ２溶液７ｍｉｎ　 ２０．０　 １．７ｂ
２％ ＮａＣｌＯ溶液１５ｍｉｎ　 ５１．２　 ５４．８ａ
２％ ＮａＣｌＯ溶液１５ｍｉｎ＋１％链
霉素溶液２０ｍｉｎ
２４．６　 ６３．５ａ
２．２　不定芽的诱导和生长
叶片和叶柄外植体在不含激素的 ＭＳ对照培养
基上培养３０ｄ后，不定芽的诱导率为４６．３％，平均
每个外植体产生不定芽１２．６个；单独使用ＴＤＺ培
养２０ｄ后，叶柄愈伤化，有少许不定芽在绿色的愈
伤组织表面形成（图２Ａ），当２μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＴＤＺ和１
μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＢＡ结合使用时，叶柄不定芽诱导效果
最明显，诱导率达８５．９，每个外植体产生不定芽
２３．０个（表２）；当 ＭＳ培养基中添加一些植物生长
激素时，叶片不定芽的诱导率都得到大幅提高，细胞
分裂素（ＴＤＺ、ＢＡ、ＫＴ）和生长素ＮＡＡ结合使用比
其单独使用效果更佳，２μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＴＤＺ和０．２
μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＮＡＡ结合利于不定芽的诱导，平均每
个外植体产生不定芽达４４．６个（图２Ｂ）；将大的丛
芽切割成小丛芽（４～５芽·丛－１），接入含０．５μｍｏｌ
·Ｌ－１　ＢＡ的 ＭＳ培养基继代，２０ｄ后，芽苗长大（图
２Ｃ），可用于生根培养。
表２　不同生长调节剂对双片苣苔不定芽诱导的影响
Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ　ｏｎ　ｓｈｏｏｔ　ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｆ　ａｎｄ　ｐｅｔｉｏｌｅ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｄ．ｏｂｔｕｓｕｍ
植物生长调节剂
／（μｍｏｌ·Ｌ－１）
叶片外植体
诱导率／％ 平均芽数／外植体
叶柄外植体
诱导率／％ 平均芽数／外植体
０　 ４６．３ｂ １２．６ｄ １９．４ｃ ４．４ｄ
ＫＴ２．０　 ８４．８ａ ２３．７ｃ ６４．７ｂ ８．３ｃ
ＢＡ２．０　 ９２．７ａ ２７．３ｃ ７９．８ａ １５．４ｂ
ＴＤＺ２．０　 ９２．９ａ ２８．６ｃ ８２．６ａ １６．８ｂ
ＢＡ２．０＋ＮＡＡ０．２　 ９３．４ａ ３６．３ｂ ８０．９ａ １５．７ｂ
ＫＴ２．０＋ＮＡＡ０．２　 ９４．０ａ ２８．１ｃ ７８．１ａ １５．０ｂ
ＴＤＺ２．０＋ＮＡＡ０．２　 ９８．４ａ ４４．６ａ ８４．７ａ １７．４ｂ
ＢＡ２．０＋ＴＤＺ１．０　 ９８．２ａ ３５．６ｂ ７９．２ａ １６．８ｂ
ＴＤＺ２．０＋ＢＡ１．０　 ９８．９ａ ３６．９ｂ ８５．９ａ ２３．０ａ
２．３　不同生长调节剂对生根与移栽的影响
对照生根率为７１．６％，生根系数仅４．９；添加适
量的生长素的生根培养基能提高双片苣苔的生根率
和生根系数，２μｍｏｌ·Ｌ
－１　ＩＢＡ 和２μｍｏｌ·Ｌ
－１
ＮＡＡ结合使用，生根效果最好，生根１１．９条，根系
较健壮（表３、图２Ｄ）。将苗高３ｃｍ以上的生根幼
苗移栽到腐殖质和黄泥（２∶１）的混合基质中，置于
半荫温室里面，６０ｄ后，成活率达１００％（图２Ｅ）。
表３　双片苣苔生根培养
Ｔａｂｌｅ　３　Ｒｏｏｔ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄ．ｏｂｔｕｓｕｍａｆｔｅｒ　２０－ｄａｙ　ｃｕｌｔｕｒｅ
生长素
／（μｍｏｌ·Ｌ－１）
生根
／％
生根数／外植体
０　 ７１．６ｂ ４．９ｃ
ＩＢＡ２．０　 １００．０ａ ８．２ｂ
ＮＡＡ２．０　 １００．０ａ ７．６ｂ
ＩＢＡ２．０＋ＮＡＡ２．０　 １００．０ａ １１．９ａ
２．４　不同光照、ｐＨ、放置方式对双片苣苔叶片不定
芽诱导和生长的影响
　　在黑暗环境中，不定芽的诱导数量较少，仅为
２０．８，且不定芽发育不良，多为黄化苗；当光照强度
增加时，不定芽诱导率和平均不定芽数量也随之增
加，但并无显著性差异，但当光照为１３０μｍｏｌ·ｍ
－２
·ｓ－１时，芽苗生长状况最佳（表４）。但光照的强弱
对不定芽诱导率和数量影响不大，适当增强光照，具
有壮苗的效果。
表４　不同光照对双片苣苔叶片不定芽发生的影响
Ｔａｂｌｅ　４　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｌｉｇｈｔ　ｏｎ　ｓｈｏｏｔ　ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｆ
ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｄ．ｏｂｔｕｓｕｍ
光量子数
／（μｍｏｌ·ｍ－２
·ｓ－１）
诱导率
／％
平均芽数
／外植体
生长状况
０．０　 ８７．７ａ ２０．８ｂ 芽苗发育不良，黄化
４０．０　 ９４．０ａ ４３．２ａ 芽苗较细，叶片较小，黄绿色
７０．０　 ９６．５ａ ４５．９ａ 芽苗中等，叶片中等，黄绿色
１３０．０　 ９４．５ａ ４７．５ａ 芽苗粗壮，叶片较大，青绿色
随着诱导培养基的ｐＨ 升高，不定芽的诱导率
和不定芽数量总体呈先上升后下降的趋势，当ｐＨ
为５．６时，不定芽的诱导率和数量达到最大值，偏酸
性的培养基更利于双片苣苔不定芽的诱导。所以，
当培养基ｐＨ为５．６－６．０时，有利于不定芽的发生
（图１）。
７６１第３期 罗　洁 等：双片苣苔的离体培养
图１　不同ｐＨ对双片苣苔叶片不定芽诱导的影响
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐＨ　ｏｎ　ｓｈｏｏｔ　ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｆ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｄ．ｏｂｔｕｓｕｍ
注：Ａ：叶柄在 ＭＳ＋２．０μｍｏｌ·Ｌ－１　ＴＤＺ＋１．０μｍｏｌ·Ｌ－１　ＢＡ培养基上培养３０ｄ后，愈伤组织形成的不定芽；Ｂ：叶片在 ＭＳ＋２．０μｍｏｌ·Ｌ－１
ＴＤＺ＋０．２μｍｏｌ·Ｌ－１　ＮＡＡ培养基上培养３０ｄ后，叶表面形成的叶状不定芽；Ｃ：不定芽在 ＭＳ＋０．５μｍｏｌ·Ｌ－１　ＢＡ培养基上增殖和生长；
Ｄ：在１／２ＭＳ＋２．０μｍｏｌ·Ｌ－１　ＩＢＡ＋２．０μｍｏｌ·Ｌ－１　ＮＡＡ培养基上培养２０ｄ生根；Ｅ：移栽到混合基质（腐殖质∶黄泥土＝２∶１）中，２个月后
长大的植株，标尺３ｍｍ。
图２　双片苣苔（Ｄ．ｏｂｔｕｓｕｍ）叶片和叶柄组织离体快繁
Ｆｉｇ．２　Ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｖｉａ　ｌｅａｆ　ａｎｄ　ｐｅｔｉｏｌｅ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｄ．ｏｂｔｕｓｕｍ
　　双片苣苔叶片不同的放置方式对不定芽诱导具
一定影响，叶背面向下接种培养时，平均每个外植体
不定芽的数量为３５．８，而叶正面向下接种培养时，
平均每个外植体不定芽的数量仅为２３．２，差异较显
著（表５）。
３　结论与讨论
苦苣苔科植物离体培养时可以使用多种不同外
植体，大岩桐［５］和非洲紫罗兰［６］以叶片和叶柄外植
表５　不同叶片放置方式对不定芽诱导的影响
Ｔａｂｌｅ　５　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｌｅａｆ　ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｓｈｏｏｔ　ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ
ｏｆ　Ｄ．ｏｂｔｕｓｕｍ
外植体
放置方式
培养２０ｄ
诱导率／％
平均芽数
／外植体
培养４０ｄ
诱导率／％
平均芽数
／外植体
叶正面朝下 ８５．７ａ ３５．８ａ ９８．７ａ ５５．８ａ
叶背面朝下 ８４．０ａ ２３．２ｂ ９５．５ａ ３６．２ｂ
体、海角樱草［７］以叶片和花瓣为外植体，通过不定芽
８６１ 西北林学院学报 ３１卷　
或体细胞胚诱导都建立了离体快繁体系。本研究发
现双片苣苔叶片外植体的诱导系数较叶柄的高，叶
片是较适宜的外植体。
双片苣苔叶片和叶柄有较多柔毛，不易消毒，如
何建立无菌体系成为了本试验的关键。使用适量的
抗菌素溶液辅助消毒，效果较好。在芍药［８］和红
掌［９］的外植体消毒中也有类似的发现。
外植体的不同放置方式对不定芽或体细胞胚的
诱导有较大的影响，Ｔ．Ｏｒｌｉｋｏｗｓｋａ［１０］等研究发现变
叶木茎段腋芽茎尖朝下贴着培养基培养时能有效地
提高不定芽的增殖系数，特洛亚枳橙和越桔的茎段
平放在培养基上培养时，不定芽的增殖系数更
高［１１－１２］，西红柿［１３］、大豆［１４］和向日葵［１５］子叶外植体
的放置方式不同，其不定芽和体细胞胚的诱导率也
不一样。本研究发现双片苣苔叶正面向下接种培养
时能增加不定芽的增殖系数。报春苣苔的叶片离体
快繁中也有相同的发现［１６］。
黑暗条件下双片苣苔的不定芽诱导率低，生长
状况差，适当增强光照，有壮苗的效果。可见，光照
的强弱在试管苗诱导和生长过程中起着重要的作
用，Ｗ．Ｐ．Ｇｏｗ［１７］发现光照对蝴蝶兰体细胞胚发生
和生长着至关重要，蝴蝶兰叶片外植在黑暗条件下
培养６０ｄ，有利于体细胞胚的诱导和生长，但在一直
有光的条件下，体细胞胚诱导难度大，而且诱导出的
体细胞胚最终褐化死亡；尤海波［１８］发现低光照增加
蝴蝶兰试管苗对蔗糖的吸收量；王华［１９］的研究表
明，弱光条件有利于葡萄试管苗根系和地上部分生
长，可增强试管苗光合自养能力，移栽后更易成活。
双片苣苔幼苗生长速度较快，对土壤的要求不
高，耐阴性好，是理想的园林地被植物，本研究为双
片苣苔在园林中的应用奠定了一定的基础。
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９６１第３期 罗　洁 等：双片苣苔的离体培养