全 文 ：云南大学学报(自然科学版)，2015，37(6):884 ～ 887 DOI:10． 7540 / j． ynu． 20150452
Journal of Yunnan University
土千年健化学成分及生物活性研究
*
杨增明1，2，赵云丽3，盛丽琴2，尚建华3
(1．昆明贝叶傣医药研究所，云南 昆明 650217;2．云南良方傣药研发技术中心，云南 昆明 650217;
3．中国科学院 昆明植物研究所，云南 昆明 650201)
摘要:研究云南民间习用药材土千年健主要化学成分及其生物活性．采用各种色谱技术进行分离纯化，通
过 NMＲ、MS等波谱学方法鉴定化合物;采用醋酸致小鼠扭体性疼痛试验考察化合物的镇痛活性．从土千年健
60%乙醇提取物中分离得到 2 个化合物，分别鉴定为 cinnamtannin B1(1)和 2 － ethylene － 3，5，6 － trimethyl － 4
－ phenol － 1 － O － β － D － xylopyranosyl －(1→6)－ β － D － glucopyranoside(2) ;与溶媒对照组相比，化合物 1 能
明显抑制醋酸所致小鼠扭体性疼痛，差异具有统计学意义．化合物 2 为首次从越桔属中分离得到，化合物 1 为
首次从该植物中分离得到;首次研究报道了化合物 1 和 2 的镇痛活性．
关键词:土千年健;乌鸦果;cinnamtannin B1;镇痛活性
中图分类号:Ｒ 284． 1 文献标志码:A 文章编号:0258 － 7971(2015)06 － 0884 － 04
土千年健为杜鹃花科植物乌鸦果［1］(Vaccinium fragile Franch．)的干燥根． 在中药大辞典［2］、滇南本
草［3］、云南中草药［4］、昆明民间常用中草药［5］等中草药著作中均有收载．具有祛风除湿，舒经通络，活血，
消肿止痛等功效，临床主要用于风寒湿痹，筋挛骨痛，手足顽麻，半身不遂，跌打损伤等症［2 － 5］．目前，国内
外对该属植物的果实与叶研究较多［6 － 8］，还未见土千年健化学成分有关的研究报道，为阐明民间传统药用
知识的物质基础和理论依据，充分挖掘其药用价值，发展民族医药，本文对土千年健化学成分进行研究，从
中分离得到 2 个化合物，分别鉴定为 cinnamtannin B1(1)和 2 － ethylene － 3，5，6 － trimethyl － 4 － phenol － 1
－ O － β － D － xylopyranosyl －(1→6)－ β － D － glucopyranoside(2) ，均为首次从该植物中分离得到，化合物
2 为首次从越桔属中分离得到．本文还首次研究报道了化合物 1 和 2 的镇痛活性．
1 仪器与材料
1． 1 仪器、试剂与材料 BＲUKEＲ AV －Ⅲ 600、DＲX － 500 MHz 型核磁共振仪，BＲUKEＲ HCT Esquire
3000 型或 Agilent G6230 TOF LC － MS型液相色谱 /质谱联用仪;Agilent 1100 高效液相色谱仪;D101 大孔
树脂(沧州宝恩化工有限公司) ，0． 077 ～ 0． 087 mm 柱色谱硅胶和薄层硅胶 G 板(青岛海洋化工厂) ，ODS
－ A(50 μm，YMC产品) ，LH －20(0． 077 ～ 0． 172 mm，台州市路桥四甲生化塑料厂) ;HPLC 用试剂为色谱
纯，其他为分析纯或食品级．
土千年健样品于 2010 年 10 月采自云南省禄丰县，经笔者鉴定，为杜鹃花科植物乌鸦果(Vaccinium
fragile Franch．) ，凭证标本(标本号 091006)存放于昆明贝叶傣医药研究所．
1． 2 实验动物与对照样品 SPF级昆明种小鼠，3 ～ 4 周龄，全雄，购自昆明医学院实验动物中心，生产许
可证:SCXK(滇)2005 － 0008．拜阿斯匹灵(阿斯匹林，ASP) ，100 mg /片，进口药品注册证号 H20050059，批
号 BTA6ZB7，Bayer Health Care AG生产，用 1%CMC － Na研磨后配制成 10 mg /mL 混悬液供阳性对照用;
* 收稿日期:2015 － 08 － 07
基金项目:昆明市科技计划项目(09H130202)．
作者简介:杨增明(1965 －) ，男，硕士，正高级工程师，主要从事中药民族药研究与开发． E － mail:bydyy@ 188． com．
通信作者:尚建华(1957 －) ，女，正高级工程师，主要从事药理毒理学研究． E － mail:sjhyaowu@ 163． com．
羧甲基纤维素纳盐(CMC － Na) ，化学纯，国药集团化学试剂有限公司，批号 20070826，用纯水加热、煮沸、
冷却后配成 1%质量分数供受试样品配制及溶媒对照用．
2 提取与分离
土千年健 1 kg，粉碎成粗粉，60%乙醇回流提取 2 次，提取液减压浓缩至无醇味，加水稀释至 2 000
mL，离心，上清液通过预处理好的 D101 大孔吸附树脂柱，依次用水、20%乙醇洗脱，收集 20%乙醇洗脱
液，减压浓缩至无醇味，加水稀释至 1 000 mL，通过预处理好的聚酰胺树脂柱，依次用水、90%乙醇洗脱，得
水洗脱部位和醇洗脱部位．醇洗脱部位拌膏过硅胶柱，乙酸乙酯洗脱，再反复通过 ODS － A、LH － 20 柱分
离，最后经 ZOＲBAX SB － C18(9． 4 mm × 250 mm，5 μm)半制备 HPLC 纯化，冷冻干燥，得化合物 1(22
mg)．水洗脱部位经硅胶柱层析，氯仿 －甲醇(体积比 80∶ 20)洗脱，洗脱物经甲醇重结晶，得化合物 2(85
mg)．
3 结构鉴定
化合物 1 灰白色粉末，ESI － MS(neg．)m/z:863［M － H］－，ESI － MS(pos．)m/z:887［M + Na］+ ． 1 H
NMＲ(CD3OD，500 MHz)δ:Upper unit 3． 29(1H，d，J = 3． 0 Hz，H － 3) ，4． 12(1H，d，J = 3． 0 Hz，H － 4) ，6． 0
(1H，dd，J = 2． 0 Hz，H －6) ，6． 05(1H，d，J = 2． 0 Hz，H －8) ，7． 07(1H，d，J = 2． 0 Hz，H － 2) ，6． 85(1H，d，J
=8． 5 Hz，H －5) ，7． 01(1H，dd，J = 8． 5，2． 0 Hz，H －6) ;Middle unit 5． 78(1H，s，H － 2) ，4． 07(1H，d，H －
3) ，4． 54(1H，s，H －4) ，5． 97(1H，d，H － 6) ，7． 30(1H，d，J = 1． 5 Hz，H － 2) ，6． 90(1H，d，J = 8． 5 Hz，H －
5) ，7． 18(1H，dd，J = 8． 5，1． 5 Hz，H －6) ;Lower unit 4． 37(1H，s，H －2) ，3． 91(1H，s，H －3) ，2． 91(1H，s，
H －4) ，6． 09(1H，s，H －6) ，6． 82(1H，m，J = 1． 5 Hz，H － 2) ，6． 75(1H，m，J = 8． 5 Hz，H － 5) ，6． 72(1H，
m，J = 8． 5，1． 5 Hz，H －6)． 13C NMＲ(CD3OD，125 MHz)δ:Upper unit 99． 9(C －2) ，67． 5(C －3) ，28． 8(C －
4) ，156． 7(C －5) ，98． 3(C － 6) ，157． 8(C － 7) ，96． 5(C － 8) ，154． 1(C － 9) ，106． 3(C － 10) ，132． 4(C －
1) ，115． 7(C －2) ，145． 5(C －3) ，146． 3(C － 4) ，116． 1(C － 5) ，119． 8(C － 6) ;Middle unit 78． 9(C －
2) ，72． 6(C －3) ，38． 3(C － 4) ，155． 8(C － 5) ，96． 0(C － 6) ，151． 1(C － 7) ，106． 7(C － 8) ，151． 8(C － 9) ，
106． 8(C －10) ，131． 8(C －1) ，116． 7(C －2) ，145． 9(C － 3) ，146． 3(C － 4) ，115． 9(C － 5) ，121． 4(C －
6) ;Lower unit 80． 3(C －2) ，67． 2(C －3) ，29． 9(C －4) ，155． 8(C －5) ，96． 3(C － 6) ，155． 6(C － 7) ，108． 8
(C －8) ，156． 0(C －9) ，99． 9(C －10) ，132． 4(C －1) ，115． 4(C － 2) ，145． 3(C － 3) ，145． 8(C － 4) ，115．
7(C －5) ，119． 4(C －6)．以上数据与文献［9 － 11］对照基本一致，化合物 1 鉴定为 cinnamtannin B1．
化合物 2 白色无定形粉末;－ TOF MS m/z:471［M － H］－，507［M + Cl］－，943［2M － H］－，979［2M +
Cl］－，EI － MS(pos．)m/z:472［M］+(10) ，340［M － xyl］+(15) ，178［M – glc – xyl］+(100) ;1H NMＲ(C5
D5N，500 MHz)δ:7． 71(1H，dd，J = 12． 2，18． 3 Hz，H － 7) ，5． 62(1H，dd，J = 2． 4，11． 8 Hz，H － 8a) ，5． 54
(1H，dd，J = 2． 6，18． 5 Hz，H －8b) ，2． 55(3H，s，H － 9) ，2． 42(3H，s，H － 10) ，2． 65(3H，s，H － 11) ;glc － 5．
32(1H，d，J = 7． 8 Hz，H －1) ，4． 19 ～ 4． 29(1H，overlapped，H － 2) ，4． 19 ～ 4． 29(1H，overlapped，H － 3) ，
4． 17 ～ 4． 19(1H，overlapped，H －4) ，3． 89 ～ 3． 93(1H，overlapped，H － 5) ，4． 66(1H，dd，J = 5． 2，11． 6 Hz，
H －6a) ，4． 17 ～ 4． 19(1H，overlapped，H －6b) ;xyl － 4． 80(1H，d，J = 7． 6 Hz，H － 1″) ，3． 89 ～ 3． 93(1H，o-
verlapped，H －2″) ，4． 07(1H，t，H － 3″) ，4． 12 ～ 4． 15(1H，m，H － 4″) ，4． 19 ～ 4． 29 (1H，t，H － 5″a) ，3． 60
(1H，overlapped，H －5″b)． 13C NMＲ(C5D5N，400 MHz)δ:147． 1(C －1) ，130． 4(C －2) ，121． 6(C －3) ，151．
2(C －4) ，129． 2(C －5) ，124． 7(C －6) ，134． 9(C －7) ，119． 4(C － 8) ，14． 6(C － 9) ，13． 8(C － 10) ，15． 2(C
－11) ;glc － 106． 0(C －1) ，75． 7(C －2) ，78． 3(C － 3) ，71． 7(C － 4) ，76． 9(C － 5) ，70． 1(C － 6) ;xyl －
105． 7(C －1″) ，74． 7(C －2″) ，77． 9(C －3″) ，71． 2(C － 4″) ，66． 9(C － 5″)．以上数据与文献［12］对照基本一
致，化合物 2 鉴定为 2 － ethylene － 3，5，6 － trimethyl － 4 － phenol － 1 － O － β － D － xylopyranosyl －(1→6)－ β
－ D － glucopyranoside(2)．
588第 6 期 杨增明等:土千年健化学成分及生物活性研究
4 镇痛作用研究
选 18 ～ 21 g雄性昆明种小鼠，按体重随机分组:溶媒对照组;阳性对照阿斯匹林 200 mg /kg组;化合物
2(批号 110223，HPLC外标法测定质量分数为 95． 7%)8． 33、25 mg /kg组(第 1 次试验) ，或化合物 1(批号
110727，HPLC外标法测定质量分数为 83． 3%)33、66 mg /kg组(第 2 次试验) ;每组 11 只．除阿斯匹林组仅
于试验当日给药 1 次外，其余各组每日分别按剂量灌胃给药 1 次，对照组灌服等容量 1% CMC － Na 20
mL /kg，连续 3 d．末次给药后 30 min，每鼠按 0． 1 mL /10 g．剂量腹腔注射 0． 6%冰醋酸溶液，观察并记录 15
min内各鼠因疼痛引起的扭体反应次数，计算抑制率．结果见表 1．结果表明，化合物 1 能明显抑制醋酸所
致小鼠的扭体性疼痛，与溶媒对照组相比，差异具有统计学意义．
表 1 化合物 1 和化合物 2 对醋酸致小鼠疼痛的影响
Tab． 1 Effects of compound 1 and 2 on pain induced by acetic acid in mice
组别 溶媒对照 阿斯匹林 化合物 1 化合物 2
剂量(mg /kg) 20 mL 200 33 66 8． 33 25
动物数(只) 11 11 11 11 11 11
给药途径 ig ig ig ig ig ig
扭体数 50． 9 !11． 0 14． 4 !10． 9＊＊ 36． 8 !15． 6* 35． 5 !13． 2＊＊ — —
(珋x ± SD，次) 41． 1 ± 18． 2 11． 1 ± 12． 2＊＊ — — 29． 3 ± 16． 2 29． 9 ± 14． 7
抑制率 /%
— 71． 79 27． 68 30． 18 — —
— 73． 01 — — 28． 78 27． 23
* /＊＊为与溶媒对照组相比，P ＜ 0． 05 /0． 01
5 讨 论
之前，化合物 1 已从落地梅(Lysimachia pardiformis)［9］、长节珠(Parameria laevigata)［10］、菲律宾樟树
(Machilus philippinensis)［11］以及越桔(Vaccinium vitis － idaea)［13］等多种植物中分离得到，化合物 2 仅见从
荨麻目的桑科榕属植物地果 Ficus tikoua中分离得到．在哈钦松被子植物系统图中，荨麻目与杜鹃花目均
由五桠果目进化而来，有一定的亲缘关系．
本课题组的另一项研究成果表明，土千年健药材用甲醇回流提取，直接或经 D101 大孔树脂纯化后，
照 HPLC法测定，以乙腈 － 0． 1%磷酸溶液(体积比 15∶ 85)为流动相，280 nm或 247 nm波长处检测，结果
显示土千年健药材中化合物 1 和 2 的质量分数分别为 0． 44%和 0． 24%，为土千年健药材的主要成分．生
物活性研究结果表明，2 者均具有一定的镇痛活性．据文献［14］报道，以化合物 1 为主要成分的乌药 LEF
组分能有效地抑制继发性肿胀、风寒湿痹肿胀及炎性组织中 PGE2的生成，具有很好的抗炎活性． 文献
［15］还报道了化合物 1 诱导脂肪细胞形成的药理活性．文献［12］报道了化合物 2 对体外培养的 Hela 细
胞和 HepG2 细胞具有一定的细胞毒活性．
综上，化合物 1 和 2 为土千年健药材消肿止痛功效的主要活性成分之一． 1 和 2 的其它药理活性值得
进一步深入研究．
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Chemical constituents from the roots of Vaccinium fragile and their bioactivity
YANG Zeng-ming1，2，ZHAO Yun-li3，SHENG Li-qing2，SHANG Jian-hua3
(1． Kunming Institute of Pattra Medicine，Kunming 650217，China;
2． Liangfang Ｒesearch and Development Center of Pattra Medicine of Yunnan，Kunming 650217，China;
3． Kunming Institute of Botany，Chinese Academy of Sciences，Kunming 650201，China)
Abstract:To study the chemical constituents from the roots of Vaccinium fragile and their bioactivity． The
chemical constituents were isolated and purified by chromatographic techniques，and identified by NMＲ，MS spec-
troscopic analyses． In the 60% ethanol extract，two compounds were isolated and identified as cinnamtannin B1
(1) ，2 － ethylene － 3，5，6 － trimethyl － 4 － phenol － 1 － O － β － D － xylopyranosyl －(1→6)－ β － D － glucopyr-
anoside (2) ，respectively． Compared with the vehicle control，compound 1 can significantly inhibit the acetic acid
－ induced writhing pain in mice． Compound 2 is isolated from the genus Vaccinium for the first time，compound 1
is first obtained from this plant． It is the first report of the analgesic activity of compounds 1 and 2．
Key words:Vaccinium fragile;cinnamtannin B1;analgesic activity
788第 6 期 杨增明等:土千年健化学成分及生物活性研究