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宁波地区野生换锦花鳞茎的主要成分含量测定



全 文 :收稿日期:2016-03-30 接受日期:2016-05-18
* 通讯作者 Tel:86-574-87609597;E-mail:nbnisui@ 126. com
天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2016,28:1238-1243,1250
文章编号:1001-6880(2016)8-1238-07
宁波地区野生换锦花鳞茎的主要成分含量测定
戴智慧1,龙 骏2,3,俞雷民1,4,倪 穗1*
1宁波大学,宁波 315211;2 南京林业大学,南京 210037;
3宁波市园林管理局,宁波 315010;4 象山县林业特产技术推广中心,象山 315700
摘 要:为了研究宁波地区野生换锦花鳞茎中主要成分的含量差异,以采自舟山大猫岛及宁波市北仑洋涨岙、
奉化萧王庙、象山鹤浦、镇海招宝山、慈溪海黄山等 6 个地区的野生换锦花鳞茎为实验材料,以石蒜碱计总生物
碱的含量,采用分光光度法测定其总黄酮、非淀粉粗多糖及总生物碱的含量;采用 HPLC法测定其加兰他敏的含
量。实验结果表明,6 个地区的野生换锦花鳞茎中主要成分的含量存在一定的差异。不同地区的野生换锦花鳞
茎中的总黄酮、总生物碱、加兰他敏的含量及非淀粉粗多糖的得率变化幅度分别为 1. 095 ~ 1. 751 mg /g、2. 691 ~
5. 559 mg /g、0. 686 ~ 1. 476 mg /g和 11. 590% ~ 14. 182%。其中采自象山鹤浦的总黄酮含量最高,为(1. 751 ±
0. 116)mg /g;慈溪海黄山的非淀粉粗多糖得率最高,为(14. 182 ± 0. 523)%;镇海招宝山的总生物碱含量最高,
为(5. 559 ± 0. 394)mg /g;北仑洋涨岙中加兰他敏含量最高,为(1. 476 ± 0. 018)mg /g。同一地区样品中总生物碱
与加兰他敏的含量呈一定的正相关,相关系数为 0. 601,但并不显著。本研究结果为换锦花人工栽培资源的选
优及开发利用提供理论依据。
关键词:野生换锦花;宁波地区;主要成分;加兰他敏;含量测定
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A DOI:10. 16333 / j. 1001-6880. 2016. 8. 012
Determination of Main Components in Bulbs
of Wild Lycoris sprengeri from Ningbo
DAI Zhi-Hui1,LONG Jun2,3,YU Lei-min1,4,NI Sui1*
1Ningbo University,Ningbo 315211,China;2Nanjing Forestry University,Nanjing 210037,China;3Garden Management
Office of Ningbo City,Ningbo 315010,China;4Xiangshan Forestry Specialty Technology Promotion Center,Xiangshan 315700,China
Abstract:To determine the content of main components in bulbs of wild Lycoris sprengeri from different places of Ning-
bo. The bulbs of wild L. sprengeri collected from Zhoushan,Beilun,Fenghua,Xiangshan,Zhenhai,Cixi were used as ex-
perimental material. The content of lycorine was equal to the content of total alkaloid. The content of total flavones,non-
starch polysaccharides and total alkaloids were analyzed by spectrophotometer and the content of galanthamine was deter-
mined using HPLC. The results indicated that there existed significant differences in the content of main components in
bulbs of wild L. sprengeri from different places. The content of total flavones,total alkaloids,galanthamine and non-starch
polysaccharides of the bulbs of wild L. sprengeri were from 1. 095 to 1. 751 mg /g,2. 691 to 5. 559 mg /g,0. 686 to 1. 476
mg /g and 11. 590% to 14. 182% respectively. The samples from Hepu of Xiangshan had the highest content of total fla-
vones,which was (1. 751 ± 0. 116)mg /g. The samples from Haihuang mountain of Cixi had the highest content of non-
starch polysaccharides,which was (14. 182 ± 0. 523)% . The samples from Zhaobao mountain of Zhenhai had the highest
content of total alkaloids,which was (5. 559 ± 0. 394)mg /g. The samples from Yangzhangao of Beilun had the highest
content of galanthamine,which was (1. 476 ± 0. 018)mg /g. Correlation analysis showed that the relationship between
the contents of total alkaloids and galanthamine was positive in the same place,the correlation coefficient was 0. 601.
However it was not significant. These results provided reference for the optimization and development in the artificial cul-
tivation of L. sprengeri.
Key words:wild Lycoris sprengeri;Ningbo area;main component;galanthamine;content determination
换锦花(Lycoris sprengeri)又名换锦石蒜,为石
蒜科(Amaryllidaceae)石蒜属(Lycoris Herb)多年生
鳞茎类草本植物[1]。在我国主要分布在安徽、江
苏、浙江、湖北等地,常伴生于阴湿山坡或竹林中。
姚丽娟[2]等在 2005 年至 2008 年间,对浙江省换锦
花野生资源分布情况做过详细调查,发现在温州南
麂岛、舟山列岛以及台州玉环海岛等地有大片野生
的换锦花分布,但未在其他地方有所发现。2013 年
9 月宁波市植物学专家林海伦在奉化萧王庙街道的
丹霞地貌考察植物资源时,在山坡的岩壁上意外发
现了大片开淡紫粉色花朵的植物,经鉴定后为换锦
花[3],后课题组又在宁波的其他地区陆续找到了野
生换锦花。
研究发现,石蒜属鳞茎中含有丰富的生物碱、黄
酮类、多糖及凝集素等多种有效的化学成分[4],具
有极高的药用价值。生物碱类成分具有抑制乙酰胆
碱酯酶、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗疟疾等活性[5];其
中加兰他敏作为一种可逆的胆碱酯酶抑制剂,多项
研究表明已可以用于轻、中及重度阿尔茨海默病
(Alazheimer’s disease,AD)的治疗[6]。石蒜属多糖
具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化等多种生物
活性[7];石蒜属黄酮类化合物具有抗氧化、抗癌症、
抗衰老等多种生物活性[8]。对石蒜属植物中总生
物碱及加兰他敏的研究多集中于石蒜[9,10]和忽地
笑[11-14]等物种中以及石蒜属[15]种间生物碱含量差
异的研究上。对石蒜属多糖的研究侧重于植物多糖
的结构组成[16]及提取工艺[17]的研究;对黄酮的研
究只见于对黄花石蒜中黄酮类成分的研究上[18]。
而对宁波地区野生换锦花鳞茎中主要成分的研究,
目前未见报道。
本研究采集了宁波及周边共 6 个地区的野生换
锦花鳞茎,采用紫外分光光度法、HPLC 法测定其主
要成分的含量,以了解各种源地换锦花植物中主要
成分的含量差异,以期为宁波地区野生换锦花资源
的人工种植及合理开发与保护提供理论依据,也为
换锦花选育优良的种质资源提供参考。
1 材料与仪器
1. 1 仪器与试剂
高效液相色谱仪 Agilent 1260(美国安捷伦公
司) :包括 G1315D检测器,G1311C 四元泵,G1329B
自动进样器;优普超纯水系统(成都超纯科技有限
公司) ;SB-5200DTD 超声波清洗机(宁波新芝生物
科技股份有限公司) ;AL104 电子天平(梅特勒-托利
多仪器上海有限公司) ;HH-S4 数显恒温水浴锅(金
坛市医疗仪器厂) ;TU-1810 紫外可见分光光度计
(北京普析通用仪器有限责任公司) ;L600 台式低速
离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司) ;SY-
2000 旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。
标准品:芦丁(UV≥98%,批号:YY20100816) ,
石蒜碱(HPLC≥98%,批号:YY91887) ,加兰他敏
(HPLC≥98%,批号:YY91256)均购于上海源叶生
物科技有限公司。甲醇为色谱纯,水为纯水,其他试
剂均为国产分析纯。
1. 2 实验材料
实验材料于 2014 年 10 月份采自舟山大猫岛、
北仑洋涨岙、奉化萧王庙、象山鹤浦、镇海招宝山和
慈溪海黄山 6 个地区(所有样品均经过原浙江大学
植物分类学家郑朝宗教授的鉴定)。将采集的野生
换锦花鳞茎洗去磷茎外附着的泥土,除去磷茎外黑
色的老皮和根,清洗后,切成薄片,60 ℃烘干至恒
重,粉碎机粉碎后,4 ℃条件下保存备用。
2 实验方法
2. 1 鳞茎总黄酮的提取及含量测定
2. 1. 1 总黄酮的提取
准确称取 6 个地区的换锦花鳞茎粉末 1. 00 g
于三角烧瓶中,加入 80%乙醇 30 mL,60 ℃条件下
超声波连续提取 2 次,每次 40 min。然后于 5000
rpm离心 15 min,取上清液用 80%乙醇定容至 50
mL中备用。
2. 1. 2 总黄酮含量的测定
参考李章念[10]的方法,并略有改动。精确称取
120 ℃干燥至恒重的芦丁 10 mg,用 80%乙醇定容
至 50 mL,摇匀,得浓度为 0. 2 mg /mL的标准液。准
确吸取标准液 0、1、2、3、4、5 mL于 6 支具塞试管中,
分别向各个试管中加 80%乙醇 5、4、3、2、1、0 mL,使
各试管溶液为 5 mL,各加 5% NaNO2 溶液 0. 3 mL,
摇匀,避光反应 5 min,加 10% Al(NO3)3 溶液 0. 3
mL,摇匀,避光反应 5 min,加 4% NaOH溶液 4 mL,
80%的乙醇定容至 10 mL,摇匀,避光反应 15 min。
然后以 80%乙醇作空白对照,在波长为 510 nm 下,
测定每个标准样的吸光度(Y)值。以吸光度(Y)值
为纵坐标,以标准样品浓度(X,μg /mL)为横坐标,
绘制标准曲线。得到回归方程 Y = 0. 0122 X +
0. 0009(R2 = 0. 9995)。
准确移取 2 mL所提取的样品液于具塞试管中,
按照上述方法测定样品的吸光度值,平行测定 3 次,
并计算总黄酮的含量。
9321Vol. 28 戴智慧等:宁波地区野生换锦花鳞茎的主要成分含量测定
总黄酮含量(mg /g)=(X ×稀释倍数 × V)/ M
× 10-3
式中,X(μg /mL)为根据所测得的吸光度值,带
入回归方程所得到的溶液浓度;V(mL)为样品提取
液总体积;M(g)为样品质量。
2. 2 鳞茎中非淀粉粗多糖的提取及含量测定
2. 2. 1 非淀粉粗多糖的提取
参照吴彦[19-21]等人的方法,并略有改动。精确
称取换锦花鳞茎粉末 0. 2 g,按固液比 1∶ 15 加纯水,
60 ℃条件下超声提取 30 min,之后 90 ℃热水浸提 2
h。冷却至室温后 5000 rpm 离心 20 min。残渣重复
热水浸提,再次离心,上清液合并。后在 55 ℃恒温
水浴下,上清液中加入适量 α-淀粉酶处理 20 min,
再次离心除杂。取上清液加无水乙醇至无水乙醇最
终浓度为 80%,放置 4 ℃条件下静置过夜。弃去上
清液,热水复溶沉淀,定容至 100 mL。
2. 2. 2 非淀粉粗多糖的含量测定
采用苯酚硫酸法。精确称取葡萄糖 10 mg 于
50 mL容量瓶中,加纯水稀释至刻度摇匀,即得浓度
为 200 μg /mL 的标准溶液。精密吸取葡萄糖标准
液 0. 0、0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5 mL,各以纯水补至
2. 0 mL,加入 5%苯酚溶液 1. 0 mL 摇匀,加入浓硫
酸 5 mL,立即混匀,置沸水浴中加热 5 min。冷却至
室温后,用紫外分光光度计在 490 nm波长处测定吸
光度值。以葡萄糖含量(X,μg)为横坐标,吸光度值
(Y)为纵坐标绘制标准曲线。得回归方程为 Y =
0. 0082 X + 0. 0055(R2 = 0. 9997)。
取非淀粉粗多糖提取液 0. 2 mL,加水补至 2
mL,按上述方法测定粗多糖的吸光度值,平行测定 3
次,并计算非淀粉粗多糖的得率。
非淀粉粗多糖的得率(%)= (X × 10-6 / V1 ×
V2)/ M × 100%
式中,X(μg)为根据所测得的吸光度值,带入回
归方程所得到的葡萄糖含量;V1(mL)为测定用体
积;V2(mL)为样品提取液总体积;M(g)为样品质
量。
2. 3 鳞茎中总生物碱的提取及含量测定
2. 3. 1 总生物碱的提取
参考王晓燕[14]的提取方法,并略有改动。准确
称取烘干的换锦花鳞茎粉末 5. 000 g 于茶叶包中,
将茶叶包封好放入索氏提取器内。在圆底烧瓶内加
入 95%的乙醇 100 mL,固定好提取装置及冷凝管,
加热溶剂并保持溶剂微沸。以茶叶包被溶剂蒸汽浸
润后滴下的第一滴提取液开始计时,作为索氏提取
的起始时间。95 ℃条件下提取 6 h。
提取液在 40 ℃水浴下旋转蒸干,甲醇回溶,倒
入离心管中,在离心机上以 4000 rpm的速度离心 20
min,取上清液用甲醇定容至 100 mL。
2. 3. 2 总生物碱含量的测定
采用分光光度法。精密称取石蒜碱对照品 10
mg,置于 100 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻
度,摇匀,即得浓度为 100 μg /mL 的标准溶液。精
密移取标准溶液 1、2、3、4、5 mL,分别置于 10 mL容
量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,以甲醇为空白对
照,参照前人[19,20]测定的总生物碱的最大吸收峰处
的波长 290 nm为检测波长,测吸光度。以吸光度 Y
为纵坐标,浓度 X(μg /mL)为横坐标,做标准曲线,
得回归方程为 Y = 0. 0101X + 0. 0033(R2 = 0. 9995)。
取适量的提取液按上述方法测定样品的吸光度值,
平行测定 3 次,并计算总生物碱的含量。
总生物碱含量(mg /g)=(X × V)/ M × 10-3
式中,X(μg /mL)为根据所测得的吸光度值,带
入回归方程所得到的溶液浓度;V(mL)为样品提取
液总体积;M(g)为样品质量。
2. 4 鳞茎中加兰他敏的提取及含量测定
2. 4. 1 加兰他敏供试品的制备
提取方法同 2. 3. 1 总生物碱样品的提取,但鳞
茎粉末取 2. 0 g,最后用甲醇定容至 10 mL。将所制
得的样品经 0. 45 μm 微孔滤膜过滤至进样瓶后 4
℃保存备用。
2. 4. 2 检测波长的确定
以甲醇为空白对照,将加兰他敏标准品溶液在
200 ~ 400 nm波长范围内扫描其紫外吸收图谱,确
定加兰他敏的最大吸收波长。
2. 4. 3 色谱条件的确定
色谱条件为:色谱柱:ZORBAX SB-C18(150 mm
×4. 6 mm,5 μm) ;检测波长:288 nm;流动相:不同
体积比的乙腈与 0. 2%磷酸水溶液梯度洗脱,0. 2%
磷酸水溶液的梯度为 0 ~ 9 min,95% ~ 80%;9 ~ 12
min,80%;12 ~ 15 min,80% ~ 95%;流速:1. 0 mL /
min;柱温:25 ℃;进样量:5 μL。
2. 4. 4 标准曲线的制定
精密称取 14. 2 mg 加兰他敏标准品,用色谱甲
醇溶解,定容于 10 mL 容量瓶中,配成 1. 42 mg /mL
的加兰他敏标准溶液,各取 0. 5、0. 7、0. 8、1. 0、1. 7、
2. 0 mL加兰他敏标准溶液定容于 10 mL容量瓶中,
0421 天然产物研究与开发 Vol. 28
配成 71. 0、99. 4、113. 6、142. 0、241. 4、284. 0 μg /mL
标准品溶液,用 0. 45 μm 的微孔滤膜过滤后,按上
述色谱条件分别进样 5 μL,在高效液相色谱仪中测
定各标准液的峰面积。以加兰他敏浓度(X,μg /
mL)为横坐标、峰面积(Y)为纵坐标,拟合绘制标准
曲线,得回归方程 Y = 2. 7482X + 76. 7974(r =
0. 9995)表明在 71. 0 ~ 284. 0 μg /mL 浓度范围内峰
面积与加兰他敏浓度的线性关系良好。
2. 4. 5 方法学考察
精密度试验:取同一供试品溶液(舟山样) ,按
上述色谱条件重复进样 10 次,测定加兰他敏的峰面
积。
重复性试验:取同一产地的鳞茎粉末(舟山
样) ,按照上述供试品溶液的制备方法,平行制备 5
份供试品溶液,按上述色谱条件测定加兰他敏的含
量。
加样回收率试验:精密称取已知含量的鳞茎粉
末 5 份(加兰他敏含量为 0. 106%) ,每份 1. 0 g,精
密加入加兰他敏对照品溶液(99. 4 μg /mL)1 mL,按
照上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,按
上述色谱条件测定峰面积,计算回收率。
2. 4. 6 样品中加兰他敏含量的测定
取上述所制得的加兰他敏样品,按照上述色谱
条件进样,测定 6 个不同地区换锦花鳞茎中加兰他
敏的含量,每个地区的样品平行测定 3 次,并记录色
谱图。
加兰他敏含量(mg /g)=(X × V)/ M × 10-3
式中,X(μg /mL)为根据所测得峰面积,带入回
归方程所得到的溶液浓度;V(mL)为样品提取液总
体积;M(g)为样品质量。
3 结果与分析
3. 1 HPLC 法测定野生换锦花鳞茎中加兰他敏的
含量
3. 1. 1 检测波长的确定
根据其紫外-可见光吸收光谱,加兰他敏标准品
在(230 ± 2)nm及(288 ± 2)nm均有较大吸收值,由
于加兰他敏标准对照品是由甲醇配置,而甲醇溶液
能较好的吸收波长短于 260 nm 的紫外光[21],故实
验选择 288 nm为检测波长。
3. 1. 2 加兰他敏及供试品色谱图
加兰他敏对照品及镇海地区的供试品色谱图见
图 1。加兰他敏的出峰时间为 5. 3 min左右。
A B
70
60
50
40
30
20
10
0
mAU
140
120
100
80
60
40
20
0
mAU
2% 4% 6% 8 10% 12 t/min 2% 4% 6% 8 10% 12 t/min
5.
32
图 1 加兰他敏对照品(A)及镇海地区供试品(B)的 HPLC色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of galanthamine (A)and L. sprengeri sample from Zhenhai (B)
3. 1. 3 方法学考察
精密度试验结果表明,所取舟山地区得到野生
换锦花鳞茎样品中加兰他敏的平均峰面积为 499.
1796,RSD 为 2. 37%,表明所使用的高效液相色谱
仪精密度良好(n = 10)。
重复性试验结果表明,所取舟山地区野生换锦
花样品中加兰他敏的平均含量为 0. 753 mg /g,RSD
为 1. 38%,表明试验重复性良好(n = 5)。
加样回收率试验结果表明(见表 1) ,所取镇海
地区野生换锦花鳞茎中加兰他敏回收率为
99. 09%,RSD为 0. 35%,表明本方法测得加兰他敏
回收率良好。
3. 2 不同地区野生换锦花鳞茎中主要成分含量的
测定结果
6 个地区的野生换锦花鳞茎中总黄酮、非淀粉
粗多糖、总生物碱及加兰他敏含量见表 2。
结果表明,总黄酮含量的变化幅度为 1. 095 ~
1. 751 mg /g,总生物碱含量的变化幅度为 2. 691 ~
5. 559 mg /g,加兰他敏含量的变化幅度为 0. 686 ~
1. 476 mg /g,非淀粉粗多糖的得率变化幅度为
11. 590% ~14. 182%。采自不同地区的野生换锦花
鳞茎中主要成分的含量具有明显的不同,其中以加
1421Vol. 28 戴智慧等:宁波地区野生换锦花鳞茎的主要成分含量测定
表 1 加样回收率试验结果
Table 1 The result of recovery test
样品量
Sample
weight (g)
样品中含量
Amount in
the sample (μg)
对照品量
Added
amount
测得量
Measured
amount (μg)
回收率
Recovery
rate (%)
平均值
Mean (%) RSD (%)
1. 0017 1058. 80 1157. 38 99. 18
1. 0020 1059. 11 1157. 87 99. 36
1. 0015 1058. 59 99. 40 1156. 53 98. 53 99. 09 0. 35
1. 0016 1058. 69 1157. 11 99. 01
1. 0014 1058. 48 1157. 23 99. 35
兰他敏的含量差异最大,约达 2. 15 倍;其次是总生
物碱的含量,为 2. 06 倍;非淀粉粗多糖的含量差异
最小,为 1. 22 倍。由表 2 可知,舟山地区的总黄酮
的含量最低,象山地区的总黄酮的含量最高;慈溪地
区的总生物碱含量最低,镇海地区的含量最高;奉化
地区的加兰他敏含量最低,北仑地区的含量最高;舟
山的非淀粉多糖含量最低,慈溪的含量最高。
表 2 不同地区换锦花鳞茎总黄酮、非淀粉粗多糖、总生物碱和加兰他敏含量
Table 2 The contents of total flavones,non-starch polysaccharides,total alkaloids and galanthamine in L. sprengeri bulbs from different
places
产地
Locality
总黄酮
Total flavones
(mg /g)
非淀粉粗多糖
Non-starch
polysaccharides (%)
总生物碱
Total alkaloids
(mg /g)
加兰他敏
Galanthamine
(mg /g)
镇海招宝山 Zhaobao Mountain,Zhenhai 1. 491 ± 0. 043 ab 13. 694 ± 0. 098 a 5. 559 ± 0. 394 a 1. 057 ± 0. 047 c
慈溪海黄山 Haihuang Mountation,Cixi 1. 355 ± 0. 396 bc 14. 182 ± 0. 523 a 2. 691 ± 0. 141 d 1. 422 ± 0. 029 a
北仑洋涨岙 Yangzhangao,Beilun 1. 430 ± 0. 259 abc 13. 501 ± 0. 381 ab 2. 810 ± 0. 044 d 1. 476 ± 0. 018 a
奉化萧王庙 Xiaowangmiao,Fenghua 1. 471 ± 0. 012 abc 12. 434 ± 0. 686 bc 3. 864 ± 0. 426 bc 0. 686 ± 0. 031 d
象山鹤浦 Hepu,Xiangshan 1. 751 ± 0. 116 a 13. 470 ± 1. 009 ab 3. 572 ± 0. 114 c 1. 288 ± 0. 102 b
舟山大猫岛 Damao Island,Zhoushan 1. 095 ± 0. 031 c 11. 590 ± 0. 336 c 4. 417 ± 0. 539 b 0. 753 ± 0. 005 d
F值 3. 386* 7. 785** 31. 192** 92. 966**
注:每列中不同字母表示差异显著(P < 0. 05) ,相同字母表示差异不显著;* P < 0. 05,**P < 0. 01。
Note:Different letters indicated significant difference (P < 0. 05) ,* P < 0. 05,**P < 0. 01.
3. 3 不同地区野生换锦花鳞茎主要成分含量的方
差分析、多重比较及相关分析
经方差分析,总黄酮、非淀粉多糖、总生物碱及
加兰他敏的 F 值依次为 3. 386、7. 785、31. 192 和
92. 966(见表 2) ,其中不同产地的非淀粉粗多糖、总
生物碱和加兰他敏的含量均达到极显著的水平,而
总黄酮的含量达到显著水平。因此,野生换锦花不
同地区间存在一定的差异。
多重比较结果表明(见表 2) ,总生物碱及加兰
他敏的含量在不同地区间差异显著性比其他两种成
分的含量更明显。另外,慈溪及北仑地区的总生物
碱含量及加兰他敏的含量均无显著性差异,并且两
地区的总生物碱含量最低,而加兰他敏的含量却是
最高的。相关分析表明同一地区的总生物碱与加兰
他敏的含量呈正相关,相关系数为 0. 601,但显著性
为 0. 207 > 0. 05。因此两者间虽存在相关性,但并
不显著。
4 讨论与结论
4. 1 HPLC法测定野生换锦花鳞茎中加兰他敏含量
实验采用 HPLC法测定野生换锦花鳞茎中加兰
他敏的含量,其精密度、重复性及回收率测定结果均
较好。采用 ZORBAX SB-C18(150 mm × 4. 6 mm,5
μm)色谱柱及不同体积比的乙腈与 0. 2%磷酸水溶
液这一流动相进行梯度洗脱,使加兰他敏与鳞茎中
的其他成分达到了很好的分离效果。因此,高效液相
色谱法能够用于换锦花鳞茎中加兰他敏的含量检测。
4. 2 野生换锦花鳞茎主要成分的种内差异性
6 个地方的野生换锦花鳞茎中总黄酮含量的高
低顺序为:象山 >镇海 >奉化 >北仑 >慈溪 >舟山;
2421 天然产物研究与开发 Vol. 28
非淀粉粗多糖含量的高低顺序为:慈溪 >镇海 >北
仑 >象山 >奉化 >舟山;总生物碱含量的高低顺序
为:镇海 >舟山 >奉化 >象山 >北仑 >慈溪;加兰他
敏含量的高低顺序为:北仑 >慈溪 >象山 >镇海 >
舟山 >奉化。可见,不同地区的野生换锦花鳞茎中
主要成分的含量存在一定的差异。另外本实验所测
得的宁波地区野生换锦花鳞茎中的加兰他敏含量与
前人[12,15,22]的研究结果不一致,这可能是不同地区
野生换锦花的生长环境不同所造成的。实地调查也
发现镇海招宝山的野生换锦花生长在林下,遮阴效
果较好,而北仑洋涨岙的野生换锦花生长在水稻田
边,舟山和象山地区的野生换锦花生长在海边的岩
石上,其所处的海拔、土壤条件及光照强度等环境因
素都不尽相同。这与王玉霜[23]等人研究发现海拔
高度对忽地笑鳞茎中石蒜碱和加兰他敏的积累有一
定影响;全妙华[24]等人研究发现忽地笑鳞茎中石蒜
碱和加兰他敏含量均表现为:50%遮荫 > 85%遮荫
> 100%自然光的结论相一致。
另外聂媛媛[11]等人研究发现黄花石蒜的花中
加兰他敏含量最高,根次之,鳞茎和茎中含量最少;
刘坤[18]研究发现中国石蒜及石蒜中以果实总碱含
量最高,花序次之,叶片最低;全妙华[25]等人研究发
现忽地笑鳞茎中总生物碱含量随生长发育时期或月
份不同存在一定差异,其中 11 月的最高,12 月次
之,1 月的最低。本实验只对 10 月份宁波地区野生
换锦花的鳞茎进行了成分含量的测定,因此,为了合
理开发利用宁波地区野生换锦花资源,后续还需要
对不同发育时期及不同部位的成分含量进行研究,
以便更加高效的利用宁波地区的野生换锦花资源。
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