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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2016, 32(8):207-213
开花是高等植物由营养生长向生殖生长转变的
重要标志［1］，MADS-box 基因家族编码一类转录因
子，在调控植物开花时间和花形态形成中发挥重要
作 用［2］， 而 SOC1 是 MADS-box 基 因 家 族 的 一 员，
能够介导来自光周期途径、春化途径、自主途径和
赤霉素途径的花时基因信号［3］，作用于下游花分生
组织特异基因，促进植物开花，是参与植物开花的
一个重要基因，对 SOC1 蛋白及与其相互作用蛋白
的研究对探究植物开花有很大帮助。
雷竹（Phyllostachys violascens）为禾本科竹亚科
收稿日期 ：2016-01-20
基金项目 ：国家自然科学基金项目（31270715），浙江农林大学人才启动基金项目（2012FR079）
作者简介 ：潘现飞，男，硕士，研究方向 ：生物大分子结构与功能 ；E-mail ：panxianfei0829@163.com
通讯作者 ：曹友志，男，博士，研究方向 ：植物分子生物学 ；E-mail ：yzcao@zafu.edu.cn
利用酵母双杂交系统筛选雷竹 SOC1 相互作用蛋白
潘现飞  施泉  林新春  徐英武  曹友志
（浙江农林大学 亚热带森林培育国家重点实验室培育基地，临安 311300）
摘 要 ： 在雷竹（Phyllostachys violascens）中找到 SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CONSTANS1（SOC1）在开花途径
中的作用靶标，进一步探索 SOC1 的作用机制。构建 pGBKT7-PvSOC1 诱饵表达载体，通过 SMART 技术构建开花时期的雷竹 cDNA
文库，酵母双杂交筛选与 SOC1 互作的蛋白，并对其进行分析鉴定。结果显示，成功构建了可用于酵母双杂交的 cDNA 文库，文库
的转化率为每微克 pGADT7-Rec 3.0×106 转化子，文库滴度为 7.5×106 cfu/mL，插入片段主要在 250-2 000 bp 之间。通过酵母双杂
交实验得到与诱饵蛋白 PvSOC1 相互作用的蛋白，筛选到的靶标蛋白经鉴定是一个富含亮氨酸的蛋白激酶，特征氨基酸序列在不同
物种中非常保守，与水稻中的同源蛋白亲缘性最高。
关键词 ： 雷竹 ；SOC1 ；cDNA 文库 ；酵母双杂交 ；蛋白质互作
DOI ：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.08.030
Screening for the Interaction Proteins of SOC1 from Phyllostachys
violascens Using Yeast Two-Hybrid System
PAN Xian-fei SHI Quan LIN Xin-chun XU Ying-wu CAO You-zhi
（The Nurturing Station for the State Key Laboratory of Subtropical Silviculture，Zhejiang A & F University，Lin’an 311300）
Abstract: This work aims to study the target proteins of suppressor of overexpression of constans1（SOC1）in flowering way of
Phyllostachys violaceus and to explore the action mechanism of SOC1. The pGBKT7-PvSOC1 vector was constructed as the bait protein，then
the cDNA library of P. violascens flowering was established using SMART technology，and the interaction proteins with SOC1 were screened
by yeast two-hybrid system as well as analyzed and identified. The results showed that the cDNA library for yeast two-hybrid was constructed
successfully，the conversion rate of the library was about 3.0×106 converters per μg pGADT7-Rec，and the capacity of the library was up
to 7.5×106 cfu/mL and the insert fragments were distributed from 0.25 kb to 2 kb. The protein interacted with the bait protein PvSOC1 was
screened through the yeast two-hybrid technology. The screened target protein was identified as a protein kinase containing plentiful leucine
which amino acid sequence was very conservative in different species，and had the highest affinity with rice.
Key words: Phyllostachys violascens ；SOC1 ；cDNA library ；yeast two-hybrid ；protein interaction
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2016,Vol.32,No.8208
刚竹属竹种，是中国特有的优良经济竹种。雷竹开
花现象十分普遍［4］，观察结果显示，雷竹开花时间
不规律，开花前具有一些明显的预兆，表现为雷竹
笋出土时间提早，产量低，个体比正常笋较小，颜
色偏红。多数雷竹开花后不久便死亡，造成竹林的
整体衰败。现阶段，对雷竹开花调控机理方面的研
究报道还比较少。本课题组目前已获得雷竹 SOC1
的编码序列，以此为基础进行相关实验，相信可以
更好地帮助了解雷竹开花的分子调控机制。
分子生物学中，若想特异性反映某种组织或细
胞在特定发育阶段表达的编码基因，构建 cDNA 文
库具有明显的优势。同时，酵母双杂交（yeast two
hybrid，Y2H）是一种快速检测和鉴定蛋白质相互作
用的方法［5］，其原理是通过激活报告基因的表达来
研究蛋白质的相互作用［6］，利用已知蛋白质通过双
杂交技术从酵母 cDNA 文库中筛选与之相互作用的
靶标蛋白，对实验研究有很大的帮助［7，8］，该技术
已经在拟南芥、水稻等许多植物研究中得到广泛应
用［9，10］。本实验通过构建开花时期雷竹的酵母双杂
交 cDNA 文库，并利用花期调控蛋白 SOC1 作为诱饵，
筛选参与调控雷竹开花的蛋白，以期为研究 SOC1
的作用机制奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验材料 材料来源为浙江省临安市浙江农
林大学校园竹种园内 3-4 月份开花时期的雷竹，每
隔一周分别采取嫩叶、成熟叶、竹茎、花芽和花，
液氮速冻后保存到 -80℃超低温冰箱。
1.1.2 实验试剂 克隆载体 T-Vector pMD19（simple）
购自 TaKaRa 公司，诱饵表达载体 pGBKT7、pGAD-
T7、酵母菌株 AH109/Y187 购自 Clontech 公司。酵
母双杂交试剂盒 BD Matchmaker Library Construction
& Screening Kits、Aureobasidin A（AbA）、酵母培养
和转化试剂购自 Clontech 公司。酵母质粒提取试剂
盒购自北京天根生化公司，构建重组载体所用各种
酶、DNA Marker、胶回收纯化试剂盒、LB 培养基组
分胰蛋白胨和酵母膏购自 TaKaRa 公司，引物合成
和测序由上海生工生物工程公司完成。
1.2 方法
1.2.1 诱饵表达载体构建 根据雷竹 SOC1 编码序
列设计引物对其 CDS 区进行 PCR 扩增，上游引物 ：
5-CGGAATTCATGGTGCGGGGGAAGACGCA-3，下
游 引 物 ：5-GCGTCGACTCAAGCATGGTTAGCCCG-
AT-3，产物连接到 T-Vector pMD19（simple）克隆载
体，转化大肠杆菌 DH5α 感受态细胞，阳性克隆菌
液送上海生工生物工程公司测序，将测序正确的阳
性克隆提取质粒。将阳性克隆质粒与 pGBKT7 载体
同时进行双酶切反应，酶切产物回收，T4 DNA 连接
酶连接 5 h，连接产物转化大肠杆菌 DH5α 感受态细
胞，单克隆菌斑进行 PCR 鉴定得到阳性转化子并进
行质粒酶切鉴定。
1.2.2 诱 饵 蛋 白 毒 性 及 自 激 活 检 测 将 空 载 体
pGBKT7 质粒（对照）和重组质粒 pGBKT7-PvSOC1
分别转入酵母 AH109 感受态细胞分别涂布于 SD/-
Trp 和 SD/-Trp/-Leu/-Ade/-His 固体培养基上，30℃孵
育 2-3 d，观察菌落形态及其颜色，以此判断是否具
有自激活活性。
1.2.3 cDNA 文库的建立 将采集的雷竹不同部位样
品混合，在液氮中快速研磨成粉状，采用 Trizol 法
提取总 RNA。用 Oligo（dT）Primer 合成第一条单链
cDNA，以单链 cDNA 为模板进行 LD-PCR 合成双链
cDNA，采用 SPINTM TE-400 柱子纯化双链 cDNA，回
收大于 500 bp 双链 DNA，利用 1% 琼脂糖凝胶电泳
检测纯化后的双链 cDNA。cDNA 文库构建的具体步
骤参照崔红军等［11］说明的文库构建方法进行，采
用醋酸锂方法制备完酵母感受态细胞，在 10 mL 的
灭菌离心管中加入 20 μL 双链 cDNA、6 μL pGADT7-
Rec、20 μL 变性处理的鲑鱼精、600 μL 酵母 Y187 感
受态细胞以及 2.5 mL 新鲜配制的 PEG/LiAc 溶液，
轻 轻 混 匀，30℃ 温 育 45 min， 加 入 160 μL DMSO，
42℃水浴 20 min，700 r/min 离心 5 min，弃上清，重
悬沉淀于 3 mL YPD Liquid Medium 中。30℃摇晃培
养 90 min。700 r/min 离心 5 min，弃上清，重悬沉淀
于 30 mL 0.9% NaCl 中。
1.2.4 cDNA 文库的质量评定 转化后的悬浮液分
别 稀 释 10、100、1 000 和 10 000 倍， 涂 布 150 μL
稀释液在 100 mm SD/-Leu 固体培养基平板上，30℃
2016,32(8) 209潘现飞等：利用酵母双杂交系统筛选雷竹 SOC1 相互作用蛋白
培养，统计菌落数量，计算转化率，平均转化率（每
微升 pGADT7-Rec 的转化子数）= 平板单克隆数量 ×
稀释倍数 ×150。用含有 25% 甘油的 YPD 冷冻培养
基重悬浮、合并所有 SD/-Leu 固体培养基上的阳性
克隆，采用相同的方法稀释菌液，用血球计数板统
计细胞浓度。文库滴度 = 平板上单菌落数 × 稀释倍
数 ×10/mL。采用 PCR 检测法计算文库重组率，随
机挑取单克隆菌落作为模板（由于酵母属于真核细
胞，细胞壁较厚，需反复冻融裂解细胞，以裂解过
的细胞液为模板），用 pGADT7-Rec 通用引物进行菌
液 PCR， 上 游 引 物 ：5-CTATTCGATGATGAAGATA
CCCCACCAAACCC-3，下游引物 ：5-GTGAACTTGC
GGGGTTTTTCAGTATCTACGATT-3，1% 琼脂糖凝胶
电泳检测反应产物。重组率计算方法为 ：䟽㓴⦷%˙ᴹᨂޕ⡷⇥Ⲵ৽ᓄᮠ৽ᓄᙫᮠ ×100%
1.2.5 诱饵载体的酵母双杂交筛选 从涂布有诱饵
载体转化菌液的 SD/-Trp 固体平板上挑取菌落，在
SD/-Trp 液体培养基上 30℃过夜培养至 OD600 超过
0.8。离心弃上清，重悬浮于 3 mL SD/-Trp 液体培养
基，加入 1 mL 雷竹 cDNA 文库菌液，在 2 L 锥形瓶
中用 45 mL 2×YPDA 液体培养基 30℃、50 r/min 孵
育约 20 h。离心弃上清，用 0.5×YPDA 液体培养基
重悬浮涂布于营养缺陷型固体培养基 SD/-Ade/-His/-
Leu/-Trp/X-α-gal 上，30℃倒置培养 2-3 d。
1.2.6 酵母共转化验证 将筛选到的阳性菌斑扩大
培养提取质粒，PCR 检测插入片段的大小，将大
于 500 bp的单克隆质粒转化大肠杆菌 DH5α 感受态
细胞，得到的阳性单克隆送上海生工生物工程公司
测序。
将 提 取 的 含 有 互 作 基 因 的 文 库 酵 母 质 粒 与
pGADT7-Rec 分别同 pGBKT7-PvSOC1 质粒共转化酵
母菌株 Y2H Gold 感受态细胞，涂布于缺失固体培养
基 SD/-Trp/-Leu 上，30℃培养 2-3 d，菌落小量培养
后悬滴于 SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade/X-α-gal 固体培养基，
30℃培养观察生长情况。
2 结果
2.1 诱饵载体的构建
以雷竹 cDNA 为模板扩增 SOC1 基因，得到条带
单一的约 681 bp 的产物（图 1-A），将目的片段连接
到 T-Vector pMD19（simple），送公司测序，结果证
实与雷竹 SOC1 序列一致，用 EcoR I 和 Sal I 双酶切
pMD19-PvSOC1 和空载 pGBKT7 质粒，获得含有相
同黏性末端的目的片段和线性载体，T4 连接酶连接
后转化 DH5α 感受态细胞，获得重组质粒，小量双
酶切重组质粒得到与预期大小一致的目的条带（图
1-B），说明诱饵载体 pGBKT7-PvSOC1 构建成功。
M M
bp
2000
1000
750
500
250
100
bp
2000
1000
750
500
250
100
A B1 2
M ：DNA Marker DL2000 ；1 ：PCR 扩 增 的 SOC1 ；2 ：pGBKT7-PvSOC1 双 酶
切结果
图 1 PvSOC1 片段扩增（A）及诱饵载体双酶切（B）电
泳图
2.2 诱饵蛋白载体自激活和毒性检测
用诱饵载体与空载体分别转化酵母 AH109 菌
株，转化菌落可以在 SD/-Trp 上生长获得白色菌落，
直径大于 2 mm，蓝白斑筛选实验未变色，且诱饵载
体和对照相比生长速度无明显差距。说明诱饵载体
没有毒性，且不具有自激活性，可以用于下一步筛
选实验。
2.3 雷竹cDNA文库建立和质量评定
提取雷竹不同部位不同时间混合样品总 RNA，
电泳检测 RNA 的完整性。结果（图 2）显示，总
RNA 有 3 条带，28S 和 18S 条带清晰，28S 亮度约
为 18S 的 2 倍且 5.8S 较弱，说明总 RNA 完整性好，
未发生降解，符合建库要求。以此 RNA 为模板反转
录合成 cDNA，并经双链 cDNA 过柱纯化，除去小片
段（图 3）。经计算，得到的文库平均转化率为每微
克 pGADT7-Rec 3.0×106 转化子，文库细胞浓度约
为 9.0×106/mL，文库滴度约为 7.5×106 cfu/mL。随
机挑取 24 个文库单克隆培养并提取质粒，用载体
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2016,Vol.32,No.8210
通用引物进行质粒 PCR 检测插入片段的大小，结果
（图 4）显示插入片段主要在 250-2 000 bp 之间，总
体结果说明文库质量满足进一步的实验需求。
竹 cDNA 文 库， 在 SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade/X-α-gal 固
体培养基上 30℃培养 2-3 d 长出蓝色菌斑（图 5），
菌落 PCR 检测（图 6），除去含有 500 bp 以下小片
段的单克隆后，将得到的单克隆扩大培养提取质粒
并送生物公司测序。
28S
18S
5.8S
1 2 3
1-3 ：样品总 RNA 电泳结果
图 2 总 RNA 电泳图
bp
2000
1000
500
250
750
100
B
2000
1000
bp
100
250
500
750
A M M 1 32 4
M ：DNA Marker DL2000 ；1，2 ：未纯化的双链 cDNA ；3，4 ：纯化的双链
cDNA
图 3 未纯化（A）和纯化后（B）的双链 cDNA 电泳图
2000
1000
750
500
250
100
bp
M 1 2 3 4 5 6 7 8 910 11 12131415 16 1718 19 20 2122 2324
M ：DNA Marker DL2000 ；1-24 ：Z 质粒 PCR 电泳结果
图 4 阳性克隆质粒检测电泳图
图 5 互作蛋白的筛选
2.4 筛选与PvSOC1相互作用的文库蛋白
以 PvSOC1 为诱饵蛋白进行酵母双杂交筛选雷
M
bp
5000
3000
1500
1000
750
500
250
100
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
M ：DNA Marker DL2000 ；1-17 ：阳性克隆质粒 PCR 结果
图 6 质粒验证互作蛋白
2.5 相互作用酵母体内验证
将 阳 性 单 克 隆 文 库 质 粒（ 阳 性 对 照 ） 及
pGADT7-Rec 空载体质粒（阴性对照）分别与诱饵载
体质粒 pGBKT7-PvSOC1 共转入酵母菌株 Y2H Gold
感受态细胞，涂布于 SD/-Trp/-Leu 营养缺陷型固体
培养基上，30℃培养 3-5 d，挑取阳性单克隆并小量
活化，悬滴法在 SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade/X-α-gal 固体
培养皿上点板，30℃倒置培养。结果（图 7）表明，
在 SD/-Trp/-Leu 培养基上阳性对照组都能正常生长，
而在 SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade/X-α-gal 培养基上，只有
一个阳性对照单克隆变蓝，说明筛选到一个文库蛋
白与诱饵蛋白真正存在相互作用。
2.6 目标蛋白的生物信息学分析
对筛选到的蛋白进行生物信息学分析，结果显
2016,32(8) 211潘现飞等：利用酵母双杂交系统筛选雷竹 SOC1 相互作用蛋白
1 2 3
4 5 6
1-5 ：杂交蛋白 ；6 ：阴性对照
图 7 Bait 与文库质粒互作验证
示，该蛋白编码基因 cDNA 全长为 1 721 bp，含有
一个完整的 ORF 序列，长度为 1 377 bp，编码 459
个氨基酸，蛋白分子量约为 50.22 kD，等电点为 6.98。
将该蛋白的氨基酸序列在 NCBI 中进行 blastp
分析，显示该蛋白和水稻、玉米、高粱中的同源序
列一致性达到 77%、76% 和 70%，利用生物学软件
进行不同物种间该蛋白氨基酸序列比对（图 8），显
示该蛋白的特征氨基酸序列在不同物种中较为保守，
结构分析表明该蛋白属于 LRR-RI 超家族，是一个
富含亮氨酸的类受体蛋白激酶。不同物种中的该同
源蛋白聚类分析（图 9）显示，雷竹和水稻聚为一
支，亲缘关系最近。
3 讨论
近年来关于高等植物开花的研究非常多，已经
确定的开花途径有自主途径、光周期途径、春化途径、
leucine-rich repeats

Phyllostachys violascens
Oryza brachyantha
Sorghum bicolor
Zea mays
Setaria italica
Elaeis guineensis
Musa acuminata
Phoenix dactylifera
Nelumbo nucifera
Ricinus communis
Sesamum indicum
Phyllostachys violascens
Oryza brachyantha
Sorghum bicolor
Zea mays
Setaria italica
Elaeis guineensis
Musa acuminata
Phoenix dactylifera
Nelumbo nucifera
Ricinus communis
Sesamum indicum
Phyllostachys violascens
Oryza brachyantha
Sorghum bicolor
Zea mays
Setaria italica
Elaeis guineensis
Musa acuminata
Phoenix dactylifera
Nelumbo nucifera
Ricinus communis
Sesamum indicum
Phyllostachys violascens ：雷竹 ；Oryza brachyantha ：水稻 ；Sorghum bicolor ：高粱 ；Zea mays ：玉米 ；Setaria italica ：狗尾草 ；Elaeis guineensis ：油棕 ；
Musa acuminata ：芭蕉 ；Phoenix dactylifera ：海枣 ；Nelumbo nucifera ：荷花 ；Ricinus communis ：蓖麻 ；Sesamum indicum ：芝麻
图 8 不同物种中目标蛋白序列比对图
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2016,Vol.32,No.8212
赤霉素途径，各条途径不是独立发挥作用，而是相
互联系和影响，协同控制开花，4 条途径的相应基
因组成响应外源信号和协同自身发育状况的通路共
同对开花时期进行控制［12］。以模式植物拟南芥和金
鱼草等为材料，通过对突变体的研究与分子克隆等
手段，分离和研究了许多参与植物开花过程的关键
基因，如 SOC1、FLC、FT 等，4 条开花途径主要通
过调节这些整合因子的表达水平来调节花发育和控
制开花时间［13-15］。找到与这些整合因子有相互作用
的其他已知或未知蛋白可以帮助我们更好地研究植
物开花机制。虽然植物开花研究得很多，但是调控
开花的机制在分子层面的阐述还不是很完善［16］，与
竹子开花相关的研究更少［17］。
酵母双杂交技术自报道以来，已被广泛应用
于确定生物体中的蛋白质与蛋白质之间的互作关
系［18］。同时构建 cDNA 文库是分子生物学中常用的
一种方法，而 cDNA 文库和酵母双杂交技术相结合
可以更方便地研究已知蛋白与靶蛋白之间的互作关
系，对研究功能特异性的蛋白有重要作用。目前关
于构建竹子酵母双杂交 cDNA 文库的报道还很少。
本实验成功构建了花期雷竹酵母双杂交 cDNA 文库，
并筛选到与雷竹 SOC1 蛋白存在相互作用的蛋白，
对后续研究雷竹开花奠定了重要的实验基础，而实
验中仅选择了一小部分阳性单克隆进行验证和测序，
尚有许多后续工作需要进行，相信会有更多的文库
靶蛋白被鉴定出来，从而进一步研究这些蛋白在雷
竹开花时期的功能。
很 多 实 验 表 明，SOC1 蛋 白 与 很 多 激 酶 存 在
相关性。有研究显示，在蛋白激酶 Casein Kinase2
Sorghum bicolor
Zea mays
Setaria italica
Phyllostachys violascens
Oryza brachyantha
Musa acuminata
Elaeis guineensis
Phoenix dactylifera
Sesamum indicum
Nelumbo nucifera
Ricinus communis
图 9 不同物种中目标蛋白聚类分析
α-Subunits（CKAs） 突 变 体 拟 南 芥 中，SOC1 的 表
达与野生型中 SOC1 的表达有明显差异［19］，表明
SOC1 的含量变化是激酶的突变效应之一。同时，与
野生型相比，在同一生长阶段，cka1a2a3 三突变体
中开花整合因子 FT 和 SOC1 的表达量大量减少，表
现为影响开花时间［20］。还有证据表明，在拟南芥中
开花整合因子 SOC1 能够影响气孔开放，而蛋白质
磷酸化酶 PP1 是植物叶片蓝光信号途径中的重要成
员［21］，后者与气孔开放相关，暗示 SOC1 蛋白的磷
酸化或去磷酸化可能会影响其功能进而参与调控植
物生命活动。
本实验构建了开花时期的雷竹 cDNA 文库，并
筛选到了一个与开花整合因子 SOC1 存在相互作用
的蛋白激酶，为雷竹开花过程相关基因的克隆和功
能研究提供了很好的前提条件，筛选的目标蛋白激
酶的特征氨基酸序列在不同物种中非常保守，推测
其功能也可能具有保守性并在植物开花过程中发挥
作用，但是关于该激酶的具体功能及其作用机制还
有待进一步的研究。
4 结论
成功构建了雷竹开花时期可用于酵母双杂交的
cDNA 文库，文库的转化率为每微克 pGADT7-Rec 3.0
×106 转化子，文库滴度为 7.5×106 cfu/mL，插入片
段主要在 250-2 000 bp 之间。利用该 cDNA 文库得
到与诱饵蛋白 PvSOC1 相互作用的蛋白，经鉴定靶
标蛋白是一个富含亮氨酸的蛋白激酶，不同物种中
的同源蛋白都含有此特征氨基酸序列，且与水稻中
的同源蛋白亲缘性最高。
参 考 文 献
［1］Moon J, Suh SS, Lee H, et al. The SOC1 MADS�box gene
integrates vernalization and gibberellin signals for flowering in
Arabidopsis［J］. The Plant Journal, 2003, 35（5）：613-623.
［2］张则婷 , 学宝 . MADS-box 基因在植物发育中的功能［J］. 植物
生理学通讯 , 2007, 43（2）：218-222.
［3］Ramanayake S. Flowering in bamboo：an enigma［J］. Cey J Sci（Bio
Sci）, 2006, 35（2）：95-105.
［4］林新春 , 袁晓亮 , 林绕 , 等 . 雷竹开花生物学特性研究［J］. 福
建林学院学报 , 2010（4）：333-337.
2016,32(8) 213潘现飞等：利用酵母双杂交系统筛选雷竹 SOC1 相互作用蛋白
［5］Fukao Y. Protein-protein interactions in plants［J］. Plant and Cell
Physiology, 2012, 53（4）：617-625.
［6］Fields S, Song O. A novel genetic system to detect protein-protein
interactions. ［J］. Nature, 1989, 340（6230）：245-246.
［7］Ito T, Chiba T, Ozawa R, et al. A comprehensive two-hybrid analysis
to explore the yeast protein interactome［J］. Proceedings of the
National Academy of Sciences, 2001, 98（8）：4569-4574.
［8］James P, Halladay J, Craig EA. Genomic libraries and a host strain
designed for highly efficient two-hybrid selection in yeast［J］.
Genetics, 1996, 144（4）：1425-1436.
［9］ Costa M, Nobre MS, Becker JD, et al. Expression-based and co-local-
ization detection of arabinogalactan protein 6 and arabinogalactan
protein 11 interactors in Arabidopsis pollen and pollen tubes［J］.
BMC Plant Biology, 2013, 13（1）：7.
［10］ Singh R, Lee MO, Lee JE, et al. Rice mitogen-activated protein kin-
ase interactome analysis using the yeast two-hybrid system［J］.
Plant Physiology, 2012, 160（1）：477-487.
［11］崔红军 , 张军杰 , 黄玉碧 . 玉米根部酵母双杂交 cDNA 文库的
构建及评价［J］. 分子植物育种 , 2008, 6（1）：161-164.
［12］张学文 , 洪亚辉 , 赵燕 . 植物开花时期的分子控制［J］. 湖南
农业大学学报 ：自然科学版 , 2004, 29（6）：523-528.
［13］ 刘丽娜 , 刘伟 , 叶庆生 . 春化作用相关基因 FLC 的研究进
展［J］. 西北植物学报 , 2004, 23（12）：2229-2234.
［14］汤青林 , 许俊强 , 宋明 , 等 . 芥菜开花信号整合子的两个核心
转录因子 FLC 和 SVP 相互作用的体外检测［J］. 园艺学报 ,
2011, 38（12）：2317-2324.
［15］张婧 . 高等植物开花基因 FT 研究进展［J］. 现代农业科技 ,
2012（3）：31-32.
［16］Sarma VV. Flowering of Melocanna baccifera（Bambusaceae）in
northeastern India［J］. Curr Sci, 2009, 96（9）：1165.
［17］Lin CS, Lin CC, Chang WC. Effect of thidiazuron on vegetative
tissue-derived somatic embryogenesis and flowering of bamboo
Bambusa edulis［J］. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 2004,
76（1）：75-82.
［18］Chen J, Carter MB, Edwards BS, et al. High throughput flow
cytometry based yeast two-hybrid array approach for large-scale
analysis of protein-protein interactions［J］. Cytometry Part A,
2012, 81（1）：90-98.
［19］Mulekar JJ, Bu Q, Chen F, et al. Casein kinase II α subunits
affect multiple developmental and stress-responsive pathways in
Arabidopsis［J］. The Plant Journal, 2012, 69（2）：343-354.
［20］Lu S X, Liu H, Knowles SM, et al. A role for protein kinase casein
kinase2 a-subunits in the Arabidopsis circadian clock1［J］. Plant
Physiol, 2011, 157（3）：1537.
［21］Kimura Y, Aoki S, Ando E, et al. A flowering integrator, SOC1,
affects stomatal opening in Arabidopsis thaliana［J］. Plant and
Cell Physiology, 2015, 56（4）：640-649.
（责任编辑　李楠）