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白蔹外用对疮疡模型的影响



全 文 :• 702 • 中华中医药杂志(原中国医药学报)2012年3月第27卷第3期 CJTCMP , March 2012, Vol . 27, No. 3
of Sanguisorba saponins.Shandong Medical Journal,2010,50(15):
24-26
[2] 呼群,宁涛,苏秀兰,等.鸡胚绒毛尿囊膜技术的改进.北京大学
学报(医学版),2001,33(4):383-385
HU Qun,NING Tao,SU Xiu-lan,et al.Improvement of chick
chorioallantoic membrane technique.Journal of Peking University
(Health Sciences),2001,33(4):383-385
[3] 柯木根,陈密玉,吴国欣,等.芥子碱对鸡胚绒毛尿囊膜血管生
成的影响.中华中医药杂志,2008,23(1):36-39
KE Mu-gen,CHEN Mi-yu,WU Guo-xin,et al.Effects of Sinapine
on the formation of microvessels in chick embryo chorioallantoic
membrane.China Journal of TCM and Pharmacy,2008,23(1):36-39
[4] 杨晓冉,赵保忠,崔景荣.β-七叶皂苷钠对鸡胚血管新生的
影响.中国新药杂志,2006,15(11):868-870
YANG Xiao-ran,ZHAO Bao-zhong,CUI Jing-rong.Anti-
angiogenesis of sodium aescinate in vivo.Chinese Journal of New
Drugs,2006,15(11):868-870
(收稿日期:2011年4月18日)
白蔹外用对疮疡模型的影响
汤佩佩,郭晓芳,白明,苗明三
(河南中医学院,郑州 450008)
摘要:目的:探讨白蔹外用对大鼠和豚鼠疮疡模型的影响。方法:采用金黄色葡萄球菌(皮下注射悬液)感
染制作大鼠和豚鼠疮疡模型,观察白蔹水煎液大、中、小剂量和白蔹油糊大、小剂量对大鼠和豚鼠疮疡血清溶菌
酶含量及局部组织形态的影响。结果:白蔹水煎液大、中、小剂量组和白蔹油糊大、小剂量组均可显著增高血清
中溶菌酶的含量(P<0.01),显著改善疮疡的症状及病理变化。结论:白蔹外用对大鼠和豚鼠疮疡均有好的治疗
作用。
关键词:白蔹;外用;疮疡模型
基金资助:“十一五”国家科技支撑计划(No.2008BAI53B09),郑州市科技攻关项目(No.10PTGS485-21)
Effect of Ampelopsis external application on sores ulcers model
TANG Pei-pei, GUO Xiao-fang, BAI Ming, MIAO Ming-san
( Henan University of TCM, Zhengzhou 450008, China )
Abstract: Objective: To investigate the effect of Ampelopsis external application on sores ulcers model. Methods:
Establishing sores ulcers rats and guinea pigs model induced by subcutaneous injection staphylococcus aureus levitation liquid,
to observe the effect of high, medium, low dose of Ampelopsis decoction and high, low dose of Ampelopsis oil paste on serum
lysozyme content and the local tissue morphology in sores ulcers rats and guinea pigs model. Results: All the high, medium, low
dose of Ampelopsis decoction and high, low dose of Ampelopsis oil paste could remarkably increase the serum lysozyme content,
signifi cantly improve the symptoms of ulcers sores and pathological changes. Conclusion: Ampelopsis external application has
remarkable curative effect on sores ulcers rats and guinea pigs model.
Key words: Ampelopsis; External application; Sores ulcers model
Fund assistance: National Key Technology R&D Program during ‘the Eleventh Five-year’ Plan Period
(No.2008BAI53B09), Science and Technology Research Project of Zhengzhou City (No.10PTGS485-21)
·研究报告·
通讯作者:苗明三,河南省郑州市金水路1号河南中医学院,邮编:450008,电话:0371-65962546,E-mail:miaomingsan@163.com
白蔹为葡萄科植物Ampelopsis japonica(Thunb.)Makino的
干燥块根,味辛、苦,性微寒,2010版《中华人民共和国药典》
载其有清热解毒,消痈散结,敛疮生肌之功,主要用于痈疽发
背、疔疮、瘰疬、烧烫伤。现代研究表明,白蔹主要含多酚、蒽
醌类等化学成分;白蔹主要活性为抗菌,并有抑制黑色素形成
等作用;此外还有治疗癌性发热、支气管扩张咯血、手足皲裂、
骨折等作用[1]。本文观察白蔹外用对大鼠和豚鼠疮疡模型的
影响。
• 703 •中华中医药杂志(原中国医药学报)2012年3月第27卷第3期 CJTCMP , March 2012, Vol . 27, No. 3
组别
空白组
模型组
麻油淀粉糊组
京万红组
白蔹水煎液大剂量组
白蔹水煎液中剂量组
白蔹水煎液小剂量组
白蔹油糊大剂量组
白蔹油糊小剂量组
表1 各组大鼠疮疡模型血清中溶菌酶含量的比较
(x-±s,n=10)
溶菌酶含量(µg/mL)
6.92±0.63
3.43±0.35**
3.65±0.76**
7.04±1.03△△
6.50±0.29△△
6.81±0.83△△
6.16±0.77△△
6.89±0.58△△
6.67±0.57△△
注:与空白组比较,**P<0.01;与模型组比较,△△P<0.01。表3同。
材料
1. 动物 SPF级Wistar大鼠100只,体质量180-200g,雌雄
各半,由河南省实验动物中心提供,合格证号:0003677;普通
级豚鼠100只,体质量200-230g,雌雄各半,由河南省康达实验
动物有限公司提供,合格证号:0121163。
2 . 药品与试剂 白蔹,购自安徽省亳州市药材交易公
司,经鉴定为葡萄科植物白蔹Ampelopsis japonica(Thunb.)
Makino。除去杂质,洗净,润透,切厚片,晒干;白蔹水煎剂的
制备方法:白蔹药材600g加入10倍量的蒸馏水浸泡30min后煎
煮,沸腾后改用文火煎煮60min,滤出煎液,再加入8倍量的蒸
馏水沸后文火煎煮60min,合并2次滤液,70℃水浴浓缩至浓度
为1.5g生药/mL,作为白蔹水煎液大剂量组,用0.9%氯化钠溶
液稀释成1.0g生药/mL、0.5g生药/mL,作为中、小剂量组。白蔹
油糊制备方法:白蔹药材打粉,过100目筛,麻油调糊,大剂量
含药量为0.2g/mL,小剂量为0.1g/mL;麻油淀粉调糊,含淀粉
量为0.2g/mL。京万红烫伤膏,天津达仁堂京万红药业有限公
司,批号:211646。水合氯醛,天津市科密欧化学试剂开发中
心,批号:20071018。一滴香,郑州市春芝调味品有限公司,批
号:20090426A。呋喃西林,苏州第五制药厂有限公司,批号:
20090406。金黄色葡萄球菌(CMCC 26003 5亿/mL),河南中医
学院微生物实验室提供;溶菌酶(LZM)测试盒,南京建成生物
工程研究所,批号:20100114;氯化钠注射液,郑州永和制药有
限公司,批号:09073105;甲醛,烟台市双双化工有限公司,批
号:20090326。
3. 仪器 WFZ UV2000型紫外可见分光光度计,尤尼卡
(上海)仪器有限公司生产;微量移液器,上海求精生化试剂仪
器有限公司。
方法
1. 大鼠疮疡模型造模及指标检测 大鼠100只,取10只作
为空白组,其余大鼠造疮疡模型:均在右侧背部脱毛,2d后腹
腔注射10%水合氯醛(0.3g/kg)麻醉大鼠,用刀片在脱毛部位划
一十字切口(1cm×1cm),深达皮下,每个伤口内注入5亿个金黄
色葡萄球菌,1次/d,连续3d,至伤口周围出现红、肿、触痛,可
见脓性分泌物为止[2]。取疮疡模型成功的80只大鼠,随机分为
8组,雌雄各半,每组10只:白蔹水煎液大、中、小剂量组(1.5、
1.0、0.5g生药/mL,用消毒药棉吸附相应药液1.2mL后,敷在疮
疡局部),白蔹油糊大、小剂量组(0.2、0.1g/mL,厚度2mm,相
当于2.4、1.2g/只),京万红组(涂京万红烫伤药膏,厚度2mm,
相当于1g/只),麻油淀粉糊组(淀粉0.2g/mL,厚度2mm,相当
于2.4g/只),模型组和空白组用消毒药棉吸附0.9%氯化钠溶液
1.2mL,敷在疮疡局部;以上各组给药后均以纱布、保鲜膜覆盖
胶布固定,每天保持药物与疮疡部位接触时间6h,6h后以0.9%
氯化钠溶液清洗用药局部,连续给药12d。每次给药后单笼单只
饲养,以避免大鼠相互舔食药物或啃噬伤口。记录从用药起12d
内,伤口每天的愈合情况。第12天给药后1h,大鼠眼眶后静脉丛
取血,3 000r/min离心10min,分离血清,按试剂盒测定血清中溶
菌酶的含量。剪取疮疡部位皮肤,固定于10%甲醛溶液中,石蜡
包埋切片,HE染色,显微镜下观察比较各组大鼠疮疡皮肤的愈
合程度。
2. 豚鼠疮疡模型造模及指标检测 豚鼠100只,取10只豚
鼠作为空白组,其余豚鼠造疮疡模型:均右侧背部脱毛,2d后
腹腔注射10%水合氯醛(0.25g/kg)麻醉豚鼠,用刀片在脱毛
部位划一十字切口(1cm×1cm),深达皮下,每个伤口内注入
5亿个金黄色葡萄球菌,1次/d,连续3d,至伤口周围出现红、
肿、触痛,可见脓性分泌物为止[3]。取造疮疡模型成功的80只
豚鼠,随机均分为8组,雌雄各半,每组10只:白蔹水煎液大、
中、小剂量组(1.5、1.0、0.5g生药/mL,用消毒药棉吸附相应
药液1.2mL后,敷在疮疡局部),白蔹油糊大、小剂量组(0.2、
0.1g/mL,厚度2mm,相当于2.4g、1.2g/只),京万红组(涂京万
红烫伤药膏,厚度2mm,相当于1g/只),麻油淀粉糊组(淀粉
0.2g/mL,厚度2mm,相当于2.4g/只),模型组和空白组用消毒
药棉吸附0.9%氯化钠溶液1.2mL,敷在疮疡局部;以上各组给
药后均以纱布、保鲜膜覆盖胶布固定,每天保持药物与疮疡部
位接触时间6h,6h后以0.9%氯化钠溶液清洗用药局部,连续
给药12d。每次给药后单笼单只饲养,以避免豚鼠相互舔食药
物或啃噬伤口。记录从用药起12d内,伤口每天的愈合情况。第
12天给药后1h,豚鼠心脏取血,3 000r/min离心10min,分离血
清,按试剂盒测定血清中溶菌酶的含量。剪取疮疡部位皮肤,
固定于10%甲醛溶液中,石蜡包埋切片,HE染色,显微镜下观
察比较各组豚鼠疮疡皮肤的愈合程度。
3. 统计学方法 数据分析用SPSS 13.0 for windows统计软
件包进行数据资料的统计学处理,计量资料用x-±s表示,等级
资料采用Ridit检验。P<0.05为差异有统计学意义。
结果
1. 对大鼠疮疡模型血清溶菌酶含量的影响 见表1。大鼠
• 704 • 中华中医药杂志(原中国医药学报)2012年3月第27卷第3期 CJTCMP , March 2012, Vol . 27, No. 3
造疮疡模型后,模型组局部出现明显疮疡症状;与空白组比,
模型组及麻油淀粉组血清溶菌酶含量显著降低(P<0.01),说
明造模成功;与模型组比,白蔹水煎液大、中、小剂量组,白蔹
油糊大、小剂量组及京万红组均可显著提高血清中溶菌酶的
含量(P<0.01);麻油淀粉糊组溶菌酶含量与模型组比无明显
差异,说明单纯麻油淀粉糊局部外用,对大鼠疮疡无明显影
响。因此,白蔹水煎液与白蔹油糊均可显著改善疮疡的感染程
度,促使疮疡面积愈合恢复,从而提示白蔹外用有敛疮生肌的
作用。
2. 对大鼠疮疡模型局部组织形态的影响 见表2。经Ridit检
验,与空白组比,模型组出现显著的疮疡病理损伤(P<0.01),
说明造模成功;与模型组比,麻油淀粉糊组对疮疡的病理变化
改善不明显;京万红组、白蔹水煎液大、中、小剂量组和白蔹油
糊大、小剂量组均可显著改善疮疡的病理变化(P<0.01)。说明
白蔹水煎液与油糊均可促使疮疡缺口组织修复闭合,减少炎细
胞浸润,而麻油淀粉糊组与模型组病理变化基本一致,提示白
蔹外用具有很好的敛疮生肌作用。
剂量组和白蔹油糊大、小剂量组均可显著改善疮疡的病理变
化(P<0.01),白蔹水煎液大剂量组可明显改善疮疡的病理变
化(P<0.05)。说明白蔹水煎液与油糊可促使疮疡缺口组织修
复闭合,减少炎细胞浸润,而麻油组与模型组病理变化基本一
致,提示白蔹外用具有很好的敛疮生肌作用。
组别
空白组
模型组
麻油淀粉糊组
京万红组
白蔹水煎液大剂量组
白蔹水煎液中剂量组
白蔹水煎液小剂量组
白蔹油糊大剂量组
白蔹油糊小剂量组
表2 各组大鼠疮疡模型局部组织形态的比较
+
0
0
1
9
4
8
2
9
6
注:“-”动物皮肤各层结构,毛囊、皮脂腺、皮下组织均正常;
“+”动物皮肤各层结构,毛囊、皮脂腺存在,创疡缺口明显肉芽组织
修复闭合;“++”动物皮肤各层结构,毛囊、皮脂腺消失,创疡缺口一
定闭合周围有少量肉芽组织修复;“+++”动物皮肤各层结构毛囊、
皮脂腺消失,创疡具有较大缺口周围有大量的炎细胞侵润。
-
10
0
0
0
0
0
0
0
0
+++
0
9
5
0
0
0
1
0
0
++
0
1
4
1
6
2
7
1
4
3. 对豚鼠疮疡模型血清溶菌酶含量的影响 见表3。豚鼠
造疮疡模型后,模型局部出现明显疮疡症状;与空白组比,模
型组及麻油淀粉糊组血清溶菌酶含量显著降低(P<0.01),说
明造模成功;与模型组比,白蔹水煎液大、中、小剂量组和白
蔹油糊大、小剂量组及京万红组均可显著提高血清中溶菌酶
的含量(P<0.01)。说明白蔹水煎液与糊剂均可显著改善疮疡
的感染程度,促使疮疡面积愈合恢复,提示白蔹外用有敛疮
生肌的作用。
4. 对豚鼠疮疡模型局部组织形态的影响 见表4。经Ridit
检验,与空白组比,模型组出现显著的疮疡病理损伤,病理变
化显著加重(P<0.01),说明造模成功;与模型组比,麻油淀粉
糊组对疮疡的病理变化改善不明显;京万红组、白蔹水煎液中
组别
空白组
模型组
麻油淀粉糊组
京万红组
白蔹水煎液大剂量组
白蔹水煎液中剂量组
白蔹水煎液小剂量组
白蔹油糊大剂量组
白蔹油糊小剂量组
表4 各组豚鼠疮疡模型组织病理学比较
+
0
0
0
8
3
6
2
8
4
注:“-”皮肤各层结构,毛囊、皮脂腺、皮下组织均正常;“+”皮
肤各层结构,毛囊、皮脂腺存在,组织缺损修复,肉芽组织修复,少
量炎细胞侵润;“++”皮肤各层结构,毛囊、皮脂腺部分消失,组织
缺损,少量肉芽组织和炎细胞侵润;“+++”皮肤各层结构毛囊、皮脂
腺完全消失,组织缺损无修复,大量的炎细胞侵润。
-
10
0
0
0
0
0
0
0
0
+++
0
9
6
0
3
0
6
0
0
++
0
1
4
2
4
4
2
2
6
组别
空白组
模型组
麻油淀粉糊组
京万红组
白蔹水煎液大剂量组
白蔹水煎液中剂量组
白蔹水煎液小剂量组
白蔹油糊大剂量组
白蔹油糊小剂量组
表3 各组豚鼠疮疡模型血清溶菌酶含量比较(x-±s,n=10)
溶菌酶含量(µg/mL)
6.84±0.55
3.21±0.34**
3.64±0.51**
7.13±0.71△△
6.26±0.67△△
6.74±0.61△△
5.93±0.65△△
6.78±0.61△△
6.40±0.66△△
讨论
疮疡是中医外科临床的常见病多发病,具有发病迅速,部
分病情较重等特点,在面部可引起疔疮走黄(西医成为败血症
或脓毒败血症),在手、足易引起伤筋损骨的严重后果。创伤出
现感染以后,就形成了疮疡。一般“伤”在皮肤,出现感染后,伤
口比较浅,感染也就比较薄,故称为“疡”。“创”在肌肉深处,
感染以后脓血郁积较深,同时伴有红肿热痛,故称为“疮”[4]。
目前常通过动物人工创伤并用金黄色葡萄球菌感染的方法来
造疮疡模型[2],疮伤感染2d后,均见食量减少,俯卧少动,有触
痛,伤口有脓性分泌物,伤口周围出现红、肿、热、痛现象[5],血
清中溶菌酶含量显著降低,动物皮肤各层结构毛囊、皮脂腺消
失,创疡具有较大缺口,周围有大量的炎细胞侵润,使血管壁通
• 705 •中华中医药杂志(原中国医药学报)2012年3月第27卷第3期 CJTCMP , March 2012, Vol . 27, No. 3
药品,2007,9(10):60-62
LI Hong-juan,ZHANG Lei,WANG Shu-guang.Pharmacological
action and clinical application of Radix Ampelopsis.Food and
Drug,2007,9(10):60-62
[2] 昌兰芳.黄及疮疡膏治疗大鼠疮疡模型的实验研究.湖北中
医学院学报,2005,7(1):43
CHANG Lan-fang.The experimental research of rhubarb and
rhizoma bletillae sores ulcers cream on rats sores ulcers model.
Journal of Hubei College of TCM,2005,7(1):43
[3] 马忠丽,张汉庆,覃剑,等.中药“敛疡散”对慢性皮肤溃疡的
作用机制研究.中国中医骨伤科杂志,2007,15(4):18-20
MA Zhong-li,ZHANG Han-qing,TAN Jian,et al.Study on
mechanisms of‘Lianyangsan’for treatment of skin ulcer.Chinese
Journal of Traditional Medical Traumatology & Orthopedics,2007,
15(4):18-20
[4] 张粹昌.疮疡发病机制之探讨.中国医药导报,2009,6(7):86
ZHANG Cui-chang.Explore the pathogenesis of sores ulcers.China
Medical Herald,2009,6(7):86
[5] 罗宇慧,韩晓明,常复蓉,等.祛腐生肌软膏对疮疡模型大鼠治
疗作用的实验研究.中国中医药科技,2002,9(5):283-284
LUO Yu-hui,HAN Xiao-ming,CHANG Fu-rong,et al.The
experimental research of remove saprophytic muscle ointment on
treatment function in rats sores ulcers model.Chinese Journal of
Traditional Medical Science and Technology,2002,9(5):283-284
[6] 曹涛,刘同军,王艳君.微生物溶菌酶的研究及应用.中国调味品,
2011,36(3):23-32
CAO Tao,LIU Tong-jun,WANG Yan-jun.Research and application
of microbial lysozyme.China Condiment,2011,36(3):23-32
[7] 徐强,张朝晖.油膏制作中的麻油中医作用机制探讨.中医外
治杂志,2011,21(2):62-63
XU Qiang,ZHANG Zhao-hui.Study on Chinese medicine
mechanisms of sesame oil in producing unguentum.Journal of
External Therapy of TCM,2011,21(2):62-63
[8] 俞琦,蔡琨,田维毅.白蔹醇提物免疫活性的初步研究.贵阳中
医学院学报,2005,27(2):20-21
YU Qi,CAI Kun,TIAN Wei-yi.The preliminary research of
immunocompetence on alcohol extract of ampelopsis.Journal of
Guiyang College of TCM,2005,27(2):20-21
[9] 许斌.中药外敷治疗疮疡机制的实验研究.辽宁中医杂志,
2005,32(8):853
XU Bin.Experimental research on mechanism of traditional
Chinese medicine external treatment on sores ulcers.Liaoning
Journal of TCM,2005,32(8):853
[10] 刘建青,余更新,杨华,等.外敷中药治百病.北京:华夏出版社,
2006:8
LIU Jian-qing,YU Geng-xin,YANG Hua,et al.External Application
of Traditional Chinese Medicine Can Treatment All Diseases.
Beijing:Huaxia Publishing House,2006:8
(收稿日期:2011年10月6日)
透性增加,产生红肿等现象。
为较好判断白蔹外用对疮疡的疗效,本实验对血清中溶菌
酶的含量、疮疡部位皮肤组织病理变化进行评价。溶菌酶的测
定更能反映白蔹在疮疡模型治疗过程中的作用,溶菌酶是存在
于人体正常体液及组织中的非特异性免疫因素,具有抗菌、抗
病毒、消肿的功效[6],能客观反映白蔹对疮疡的治疗情况。组织
病理学变化可以反映受损组织各层皮肤的炎细胞浸润程度和
愈合情况,能直接反映药物的疗效。实验结果显示白蔹水煎液
大、中、小剂量组和白蔹油糊大、小剂量组均可显著提高血清中
溶菌酶的含量和显著改善疮疡的病理变化。在对大鼠和豚鼠
疮疡模型血清溶菌酶含量的影响方面,京万红组、白蔹水煎液
中剂量组和白蔹油糊大剂量组均略优于白蔹水煎液大、小剂量
组和白蔹油糊小剂量组,但无统计学意义。在对大鼠和豚鼠疮
疡模型组织病理学的影响方面,京万红组和白蔹油糊大剂量组
相差不大,均略优于各给药组;白蔹水煎液中剂量组略优于白
蔹水煎液大、小剂量组及白蔹油糊小剂量组;麻油淀粉糊组与
模型组溶菌酶含量及病理变化均基本一致,提示白蔹外用具有
很好的敛疮生肌作用。本实验中麻油淀粉糊组各项指标与模型
组相差不大,提示对疮疡的改善主要不是麻油本身的作用;但
麻油气味芳香,其香气有利于维护毛细血管的通透性,改善血
液循环[7],有助于药物的吸收。现代临床常用麻油调糊治疗烧
烫伤,增强疗效。
现代研究认为,白蔹可促进T淋巴细胞增殖能力、巨噬细
胞吞噬功能,而在抗感染免疫中,巨噬细胞发挥着吞噬、杀菌、
清除炎症产物和修复组织等重要作用,T淋巴细胞不仅可直接杀
伤靶细胞,也可通过释放淋巴因子间接发挥抗感染免疫效应[8]。
这表明白蔹可增强动物的免疫功能,因此其外敷应用于治疗疮
疡可能具有直接抗菌和调节机体免疫功能双重机制。有研究
认为,创面愈合的本质与核心是肉芽组织中表皮细胞生长因子
(EGF)的调控及其结果,创面愈合的过程是多种生长因子共
同作用的结果,这在一定程度上反映了外用中药在分子水平上
的促疮面愈合机制[9]。白蔹的敛疮生肌功能可能会促进动物皮
肤在创面愈合早、中期创面EGF总量增多,从而加快创面的愈
合。这很可能是外用白蔹促进创面愈合的重要途径之一。
本实验为白蔹外用敛疮生肌的功能提供了实验依据,有
报道现代临床用白蔹和麻油调糊治疗烧伤创面[1]、多发性毛囊
炎、唇疮、疔疮[10]疗效显著,故本实验采用白蔹麻油调糊外用
治疗疮疡。2005版《中华人民共和国药典》记载白蔹外用适量,
煎汤洗或研成极细粉敷患处,故本实验同时也采用白蔹水煎液
外用治疗疮疡,为白蔹敛疮生肌的外用功能提供了实验依据,
也为临床疮疡的治疗提供简易有效的救治方法。白蔹敛疮生肌
的外用功能也为白蔹的临床外用提供了理论支撑。
参 考 文 献
[1] 李洪娟,张蕾,王术光.白蔹的药理作用及临床应用.食品与