全 文 ：续表 3
菌株编号
测试菌
大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 烟草赤星病菌 小麦赤霉病菌 白菜黑斑病菌 黄瓜枯萎病菌 芍药炭疽病菌
ES07 + － － － + + － －
ES08 + + + + － － － － －
ES09 + + + + － － +
ES10 + + + － － + + － +
ES11 + + － + － － +
ES12 + + + + + + + + + + + + +
ES14 + － － － － － +
ES16 + + + + － + + － －
ES17 + + + + － － + － －
ES18 + + － + － － + +
ES19 + － － － － + －
ES21 + + + － － + + －
CK1 － － － － － － －
CK2 － － － － － － －
① E表示杜仲，R表示根部，L表示叶部，S表示茎部;②“ －”:Φ ＜ 6 mm;“ +”:6 ＜Φ ＜10 mm;“ + +”:10 mm ＜Φ ＜16 mm;“ + + +”:16 mm ＜Φ ＜ 26 mm;“ + +
+ +”:Φ ＞ 26 mm
4 讨论
在内生真菌的研究中，比较重要的一个问题就是植物材料表
面消毒技术，本研究参照文献报道的方法，通过控制杀菌剂浓度
及处理时间来保证材料表面消毒的彻底性、最大程度排除染菌的
可能，并设置对照以确保所分离的真菌均来自杜仲组织内部。
本试验中，虽然筛选出了大量的高活性菌株，但是，这些菌株
未经菌种选育和发酵条件优化，其次生代谢产物的产量较低，达
到商业化生产水平还有一定的差距，所以，内生真菌发酵产物产
量的大幅提高，是今后急待解决的重要问题。
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收稿日期:2010-03-27; 修订日期:2010-10-30
基金项目:广西壮族自治区自然科学基金(No． 0229044) ;广西教育厅科研项目(No．［2001］)401;广西中医学院重点科研项目(No． ZD2004010)
作者简介:韦建华(1972 －)，女(壮族)，广西都安人，现任广西中医学院药学院讲师，硕士学位，主要从事中药、民族药的有效成分与质量标准研究工作．
* 通讯作者简介:甄汉深(1956 －)，男(汉族)，广东台山人，现任广西中医学院药学院教授，博士研究生导师，主要从事中药和药物分析教研工作．
匙羹藤有效成分牛弥菜醇 A急性毒性及降糖作用研究
韦建华1，丘 琴1，甄汉深1* ，陈 君2，卢汝梅1
(1． 广西中医学院·药学院，广西 南宁 530001; 2． 柳州高等医学专科学校，广西 柳州 545006)
摘要:目的 研究牛弥菜醇 A降血糖的药理作用。方法 牛弥菜醇 A 按 100，200，400 mg·kg －1连续灌胃 14d 后，观察其
对糖尿病小鼠血糖和正常小鼠的体质量、血糖、糖耐量的影响。结果 牛弥菜醇 A 能明显降低四氧嘧啶性糖尿病小鼠和
肾上腺素性糖尿病小鼠的血糖值(P ＜ 0． 01) ;较高剂量对正常小鼠的血糖和体重有一定的影响(P ＜ 0． 05) ;能增强正常
小鼠的葡萄糖耐受能力，耐受时间在 1h左右;牛弥菜醇 A的 MTD大于 750 mg·kg －1，相当于临床成人日用药的 430． 29
倍。结论 牛弥菜醇 A对高血糖小鼠有显著的降血糖作用。
关键词:匙羹藤; 牛弥菜醇 A; 急性毒性; 降糖作用
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 03． 014
中图分类号:R962 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2011)03-0554-03
Experimental Study on Hypoglycemic Activity and Acute Toxicity of Conduritol A of
Stems from Gymnema sylvrstre
WEI Jian-hua1，QIU Qin1，ZHEN Han-shen1* ，CHEN Jun2，LU Ru-mei1
(1． Guangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanning 530001 China;2． Liuzhou Medical College Li-
uzhou 545006，China)
Abstract:Objective To investigate the hypoglycemic effect of conduritol A from stems of Gymnema sylvestre． Methods Condur-
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itol A (400、200、100 mg·kg －1)was admistered intragastrically for 14 days and its effects on blood glucose，weight and glucose
tolerance in diabetic mice and normal mice were observed． Results Conduritol A could significantly decrease fasted blood glucose
in diabetic mice induced by alloxan and adrenalin (P ＜ 0． 01)． High dosage of conduritol A could decrease fasted blood glucose
and weight in normal mice (P ＜ 0． 05)． Conduritol A could improve glucose tolerance and the period was about 1 hour． The re-
sults of acute toxicity showed that MTD of conduritol A was 750 mg·kg －1，corresponding with 430． 29 times of clinical trial daily
dose． Conclusion Conduritol A has obvious hypoglycemic effet．
Key words:Gymnema sylvestre; Conduritol A; Acute toxicity; Hypoglycemic effect
牛弥菜醇 A 系从萝藦科植物匙羹藤 Gymnema sylvestre
(Retz．)Schult(简称 GS)茎中提取的一种有效成分［1，2］。现代药
理研究表明匙羹藤叶具有降血糖、降血脂、抑制甜味反应、抗龋、
抗病毒、抗过敏等作用［3，4］。从前期实验看［5 ～ 7］，匙羹藤主要降
血糖成分为匙羹藤酸和牛弥菜醇 A。本研究对匙羹藤茎活性成
分牛弥菜醇 A进行提取和分离，并在国内首次通过药理实验证
明牛弥菜醇 A急性毒性及降血糖作用。这为充分合理地利用匙
羹藤药材资源，开发抗糖尿病药物提供一定的科学依据。
1 材料与仪器
1． 1 样品 牛弥菜醇 A 由匙羹藤茎提取、分离、纯化制得，实验
时以蒸馏水配制成所需浓度。
1． 2 动物 昆明种小鼠(20 ± 2)g，雌雄兼用，SPF 级，由广西药
检所实验动物中心提供。实验动物生产许可证号:SCXK桂 2003
－ 0001。
1． 3 试剂 盐酸苯乙双胍片(降糖灵片)购自江苏林海药业有限
公司制造分公司;格列本脲片(优降糖片)购自中山市三才医药
有限公司;四氧嘧啶(alloxan)购自美国 Sigma 公司;盐酸肾上腺
素购自天津金耀氨基酸有限公司;葡萄糖(C6H12 O6·H2O)购自
广东汕头新宁化工厂;葡萄糖液体(Glu)试剂盒购自四川省迈克
科技有限责任公司。
1． 4 仪器 AE100 1 /10000 电子分析天平(日本岛津公司) ;UV
－160A紫外 －可见分光光度计(日本岛津公司) ;Agilent8453 紫
外 －可见分光光度计(安捷伦公司) ;台式低温高速离心机(美国
贝克曼库尔特公司) ;BECKMAN COULTER DU640 紫外分光光度
计(美国贝克曼库尔特公司)。
2 方法
2． 1 牛弥菜醇 A 的急性毒性试验(MTD 测定)［8，9］ 取体质量
(20 ± 2)g小鼠，共 40 只(雌、雄各半，分笼饲养)。禁食不禁水
12 h后，称重，编号，灌胃给药，24 h 内给药 2 次，间隔 6 h。观察
给药后各组小鼠外观、行为、进食、四肢活动、饮水、大小便排泄、
死亡等情况。观察 1 次 /d，连续 14 d，详细记录动物反应情况，称
体质量并计算增重率，根据总给药量推算出相当于临床用药量的
倍数。
2． 2 牛弥菜醇 A对四氧嘧啶糖尿病血糖的影响
2． 2． 1 四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的制备 正常小鼠禁食不禁水
12 h后，尾静脉注射临用前配制的四氧嘧啶生理盐水 60 mg·
kg －1，72 h后，对禁食不禁水 8 h 的小鼠眶静脉丛毛细玻管采血
0． 2 ml，待血液凝固析出血清后，4 000 r·min －1离心 15 min，取血
清 10 μl，按葡萄糖试剂盒的 GOD － POD 法测血糖值，选空腹血
糖高于 13． 00 mmol /L者用于实验［7 ～ 10］。
2． 2． 2 动物分组与给药 将合格高血糖模型的小鼠均匀分为 5
组:降糖灵阳性对照组(降糖灵 12 mg·kg －1) ;牛弥菜醇 A 高、
中、低(400，200，100 mg·kg －1)剂量组;糖尿病模型组(等容积的
蒸馏水)。另取同批体质量相近的正常小鼠作为空白对照组(等
容积的蒸馏水)。灌胃给药，1 次 /d，连续给药 14 d 后，测定各组
的空腹血糖值。
2． 2． 3 样品的采集及测定 于末次给药前小鼠禁食不禁水 8 h，
给药后继续禁食不禁水 2 h 后，眶静脉丛毛细玻管采血 0． 2 ml，
待血液凝固析出血清后，4 000 r·min －1离心 15 min，取血清 10
μl，按葡萄糖试剂盒的 GOD － POD法测空腹血糖值。
2． 3 牛弥菜醇 A对正常小鼠体质量、血糖的影响
2． 3． 1 分组与给药 取正常昆明种小鼠，50 只(雌、雄各半) ，体
质量(20 ± 2)g，随机分为 5 组:优降糖阳性对照组(优降糖 15 mg
·kg －1) ;牛弥菜醇 A高、中、低(400，200，100 mg·kg －1)剂量组;
空白对照组(等容积的蒸馏水)。灌胃给药，1 次 /d，连续给药 14
d后，称体质量并测定各组的空腹血糖值。
2． 3． 2 样品的采集及测定 于末次给药前小鼠禁食不禁水 8 h，
给药后继续禁食不禁水 2 h 后，眶静脉丛毛细玻管采血 0． 2 ml，
待血液凝固析出血清后，4 000 r·min －1离心 15min，取血清 10
μl，按葡萄糖试剂盒的 GOD － POD法测定空腹血糖值。
2． 4 牛弥菜醇 A对肾上腺素性糖尿病小鼠血糖的影响 取正常
昆明种小鼠，60 只(雌、雄各半) ，体质量(20 ± 2)g，随机分为 6
组:优降糖阳性对照组(优降糖 15 mg·kg －1) ;牛弥菜醇 A 高、
中、低(400，200，100 mg·kg －1)剂量组;模型对照组(等容积的蒸
馏水) ;空白对照组(等容积的蒸馏水)。灌胃给药，1 次 /d，连续
给药 14 d，于末次给药前小鼠禁食不禁水 8 h，给药后继续禁食不
禁水 2 h后，除空白对照组外，每只小鼠腹腔注射盐酸肾上腺素
0． 2 mg·kg －1，空白对照组则腹腔注射等容积的生理盐水。30
min后，眶静脉丛毛细玻管采血 0． 2 ml，待血液凝固析出血清后，
4 000 r·min －1离心 15 min，取血清 10 μl，按葡萄糖试剂盒的
GOD － POD法测空腹血糖值。醇 A对肾上腺素性糖尿病小鼠血
糖的影响。
2． 5 牛弥菜醇 A 对正常小鼠糖耐量的影响 取正常昆明种小
鼠，90 只(雌、雄各半) ，体质量(20 ± 2)g，随机分为 6 组:优降糖
阳性对照组(优降糖 15 mg·kg －1) ;牛弥菜醇 A 高、中、低(400，
200，100 mg·kg －1)剂量组;模型对照组(等容积的蒸馏水) ;空白
对照组(等容积的蒸馏水)。灌胃给药，1 次 /d，连续给药 14 d，于
末次给药前小鼠禁食不禁水 8 h，每组随机各取 10 只小鼠测零时
血糖，给药后继续禁食不禁水 2 h后，除空白对照组外，每只小鼠
灌胃给药葡萄糖 2 g /kg，空白对照组则灌胃等容积的生理盐水。
于灌胃给药后 0． 5，1，2 h，每组各取 10 只小鼠眶静脉丛毛细玻管
采血，测定血糖值，并以空腹血糖值作为零时血糖描记血糖值随
时间变化曲线。用近似梯形法计算曲线下面积。
2． 6 数据处理 结果计量资料 珋x ± s 表示，EXCEL 软件分析数
据，以 t检验法计算组间显著性差异。
3 结果
3． 1 牛弥菜醇 A的急性毒性实验(MTD)急性毒性测定结果显
示，牛弥菜醇 A的MTD大于 750 mg·kg －1，相当于临床成人日用
药的 430． 29 倍，临床成人日拟用最大剂量为 0． 83g 生药·kg －1。
结果见表 1。
表 1 MTD试验牛弥菜醇 A对小鼠体质量的影响(珋x ± s)
组别 n
给药前
m /g
给药后 m /g
70 d 140 d
体质量增率
(%)
牛弥菜醇 A♂ 20 20． 98 ± 0． 80 24． 12 ± 0． 68 29． 16 ± 1． 86 39． 40
♀ 20 20． 85 ± 0． 78 23． 45 ± 0． 78 28． 57 ± 1． 60 37． 03
空白对照 ♂ 10 20． 76 ± 0． 74 25． 02 ± 0． 12 29． 42 ± 2． 01 41． 71
♀ 10 20． 99 ± 0． 78 24． 79 ± 0． 74 29． 14 ± 1． 87 38． 82
3． 2 牛弥菜醇 A对四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖的影响 与模型
组比较，牛弥菜醇 A高中剂量组均有极显著性差异(P ＜ 0． 01) ，
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL ． 22 NO． 3 时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 3 期
低剂量组无显著性差异(P ＞ 0． 05) ，但仍表现出降低血糖的趋
势。表明牛弥菜醇 A对实验性糖尿病小鼠有降血糖作用。结果
见表 2。
3． 3 牛弥菜醇 A 对正常小鼠血糖、体质量的影响 与空白对照
组相比较，优降糖阳性组与牛弥菜醇 A 高剂量组的血糖有极显
著性意义(P ＜ 0． 01)。牛弥菜醇 A中、低剂量组均无统计学意义
(P ＞ 0． 05)。与空白对照组相比，优降糖阳性组和牛弥菜醇 A高
剂量组的体质量明显低于空白组(P ＜ 0． 05) ，牛弥菜醇 A 中、低
剂量组均无统计学意义(P ＞ 0． 05) ，表明牛弥菜醇 A在较高剂量
时对正常小鼠的血糖和体质量有一定的影响。结果见表 3 ～ 4。
表 2 牛弥菜醇 A对四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖的影响(珋x ± s)
组别
剂量
C /mg·kg － 1
血糖值 C /mmol·L －1
给药前 给药后
血糖降低
率(%)
空白对照 － 4． 91 ± 0． 74 5． 01 ± 0． 86 －
模型对照 － 19． 32 ± 3． 09＊＊ 19． 44 ± 3． 77＊＊ －
降糖灵 12 19． 11 ± 3． 35＊＊ 9． 88 ± 2． 29※※ 48． 29
CA高剂量 400 19． 13 ± 3． 59＊＊ 11． 25 ± 2． 57※※ 41． 18
CA中剂量 200 18． 99 ± 3． 43＊＊ 14． 17 ± 3． 74※ 29． 17
CA低剂量 100 19． 16 ± 3． 25＊＊ 16． 71 ± 3． 55 12． 97
与空白对照组比较，＊P ＜0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;与模型组比较，※P ＜ 0． 05 ，※※P
＜0． 01;n =10
表 3 牛弥菜醇 A对正常小鼠血糖的影响(珋x ± s)
组别
剂量
C /mg·kg － 1
给药前血糖值
C /mmol·L －1
给药后血糖值
C /mmol·L －1
空白对照 － 6． 16 ± 0． 53 6． 45 ± 0． 60
优降糖 15 5． 77 ± 1． 17 3． 71 ± 0． 48＊＊
CA高剂量 400 5． 68 ± 0． 84 5． 06 ± 0． 89＊
CA中剂量 200 5． 94 ± 0． 42 5． 71 ± 0． 61
CA低剂量 100 5． 64 ± 1． 05 6． 08 ± 0． 59
与空白对照组比较，＊P ＜0． 05，＊＊P ＜0． 01;n =10
表 4 牛弥菜醇 A对正常小鼠体质量的影响(珋x ± s)
组别
剂量
C /mg·kg － 1
体质量 m /g
给药前 给药后
体质量增长
率(%)
空白对照 － 20． 78 ± 0． 97 29． 12 ± 1． 61 40． 13
优降糖 15 20． 87 ± 0． 77 26． 46 ± 1． 35＊ 26． 78
CA高剂量 400 20． 69 ± 1． 32 26． 88 ± 2． 56＊ 29． 92
CA中剂量 200 20． 62 ± 0． 98 27． 35 ± 1． 47 32． 64
CA低剂量 100 20． 65 ± 1． 03 28． 33 ± 1． 67 37． 16
与空白对照组比较，＊P ＜0． 05，＊＊P ＜0． 01;n =10
3． 4 牛弥菜醇 A对肾上腺素性糖尿病小鼠血糖的影响 给药 14
d后，模型组的血糖值明显高于空白对照组，差别有极显著性意
义(P ＜ 0． 01) ，说明糖尿病造模成功。牛弥菜醇 A各剂量组和优
降糖阳性对照组的血糖值均明显低于模型对照组，差别有极显著
性意义(P ＜ 0． 01)。表明牛弥菜醇 A 对肾上腺素性糖尿病小鼠
有明显降血糖作用。结果见表 5。
表 5 牛弥菜醇 A对肾上腺素性糖尿病小鼠血糖的影响(珋x ± s)
组 别 剂量 C /mg·kg － 1 给药后血糖值 C /mmol·L －1
空白对照 － 5． 38 ± 1． 04
模型对照 － 13． 93 ± 3． 84＊＊
优降糖 15 6． 31 ± 2． 52※※
CA高剂量 400 6． 56 ± 2． 59※※
CA中剂量 200 6． 74 ± 2． 16※※
CA低剂量 100 7． 02 ± 1． 78※※
与空白对照组比较，＊P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;与模型组比较:※P ＜ 0． 05 ，
※※P ＜0． 01;n =10
3． 5 牛弥菜醇 A对正常小鼠糖耐量的影响 与空白对照组相比
较，模型组在给予葡萄糖后的各个时段内，血糖值明显高于空白
组(P ＜ 0． 01) ，说明造模成功。给予葡萄糖 30 min，各给药组的
血糖值均低于模型组(P ＜ 0． 05) ;给予葡萄糖 1 h，除低剂量组
外，其余各给药组的血糖值均低于模型组(P ＜ 0． 05) ;给予葡萄
糖 2 h，阳性组(优降糖)血糖值仍低于模型组(P ＜ 0． 01) ，其余各
给药组血糖值与模型组比较无显著性差异(P ＞ 0． 05)。表明牛
弥菜醇 A可增强正常小鼠的葡萄糖耐受能力，耐受时间在 1h 左
右。结果见表 6 和图 1。
表 6 牛弥菜醇 A对正常小鼠糖耐量的影响(珋x ± s)
组别
剂量
C /mg·kg － 1
糖耐量 C /mmol·L －1
0 h 0． 5 h 1 h 2 h
空白对照 － 5． 16 ± 1． 06 5． 19 ± 1． 53 5． 27 ± 1． 32 5． 48 ± 1． 09
模型对照 － 5． 06 ± 0． 97 18． 51 ± 2． 01＊＊11． 59 ± 1． 48＊＊8． 77 ± 1． 26＊
优降糖 15 2． 17 ± 0． 79※※11． 85 ± 1． 60※※ 7． 47 ± 1． 15※※5． 03 ± 1． 17※
CA高剂量 400 3． 82 ± 1． 01※ 13． 48 ± 2． 46※※ 9． 34 ± 1． 54※ 7． 31 ± 1． 61
CA中剂量 200 3． 89 ± 1． 13※ 14． 30 ± 2． 22※※ 9． 58 ± 1． 78※※7． 69 ± 0． 97
CA低剂量 100 4． 43 ± 1． 21 15． 35 ± 2． 40※ 10． 03 ± 1． 64 7． 60 ± 1． 94
与空白组比较，＊P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;与模型组比较，※P ＜ 0． 05 ，※※P ＜
0． 01;n =10
图 1 牛弥菜醇 A对正常小鼠糖耐量的影响
4 讨论
本实验采用匙羹藤茎活性成分牛弥菜醇 A 作为受试物，观
察其对糖尿病四氧嘧啶糖尿病小鼠、肾上腺素糖尿病的血糖值的
影响，试验结果表明，匙羹藤茎活性成分牛弥菜醇 A 可以显著降
低四氧嘧啶糖尿病小鼠、肾上腺素糖尿病小鼠的血糖值。给予匙
羹藤茎活性成分牛弥菜醇 A灌胃 14 d后，高、中剂量组的小鼠血
糖值明显下降，与糖尿病组有显著性差异，但降糖效果并不呈一
定的量效关系。实验结果表明，高剂量组牛弥菜醇 A 的降糖作
用强度与阳性药物优降糖组相当。因此可认为牛弥菜醇 A 是匙
羹藤降糖作用的有效成分之一。
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