全 文 ：竹根七中白桦脂醇的分离与含量测定
寇智斌，夏晓慧，陆遥，何林林，林奇泗*
（徐州医学院药学院，江苏徐州 221004）
摘 要：以植物竹根七根及根茎为原料，从中分离并检测天然防腐成分。用系统溶剂法从竹根七中分离得到化合物
纯品，用核磁法测定其结构，用高效液相法测定其含量。所得化合物为白桦脂醇，其含量为（0.28±0.02）mg/g。竹根七中
含有天然防腐成分白桦脂醇。
关键词：竹根七；白桦脂醇；高效液相
Isolation and Determination of Betulin in Tupistra chinensis
KOU Zhi-bin，XIA Xiao-hui，LU Yao，HE Lin-lin，LIN Qi-si*
（College of Pharmacy，Xuzhou Medical College，Xuzhou 221004，Jiangsu，China）
Abstract：The natural preservatives composition of roots and rhizomes of Tupistra chinensis was separated and
detected. The systematic solvent extraction method was used to isolate active ingredients . Structure of isolated
compound was identified by nuclear magnetic， and its content was determined by HPLC. The isolated compound
was identified as Betulin， and its content was （0.28±0.02） mg/g. Betulin which is a kind of natural ingredient
exists in Tupistra chinensis.
Key words：Tupistra chinensis； Betulin； HPLC
食品研究与开发
Food Research And Development
2015年 12月
第 36卷第 23期
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.23.033
基金项目：徐州市科技厅 2014年立项课题（Xjy201419）
作者简介：寇智斌（1987—），女（汉），药师，本科，研究方向：药物体
内代谢研究。
*通信作者：林奇泗（1980—），男（汉），副教授，博士，研究方向：中
药活性成分分析与体内代谢研究。
天然药物竹根七（Tupistra chinensis Bak.）为百合
科开口箭属植物，分布于中国陕西、安徽、浙江、江西、
福建、台湾、四川、云南等地，生于林下阴湿处、溪边或
路旁。竹根七以根状茎入药，其味甘、微苦，有小毒，具
有清热解毒，散瘀止痛的功效。常用于治疗白喉，风湿
关节痛，腰腿疼；外用治痈疖肿毒[1-2]。竹根七具有多方
面药理活性，其醇提物具有祛痰、抗炎及抑菌作用 [3]。
经现代研究发现，竹根七提取物在体内外试验中均表
现出较强的抗肿瘤和抗菌活性[4]。竹根七的抗肿瘤和
抗菌活性成分主要是其酸性多糖和总皂苷[5-7]。
本研究组在对其进行活性研究时发现，竹根七中
总酚酸的抗氧化和抗菌活性最强[8]。本研究组采用系
统提取法对竹根七进行成分提取，用核磁及液相方法
确定其结构，以期明确其作用机理和物质基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器
AV-600 核磁共振仪：瑞士 Bruker 公司；RE-
52AA旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；ZF-1三用紫
外分析仪：上海精科实业有限公司；HZQ-C双层水浴
振荡器：金坛市杰瑞尔电器有限公司；Agilent 1260型
高效液相色仪：安捷伦 Agilent。
1.1.2 试剂与药材
石油醚（60 ℃～90 ℃）、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、乙
醇：购自科特试剂有限公司；薄层层析硅胶 GF254柱层
析硅胶（100目～200目）、柱层析硅胶（200目～300目）、
Sephadex LH-20、D101大孔树脂：购自青岛海洋化工
有限公司。
竹根七药材（批号 90043）：购自鹏翔药业，粉碎并
过二号筛后贮于干燥器备用；对照品白桦脂醇（批号
130914）：购自四川省维克奇生物科技有限公司。
1.2 方法
1.2.1 提取与分离
将药材粗粉 5 kg，加入 10倍量 75 %乙醇浸泡过
检测分析
125
夜，采用中药提取罐进行回流提取，提取 3次，提取时
间依次为 2、1.5 h和 1.5 h，合并滤液，减压回收溶剂，
浓缩后得浸膏，将浸膏用适量水稀释悬浮后，依次先
后用石油醚、氯仿和乙酸乙酯萃取 5次，合并各萃取
液，减压浓缩后得到 4个萃取层的浸膏。
将乙酸乙酯浸膏用硅胶拌样后，采用硅胶柱色谱
分离，以氯仿-甲醇溶剂系统不同梯度（100 ∶ 0、95 ∶ 5、
90 ∶ 10、85 ∶ 15、80 ∶ 20，体积比）进行洗脱。将洗脱后得
到的馏分通过 TLC检查合并相近组分。在氯仿-甲醇
（95 ∶ 5，体积比）的梯度洗脱出馏分，经过反复硅胶柱
色谱和凝胶柱色谱分离和纯化，得到某白色结晶。
1.2.2 核磁共振测定结构
将 1.2.1项下分离得到的白色结晶进行 1H NMR
spectra和 13C NMR核磁分析。所得白色结晶溶解于吡
啶中，在 300 MHz下分析，以四甲基硅烷（TMS）为标准
对照品计算各峰的化学位移 δ（mg/L）。
1.2.3 HPLC分析
1.2.3.1 色谱条件与系统试用性试验
Agilent 1260型高效液相色仪；色谱柱：COSMOSIL
5C18-MS-Ⅱ（4.6ID×250 mm）Manf.No.K66428；流动相：
甲醇-0.1 %甲酸（85 ∶ 15，体积比）；流速：1.0 mL/min；
柱温：30℃；进样量：20 μL；检测波长：210 nm。按上述色
谱条件进样，白桦脂醇与相邻峰的分离度皆大于 1.5，
理论板数按白桦脂酸峰和白桦脂醇峰皆大于 3 000。
1.2.3.2 供试品溶液的配制
精密称取干燥的竹根七粗粉 5 g，以甲醇为提取溶
剂，于索氏提器中水浴恒温 85℃提取 3次，每次 60min。
滤过，合并 3次滤液于旋转蒸发器上旋转蒸发将其浓
缩近干。将浓缩后样品用甲醇溶解滤过后转移至 25 mL
容量瓶中，用甲醇定容至刻度。
1.2.3.3 对照品溶液配制
称取白桦脂醇对照品适量，用甲醇溶解于 50 mL
容量瓶中定容至刻度，精密配制浓度为 0.05、0.10、0.15、
0.20、0.25 mg/mL白桦脂醇对照品溶液。
1.2.3.4 高效液相色谱分析
取 1.2.3.3项下一系列不同浓度的白桦脂醇对照
品溶液按 1.2.3.1项下色谱方法分析，计算回归方程。
再取 1.2.3.2项下供试品溶液按 1.2.3.1项下色谱方法
分析，计算含量，测定 3次，求平均值及 RSD值。
2 结果与讨论
2.1 结构鉴定
将 1.2.1项下分离得到的白色结晶进行核磁氢谱
和碳谱的分析，得到结果如下：白色结晶，1HNMR（吡
啶，300 MHz）0.815（3H，s），0.845（3H，s），1.043（6H，s），
1.052（3H，s），1.056（3H，s），1.787（3H，s），3.533（1H，
dd，11.4，4.2 Hz），4.754 （1H，s），4.964 （1H，s）；13C -
NMR（吡啶，300 MHz），150.245（C-20），109.964（C-
29），78.153（C-3），56.655（C-17），51.011（C-9），49.823
（C-19），47.841（C-18），42.883（C-14），41.156（C-8），
39.547（C-4），38.692（C-13），37.561（C-10），34.872（C-
7），32.931（C-16），28.672（C-23），28.333（C-2），
21.234（C-11），19.502（C-30），16.365（C-26）与文献[9]
报道一致，故确定该化合物为白桦脂醇（Betulin），分子
结构见图 1，该化合物为首次从竹根七中分离得到。
2.2 样品含量测定
按 1.2.3.3项下对照品溶液，分别进样测定。以峰
面积（Y）对进样量（X）进行线性回归，得回归方程：Y=
6 434.1X+85.25，r=0.999 3。取 1.2.3.2项下供试品溶液
3份，按 1.2.3.1项下色谱条件进样分析，色谱图见图
2。将峰面积代入回归方程求得竹根七中白桦脂醇平
均含量为 0.28 mg/g，RSD为 1.7 %。
3 结论
白桦脂醇及其衍生物作为生物制剂广泛应用于
食品、药品和化妆品行业。其在食品开发领域可作为
一种天然的新型防腐剂用于肉制品的防腐。据文献报
道，以牛肉为原料，使用白桦脂醇作为天然的新型防
腐剂可得到货架期和感官性质俱佳的牛肉干产品 [10]。
白桦脂醇多从白桦树皮中提取，在其他植物中也有少
量存在。然而白桦树是多年生木本植物，采收其树皮
对森林植被的破坏较大。如果能够广泛的发掘含有白
桦脂醇的天然植物，尤其是生长周期短的草本植物，
必将产生的良好的社会和经济效益。目前在竹根七中
发现白桦脂醇尚属首次。竹根七甲醇提取物对细菌的
抑制作用也印证了其作为天然防腐成分来源的可行
白桦脂醇 Betulin
化学结构式：C30H50O2
分子量：442.72
图 1 白桦脂醇分子结构图
Fig.1 Molecular structure of Betulin
寇智斌，等：竹根七中白桦脂醇的分离与含量测定 检测分析
126
图 2 竹根七提取物高效液相色谱图
Fig.2 HPLC chromatograms of the reference substance and extracts from Tupistra chinensis
性。本研究为天然防腐剂植物来源的扩大提供了试验
基础。
参考文献：
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收稿日期：2015-08-31
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b
a.供试品溶液；b.白桦脂醇对照品溶液。
寇智斌，等：竹根七中白桦脂醇的分离与含量测定检测分析
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