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[收稿日期] 2009-11-14
[ 基金项目] 国家自然科学基金(编号:30960531);贵州省卫生厅优秀医学青年人才专项基金(编号:gzw k j 2008-2-004)　[ 作者简介] 陶玲 ,女,
硕士 ,副教授 ,电话:0851-6909274 , E-mail:s xc9860@sina.com 　[ 通讯作者] 沈祥春 ,男 , 教授 ,电话:0851-6908108 , E-mai l:sh enxiangchun@
126.com
艳山姜挥发油抗炎镇痛作用的实验研究
陶玲 ,沈祥春 ,彭佼 ,柏帅　(贵阳医学院 ,贵州 贵阳 550004)
[ 摘要] 　目的:研究艳山姜挥发油抗炎镇痛的药理作用 , 为建立以活性组分为基础的艳山姜质量标准提供实验依据。方法:
采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀及皮肤毛细血管通透性实验 、醋酸致小鼠扭体反应与小鼠热板致痛等实验动物模型对艳山姜挥
发油进行整体动物生物活性评价。结果:艳山姜挥发油能够显著减少醋酸致小鼠扭体次数 , 延长热板痛反应时间 ,显著抑制
二甲苯致小鼠耳廓肿胀及皮肤毛细血管通透性的增高 , 与模型组比较差异有显著性。结论:艳山姜挥发油具有较好的抗炎镇
痛作用 ,其挥发油含量分析 , 可以作为衡量艳山姜药材质量标准的指标性成分之一。
[ 关键词] 　艳山姜挥发油;抗炎;镇痛
[中图分类号] R285.6　　[ 文献标识码] A　　[文章编号] 1001-5213(2010)09-0722-03
Experimental study on the anti-inflammatory and analgesic effects in vivo of essential oil from
fructus Alpiniae zerumbet in mice
TAO Ling ,SHEN Xiang-chun ,PENG Jiao ,BO Shuai(Guiyang Medica l colleg e , Guizhou , Guiyang 55004 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To investig ate the anti-inflammato ry and analg esic effects of essential oil o f f ructus A lpiniae zerum-
bet in mice;to prov ide expe rimental ba sis fo r e stablishing the quality standard of fructus A lpiniae z erumbet on the basis of bio-
activ e ingr edients.METHODS　The inflammatory models we re produced by xylene , the ear edema and capillary permeability
were a ssayed in mice.The analg esic effec ts w ere evalua ted by w rithing response induced by acetic acid and ho t-plate procedure
in mice.RESULTS　There were significantly analg esic effects of essential oil of f ructus A lpiniae zerumbet , and it could signifi-
cantly inhibit ear edema and skin capillar y permeability induced by xylene , the re was significant differ ence compared w ith con-
trol g roup.CONCLUSION　Essential oil is bioac tive ing redient o f f ruc tus Alp iniae zerumbet with anti-inflammatory and analg e-
sic effects , w hich can be used as the marker ing redient of quality standand of f ruc tus A lpiniae zerumbet.
KEY WORDS:essential oil of f ruc tus A lpiniae zerumbet;anti-inflamma to ry;analg esic
　　贵州民族药艳山姜为姜科山姜属植物艳山姜
A lpinia zerumbet(Pers.)Burt t et Smith的干燥成
熟果实 ,具有温中燥湿 ,行气止痛 ,截疟的功效 ,用于
治疗心腹冷痛 ,胸腹胀满 ,消化不良 ,呕吐腹泻等症
状 ,已被收载入《贵州省中药材 、民族药材质量标
准———2003版》[ 1] 。艳山姜挥发油具有降血脂 、降
血压 、镇痛等药理作用 ,其作用机制与改善氧化应激
状态和 NO-cGMP 系统密切相关[ 2-3] 。但是 ,这些研
究多采用的是 Alpinia zerumbet(Pers.)Burt t et
Smith的叶 ,与我国民间及贵州民族药艳山姜的药
用部位为果实有所不同[ 3] 。国内关于艳山姜的研究
资料较少 ,尤其是活性分析迄今未见明确报道[ 4] 。
根据该药的功能主治及民间应用 ,结合挥发油药理
作用的现代研究 ,本实验主要考察艳山姜挥发油的
抗炎 、镇痛的药理效应 ,以确证挥发油是否可以作为
艳山姜的生物活性的质控标准 ,为艳山姜的开发和
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有效利用提供参考依据。
1　材料
UV-260型分光光度计(日本岛津公司);艳山
姜挥发油制备与分析:艳山姜成熟果实采自贵州省
贞丰县 ,凭证标本经贵阳医学院生药学与药用植物
学教研室陈祖云副教授鉴定为姜科山姜属植物艳山
姜 A lpinia zerumbet(Pe rs.)Burt t et Smi th 的干燥
成熟果实 ,按中国药典 2005年版一部挥发油提取的
要求进行提取 ,所得艳山姜挥发油为淡黄色透明液
体 ,得率为1.3 mL·kg-1 ,具有较为浓烈的香味 。以
HP6890/HP5973 GC-MS联用仪分析挥发油组分
与含量 ,分离出 83个组分 ,鉴定了 66 个化合物 ,占
其总量的95.52%,其中 1 , 8-桉叶素(9.17%)含量
最高 , 其余依次为 β-蒎烯(7.86%)、P-牡荆油
(7.57%)、β-水芹烯(7.50%)、α-蒎烯(5.83%)、樟
脑萜 (5.72%)、桃 金娘 烯 醛 (4.80%)、樟 脑
(4.74%)、 L-龙 脑 (4.55%)、石 竹 烯 氧 化 物
(4.31%)、L-芳樟醇(3.73%),以上 11 个化合物共
占挥发油总量的65.78%,挥发油以 0.5%CMC-Na
混悬至相应浓度用于动物实验[ 5] ;阿司匹林(中国医
药公司上海分公司 , 批号 840130);试剂均为分析
纯;清洁级昆明种小鼠 ,体质量 18 ～ 22 g , ♀♂兼用
[贵阳医学院实验动物中心 ,动物合格证号:SCXK
(黔)2002-0001] 。
2　方法
2.1　对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响[ 6] 　选取
体质量(20±2)g 小鼠 50只 ,随机分为 5组 ,即模
型组 、阿司匹林组 300 mg·kg-1 、艳山姜挥发油高 、
中 、低剂量组 52 μL (40 g 药材/kg)、中剂量组 26
μL(20 g 药材/kg)、低剂量组 13 μL(10 g 药材/kg ,
每组 10只小鼠 ,给药容积为 10 mL·kg -1 ,连续灌胃
给药 5 d ,末次给药 40 min 后 ,于小鼠右耳(两面)均
匀涂抹二甲苯 20 μL/只致炎 ,左耳不涂 ,同时立即尾
静脉注射 1%伊文思兰0.1 mL·(10 g)-1 。 20 min 后
将小鼠颈椎脱臼处死 ,用直径为 8 mm 的打孔器沿
左右耳片同一部位打下圆耳片 ,电子天平上称量 ,右
耳与左耳质量之差即为肿胀度 。并计算肿胀抑制
率 ,肿胀抑制率(%)=(模型组平均肿胀度-给药组
平均肿胀度)/模型组平均肿胀度×100%。
2.2　伊文思蓝标准曲线的的制作[ 7] 　精密称取伊
文思蓝粉末0.010 g ,置于 100 mL 量瓶中 ,用甲酰
胺溶解并定容 ,配成 100 mg·L-1溶液 ,在分别精密
吸取0.25 ,0.5 ,1 ,2 ,4 ,6 ,8 mL 该溶液于 10 mL 量
瓶中并再次用甲酰胺定容 ,以 620 nm 波长 ,测定其
吸光度(A),甲酰胺调零 ,以吸光度(A)对溶液中伊
文思蓝的浓度(C)得回归方程为 A =0.096 4C+
0.024 2 , r=0.999 9 ,伊文斯蓝浓度在2.5 ～ 80 mg
·L-1与吸光度呈良好的线性关系。
2.3　对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响[ 8] 　将致
炎右耳片剪成数片浸入 2 mL 甲酰胺中 ,38 ℃水浴
48 h 将染料渗出 ,离心 ,上清液于 620 nm 处测吸光
度(A),按“2.2” 伊文思蓝标准曲线计算伊文思蓝
的含量。
2.4　对热板致痛的影响[ 9] 　取♀昆明种小鼠 ,体质
量(20±2)g ,置于(55±0.5)℃的热板上 ,记录小鼠
自放置于热板上至出现舔后足反应所需的时间 ,即
为痛阈值 ,凡小于 5 s或大于 30 s及跳跃的均淘汰 ,
合格小鼠再测一次痛阈值 ,取 2次平均值作为各鼠
给药前痛阈值 。选取合格小鼠 50只 ,按体质量与痛
阈值随机分为 5组 ,10只/组 ,分组与给药同“2.1” 。
于末次给药后 40 min测定各鼠痛阈值(用药后小鼠
痛阈为 60 s者中止实验 ,其痛阈值以 60 s计)。计
算痛阈提高百分率:痛阈提高百分率(%)=(给药后
平均痛阈值-给药前平均痛阈值)/给药前平均痛阈
值×100%。
2.5　冰醋酸致小鼠扭体法[ 10] 　取昆明种小鼠 50
只 , ♀♂各半 ,按体质量随机分为 5组 ,分组与给药
同“ 2.1” ,于末次给药 40 min 后 , 小鼠腹腔注射
0.6%冰醋酸0.1 mL·(10 g)-1 ,观察并记录 20 min
内小鼠的扭体次数并计算镇痛抑制率 ,镇痛抑制率
(%)=(模型组平均扭体次数-给药组平均扭体次
数)/模型组平均扭体次数×100%。实验过程中室
温维持在(18±1)℃。
2.6　统计学处理　实验数据用 SPSS 10.0 统计分
析软件进行分析 ,两两比较用 t检验 。
3　结果
3.1　对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响　小鼠右耳
涂二甲苯后 ,耳廓显著肿大。阿司匹林显著抑制二甲
苯所导致小鼠耳廓肿胀的急性炎症反应 ,表现为肿胀
度降低 。艳山姜挥发油各剂量组对二甲苯所致的急
性炎症反应具有显著的抑制作用 ,结果见表 1。
表 1　艳山姜挥发油对二甲苯所致小鼠耳片肿胀度的影响
( x±s , n=10)
Tab 1　Effects of essential oil from fructus Alpiniae Zerumbet
on ear sw elling degree of mice induced by xy lene( x±s , n=10)
组别 剂量/μL·kg -1 肿胀度/mg 抑制率/ %
模型组 - 15.6±5.9 -
阿司匹林 300 mg·kg -1 7.7±4.7b 50.6
艳山姜挥发油 52 9.5±5.0a 39.1
26 10.2±6.3 34.6
13 11.1±7.3 28.8
注:与模型组比较 , aP < 0.05 , bP < 0.01
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3.2　对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响　小鼠尾
静脉注射伊文思蓝后 ,由于二甲苯导致小鼠耳部充
血 、水肿 ,因此伊文思蓝随血流分布于小鼠耳部分布
较多 。抗炎药物抑制二甲苯所致耳廓炎症 ,小鼠耳
片伊文思蓝含量减少 。结果提示 ,阿司匹林和艳山
姜挥发油具有显著的抑制炎症渗出 ,降低皮肤毛细
血管通透性的作用。见表 2 。
表 2　艳山姜挥发油对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响( x
±s , n=10)
Tab 2　Effects of essential o il f rom fructus A lpiniaeZerum-
bet on blo od capillary pe rmeability of skin induced by xylene
( x±s , n=10)
组别 剂量/μL·k g-1 A620 伊文斯蓝质量浓度/mg·L -1
模型组 - 0.53±0.17 52.6±17.9
阿司匹林 300 mg·kg -1 0.28±0.14b 26.9±15.0b
艳山姜挥发油 52 0.34±0.13a 32.5±13.5a
26 0.39±0.16 37.6±16.2
13 0.41±0.14 39.8±15.0
注:与模型组比较 , a P< 0.05 , bP< 0.01
3.3　对热板致痛的影响　连续给药 5 d后 ,阿司匹
林组 、艳山姜挥发油各剂量组均显著延长小鼠的痛
阈值 ,与模型组比较差异具显著性 ,痛阈提高百分率
分别为59.9%, 46.8%,26.1%,8.2%。
3.4　冰醋酸致小鼠扭体法　结果见表 3。
表 3　艳山姜挥发油对醋酸致小鼠扭体反应的影响( x±s , n
=10)
Tab 3　Effects of essential o il f rom fructus A lpiniaeZerum-
bet on unithing respense induced by ace tic acid in mice( x±s ,
n=10)
组别 剂量/μL·kg -1
扭体次数
/次/ 20 min
镇痛抑制率
/ %
模型组 - 43.5±12.8 -
阿司匹林 300 mg·kg -1 22.5±8.7b 48.2
艳山姜挥发油 52 25.5±10.3b 41.4
26 29.3±12.1a 32.6
13 36.7±10.6 15.6
注:与模型组比较 , a P<0.05 , bP<0.01
4　讨论
按照艳山姜主治功效及植物基源生物活性效应
分析 ,应化入芳香行气开窍类药物 。中药中具有“辛
香之气”的药物心 、脑血管系统具有广泛的生物活
性 ,同时多数具有抗炎 、镇痛的药理作用[ 11] ,且具有
的共性物质基础就是挥发性物质。本研究采用药典
规定的挥发油提取方法 ,以经典的抗炎镇痛动物模
型 ,评价其整体动物生物活性 ,力图建立以活性组
分/部位为质控标准的艳山姜定量成分 。
二甲苯致小鼠耳廓肿胀 、皮肤毛细血管通透性
增高两类急性非特异炎症模型评价艳山姜挥发油对
早期急性炎症的影响 ,以经典的镇痛模型———热板
法和醋酸所致扭体法实验评价镇痛作用。实验结果
证实 ,艳山姜挥发油提取物能够有效抑制二甲苯致
小鼠耳廓肿胀及皮肤毛细血管通透性增高 ,能够提
高小鼠热刺激体表的痛阈 ,抑制醋酸刺激腹腔黏膜
引起的痛反应 ,减少扭体次数。
以上实验结果证实 ,贵州地产艳山姜挥发油具
有显著的抗炎镇痛作用 ,为植物资源的合理研究开
发与充分有效利用提供了实验基础。目前 ,贵州艳
山姜主要依靠性状鉴别 ,尚未见有定量的质控标准
研究 ,其质量标准亟需提高 ,以适应当前社会发展的
需要[ 12] 。本研究证实 ,挥发油含量检测与分析 ,可
以作为艳山姜基于生物效应组分的质控标准之一。
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