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光叶娃儿藤解热抗炎作用实验研究



全 文 :[收稿日期] 2012517(011)
[第一作者] 杨超燕,硕士,实验师,从事新药开发与研究工作,
Tel:020-39352180,E-mail:y1c2y@ 163. com
[通讯作者] * 陈艳芬,博士,副教授,从事中药抗炎活性物质
筛选及作用机制研究工作,Tel:020-39352180,E-
mail:xwnai@ 163. com
光叶娃儿藤解热抗炎作用实验研究
杨超燕,陈艳芬* ,陶曙红,唐春萍,崔红花
( 广东药学院中药学院,广州 510006)
[摘要] 目的:观察光叶娃儿藤的解热和抗炎作用。方法:SD大鼠随机分为生理盐水对照组,阿司匹林组(0. 1 g·kg -1) ,
光叶娃儿藤低、中、高剂量组(6,12,24 g·kg -1)。分别采用酵母混悬液复制大鼠发热模型和角叉菜胶致大鼠足趾肿胀法,观察
光叶娃儿藤的解热和抗炎作用,同时紫外分光光度法测定大鼠角叉菜胶致炎足渗出物中的前列腺素 E2(PGE2)的含量。结
果:与生理盐水组比较,光叶娃儿藤中、高剂量组(12,24 g·kg -1)能显著降低酵母菌致大鼠发热模型的体温(P < 0. 05) ,并能
显著抑制角叉菜胶致大鼠的足肿胀度(P < 0. 05)和足组织中的前列腺素 E2(PGE2)的合成(P < 0. 05)。结论:光叶娃儿藤具
有明显的解热和抗炎作用,其机制可能与抑制 PGE2 等炎症介质合成有关。
[关键词] 光叶娃儿藤;解热;抗炎;角叉菜胶;前列腺素 E2
[中图分类号] R285. 5 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2013)04-0274-03
Studies on Antipyretic and Anti-inflammatory Effects of Tylophora ovata
YANG Chao-yan,CHEN Yan-fen* ,TAO Shu-hong,TANG Chun-ping,CUI Hong-hua
(School of Traditional Chinese Medicine,Guangdong Pharmaceutical College,Guangzhou 510006,China)
[Abstract] Objective:To explore the antipyretic and anti-inflammatory effects of Tylophora ovata.
Method:SD rats were divided into 5 groups randomly:physiological saline group,positive control group,the
water extract of T. ovata low-dose group (6 g·kg -1) ,middle-dose group (12 g·kg -1)and high-dose group (24
g·kg -1). The fever model with high temperature was established induced by yeast in rats,and the inflammatory
model with foot edema was established by carrageenan in rats. The antipyretic and the anti-inflammatory effects of
T. ovata were observed,the content of prostaglandin E2 (PGE2) in paw tissue were tested by ultraviolet
spectrophotometry. Result:Compared with the saline group,the water extract of T. ovata middle-dose group and
high-dose group showed significant antipyretic activity in rats with high temperature induced by yeast (P < 0. 05) ,
and appeared significant anti-inflammatory activity in rats with foot edema induced by carrageenin (P < 0. 05).
Conclusion:T. ovata had notable effects of antipyretic and anti-inflammatory,the anti-inflammatory mechanism
might be related to inhibition of PGE2 biosynthesis.
[Key words] Tylophora ovata;antipyretic action;anti-inflammation;carrageenan;prostaglandin E2
光叶娃儿藤为萝藦科娃儿藤属的多年生匍匐性
藤状草本植物,主要分布于台湾和广东[1],在民间
广泛应用于治疗感冒发热,咽喉肿痛等,且疗效显
著。近年来对娃儿藤属植物的研究主要集中于其所
含的生物碱类成分,对其侧重在抗肿瘤、抗病毒等方
面研究[2],关于光叶娃儿藤的解热抗炎作用研究未
见报道。本文选用啤酒酵母致热大鼠模型和角叉菜
胶致大鼠足趾肿胀法,首次研究光叶娃儿藤的解热
和抗炎作用,为其进一步开发及应用提供实验依据。
1 材料
1. 1 药材 光叶娃儿藤全草采于广东吴川,经中国
科学院华南植物研究所标本馆叶华谷研究员鉴定为
萝藦科娃儿藤属的光叶娃儿藤 Tylophora ovata
(Lindl.) Hook. ex Steud. var. brownii (Hay.)
Tsiang et P. T. Li,标本存放于中国科学院华南植物
·472·
第 19 卷第 4 期
2013 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 19,No. 4
Feb.,2013
研究所标本馆。
1. 2 药品及试剂 称取光叶娃儿藤鲜品 200 g,切
段,置烧杯中加入大约 10 倍体积的水煎煮 3 次,每
次 0. 5 h,提取液合并过滤、浓缩光叶娃儿藤水提取
物浓缩液(相当于生药 2. 4 g·mL -1) ,给药前配成
所需浓度;角叉莱胶,international Laboratory USA,批
号 339537;啤酒酵母,安琪酵母股份公司,批号
20111202;醋酸,广东光华化学厂有限公司,批号
20111223;甲醇,天津市百世化工有限公司,批号
20100630;阿司匹林肠溶片,拜耳医药保健有限公
司,批号 BJ04316;羧甲基纤维素钠,天津市百世化
工有限公司,批号 20100908。
1. 3 动物 SPF 级 SD 大鼠,体重 180 ~ 220 g,雄
性,由广东省医学实验动物中心提供,生产许可证
号 SCXK (粤)2008-0002,正常饲养 3 d后供试。
1. 4 仪器 UV-1800 型紫外分光光度计(北京瑞利
分析仪器公司) ,PV-200 型足跖容积测量仪(成都泰
盟科技有限公司)。
表 1 光叶娃儿藤对皮下注射啤酒酵母混悬液致热大鼠的影响(珋x ± s,n = 8)
组别
剂量
/ g·kg -1
基础体温
/℃
给药后不同时间体温升高值 /Δ℃
1 h 2 h 3 h 4 h 5 h
生理盐水对照 - 37. 39 ± 0. 18 1. 33 ± 0. 48 1. 15 ± 0. 44 1. 16 ± 0. 50 1. 12 ± 0. 41 0. 52 ± 0. 31
娃儿藤 24 37. 13 ± 0. 28 0. 82 ± 0. 401) 0. 88 ± 0. 40 - 0. 05 ± 0. 822) 0. 41 ± 0. 422) 0. 25 ± 0. 85
12 37. 48 ± 0. 28 0. 53 ± 0. 572) - 0. 10 ± 0. 312) 0. 54 ± 0. 64 0. 64 ± 0. 60 0. 33 ± 0. 89
6 37. 24 ± 0. 30 0. 74 ± 0. 63 1. 09 ± 0. 37 0. 53 ± 0. 79 0. 70 ± 0. 50 0. 47 ± 0. 61
阿司匹林 0. 1 37. 16 ± 0. 23 0. 33 ± 0. 702) - 0. 51 ± 0. 852) - 0. 51 ± 0. 852) 0. 05 ± 0. 572) 0. 07 ± 0. 592)
注:与生理盐水组比较1)P < 0. 05,2)P < 0. 01(表 2 ~ 3 同)。
2 方法
2. 1 对大鼠背部皮下注射啤酒酵母混悬液致热实
验的影响[3-4] 取 SD大鼠,实验室温度 23 ~ 24 ℃,
实验前 2 d将温度计插入肛门内 2 cm,每日测定体
温 1 次,连续 3 d,使大鼠适应测体温操作。选取体
温 36. 6 ~ 38. 3 ℃,体温波动在 0. 2 ℃以内者,测定
给药前体温,随后皮下注射 10%啤酒酵母混悬液
(用质量分数 0. 5% CMC-Na 临时配制) ,给药容积
为 10 mL·kg -1,5 h 后测定体温 1 次,选择体温升
高 1 ℃以上者作为实验对象,然后随机分成 5 组:
啤酒酵母混悬液 +生理盐水对照组;啤酒酵母混悬
液 +阿司匹林组;啤酒酵母混悬液 + 光叶娃儿藤
24,12,6 g·kg -1剂量组,立即灌胃给予相应的药物,
给药容积为 10 mL·kg -1,生理盐水对照组给予等量
的生理盐水,测定给药后 1,2,3,4,5 h 大鼠体温,
以给药前大鼠体温平均值为基础体温,计算各测定
时间点大鼠体温的变化。
2. 2 对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀度的影响[5-6]
SD大鼠 40 只,随机分成 5 组,每组 8 只,分别为:生
理盐水对照组、阿司匹林阳性对照组及光叶娃儿藤
高、中、低剂量(24,12,6 g·kg -1)组。给药前用足跖
容积测量仪测量大鼠右后足容积,ig 给药 30 min 后
于大鼠右后足跖 sc 1% 的角叉菜胶 0. 1 mL /只致
炎,分别在致炎后 1,2,3,4,5 h 用足跖容积测量仪
测量,测量致炎后足容积并计算致炎前右后足容积
之差,计算出各组的肿胀率。
肿胀率 =[(致炎后足容积 -致炎前右后足容积)/致炎
前足容积]× 100%
2. 3 对角叉菜胶致大鼠肿胀足炎性组织中 PGE2
含量的影响[7] 取 2. 2 项实验测完致炎 5 h 后足容
积的大鼠处死,从踝关节 0. 5 cm处剪下炎性肿胀足
爪,称重,剪碎,加入生理盐水 5 mL 浸泡 2 h,离
心浸泡液 15 min(3 000 r·min -1) ,取上清液 0. 5
mL,加入 0. 5 mol·L -1 KOH甲醇液 2 mL,在 50 ℃水
浴中异构化 20 min,加入甲醇稀释至 5 mL 后,用紫
外分光光度计在 278 nm 处测定吸光度(A)。按下
式计算 PGE2 含量。
PGE2(μg·g
-1)= A278 × 13. 13 × D × V /炎足爪重(V-
PGE2 溶液体积) (V = 5 mL,D = 10)
2. 4 统计学处理 采用 SPSS 13. 0 软件,计量资料
以 珋x ± s表示,组间比较采用单因素方差分析,P <
0. 05 为有统计意义。
3 结果
3. 1 对大鼠背部皮下注射啤酒酵母混悬液致热实
验的影响 大鼠皮下注射啤酒酵母混悬液 5 h 后体
温明显升高,光叶娃儿藤高、中剂量组给药后 1 h
对啤酒酵母致大鼠体温升高有显著的抑制作用,与
生理盐水对照组比较,差异具有统计学意义(P <
0. 05) ,且降温作用持续 4 h,但作用未呈剂量依赖
性,结果见表 1。
·572·
杨超燕,等:光叶娃儿藤解热抗炎作用实验研究
3. 2 对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀度的影响 实
验结果表明,光叶娃儿藤高、中剂量组对角叉菜胶引
起的大鼠足跖肿胀性炎症反应均有明显的抑制作
用,与生理盐水对照组比较,差异具有统计学意义
(P < 0. 05) ,抗炎作用持续 5 h,但作用未呈剂量依
赖性,见表 2。
表 2 光叶娃儿藤对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响(珋x ± s,n = 8)
组别
剂量
/ g·kg -1
致炎后肿胀率 /%
1 h 2 h 3 h 4 h 5 h
生理盐水对照 - 19. 70 ± 9. 40 37. 97 ± 7. 91 39. 48 ± 8. 59 36. 20 ± 5. 61 34. 61 ± 7. 73
娃儿藤 24 19. 43 ± 7. 33 24. 74 ± 9. 551) 24. 59 ± 6. 792) 19. 62 ± 7. 942) 22. 72 ± 7. 481)
12 6. 61 ± 4. 092) 13. 32 ± 8. 222) 16. 62 ± 12. 302) 16. 38 ± 11. 412) 13. 64 ± 11. 082)
6 16. 88 ± 3. 53 26. 77 ± 8. 531) 30. 02 ± 10. 16 36. 62 ± 11. 07 24. 00 ± 10. 88
阿司匹林 0. 1 g 5. 15 ± 1. 232) 1. 76 ± 3. 672) 7. 74 ± 6. 122) 13. 01 ± 6. 382) 9. 61 ± 7. 782)
3. 3 对角叉菜胶致大鼠肿胀足炎性组织中 PGE2
含量的影响 结果表明,光叶娃儿藤高、中剂量组均
能显著性降低角叉菜胶致大鼠足爪炎性渗出物中
PGE2 的含量,与生理盐水对照组比较,差异具有统
计学意义(P < 0. 05) ,但作用未呈剂量依赖性,结果
见表 3。
表 3 光叶娃儿藤对角叉菜胶致大鼠肿胀足炎性组织中
PGE2 含量的影响(珋x ± s,n = 8)
组别 剂量 / g·kg -1 PGE2 /μg·g - 1
生理盐水对照 - 357. 28 ± 45. 92
娃儿藤 24 283. 12 ± 53. 131)
12 286. 97 ± 35. 272)
6 338. 34 ± 25. 24
阿司匹林 0. 1 306. 70 ± 41. 981)
4 讨论
已有研究表明,能起到解热或抗炎作用的成分
一般有生物碱、黄酮、苷类等化合物[8],而娃儿藤属
植物主要含有生物碱,已经从该属植物中分离得到
70 多个娃儿藤生物碱及其类似物[9],该生物碱具有
抗过敏、平喘、抗病毒以及抗肿瘤等多种生理活性。
光叶娃儿藤是娃儿藤属娃儿藤的变种,其相关的药
理作用或许与它的主要化学成分生物碱有关。
实验结果表明,光叶娃儿藤具有抑制啤酒酵母
大鼠发热的作用,且作用时间持续较长。皮下注射
啤酒酵母混悬液所致的大鼠发热是由注射部位的局
部溃烂引发的剧烈炎症反应导致,动物全身表现与
临床伴内脏或皮肤有明显炎症的里热证类似[10],属
于感染性发热的范畴,说明光叶娃儿藤用于治疗感
染性引起的发热效果显著,与其临床主治感冒发热
效果相符;角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀为急性非
特异性的炎症模型,主要是前列腺素(PG)释放,引
起局部充血、水肿及渗出等病理反应过程,PGE2 作
为一种炎症因子,具有扩血管、趋化、致热和致痛等
作用,存在于炎症组织中,可与缓激肽、白三烯等炎
症介质起协同作用,加剧炎症反应。通过抑制前列
腺素的合成,可以减轻炎症反应。光叶娃儿藤能显
著性降低角叉菜胶致大鼠足爪炎性渗出液中 PGE2
的含量,表明光叶娃儿藤抗炎作用可能与其抑制炎
性组织中的 PGE2合成或释放有关,有关其起效成分
和机制有待进一步的研究。
[参考文献]
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[责任编辑 李玉洁]
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第 19 卷第 4 期
2013 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 19,No. 4
Feb.,2013