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不同基因型高羊茅的耐铅与铅富集特性



全 文 :31卷07期
Vol.31,No.07
草 业 科 学
PRATACULTURAL SCIENCE
1269-1274
07/2014
DOI:10.11829\j.issn.1001-0629.2014-0065
不同基因型高羊茅的耐铅与铅富集特性
李惠英,户正荣,傅金民
(中国科学院武汉植物园 植物种质创新与特色农业重点实验室,湖北 武汉430074)
摘要:高羊茅(Festuca arundinacea)具有修复铅(Pb)污染土壤的应用潜力。为筛选耐铅和铅富集能力强的高羊
茅基因型,本研究利用水培试验,分析了铅浓度在500、1 000、1 500mg·L-1递增的条件下,18个高羊茅基因型的
生长反应和铅吸收转运特征。结果表明,500mg·L-1铅浓度下,所有基因型均保持良好的生长状况及草坪质
量;当浓度升至1 000、1 500mg·L-1时,草坪质量、植株铅含量以及铅转移系数均出现显著的基因型间差异(P<
0.05)。‘Kentucky-31’,‘PI232876’,‘PI634229’和‘AST7001’等基因型的地上部铅含量大于35mg·g-1 DW
(干质量),同时,它们对铅的转移系数也较高(大于0.42)。而‘Silverado’的地上部铅含量(3.34mg·g-1 DW)和
铅转移系数(0.03)均最小,对铅的耐性最强。研究结果为铅污染土壤的植物修复与植被重建提供了新的材料和
参考。
关键词:高羊茅;重金属铅;植物修复;铅富集;筛选
中图分类号:S816;S543+.903;Q943.2   文献标识码:A   文章编号:1001-0629(2014)07-1269-06*
Lead tolerance and accumulation of different tal fescue genotypes
LI Hui-ying,HU Zheng-rong,FU Jin-min
(Key Laboratory of Plant Germplasm Enhancement and Specialty Agriculture,Wuhan Botanical Garden,
The Chinese Academy of Sciences,Wuhan 430074,China)
Abstract:Tal fescue(Festuca arundinacea)is a promising species for remediation of lead(Pb)contamina-
ted soils by phytoextraction.In order to select the genotypes with higher Pb tolerance or high accumula-
tion ability,the growth response,Pb uptake and translocation characteristics of 18tal fescue genotypes
were studied under hydroponic culture with 500,1 000,1 500mg·L-1 of Pb.The results indicated that
al of the tested tal fescue genotypes were tolerant to 500mg·L-1 of Pb.When the Pb concentrations
were 1 000and 1 500mg·L-1,there were significant variation in turf quality,Pb uptake and translocation
among genotypes(P<0.05).Shoot Pb concentrations in‘Kentucky-31’,‘PI232876’,‘PI634229’and
‘AST7001’were more than 35mg·g-1 DW (dry weight).Meanwhile,the translocation factors of these 4
genotypes were higher than others(>0.42).Among al the genotypes,‘Silverado’had the least shoot Pb
concentration(3.34mg·g-1 DW)and translocation factor(0.03).However it was the most tolerant to
high Pb concentration and grew normaly in nutrient solution containing 1500mg·L-1 Pb without suffer-
ing phytotoxicity.This work provided new plant genotypes for revegetation or phytoremediation of Pb
contaminated soils.
Key words:tal fescue;lead;phytoremediation;Pb accumulation;screening
Corresponding author:FU Jin-min E-mail:jfu@wbgcas.cn
* 收稿日期:2014-02-15  接受日期:2014-04-18
基金项目:国家自然科学基金“高羊茅铅富集关键基因的发掘与功能解析”(31201653);中科院院地合作项目“湖南重金属超富集草坪草
的选育与示范”(No.2B201131161101616)
第一作者:李惠英(1977-),女,河南滑县人,副研究员,博士,研究方向为草坪草逆境分子生物学。E-mail:lihuiying@wbgcas.cn
通信作者:傅金民(1961-),男,山东菏泽人,研究员,博士,研究方向为草坪种质资源学。E-mail:jfu@wbgcas.cn
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  铅是一种重要的重金属污染物,我国铅污染现
象非常普遍,其中,以土壤铅污染最为突出。铅毒性
大,具有极强的累积性和不可逆性,对动植物都具有
很强的毒害作用。经食物链进入人体后,对人体健
康也造成严重威胁[1]。近几年,我国各地儿童血铅
超标事件时有发生,因此,怎样修复铅污染环境已成
为当前环境科学的研究热点。
近年来,利用超富集植物对重金属污染土壤进
行修复的技术被公认为是一种绿色安全的修复技
术,与传统修复措施相比,植物修复具有成本低、操
作简单、无二次污染等优势[2-3]。但其缺点是必须获
得重金属超富集植物[4],且超富集植物通常生长缓
慢、生物量小,分布地域性较强,不适宜大范围污染
土壤的修复。此外,超富集植物观赏价值普遍较低,
综合生态效应不佳。
高羊茅(Festuca arundinacea)是一种冷季型多
年生草坪草兼牧草,具有绿期长、适应性好、抗逆性
强等特点,在我国北部地区广泛栽种。同时,其耐热
性相对较强,在我国长江流域气候过渡区也能顺利
越夏。因此,上海、浙江、江西、安徽、江苏、湖南、湖
北、广西、贵州、云南等地都适合高羊茅的生长[5]。
研究表明,高羊茅也可作为重金属铅污染的一种修
复植物。在5 000mg·kg-1的高浓度铅处理下,高
羊茅可保持正常生长[6]。水培条件下,铅浓度达
450mg·L-1时,仍能保持正常生长,根系不会产生
明显损伤[7]。高羊茅地上部铅含量及转运系数在常
用草坪草中是最高的,其铅转运系数可达1.30[6],高
于Nanda等[8]推荐的铅超富集植物转运系数0.04。
利用高羊茅修复重金属铅污染土壤具有诸多优
点,如可同时美化环境,生长快,生物量大,刈割方
便,有利于重金属的回收处理;根系发达,有利于保
持水土;不进入食物链,对人体安全;适应性广,可
大范围种植等等。因此,将高羊茅用于铅污染土壤
的植物修复已成为一种趋势[9-11]。但目前世界上高
羊茅基因型众多,不同的高羊茅基因型耐铅和铅富
集能力是否存在差异?哪些基因型适宜于铅污染土
壤的修复?这些问题尚未得到解决。为此,本研究
利用水培试验对18种高羊茅的耐铅性和铅富集特
征进行研究,探究不同基因型对重金属铅的富集能
力是否存在差异,旨在筛选耐铅和铅富集能力更强
的高羊茅基因型,为选用最适的高羊茅基因型进行
铅污染土壤的修复治理提供参考。
1 材料与方法
1.1 高羊茅材料
供试高羊茅种子植物种质创新与特色农业部重
点本实验室收集保存,共18个基因型,分别为
‘Kentucky-31’、‘Falcon’、‘Endeavor’、‘WTF12’、
‘Lindergh’、‘Padre’、‘Silverado’、‘K06-WA’、‘In-
novator’、‘Rembronet’、‘CE1’、‘Milinnium’、
‘Houndog’、‘PI634229’、‘WTF4’、‘Barlexas’和
‘AST7001’。其中,‘WTF12’和‘WTF4’是实验室
在国 内 收 集 的 野 生 种 质 材 料,‘PI232876’和
‘PI634229’分别来自非洲国家阿尔及利亚和突尼
斯,其余高羊茅基因型均来自美国。
1.2 播种与铅处理
将高羊茅种子分别播种于装有干净细沙底部具
小孔的塑料培养杯中,覆盖5mm 薄沙,每天浇水保
持水培杯中基质湿润。种子发芽后,每周浇1/2
Hoagland营养液[12](超纯水制备)。待幼苗长至12
cm后,将培养杯中高羊茅植株根系分别用自来水和
超纯水冲洗干净,转移到装有1/2Hoagland营养液
三角瓶中适应性培养3d,统一修剪高度为8cm,进
行Pb处理。
铅处理组:将Pb(NO3)2 按500、1 000、1 500
mg·L-1的递增浓度依次加入改良的1/2Hoag-
land营养液中[13],每隔1d更换新的营养液,每个
浓度梯度分别处理7d。对照组为不加Pb(NO3)2
的改良1/2Hoagland营养液。每个基因型的对照
和处理分别设3个重复,共108个样品。铅处理组
和对照组高羊茅均在温室中进行培养,温度为20
℃/16℃(昼/夜),光强为8 000lx,光照时间14
h·d-1,每次改变铅处理浓度前,统一修剪样品,使
其高度保持为8cm。
1.3 草坪质量
每个梯度的铅浓度试验处理7d后,对高羊茅
草坪质量进行观察打分,每个基因型的3次重复分
别打分,取平均值作为目测质量分数。打分参考
Turgeon[14]的方法,采取9分制,0分为叶片枯黄而
薄,植株死亡,6分为可视觉接受水平,9分为叶片稠
密,色泽浓绿,植株生长旺盛。
1.4 植株铅含量测定
1 500mg·L-1 Pb(NO3)2 处理7d后,分别将
对照和处理组高羊茅植株分地上部和根部采集样
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品。用自来水先把植株地上部冲洗干净,然后用去
离子水冲洗,吸水纸将表面的水吸干。根部先放入
20mmol Na-EDTA 溶液中浸泡润洗15min,以去
除表面吸附的Pb2+,再用去离子水冲洗干净。样品
在105℃下杀青30min后,再于70℃烘24h至质
量恒定。烘干的植物样品经粉碎后,采用V浓HNO3∶
VHClO4 =3∶1 法 消 化,原 子 吸 收 分 光 光 度 计
[AA240FS火焰系统,美国瓦里安(VARIAN)公
司,型号:SpectrAA-Duo]测定植物样品中的铅质量
分数[15-16]。转移系数按Tanhan等[17]的方法计算。
1.5 统计分析
采用SPSS 16.0软件对所测数据统计分析,用平
均值和标准误表示测定结果。利用One-way ANO-
VA方法进行方差分析,基于Duncan新复极差(SSR)
法进行不同基因型间的多重比较,显著性水平为
0.05。用Excel 2003软件进行数据作图。
2 结果与分析
2.1 铅处理对高羊茅草坪质量的影响
多重比较结果表明,除了500mg·L-1的铅处
理组与对照组的草坪质量差异不显著外(P>
0.05),其他浓度的处理组与对照组之间,以及所有
铅处理组之间均有显著差异(P<0.05)。正常生长
条件下,18个高羊茅基因型的草坪质量均在8.7分
以上(图1)。500mg·L-1的Pb处理一周后,所有
基因型的草坪质量平均得分仍在8.5以上,叶色保
持碧绿,生长旺盛,某些基因型的草坪质量甚至超过
了对照(如‘K06-WA’)。当Pb浓度增加至1 000
mg·L-1时,不同基因型开始呈现出明显的差异。
其中,‘Silverado’、‘Lindergh’、‘WTF12’、‘CE1’、
‘Houndog’、‘WTF4’6个材料的草坪质量较高,得
分在7.5以上,尤其是‘Silverado’草坪质量最高,达
8.3。其余12个基因型的草坪质量得分较低,少量
叶片出现发黄现象,生长受到一定的抑制,但也在可
接受水平(草坪质量得分在6~7)。当Pb2+提升至
1 500mg·L-1后,超过2/3的高羊茅基因型生长受
到严重抑制,叶片整体发黄,部分基因型还出现了萎
蔫现 象,草 坪 质 量 降 至 可 接 受 水 平 之 下,如
‘PI232876’、‘PI634229’和‘AST7001’3个基因型
的草坪质量仅为3分左右。但‘Silverado’仍保持着
较高的草坪质量(7.7分),此外,‘WTF12’、‘Lin-
dergh’和‘WTF4’也在可接受水平以上。
2.2 高羊茅地上部分铅含量
高羊茅地上部分铅含量在基因型间存在差异
(图2)。结果表明,大部分高羊茅基因型的地上部
分都累积了高浓度的铅离子,其中‘Kentucky-31’,
‘PI232876’,‘PI634229’和‘AST7001’这4个基因
型的铅含量最高,在35mg·g-1以上,‘PI634229’
和‘AST7001’甚至接近50mg·g-1,显著高于除
‘Kentucky-31’和‘PI232876’以外的其他所有基因
图1 铅处理前后不同高羊茅基因型的草坪质量
Fig.1 Turf grass quality of different tal fescue genotypes before and after treatment by Pb
注:不同小写字母表示所有处理间存在显著差异(P<0.05)。K-31,‘Kentucky-31’;Fa,‘Falcon’;En,‘Endeavor’;W12,‘WTF12’;Li,‘Lin-
dergh’;Padre,‘Padre’;Si,‘Silverado’;K06,‘K06-WA’;In,‘Innovator’;Remb,‘Rembronet’;CEI,‘CE1’;Mil,‘Milinnium’;Hd,‘Hound-
og’;PI63,‘PI634229’;WTF4,‘WTF4’;Bl,‘Barlexas’;AST,‘AST7001.下同。
Note:Different lower case letters mean significant difference among al treatments at 0.05level.The same below.
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图2 铅处理后不同高羊茅基因型的地上部分铅含量
Fig.2 Pb concentration in shoot of different tal fescue genotypes
型(P<0.05)。地上部铅含量最低的是‘Silvera-
do’,仅为3.3mg·g-1,显著低于除‘Lindergh’以
外的其他所有基因型。其余基因型地上部铅含量在
10~30mg·g-1。
2.3 高羊茅地下部分铅含量
与地上部铅含量表现相似,地下部铅含量在高
羊茅基因型之间也存在差异(图3)。整体而言,高
羊茅地下部的铅含量在63~170mg·g-1,远高于
地上部。有趣的是,地上部铅离子含量高的基因型
如‘Kentucky-31’和‘PI232876’,其地下部铅离子含
量反而较低。相反,地上部铅离子含量最小的 ‘Sil-
verado’,其地下部铅离子含量却是18个高羊茅基
因型中最高的,达170mg·g-1。地下部铅离子累
积含量较高的基因型还有‘Endeavor’、‘Lindergh’、
‘Rembronet’、‘Innovator’以及‘WTF4’等,均在
130mg·g-1以上。而地下部铅离子累积最少的基
因型是‘Houndog’,为63mg·g-1。
2.4 高羊茅品种铅转移系数
铅转移系数在18个高羊茅基因型之间也存在
差异(图4)。铅转移系数最大的4个基因型依次是
‘Kentucky-31’、‘PI232876’、‘PI634229’和
‘AST7001’,均在0.42以上,其中‘Kentucky-31’和
‘PI232876’超过了0.5。对铅转移系数最小的基因
型是‘Silverado’,仅为0.03,其次是‘Lindergh’,为
0.08。其余基因型的转移系数在0.10~0.28。对
比铅含量和铅转移系数发现,高羊茅对铅的转移系
数大小与不同基因型地上部铅积累能力呈现基本一
致的特征。
3 讨论
本研究表明,所有供试高羊茅基因型均能耐受
500mg·L-1的铅浓度胁迫,在此浓度下高羊茅的
生长和草坪质量与对照无明显差异,有的基因型长
势和草坪质量甚至超过了对照。刘素纯等[19]研究也
图3 铅处理后不同高羊茅基因型的地下部分铅含量
Fig.3 Pb concentration in root of different tal fescue genotypes
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图4 不同高羊茅基因型的铅转移系数
Fig.4 Pb translocation factor of different tal fescue genotypes
表明,小于200 mg·L-1浓度的铅处理会促进黄瓜
(Cucumis sativus)幼苗根茎的生长,这种现象可能
是因为低浓度的重金属对植物具有积极的“刺激作
用”[20]。当铅处理水平升至1 000mg·L-1时,绝大
部分高羊茅基因型的生长受到明显抑制,部分叶片
出现发黄现象,草坪质量下降,但仍保持在可接受水
平之上。铅处理浓度达到1 500mg·L-1时,高羊
茅的生长反应出现了明显的基因型间差异,大部分
高羊茅基因型的生长受到显著抑制,甚至出现生长
停滞现象,叶片整体萎蔫发黄,草坪质量严重下降;
但仍有少数基因型保持良好的生长态势和较高的草
坪质量。
铅处理后,所有供试高羊茅的地上部和地下部
的铅含量都明显增加,且地上部均小于地下部的铅
质量分数。这说明高羊茅物种对铅都具有一定的吸
收能力,而且吸收的铅主要积累在根部,这可能与铅
在环境中的可移动性较低有关[21]。Baker等[22]将
叶片或地上部(干质量)含Pb达到1 000μg·g
-1以
上,同时铅转移系数大于1的植物定义为铅超富集
植物,但该定义没有考虑植物的生物量问题。实际
上,即使地上部分铅质量分数大,转运系数也大,但
若在一定时期内植物生长量小,则自地下部分向地
上部分转运总量少,带走的铅绝对量也少,这样的植
物修复价值并不高。2005年,聂发辉[23]建议,将给
定生长期内单位面积地上部分植物吸收的重金属总
量与土壤含量之比(生物富集量系数)作为超富集植
物的一项评价指标,使得富集量或转运系数未达到
某一水平,但生物量很大的植物也能作为超富集植
物。尽管本研究中18个供试高羊茅基因型对铅的
转运系数低于1,但其地上部分铅含量均远远大于
超富集植物的标准,加之高羊茅生长快速,生物量
大,适应性广,因此,在铅污染土壤的植物修复工程
中具有比一般超富集植物更高的应用潜力。来自非
洲的‘PI232876’、‘PI634229’和来自美国的‘Ken-
tucky-31’、‘AST7001’共4个基因型累积的铅离子
浓度最高,在35 mg·g-1以上。‘PI634229’和
‘AST7001’甚至接近50mg·g-1。同时,它们对铅
的转移系数也是所有品种中最高的(均在0.4以
上),表明这些高羊茅基因型能有效地吸收培养液中
的铅离子,并转运至植株的地上部。然而,尽管这几
个基因型能够吸收大量重金属,但在过高浓度的铅
胁迫(1 500mg·L-1)下,其叶片失绿发黄,甚至萎
蔫,表明其叶绿素含量显著下降,很可能是因为过高
浓度的Pb导致植株光合作用受阻,代谢紊乱。因
此,它们可作中等浓度铅污染土壤的植物修复。
另一个表现优异的基因型是‘Silverado’,在
1 500mg·L-1的高浓度铅胁迫下,其叶色浓绿,生
长迅速,草坪质量仍保持较高的水平,表明该基因型
对铅具有很强的耐受性。多重比较结果也表明,
‘Silverado’的草坪质量受3种铅浓度处理的影响不
显著。‘Silverado’根部积累的铅离子浓度是供试品
种中最高的,达到170mg·g-1,但其地上部铅含量
极少。这可能是向地上部的运输受阻,叶片中叶绿
素含量不变,使得植株能保持正常的光合作用和代
谢。因此,‘Silverado’在高浓度铅污染土壤的植被
重建方面具有极高的应用潜力。同时,由于‘Silver-
ado’对铅的转移系数极低,地上部铅离子含量极少,
也可将其作为牧草,在重度铅污染地区进行大面积
推广应用。
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4 结论
高羊茅对铅胁迫的耐受性存在明显的基因型间
差异,不同基因型高羊茅富集和转移铅离子的能力
也具有明显的差异。耐铅性强的基因型对铅的转移
系数往往较低;而对铅转移系数高、地上部富集能力
强的高羊茅基因型通常不耐高浓度的铅胁迫。在实
际应用中,应根据实践目标选择合适的高羊茅基因
型。本研究结果为铅污染土壤的植物修复和植被重
建提供了新的高羊茅种质资源和理论基础。
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