全 文 ：第 3 期 杨 荣，等:藏药绿萝花水提物对小鼠免疫功能的影响
2015 年 5 月
第 41 卷第 3 期
西南民族大学学报( 自然科学版)
Journal of Southwest University for Nationalities(Natural Science Edition)
May. 2015
Vol. 41 No. 3
doi:10. 11920 /xnmdzk. 2015. 03. 008
藏药绿萝花水提物对小鼠免疫功能的影响
杨 荣，刘 群，康莲莲，王 赛，韩金潭
( 西南民族大学生命科学与技术学院，四川 成都 610041)
摘 要:探讨藏药绿萝花对机体免疫功能的影响，为临床合理用药和进一步开发利用提供科学依据．本研究以 L9 ( 3
4 )
正交设计试验所获得的绿萝花水萃取干膏制剂为研究材料，以 N2Hmice小白鼠为研究对象，以 ConA 诱导小鼠淋巴细
胞转化试验( CCK － 8 法) 、血凝和血凝抑制试验及巨噬细胞吞噬试验为研究方法，以( SI) 刺激指数、( HI) 新城疫抗体
效价、吞噬百分率和吞噬指数为检测指标，探讨不同剂量绿萝对机体免疫功能的影响．实验结果显示低剂量绿萝花能
够增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬指数，其增强作用极显著优于空白组;低、中剂量绿萝花组具有促进小鼠血清 ND抗体
产生的作用，作用显著优于空白组;低、中剂量绿萝花组具有促进小鼠外周血淋巴细胞增殖的作用，作用显著优于空白
组．研究结果表明低( 1. 08g /次 /d，7d) 、中 ( 2. 16g /次 /d，7d) 剂量绿萝花对小鼠免疫功能具有增强作用．
关键词:藏药绿萝花;淋巴细胞转化试验;血凝和血凝抑制试验;巨噬细胞吞噬试验
中图分类号:R285;R29 文献标志码:A 文章编号:2095-4271(2015)03-0305-05
收稿日期:2015-03-22
通信作者:刘群(1965 －)，男，汉族，四川资中人，副教授，博士;Email:liuqun2567@ 163． com
基金项目:国家“十二五”科技支撑计划项目(2011BAD34B02 － 4);中央高校基本科研业务费科研建设平台(11NPT03)
Effects of aqueous extract of Scindapsus aureus on immune function of mice
YANG Rong，LIU Qun，KANG Lian-lian，WANG Sai，HAN Jin-tan
(School of Life Science and Technology，Southwest University for Nationalities，Chengdu 610041，P． R． C．)
Abstract:This paper investigated the immune function of scindapsus aureus in mice to provide a scientific basis for rational drug
use and further development，and used Scindapsus aureus decoction of dry extract obtained from L9(34)orthogonal experimental
design． N2H mice were used as research object，ConA-induced lymphocyte transformation test (CCK-8 asssay)，hemagglutina-
tion and hemagglutination inhibition test in conjunction with macrophage phagocytosis test were employed，and (SI)stimulation
index，(HI)antibody titer，phagocytic percentage and phagocytic index were the targets of detection to investigate the effects of
different doses of scindapsus aureus on immune function． The experimental results were that low dose of scindapsus aureus group
could enhance mice phagocytic index of peritoneal macrophage，whose enhanced role was significantly better than medium doses
of scindapsus aureus and control groups．，Low and medium doses of scindapsus aureus group promoted ND antibody production in
mice serum，with effects markedly better than the control group，and low and medium doses of scindapsus aureus groups could
promote the proliferation of the lymphocyte，and the effect obviously preceded the control group． The results showed that the low-
dose (1． 08g / times /d，7d)and medium dose of scindapsus aureus group (2． 16g / times /d，7d)could enhance the immune func-
tion in mice．
Key words:scindapsus aureus;lymphocyte transformation test;hemagglutination and hemagglutination inhibition test;macro-
phage phagocytosis tes
藏药绿萝花［Scindapsus aureus (Linden ex Andre) Engl］是天南星科喜林芋属植物绿萝花的干燥花
西南民族大学学报( 自然科学版) 第 41 卷
蕾［1］，产地在西藏寒冷地区及喜马拉雅山脉一带． 据
藏医养身图说》记载，藏药绿萝花具有治疗高血压、高
血脂、糖尿病、冠心病、脉管炎、血管炎等［2］．藏民将晾
干后的绿萝花泡水饮用，用以预防和治疗糖尿病、高
血脂等疾病．目前有关西藏绿萝花的研究报道较少，
主要集中于其化学成分的研究，如黄酮、挥发油、还原
糖的提取分离、抗氧化和降血糖等药理作用研
究［1，3 ～ 9］，而其对机体免疫功能的影响尚未见报道．在
中医药理论指导下，本研究结合藏地民间服用习惯和
中药总化学成分产生整体效应的观点，以水煎干膏制
剂为研究材料和 N2 Hmice 小白鼠为研究对象，采用
ConA诱导小鼠淋巴细胞转化试验(CCK － 8 法)、血
凝和血凝抑制试验、巨噬细胞吞噬试验，并以黄芪多
糖为阳性对照，研究不同剂量绿萝花对小鼠细胞免疫
功能、体液免疫功能、非特异性免疫功能的影响，现将
研究结果报告如下．
1 材料
1. 1 试验动物
N2Hmice小白鼠，体重 20 ± 2g，雄性，由四川大学
实验动物中心提供(合格证号:NO. 0010780)．
1. 2 主要试剂及仪器
黄芪多糖口服液(北京普尔路威达兽药有限公
司，批号:兽药字(2009)010045231);刀豆素蛋白 A
(ConA)(Sigma 公司，批号:20110108165);鸡新城疫
La Sota活毒冻干疫苗(北京信得威特科技公，批号:
201204001);Cell Counting Kit － 8(CCK － 8)试剂盒
(日本同仁化学研究所，批号:EST82);小鼠外周血淋
巴细胞分离液(天津灏洋生物制品科技公司，批号:
20121128);改良型 RPMI － 1640 培养基(赛默飞世尔
生物化学制品公司，批号:NXL0745;自配无 Ca2 +、
Mg2 + Hank，s液，PBS，1%鸡红细胞悬液，5%鸡红细胞
悬液，6% 淀粉肉汤． CASY TT 型快速细胞分析仪
(Scharfe System 公司);Model 680 型酶联免疫检测仪
(Bio － Rad公司)．
2 方法
2. 1 绿萝花水提干膏口服液的制备
采用 L9(3
4)正交表设计实验，以水提干膏得率
为考察指标． 优化后的水萃取工艺为:浸泡时间
0. 5h、加水量 20 倍、煎煮时间 1h、煎煮次数 4 次，所得
到干膏率为 23. 11%，将其换算成生药含量并分别配
制成 2g /ml、1g /ml、0. 5g /ml 浓度的口服液，4℃冰箱
保存．
2. 2 试验动物分组及处理
小鼠适应性喂养 5 天后，将 60 只 N2Hmice 小鼠
随机分为 5 组，按每天灌胃口服液浓度分为绿萝花低
(0. 5g /ml)、中(1 g /ml)、高(2g /ml)剂量组和黄芪多
糖组(0. 5g /ml)及空白组(0. 5g /ml)，每组 12 只，在环
境为 SPF级实验动物房隔笼饲养．各组处理如下:
各组在最后一次灌胃 12h 后，每只小鼠均肌肉注
射鸡新城疫 La Sota活毒冻干疫苗 2 头份．
2. 3 试验样品的制备
各组实验动物在最后一次灌胃后的第 7d、14d、
21d，眼眶静脉丛采血 0. 2 ～ 0. 5mL 制备血清，用于鸡
新城疫抗体测定;眼眶采血 0. 5ml，分离收集中间层淋
巴细胞悬液，Hank’s 液洗涤细胞 2 次，沉淀备用，用
于小鼠外周血淋巴细胞转化试验;以枸橼酸钠为抗凝
剂现用现配成 1%鸡红细胞悬液、5%鸡红细胞悬液．
2. 4 小鼠外周血淋巴细胞转化试验
CCK － 8 测定条件的选取参考王洪鸽等［10］的 L9
(34)正交表设计试验，优化后的 CCK － 8 测定条件
为:细胞数为 1 × 106个 /孔、ConA浓度为 5ug /ml、细胞
培养时间为 48h，加入 CCK －8 后培养时间为 4h．
ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验参考侯春梅
等［11］和林忠宁等［12］实验方法:以肝素钠为抗凝剂，无
菌操作取小鼠眼眶静脉丛血 0. 5ml，按 Ficoll 密度梯
度离心法分离外周血单核细胞(peripheral blood
mononuclear cells，PBMC)悬液［13］． 洗涤离心 PBMC，
用无菌改良型 1640 完全培养基(组成:100 U /ml 的
青霉素、25 mmol /L 的 l －谷氨酰胺、0. 1 ml /ml 的小
牛血清和 100 ug /ml 的链霉素)混匀，计数并配制成
106个 /ml单细胞悬液．参考赵世云等［14］的实验方法，
以组为单位，将每份小鼠已分离得 106 /ml 的 PBMC
悬液中取单细胞悬液(100 ul /孔)接种于 96 孔培养板
内，每份样本分未刺激组和 ConA 组，并对应编号记
录，ConA组每孔均加入浓度为 5ug /ml 的 ConA 10ul，
未刺激组加入 1640 完全培养基 10ul． 另外设 3 孔有
110 ul1640 完全培养液和 3 孔有 10ulConA 及
100ul1640 完全培养液空白对照． 将培养板置于 CO2
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第 3 期 杨 荣，等:藏药绿萝花水提物对小鼠免疫功能的影响
体积分数为 5%、温度为 37℃的培养箱里培养 48 h．
取出培养板，无菌条件下向各孔加入 10ul 的 CCK － 8
溶液并小心混匀，继续培养 4h，用酶联免疫检测仪测
定在 450nm处的吸光度．计算对应小鼠样本的刺激指
数．
刺激指数(SI)= 加 ConA细胞组 OD值 －加 ConA培养基对照孔均 OD值
不加 ConA细胞组 OD值 －不加 ConA培养基对照孔均 OD值
(1)
2. 5 血清抗体滴度测定
制备每组小鼠非抗凝血血清并标记编号，56℃水
浴锅中灭活 30 min，参考王延树［15］的血球凝集抑制
试验(HI)和微量血球凝集试验(HA)方法来测定小
鼠血清中的新城疫抗体效价． 以 100%抑制凝集(完
全不凝集)的最大稀释度为该血清的血凝抑制 HI 抗
体效价，用以 2 为底的负对数(－ log2)表示，即
Xlog2．
2. 6 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的测定
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验参照付绍
玲［16］的实验方法，计录 100 个巨噬细胞中所吞噬鸡
红细胞的数目和有吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数目，按
下列公式计算吞噬百分比和吞噬指数:
吞噬指数 = 100 个巨噬细胞中吞噬鸡红细胞总数 / 100 个巨噬细胞
吞噬百分比(%)=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数 /100 个巨噬细胞
2. 7 统计学处理
所得到的实验数据用 珋x ± Se 表示，采用 SPSS
18. 0 统计软件进行单因素方差分析，同时进行 LSD
比较，以 P﹤ 0. 05 为具有统计学意义上的差异．
3 结果与分析
3. 1 绿萝花对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
表 1 表明:绿萝花低、中、高剂量组与空白组及黄
芪多糖组的吞噬百分比差异不显著(P﹥ 0. 05)．在吞
噬指数上，与空白组相比，低剂量组、黄芪多糖组有极
显著差异(P﹤ 0. 01)，中、高剂量组差异不显著(P﹥
0. 05);与黄芪多糖组相比，低、中剂量组无显著差异
(P﹥ 0. 05)，高剂量组差异显著(P ﹤ 0. 05)．结果表
明:低剂量绿萝花组可以增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞
噬指数，且增强作用极显著．
3. 2 绿萝花对小鼠血清抗体滴度的影响
表 2 表明:在 ND 抗体效价上，与空白组相比，低
剂量组、黄芪多糖组在各时间点均有极显著(P ﹤
0. 01)提高，中剂量组在给药后第 7d有显著(P﹤ 0. 0
5)提高，第 14 和 21d都有极显著(P﹤ 0. 01)提高，高
剂量组仅在给药后第 7d 有显著(P ﹤ 0. 05)提高;与
黄芪多糖组相比，低、中剂量组在各时间点上异差不
显著了(P﹥ 0. 0 5)，高剂量组在给后第 21d 有极显
著(P﹤ 0. 01)降低．结果表明:低、中剂量绿萝花组具
有促进小鼠血清 ND抗体产生的作用．
表 1 绿萝花水提物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力
的影响(珋x ± Se ，n﹦ 12)
Table1 Effects of Scindapsus aureus extract on
macrophage phagocytosis in mice(珋x ± Se ，n﹦ 12)
组 别 吞噬百分比(%) 吞噬指数
空白组 42. 50 ± 8. 85ab 0. 59 ± 0. 25ab
黄芪多糖组 43. 42 ± 6. 00ab 0. 92 ± 0. 23CD
低剂量组 45. 92 ± 6. 30ac 1. 12 ± 0. 33D
中剂量组 39. 58 ± 6. 24bC 0. 77 ± 0. 25aBC
高剂量组 42. 33 ± 8. 62ab 0. 51 ± 0. 21b
注:同列右肩有相同字母表示无显著差异(P﹥ 0. 05)，字母相同
但大小写不同表示有显著差异(P﹤ 0. 05)，字母和大小写都不同表示
有极显著差异(P﹤ 0. 01)．
表 2 绿萝花水提物对小鼠血清新城疫体效价的影响
(珋x ± Se ，n﹦ 12 ，log2)
Table2 Effects of Scindapsus aureus extract on serum antibody
in mice(珋x ± Se ，n = 12 ，log2)
组 别
给药结束后的时间(d)
7 14 21
空白组 6. 00 ± 1. 21a 5. 67 ± 0. 89a 5. 42 ± 0. 90a
黄芪多糖组 7. 58 ± 1. 00BC 6. 92 ± 0. 79bC 6. 75 ± 0. 45B
低剂量组 8. 00 ± 0. 85C 7. 08 ± 0. 79C 7. 00 ± 0. 60B
中剂量组 7. 17 ± 0. 94Bc 6. 75 ± 1. 06bC 6. 58 ± 0. 51B
高剂量组 6. 92 ± 0. 79AB 6. 33 ± 0. 49abc 5. 67 ± 0. 78a
注:同表 1 的注．
3. 3 绿萝花对小鼠外周血淋巴细胞增殖的影响
表 3 表明:在淋巴细胞刺激指数上，与空白组相
比，黄芪多糖组在各时间点都有极显著(P﹤ 0. 01)提
高，低剂量组在给药后第 7d 有极显著(P ﹤ 0. 01)提
高，第 14d有显著(P ﹤ 0. 05)提高;中剂量在给药后
第 14d有显著(P﹤ 0. 05)提高;高剂量组各时间点异
差不显著(P﹥ 0. 05);与黄芪多糖组相比，低、中剂量
在各时间点异差不显著(P﹥ 0. 05)，高剂量在给药后
第 14d极显著(P ﹤ 0. 01)低于黄芪多糖组和低、中
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西南民族大学学报( 自然科学版) 第 41 卷
剂量组．结果表明:低、中剂量绿萝花组具有促进小鼠
外周血淋巴细胞增殖的作用，作用显著优于高剂量绿
萝花并与黄芪多糖相当．
表 3 绿萝花水提物对小鼠外周血淋巴细胞的刺激指数
的影响(珋x ± Se ，n﹦ 12)
Table3 Effects of Scindapsus aureus extract on peripheral
blood lymphocyte proliferation in mice(珋x ± Se ，n = 12)
组 别
给药结束后的时间(d)
7 14
空白组 1. 19 ± 0. 13a 1. 26 ± 0. 16a
黄芪多糖组 1. 42 ± 0. 19B 1. 62 ± 0. 30B
低剂量组 1. 42 ± 0. 32B 1. 56 ± 0. 28A B
中剂量组 1. 31 ± 0. 17aB 1. 50 ± 0. 33A Bc
高剂量组 1. 27 ± 0. 15aB 1. 30 ± 0. 26ac
注:同表 1 的注．
4 讨论与结论
在病毒侵袭动物机体时，非特异性免疫是机体的
第一道屏障．在免疫应答中，巨噬细胞是动物体内重
要的免疫调节和效应细胞，可识别、吞噬和消除病原
微生物及机体衰老细胞，具有分泌特定细胞因子参与
机体炎症反应等功能，所以其吞噬异物的能力，从一
定程度上反映机体的非特异性免疫水平．巨噬细胞也
是重要的抗原呈递细胞，外源性抗原物质经过胞内酶
的降解处理形成许多具有抗原决定簇的抗原肽并与
MHCⅡ类分子结合形成抗原肽 － MHCⅡ类分子复合
物引起机体免疫应答反应．本研究向小鼠腹腔内注射
淀粉，可以引起非感染性的炎性渗出，从而使巨噬细
胞大量在腹腔中出现，此时再向腹腔内注射较大异
物，则可被巨噬细胞吞噬． 吞噬百分率主要反映机体
非特异免疫功能的情况，吞噬指数则反映巨噬细胞吞
噬能力的大小．实验结果表明:在生理情况下虽然绿
萝花对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率没有明显的
促进作用，但低剂量绿萝花能够增强小鼠腹腔巨噬细
胞的吞噬指数，其作用极显著(P ＜ 0. 01)优于空白
组，与黄芪多糖无显著差异． 说明小剂量绿萝花对机
体非特异性免疫功能有促进作用，中、高剂量绿萝花
作用不明显．
新城疫病毒能够凝集鸡红细胞，但相应的特异性
抗体可以抑制此过程，即血球凝集抑制(hemagglutina-
tion inhibition，HI)，因此利用已知病毒能够检测出被
检血清中的相应抗体，并可以检测出滴定抗体的含
量． B淋巴细胞通过分泌抗体介导体液免疫，抗体水
平反映了机体体液免疫应答水平． 本研究结果表明:
从抗体产生时间来看，给药结束后 12h 到第 7d 是抗
体产生高峰值的时间段，从抗体持续时间来看，低、中
剂量绿萝花具有作进小鼠血清 ND 抗体产生的作用
(平均抗体效价 log2 = 7. 36、log2 = 6. 83)，极显著(P
＜ 0. 01)优于空白组，并与黄芪多糖(平均抗体效价
log2 = 7. 08)无显著差异(P ＞ 0. 05)，表明低、中剂量
绿萝花具有提高机体体液免疫功能的作用．
T细胞是机体细胞免疫的主要细胞，其外周血中
的 T细胞数占淋巴细胞总数的 75%左右． 当在体外
用某些有丝分裂因子和淋巴细胞一起培养时，淋巴细
胞的形态及代谢可能产生一系列变化从而转化为淋
巴母细胞，因此反映出机体的免疫状态． ConA 作为一
种非特异性的有丝分裂原，可以刺激 T 细胞发生转
化，通过在酶联免疫检测仪检测前后的吸光度可以计
算出淋巴细胞增殖的刺激指数，直观体现转化率的大
小，表明机体细胞免疫功效状态．本试验研究结果，与
空白组相比，黄芪多糖在各个实验时间点都有极显著
(P ＜ 0. 01)提高淋巴细胞刺激指数;低剂量绿萝花在
连续给药 7d后第 7d 有显著(P ＜ 0. 05)提高，第 14d
有极显著(P ＜ 0. 01)提高;中剂量绿萝花在给药后第
14d有显著(P ＜ 0. 05)提高，低、中剂量绿萝花在各时
间点的淋巴细胞刺激指数平均值与黄芪多糖相比较，
异差不显著(P﹥ 0. 05)．结果表明:低、中剂量绿萝花
具有提高机体细胞免疫功能的作用．
根据《保健食品检验与评价技术规范》［17］对增强
免疫力功能判定标准:在体液免疫功能(包括血清溶
血素测定实验或抗体生成细胞检测实验)、细胞免疫
功能(包括迟发型变态反应实验或小鼠脾淋巴细胞转
化实验)、单核 －巨噬细胞功能(包括自然杀伤细胞活
性测定实验或小鼠碳廊清试验或小鼠腹腔巨噬细胞
吞噬鸡红细胞试验)三个方面的实验中，其结果判定
如下:
一是具有免疫调节作用:在体液免疫功能、细胞
免疫功能、单核 －巨噬细胞功能及 NK 细胞功能检测
中，如其中有两个以上(含两个)功能检测结果为阳
性，可判定该受试物具有免疫调节作用;二是具有免
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第 3 期 杨 荣，等:藏药绿萝花水提物对小鼠免疫功能的影响
疫增强效应:在一组试验中，受试物对免疫系统某一
方面的试验具有增强作用而对其他方面的试验无抑
制作用，可以判定该受试物具有免疫增强效应;三是
具有免疫抑制效应:在一组试验中，受试物对免疫系
统某一方面的试验具有抑制作用而对其他方面的试
验无增强作用，可以判定该受试物具有免疫抑制效
应．
综合本研究的实验结果和相关规定:低(以生药
计算，口服 1. 08g /次 /d，连续 7d)、中剂量绿萝花(以
生药计算，口服 2. 16g /次 /d，连续 7d)对小鼠免疫功
能具有增强作用．
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( 责任编辑:李建忠，付强，张阳，罗敏;英文编辑:周序林，郑玉才)
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