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雷公连与混淆品穿心藤的薄层色谱和紫外-可见光谱鉴别研究



全 文 :收稿日期:2014-04-06; 修订日期:2014-09-24
基金项目:贵州省科学技术基金(No.黔科合 J字[2011]2306 号) ;
贵州省科技计划项目(No.黔科合中药字[2011]LKZ7047 号)
作者简介:吴向莉(1967-),女(汉族),贵州贵阳人,贵阳中医学院高级实验
师,学士学位,主要从事中药鉴别研究与药用植物绘画工作.
* 通讯作者简介:王祥培(1975-) ,男(侗族) ,贵州天柱人,贵阳中医学院
教授,博士学位,主要从事中药及民族药品质与资源开发研究工作.
雷公连与混淆品穿心藤的薄层色谱
和紫外-可见光谱鉴别研究
吴向莉,吴红梅,陈 丽,王祥培*
(贵阳中医学院,贵州 贵阳 550002)
摘要:目的 建立雷公连与穿心藤的薄层色谱、紫外 -可见光谱鉴别方法。方法 利用紫外分光光度计测定雷公连、穿心
藤的水、无水乙醇、氯仿和石油醚(60 ~ 90℃)4 种溶剂的浸泡液的紫外 -可见吸收图谱,采用紫外 -可见谱线组的吸收峰
数及峰位置对其结构特征进行分析鉴别;采用水、正丁醇、石油醚(60 ~ 90℃)依次超声提取雷公连、穿心藤,以石油醚 -
丙酮(8∶ 2)、石油醚 -丙酮(9∶ 2)、石油醚 -氯仿(3∶ 2)为展开剂,用硅胶 G 预制薄层板,以 10%的硫酸乙醇液为显色
剂,进行薄层色谱分析。结果 雷公连、穿心藤的紫外 -可见光谱图的最大吸收峰数及峰位置有差异,其薄层色谱主斑点
位置及颜色有明显差异,且集中、分离度好。结论 所建立的方法快速、简便、可靠、灵敏、重现性好、专属性强,可为雷公
连、穿心藤的药材鉴别提供参考。
关键词:雷公连; 穿心藤; 薄层色谱; 紫外 -可见光谱组法; 鉴别
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2015. 02. 047
中图分类号:R282. 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)02-0377-02
雷公连为天南星科植物雷公连 Amydrium hainanense(Engl.)
H . Li.的干燥藤茎,附生于常绿阔叶林中树干上或石崖上,主要
分布于西南及湖南、湖北、广西等地区,具有舒筋活络,祛瘀止痛
之功效,主要用于治疗风湿麻木、心绞痛、骨折及跌打损伤等,为
民族地区习用药材,称“化恩妈”[1 ~ 4]。目前,国内外有关雷公连
的报道极为少见,仅有雷公连中挥发油成分方面的研究[5]及其
有效成分的初步研究[6]。雷公连药材在民族地区使用广泛,由
于其与同属植物穿心藤 Amydrium hainanense (Ting et Wu ex H. Li
et al.)H. Li的藤茎极其相似,两者易造成混用,为避免其使用混
淆,本课题组已经就雷公连的显微鉴别[7]进行研究,但未见关于
雷公连和穿心藤的薄层色谱及紫外 -可见光谱的鉴别研究报道,
为了丰富雷公连药材的鉴别方法,弥补显微鉴别上的不足,本实
验对雷公连和穿心藤的薄层色谱特征及紫外 -可见光谱进行鉴
别研究,以期为雷公连的研究开发与临床应用提供鉴定依据。
1 材料与仪器
雷公连药材采自贵州麻江县,并经王祥培教授鉴定为天南星
科植物雷公连 Amydrium hainanense(Engl.)H. Li. 的干燥或新鲜
藤茎。穿心藤药材采自广西兴秀,经吴向莉高级实验师鉴定为穿
心藤 Amydrium hainanense (Ting et Wu ex H. Li et al.)H . Li的干
燥或新鲜藤茎。
岛津 UV - 2510PC 型紫外可见分光光度计(日本)ZF - I 型
三用紫外分析仪(日本) ,蒸馏水,无水乙醇,乙酸乙酯,丙酮,氯
仿,石油醚(60 ~ 90℃)等均为分析纯。
2 方法和结果
2. 1 薄层色谱
2. 1. 1 供试品及对照药材溶液的制备 称取 1g雷公连和穿心藤
干燥药材细粉(鲜品雷公连和穿心藤药材用剪刀剪碎,分别取
2g) ,分别置具塞锥形瓶中,依次加入正丁醇、乙酸乙酯、石油醚
(60 ~ 90℃)各 25mL,超声提取 30min,滤过,滤液分别浓缩至
1mL,即得供试品溶液。
2. 1. 2 薄层色谱条件与结果 取供试品溶液 2μl 点于自制硅胶
G薄层板上,分别以石油醚 -丙酮(8 ∶ 2)、石油醚 -丙酮(9 ∶
2)、石油醚 -氯仿(3∶ 2)为展开剂,对正丁醇、乙酸乙酯、石油醚
提取部位的供试品溶液分别进行展开,取出,晾干,正丁醇供试液
与乙酸乙酯供试液喷以 10% 硫酸乙醇溶液,在 105℃加热约
10min,置紫外光灯(365nm)下检视。结果见图 1 ~ 4;石油醚供试
液直接置紫外灯下(365nm)下检视。结果见图 5 ~ 6。
1.雷公连 2.穿心藤
图 1 两种药材干品正丁醇提取部分的 365nm紫外光下 TLC图谱
1.雷公连 2.穿心藤
图 2 两种药材鲜品正丁醇提取部分的 365nm紫外光下 TLC图谱
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2015 VOL. 26 NO. 2 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 2 期
1.雷公连 2.穿心藤
图 3 两种药材干品乙酸乙酯提取部分的 365nm紫外光下 TLC图谱
1.雷公连 2.穿心藤
图 4 两种药材鲜品乙酸乙酯提取部分的 365nm紫外光下 TLC图谱
1.雷公连 2.穿心藤
图 5 两种药材干品石油醚提取部分的 365nm紫外光下 TLC图谱
1.雷公连 2.穿心藤
图 6 两种药材鲜品石油醚提取部分的 365nm紫外光下 TLC图谱
2. 2 紫外 -可见光谱
2. 2. 1 供试品溶液的制备 精确称取雷公连和穿心藤干燥细粉
各 4 份,每份 1g置 100ml锥形瓶中,分别加入蒸馏水、无水乙醇、
氯仿和石油醚各 30ml,密塞,静置 24h,过滤,滤液取 1ml 置 10ml
容量瓶中,以相应溶剂定容。
2. 2. 2 紫外 -可见光谱条件与结果 吸取适量样品液至 1cm 石
英吸收池,分别以相应溶剂做对照。以空气做空白校正,波长为
200 ~ 800nm,狭缝 2nm,扫描速度为:中速。不同样品的紫外 -可
见吸收波长结果见表 1。
表1 雷公连、穿心藤的紫外 -可见光谱吸收波长数据 nm
样品 水溶液 无水乙醇溶液 氯仿溶液 石油醚溶液
雷公连 286. 20 663. 80 665. 80 668. 80
468. 60 460. 40 473. 00
434. 60 432. 20 445. 80
417. 80 385. 00 411. 00
穿心藤 288. 60 664. 60 666. 40 669. 00
413. 60 460. 00 533. 60
415. 20 408. 80
3 讨论
3. 1 薄层色谱图谱结果分析
3. 1. 1 提取溶剂的选择 曾选用甲醇、丙酮、氯仿等溶剂进行考
察,以上提取溶剂得到的薄层色谱信息均不明显,从效果方面考
虑,最终确定采用正丁醇、乙酸乙酯、石油醚依次超声提取 30min
为最佳提取方法。
3. 1. 2 展开剂的选择 展开剂曾选用三氯甲烷 - 丙酮(9. 8 ∶
0. 2)、石油醚 -乙酸乙酯(8∶ 4)、石油醚 -氯仿(6∶ 4)、石油醚
-丙酮(8∶ 2)、石油醚 -丙酮(9∶ 2)、石油醚 -氯仿(3∶ 2)等,
结果显示,油醚 -丙酮(8∶ 2)、石油醚 -丙酮(9∶ 2)、石油醚 -
氯仿(3∶ 2)展开,其 Rf值在 0. 189 ~ 0. 803 之间,分离度较好,并
且雷公连与穿心藤药材中各斑点的 Rf 值有明显差异,且斑点的
颜色、个数不同,可作为两者的鉴别依据。
3. 1. 3 显色剂的选择 曾选用 10%磷钼酸乙醇溶液、氨薰显色、
10%硫酸乙醇液、紫外灯(365nm)下等方法观察,结果显示,10%硫
酸乙醇显色,在紫外灯(365nm)下的荧光斑点较为清晰明显,所以
显色剂采用 10%硫酸乙醇液、紫外灯(365nm)下观察荧光斑点。
3. 2 紫外 -可见光谱法结果分析 雷公连、穿心藤同为天南星科
雷公连属植物,其亲缘关系非常近,由于其成分相差不大,常用的
紫外光谱法难以达到鉴别的目的,而采用多溶剂紫外 -可见光谱
扫描法,可获得较好的鉴别结果。
雷公连、穿心藤的蒸馏水浸液紫外 -可见图谱的最大吸收峰
位置差异不明显;无水乙醇浸液紫外 - 可见图谱中雷公连在
468. 6nm、434. 6nm处有吸收,而穿心藤没有;氯仿组浸液紫外 -可
见图谱中雷公连在 385nm有吸收,而穿心藤没有;石油醚提取液紫
外 -可见谱线组差别明显,如雷公连在 473nm、445. 8nm处有吸收,
而穿心藤在 533. 6nm处吸收。因此,采用多溶剂紫外 -可见光谱
组法,用固定的极性大小不同的 4种溶剂浸提样品,分别将水溶性
成分和脂溶性成分按极性大小顺序从样品中提取出来,所测绘出
的 4条谱线能全面地反映出样品所含成分的整体效应差异性、特
征性、灵敏性,为雷公连、穿心藤的鉴别提供依据,并在传统鉴别方
法的基础上,一定程度的充实了雷公连的鉴别方法。
参考文献:
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 2 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2015 VOL. 26 NO. 2