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紫背金盘治疗大鼠疮疡模型实验研究



全 文 :收稿日期:2012-05-01; 修订日期:2012-11-07
基金项目:2011 年湖南省中医药科研计划项目( No. 2010023) ;
2011 年湖南省自然科学基金项目( No. JJ116079)
作者简介:易刚强( 1965-) ,男( 汉族) ,湖南湘阴人,现任湖南中医药大学
副教授,硕士学位,主要从事中药资源、中药有效成分分析以及中药生物
技术研究工作.
* 通讯作者简介:李云耀( 1978-) ,男( 苗族) ,湖南沅陵人,现任湖南中医
药大学讲师,硕士学位,主要从事中药新药开发研究工作.
紫背金盘治疗大鼠疮疡模型实验研究
易刚强,李云耀* ,李晓龙,覃中东
[湖南中医药大学中药现代化重点实验室;湖南省中药学重点学科;
国家中医药管理局药性与药效(三级)科研实验室,湖南 长沙 410208]
摘要:目的 研究紫背金盘的实验大鼠的疮疡模型药效。方法 采用 ELISA法观察紫背金盘对大鼠血清白细胞间介素 8
( IL - 8) 、肿瘤坏死因子( TNF - α) 以及溶菌酶( LSZ) 的影响。结果 紫背金盘提物高剂量组能提高大鼠疮疡模型血清中
的溶菌酶的含量( P < 0. 05) ,降低血清中白细胞间介素 8 和肿瘤坏死因子水平( P < 0. 05) ;而紫背金盘提物低剂量组作
用不明显。结论 紫背金盘具有治疗疮疡作用。
关键词:紫背金盘; 疮疡模型
DOI标识:doi: 10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2013. 02. 055
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 02-0367-02
Study on Ajugae nipponensis Makino treated with Sore Model of the big rat
YI Gang-qiang,LI Yun-yao* ,LI Xiao-long,QIN Zhong-dong
( TMC University of Hunan,Changsha,Hunan 410208,China)
Abstract: Objective To research the effective of Ajugae nipponensis Makino in sore model of the experiment big rat. Method-
s Using the method of ELISA observation of Ajugae nipponensis Makino on big rat serum IL - 8、TNF - a and LSZ effectionResults
Water and alcohol extract of Ajugae nipponensis Makino with high and dose could significantly improve the symptom of Sores in rats
,incresed content of LSZ ( P < 0. 05) and reduced level of IL - 8 and TNF - α factor in serum ( P < 0. 05) . Conclusion Ajugae
nipponensis Makino is the treatment of sore effect
Key words: Ajugae nipponensis Makino; Sore model
紫背金盘为唇形科植物紫背金盘 Ajugae nipponensis Makino
的全草,又名白毛夏枯草、破血丹、筋骨草、石灰菜、九味菜、散瘀
草、散血丹、退血草、散血草,具有清热解毒,凉血散瘀,消肿止痛
之功效[1 ~ 3]。现代药理学研究发现有收缩血管、降血糖、降脂、降
压、抗肿瘤、抗炎、抑菌、抗病毒、促进创伤愈合等作用[4 ~ 8]。本课
题主要是通过建立大鼠疮疡模型,测定疮疡大鼠血清中 LSZ、IL
- 8 以及 TNF - α含量[9,10],对紫背金盘水提物和醇提物治疗疮
疡作用进行实验研究,为民间用紫背金盘治疗疮疡提供理论依据
和实验数据,现报道如下。
1 材料与仪器
1. 1 动物 SD大鼠,雄性,体质量 180 ~ 220g。由长沙市开福区
东创实验动物科技服务公司提供,实验动物环境许可证号:SYXK
(湘)2009 - 0001。
1. 2 试药 紫背金盘,由民间赤脚医生阮炳胜在湖南省宁乡县草
地、林地及阳坡地采集,经湖南中医药大学药学院彭菲教授鉴定,
为唇形科筋骨草属紫背金盘 Ajugae nipponensis Makino全草,切成
大约 2cm长度,晒干,备用。氨苄西林(湖南中和制药有限公司,
批号 090303) ,临用前用蒸馏水配用。大鼠溶菌酶(LSZ) (武汉
博士德生物工程有限公司,批号:20091106) ;大鼠白细胞间介素
8(IL - 8) (武汉博士德生物工程有限公司,批号:20091124) ;肿
瘤坏死因子(TNF - α) (武汉博士德生物工程有限公司,批号:
20091018)。
1. 3 仪器 RT - 600S 酶标仪(深圳雷杜生命科学股份有限公
司) ;LDZ4 - 2 型低速自动平衡离心机 (北京医用离心机厂) ;
DHG -9240A电热恒温鼓风干燥箱(郑州长城科工贸有限公司)。
1. 4 菌种 金黄色葡萄球菌(GIMZ. 221) ,菌株来源于湖南中医
药大学基础医学院微生物实验室,用前经湖南中医药大学伍参荣
教授鉴定。
1. 5 药物制备 称取紫背金盘药材粉末 0. 5kg,加蒸馏水 10 倍
量、8 倍量分别回流 3h、2h,合并滤液,浓缩后得水提物浸膏57. 5
g,浸膏得率为 11. 5%;同时称取紫背金盘药材粉末 0. 5 g,加乙醇
10 倍量、8 倍量分别回流 3h、2h,合并滤液,浓缩后得醇提物浸膏
61. 0g,浸膏得率为 12. 2%[11]。
2 方法
2. 1 动物造模分组及给药 取大鼠 70 只,将动物随机分成 7
组:紫背金盘水提物高剂量组、紫背金盘水提物低剂量组、紫背金
盘醇提物高剂量组、紫背金盘醇提物低剂量组、氨苄西林阳性对
照组、疮疡模型组、空白组,每组 10 只。背部脱毛,消毒后,用刀
片划 1cm × 1cm十字口子,深达皮下,创口内注 0. 2 ml 金黄色葡
萄球菌液悬浊液,不缝合,自然暴露 2d后,大鼠食量减少,俯卧少
动,创口周围红肿,有触痛,有黄色黏稠浓性分泌物渗出,疮疡形
成后[12,13],按表 1 计算剂量,每天分别给予紫背金盘水提物
44. 4、177. 6 mg /kg,紫背金盘醇提物 47. 1、188. 4 mg /kg 以及阳
性对照药氨苄西林 23. 2 mg /kg,模型组以及空白组给予等量的生
理盐水(10 ml /kg) ,连续灌胃给药 12 d。
2. 2 血清处理 给药 13 d 后,从大鼠颈总动脉取血 7ml,血液凝
固后置于 37℃ 温箱中 30 min。然后以 3 000 r /min,离心 15 min,
取血清液,用无菌生理盐水稀释 1 倍[14]。
2. 3 指标检测
2. 3. 1 一般情况 观察大鼠活动及食欲、存活、脓液等。
2. 3. 2 IL - 8、TNF - α 及 LSZ 含量测定(按试剂盒说明书进行
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2013 VOL. 24 NO. 2 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 2 期
操作)取出酶标板,依照次序对应加入 100 μl 的标准品于空白
微孔中,分别标记编号,加入 100 μl 血清样品于空白微孔中,在
标准孔和样品孔中加入 50 μl 的酶标记溶液;37℃孵育反应 60
min,洗板机清洗 5 次,每次静止 15 min,然后在每个孔中加入底
物 A、B液各 50 μl,37℃下避光孵育 15 min,最后每孔加入 50 μl
终止液,终止反应,测定数据,打印。
2. 4 统计方法 采用 SPSS16. 0 软件进行统计处理,所有数据均
用 珋x ± s表示,统计采用方差分析,对方差分析有显著差异者进一
步用 t检验,比较组间差异。
3 结果
3. 1 一般情况
3. 1. 1 动物存活情况 疮疡模型形成 4 d 以后,模型组有 2 只大
鼠死亡,紫背金盘水提物低剂量组和紫背金盘醇提物低剂量组各
有 1 只大鼠死亡,氨苄西林阳性药物组未见大鼠死亡。
3. 1. 2 脓液情况 在连续给药 6 ~ 8 d 后,紫背金盘水提物高剂
量组、醇提物高剂量组以及氨苄西林阳性对照组伤口皮肤红肿基
本消失,无脓性分泌物渗出;水提物低剂量组和醇提物低剂量组
少部分伤口愈合,但还是有红肿的现象。第 9 ~ 12 天,疮疡模型
组部分伤口周围仍红肿隆起且有脓性分泌物。
3. 1. 3 活动、食欲以及体质量情况 疮疡形成后大鼠食欲减少,
精神萎靡不振,活动量减少,甚至少数大鼠出现背躬和便稀的现
象。但从第 6 天以后,紫背金盘水提物高剂量组、醇提物高剂量
组以及氨苄西林阳性药物组大鼠的活动有所增多,动物进食增
加,第 11 天后动物活动量和食欲达到了基本正常,大鼠体质量有
所增加。
3. 2 背金盘提取物对疮疡模型大鼠 LSZ、IL - 8 以及 TNF - α 的
影响 与模型组比较,紫背金盘提物高剂量组能提高大鼠血清中
LSZ的水平(P < 0. 05) ,同时降低大鼠血清 IL - 8、TNF - α 含量
(P < 0. 05) ;紫背金盘提物低剂量组表现不明显,结果见表 1。
表 1 紫背金盘提取物对疮疡大鼠
血清中 IL - 8,TNF - α,LSZ的影响(珋x ± s)
组别 n
IL - 8
/ng·L -1
TNF - α
/pg·ml - 1
LSZ
/mg·L -1
空白 10 1. 02 ± 0. 49* 0. 18 ± 0. 65* 1. 48 ± 0. 26*
模型 8 1. 56 ± 0. 44 0. 61 ± 1. 07 1. 14 ± 0. 37
氨苄西林 10 1. 31 ± 0. 29 0. 30 ± 0. 21* 1. 31 ± 0. 46*
水高剂量 10 1. 38 ± 0. 44* 0. 38 ± 0. 03* 1. 28 ± 0. 39*
水低剂量 9 1. 53 ± 0. 30 0. 35 ± 0. 21 1. 17 ± 0. 20
醇高剂量 10 1. 38 ± 0. 42* 0. 41 ± 0. 23* 1. 29 ± 0. 22*
醇低剂量 9 1. 51 ± 0. 50 0. 51 ± 0. 78 1. 18 ± 0. 26
与模型组比较,**P <0. 01;* P <0. 05
4 结论
紫背金盘可促进疮疡的愈合,提高疮疡大鼠血清中 LSZ 含
量,同时降低疮疡大鼠血清中 IL - 8、TNF - α含量。
5 讨论
疮疡具有“红、肿、热、痛”以及脓性分泌物等症状,而脓性分
泌物以及血浆中含有溶菌酶,溶菌酶是一种小分子蛋白质,是中
性粒细胞中的一种酶,是由巨噬细胞产生并释放到细胞外,广泛
存在于机体组织、体液和分泌物中,它能与细胞结合,使其失去细
胞壁而崩解死亡。溶菌酶是机体最重要的非特异性防御功能因
子之一,参与多种免疫反应,在机体防御功能和非特异免疫中具
有保持机体生理平衡的重要作用,参与机体的炎症及修复再生等
过程的调节,能够激活单核细胞,增加巨噬细胞的吞噬功能及抗
原呈递功能,降低 IL - 8 和 TNF - α 含量[15 ~ 18]。因此,LSZ 活性
的高低可作为了解巨噬细胞功能状态和机体抗感染能力的重要
指标之一。
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