全 文 ：第 23卷　第 5期 中　南　林　学　院　学　报 Vol. 23　 No. 5
　 2003年 10月 JOU RN AL OF CENT RAL SOUT H FO RESTRY UNIV ERSITY Oct. 2003　

[文章编号 ] 1000- 2502( 2003) 05- 0056- 03
虎眼万年青离体快繁体系及无糖生根培养
屈云慧 , 熊　丽 , 张素芳 , 吴丽芳 , 杨春梅
(云南省农业科学院园艺研究所花卉研究中心 ,云南 昆明 650205)
[摘　要 ]　以虎眼万年青的叶片为外植体 ,对不同激素浓度的愈伤组织和不定芽的诱导情况以及再生芽的无糖培养情况进行了研
究 .结果表明: 适于愈伤组织诱导及不定芽分化的培养基为 MS+ BA 1. 0 mg /L + NAA 0. 1 mg /L,适宜的继代培养基为
M S+ BA 0. 5 mg /L+ NAA 0. 1 mg /L;用无糖培养体系进行生根培养时 ,基质中 N AA浓度为 0. 1 mg /L时 ,再生芽的生根率达
94% ,种苗质量优于常规组培 .
[关键词 ]　 园艺学 ; 虎眼万年青 ; 快速繁殖 ; 无糖培养
[中图分类号 ]　 S682. 36; Q943. 1　　　　 [文献标识码 ]　 A
Rapid Micro Propagation System in vitro and Photo-autotrophic
Culture of Ornithogalum dubium
QU Yun-hui, X IONG Li , ZHANG Shu-fang , WU Li-fang, Y AN G Chun-mei
( Flowers Research Center of Horticul ture Research Inst itute of Yunnan Agriculture Sciences Acad emy, Kunming 650200, Yunnan, China)
Abstract: A study was made, in dif f erent densi ties of hormon e, of th e inducement of cal lus and shoots and the sugar-f ree cul ture of
regeneration shoots f rom Ornithogalum dubium , using i t s bas al leav es as ex plants. The result s show th at th e cul ture medium of M S
+ BA 1. 0 mg /L + N AA 0. 1 mg /L is suitable to cal lus inducing and sh oot breaking u p and that of MS+ BA 0. 5 mg /L+ N AA 0. 1
mg /L is sui table to subcul tu re; and that in th e sugar-f ree cul tu re sys tem, w h en NA A 0. 1 mg /L is put in the basic culture medium,
th e rooting rate reaches 94% and th e quali ty of s eedlings is superior to th at cul tivated by conventional t iss ue culture.
Key words: hor ticulture; Orni thogalum dubium; rapid propagation; sugar-f ree cult ivation
虎眼万年青 Orni thogalum dubium为百合科 Liliaceae虎眼万年青属 Ornithogalum多年生草本植物 ,原产
欧洲、西亚和南非 .其花黄色或橙红色 ,花心有黑色“虎眼” ,数朵排成顶生 ,总状花序或伞房花序 ,花型优雅 ,花
期长 ;叶基生 ,厚革质 ,常绿 ,花叶俱佳 ,是近几年来引进栽培的球根花卉新品种 .其鳞茎自然分株繁殖 ,繁殖系
数小 .利用组织培养方法能较好地满足商业性种植对种苗的需求 ,国外已开始这方面的研究 ,国内尚无相关报
道 .无糖 ( Sugar-free)培养又称光独立 ( Pho to auto trophic)培养 ,是近几年新兴的组培新方法 ,该法以大型培养
容器替代常规的小培养瓶 ,通过对 CO2浓度、光照强度、温度、相对湿度、气流速度等环境因子的调节 ,使用不
加糖的培养基 ,为植株自养生长创造适宜的生长环境条件 ,对种苗质量的提高有促进作用 .
本研究中 ,对培养基激素浓度对虎眼万年青离体快速繁殖的影响进行了探索 ,并对增殖再生的不定芽进行
无糖生根培养 ,在此基础上建立适于组培种苗工厂化生产的技术体系 .
[收稿日期 ] 2003-05-27
[基金项目 ] 中以合作项目 ( 2001GH05) .
[作者简介 ] 屈云慧 ( 1972- ) ,女 ,云南大理人 ,助理研究员 ,硕士研究生 ,主要从事花卉组织培养技术研究及组培种苗生产管理 .
DOI : 10. 14067 /j . cnki . 1673 -923x . 2003. 05. 015
1　材料与方法
1. 1　供试品种
供试品种为从国外引进的商业品种 ,虎眼万年青 Ornithogalum dubium (英文名为 Yellow Chink) .
1. 2　外植体处理
取虎眼万年青新萌发的叶片为外植体 ,用自来水冲洗干净后 ,用 75%酒精浸泡 1～ 2 min,再用 0. 1%
HgCl2溶液消毒 15～ 20 min,无菌水冲洗 4～ 5次 ,将叶片切成 1 cm2大小 .
1. 3　试验方法
将小叶块平放到附加不同激素的 MS培养基上 .培养基中蔗糖 30 g /L,琼脂 6 mL /L, pH5. 8.每个处理接
种 20～ 30个切块 .在培养室内培养 ,培养温度 ( 25± 2)℃ ,光照 12 h /d,光照强度 2 000～ 3 000 lx.
1. 4　无糖生根培养
将达到生根标准的再生芽直接从基部切下 ,移栽于消毒的蛭石上 ,置于无糖培养系统中培养 ,对培养基质
中的 NAA浓度进行筛选试验 .基质附加 MS大量元素 ,室内温度 ( 20± 2)℃ ,培养箱内 CO2体积分数为
0. 10% ～ 0. 12% ,光照条件及湿度依照无糖培养规程适时调整 .与常规组培生根培养进行对照 .
2　 结果与分析
2. 1　不同激素配比对外植体诱导率及形态发生的影响
表 1　不同激素配比对诱导率及形态发生的影响†
Table 1　 Ef fects of dif ferent hormone combinat ion on induction
rate and morpgogenesis
编号 处理接种数 /块
激素浓度 /( mg· L- 1 )
BA N AA
出愈 (芽 )率
/%
诱导频率 /%
愈伤组织 不定芽 根
1 21 0. 5 0. 1 85. 7 47. 6 81. 0 23. 8
2 22 1. 0 0. 1 90. 9 54. 5 86. 4 0
3 21 2. 0 0. 1 95. 2 90. 5 28. 6 0
4 25 0. 5 0. 2 80 32 52. 0 32. 0
5 26 1. 0 0. 2 80. 8 38. 5 76. 9 0
6 28 2. 0 0. 2 82. 1 71. 4 32. 1 0
7 21 0. 5 0. 5 85. 7 33. 3 76. 2 28. 6
8 22 1. 0 0. 5 86. 3 59. 1 68. 2 13. 6
9 20 2. 0 0. 5 80 70 35. 0 0
† 外植体均为靠近叶片基部的切块 .
　　虎眼万年青的叶切块在不同激素
配比的诱导培养基中较易产生愈伤组
织及不定芽 ,切块边缘产生愈伤组织
的机率高 ,而切块表面易产生不定芽 .
在供试的 9个处理中均有愈伤组织及
不定芽的产生 ,总体诱导率均在 80%
以上 .表 1为不同激素浓度的愈伤组
织和不定芽的诱导情况 .由表 1可知 ,
BA浓度高时诱导愈伤组织的效果
好 , N AA与 BA的浓度比例相当时 ,
有利于不定芽的产生 .从总体上来看 ,
处理 3的愈伤组织诱导频率最高 ,其
次为处理 6;处理 2的不定芽诱导频率最高 ; N AA浓度较高时 ( 0. 5 mg /L )或 BA浓度较低时有少量根的再生 .
在培养基中 BA为 1. 0 mg /L, N AA为 0. 1 mg /L时 ,叶片切块诱导长出愈伤组织的同时 ,不定芽的诱导频率
最高 ,在建立虎眼万年青快繁体系时 ,该组合适宜作为诱导培养基 .在进行继代增殖培养时 ,可选择培养基 MS
+ BA 0. 5mg /L+ N A A 0. 1 mg /L,它对不定芽的生长和增殖效果较好 .
表 2　无糖培养中 NAA浓度对生根的影响
Table 2　 Ef fects of NAA combination on root ing in Sugar-free System
处理 N AA浓度
/( mg· L- 1 )
最初生根时间
/d
根数
/条 15 d后平均根长 /cm
生根率
/%
0 10 3 1. 5 69
无糖 0. 1 8 7 1. 8 94
0. 5 8 5 2. 3 78
有糖 0. 5 10 4 2 83
在虎眼万年青叶片的诱导培养中 ,叶片
的取材部位对诱导结果有一定的影响 .靠近
叶基部较厚的叶片切块较易产生愈伤组织及
分化不定芽 ,叶尖部位的切块只能诱导出少
量愈伤组织 ,无不定芽的产生 .所以 ,应选择
生长健壮的叶片作外植体 ,而且应将叶片靠
近顶部 1 /3的部位切去 .
2. 2　再生芽的无糖生根培养
将增殖培养 20 d后 ,长至 3 cm左右的再生芽及时从基部切下 ,转入无糖培养系统中进行生根培养 ,其生
根情况见表 2.在附加不同浓度 NAA的基质中 ,生根情况有差异 .较高浓度的 NAA对生根无明显的促进作
57第 5期 屈云慧等 :虎眼万年青离体快繁体系及无糖生根培养
用 ,而且生根数较少 ,培养 18 d后 ,出苗时根系较长 ,不利于移栽成活 ; 0. 1 mg /L的 NAA生根综合情况最好 ,
根数量较多 ,而且基部膨大 ; N AA浓度为 0时也有 69%的生根率 ,但生根较慢 ,根数量最少 .
在常规的组培生根培养中 ,以 MS+ NAA 0. 5 mg /L为培养基时 ,生根率可达 83% ,但根数较少 ,基部鳞茎
基本无膨大现象的发生 .无糖生根培养的种苗质量明显优于常规组培生根培养的种苗 .
3　讨　论
用虎眼万年青新萌发的叶片切块作外植体在适宜的诱导培养基上培养 ,可以对其进行快速繁殖 .叶片的取
材和消毒都十分方便 ,而且在取材过程中不损耗母株 ,适于引进品种的规模化繁殖与快速生产 .
在虎眼万年青的继代增殖培养中 ,随着继代次数的增加 ,植株体内会有一定的激素累积 ,须根据再生芽的
生长状况适时对培养基中激素浓度进行调整 ,逐步降低激素的用量 ,以保证种苗不发生变异 ,或仅仅发生很小
的变异 ,不断获得健壮的继代苗 .
在无糖培养的基质不加糖 ,可明显减少常规组培技术中污染的发生 ,在一定程度上提高了成苗率 .无糖培
养体系是通过对培养环境 CO2浓度、光照强度、温度、相对湿度、气流速度等环境因子的调节来调整植株生长
的 ,对培养室硬件设施的要求较高 ,在规模化种苗生产中有一定的局限性 .
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[本文编辑:邓白罗 ]
(上接第 44页 )　　 AgNO3是乙烯合成的抑制剂 ,何嵩等 [11 ]观察到 AgNO3可大大加快春兰和墨兰杂交种根
状茎的分化频率 .本试验的结果表明 , AgNO3对墨兰的分化成苗有一定的促进作用 .但更高浓度是否更有利于
墨兰根状茎的分化还有待进一步的研究 .
一般认为 , GA3具有促进茎的伸长和种子发芽的作用 .在组织培养中常用来促进潜伏芽的萌发 .本试验结
果却发现 , GA3对墨兰根状茎的分化成苗有抑制作用 .其原因有待深入研究 .
[参　考　文　献 ]
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