全 文 :29卷12期
Vol.29,No.12
草 业 科 学
PRATACULTURAL SCIENCE
1903-1909
12/2012
模拟酸雨胁迫下钙离子对
高羊茅种子发芽的影响
常青山1,张利霞2,万 涛3,王庆亚4,王 瑞5
(1.河南科技大学林学院,河南 洛阳471003;2.河南科技大学农学院,河南 洛阳471003;
3.景德镇高等专科学校生化系,江西 景德镇333000;4.南京农业大学生命科学学院,江苏 南京210095;
5.南京农业大学园艺学院,江苏 南京210095)
摘要:以高羊茅(Festuca arundinacea)为材料,采用不同浓度CaCl2 溶液对高羊茅进行浸种处理,测定模拟酸雨胁
迫下高羊茅种子发芽和生长的影响,旨在寻找高羊茅发芽阶段抗酸雨胁迫的最佳浸种浓度。结果表明,随着钙溶
液处理浓度的升高,模拟酸雨胁迫下高羊茅种子发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数、苗高、根长、鲜质量均呈先
增加后下降的趋势,幼苗的电导率则呈先下降后上升的趋势。主成分分析与隶属函数综合分析表明,钙溶液浸种
对模拟酸雨胁迫下高羊茅种子发芽能力影响效果由大到小依次为50、25、10、100、5、0mmol·L-1,以50
mmol·L-1的钙溶液浸种处理对提高高羊茅种子发芽阶段抗酸雨胁迫的效果最佳。
关键词:高羊茅;氯化钙溶液;主成分分析
中图分类号:S543+.903.4;Q945.3 文献标识码:A 文章编号:1001-0629(2012)12-1903-07
*
酸雨是当今世界面临的重大环境污染因素之
一[1]。中国是目前世界上继欧洲和北美之后出现的
第三大酸雨覆盖区域,境内受污染的地区约占国土
总面积的40%。酸雨成为目前中国面临的极其严
峻的环境污染问题之一[2-3]。酸雨能使人类赖以生
存的生态环境发生重大改变,使土壤酸化、盐基离子
流失,导致作物根系发育严重受阻、活力显著下降,
并影响其对营养物质的吸收与利用,从而直接或间
接地对作物的生长及产量产生不良影响[2,4-5]。一般
来说,植物种子在萌发与幼苗阶段极易受到酸雨胁
迫的不良影响[6-7]。因此,许多缓解酸雨胁迫的相关
研究均在植物种子萌发与幼苗期展开[8-9]。大量研
究表明,外源钙处理可以降低细胞膜透性、稳定细胞
膜、提高抗氧化酶活性、减轻胁迫造成的氧化伤
害[10-11],可以缓解重金属胁迫[12]、盐胁迫[13-14]、酸雨
胁迫等各种胁迫伤害[8]。
然而,外源钙对不同胁迫缓解作用的研究多集
中在农作物[12,15]与经济作物上[16-17],在草坪草中研
究相对较少。随着长江中下游地区城市化进程的加
快,人们对城市园林绿化与生态环境的改善有了越
来越高的追求,而酸雨却成为影响城市绿化,特别是
影响草坪绿化的一个重要因素[18]。因此,研究草坪
草及其相关生态技术,有效缓解酸雨胁迫带来的伤
害,对酸雨地区城市生态环境保护与防治具有重要
意义。高羊茅(Festuca arundinacea)作为一种绿期
较长的冷季型草坪草,广泛用于城市园林绿化、运动
场草坪的建植和公路护坡等生态建设工程中,在长
江中下游地区城市绿化中也有着大面积的应用[19]。
本研究以高羊茅种子为材料,研究不同浓度CaCl2
溶液浸种对模拟酸雨胁迫下高羊茅种子萌发特性的
影响,以期为长江中下游酸雨地区高羊茅草坪建植
提供理论与实践依据。
1 材料与方法
1.1材料 高羊茅种子购自江苏省农业科学研究
院,从美国进口,室内袋装贮藏,品种为金质克拉多。
1.2模拟酸雨的配制 根据江苏省实测降水中
SO42-与NO3-的摩尔浓度之比 (约5∶1)[20],参照
曹春信等[21]的方法制备模拟酸雨:配制 0.25
mol·L-1 H2SO4 和0.05mol·L-1 HNO3 溶液,
按等体积比配制模拟酸雨的酸母液;配制浓度高于
*收稿日期:2012-03-16 接受日期:2012-05-07
基金项目:河南科技大学博士科研启动基金项目(09001690、09001697)
作者简介:常青山(1979-),男,河南安阳人,讲师,博士,从事园林植物与草坪学研究。E-mail:mehero2010@126.com
通信作者:张利霞 E-mail:zhanglixia210@163.com
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天然酸雨成分 1 000倍的电解质母液,含 3.1
g·L-1 CaC12、8g·L-1 NH4Cl、0.91g·L-1 NaCl
和0.75g·L-1 KCl。然后将电解质母液稀释1 000
倍后,用酸母液调节模拟酸雨的pH值为2.5。
1.3方法 利用RXZ-300D人工智能气候箱(宁波
江南仪器制造厂)进行种子发芽试验。培养条件:温
度(25±1)℃,每天光照12h,相对湿度80%。准确
称取无水CaCl2,以去离子水配制成0(以无CaCl2
的去离子水作对照)、5、10、25、50、100mmol·L-1
的 CaCl2 溶液。选取籽粒饱满、大小基本一致的高
羊茅种子,用0.5%的双氧水溶液消毒30min,再经
去离子水漂洗3次并用吸水纸吸干表面水分,然后
在上述配好的各种浓度CaCl2 溶液及去离子水(对
照)中浸泡24h后,用去离子水漂洗种子3次,吸水
纸吸干种子表面的水分。将浸种处理过的种子放入
预先铺上2层滤纸的培养皿中,每皿50粒,4个重
复,保持间距尽量一致。每个培养皿加入15mL
pH值2.5的模拟酸雨溶液进行胁迫试验。每2d
换一次模拟酸雨溶液,每天打开2次,与外界换气5
min,每24h观察记录发芽情况;最后一天记录最终
发芽数及幼苗鲜质量、苗高与根长。本试验采用国
家标准[22]规定的高羊茅末次计数时间(第14天),
从第1天开始每天统计发芽的种子数,14d后计算
以下相关指标[23-24]:
1)发芽率(GR)=(n/N)×100%(n为最终达到
的正常发芽粒数,N 为供试种子数);
2)发芽势(GP)=(n5/N)×100%(n5 为种子发
芽第5天的正常发芽粒数,N 为供试种子数);
3)发芽指数(GI)=∑(Gt/Dt)(Gt 为在t天的
发芽数,Dt为相应的发芽天数);
4)活力指数=GI×S(GI为发芽指数,S为单株
鲜质量);
5)鲜质量、苗高和根长:随机抽取10株,计算高
羊茅幼苗鲜质量单株平均值,以及苗高与根长单株
平均值。
1.4质膜透性测定与计算 测量发芽第14天的
正常幼苗电导率,并以相对电导率来反映幼苗的膜
透性[25]。参考韩永华等[26]的方法测定幼苗电导率:
从对照及不同处理中分别称取生长一致的鲜苗0.1
g,剪成长度为0.5cm的小段,3个重复。用去离子
水充分冲洗干净后,用吸水纸吸干水分,置于20mL
试管中,并加10mL去离子水,摇匀、密封,室温放
置24h,用DDB-6200型数字电导仪测定电导率E1;
然后置沸水浴中煮30min,冷却后测定电导率E2;同
时测定其背景电导值E0。按下式计算电导率(P):
P=(E1-E0)/(E2-E0)×100%.
1.5统计分析 数据采用SPSS 13.0进行方差分
析与多重比较(Duncan新复极差法),然后采用Ori-
gin 8.0作图。不同CaCl2 处理对酸雨胁迫下高羊
茅种子发芽的影响采用主成分分析与隶属函数法进
行评价[27]。
隶属函数值计算公式:
R(Xj)=
Xj-Xmin
Xmax-Xmin
(1)
反隶属函数值计算公式:
R(Xj)=1-
Xj-Xmin
Xmax-Xmin
(2)
式中,Xj 为第j个综合指标,Xmin、Xmax分别为第j
个综合指标的最小值和最大值。若所测指标与抗性
指标正相关则采用公式(1),反之采用公式(2)。最
后用各指标的隶属函数值乘以相应的权重系数(权
重系数为负值时取绝对值)来计算综合评定值。
2 结果与分析
2.1模拟酸雨胁迫下高羊茅种子的发芽率和
发芽势 在模拟酸雨胁迫条件下,经过CaCl2 浸种
的高羊茅种子的发芽率与发芽势呈现先增加后降低
的趋势(图1A、图1B)。各处理均高于对照,其中
25~100mmol·L-1 CaCl2 处理与对照差异显著
(P<0.05)。随着 CaCl2 溶液浓度的升高,在50
mmol·L-1 CaCl2 溶液浸种处理下高羊茅发芽率与
发芽势达到最大,100mmol·L-1 CaCl2 溶液处理
开始下降,但仍高于对照。在25mmol·L-1 CaCl2
溶液浸种下,高羊茅的发芽率与发芽势分别比对照
增加了 12.41% 和 41.10%;在 50 mmol·L-1
CaCl2 溶液浸种下,高羊茅的发芽率与发芽势分别
比对照增加了21.82%和58.40%。
2.2 CaCl2 溶液浸种对高羊茅种子发芽指数
与活力指数的影响 不同浓度的CaCl2 处理对
模拟酸雨胁迫下的高羊茅种子的发芽指数与活力指
数影响明显,均高于对照;随着CaCl2 溶液浓度的升
高,二者均呈先上升后下降的趋势(图1C、图1D)。
25和50mmol·L-1 CaCl2 溶液处理下发芽指数显
著高于对照(P<0.05),分别比对照增加了23.37%
和31.98%。10~100mmol·L-1 CaCl2溶液处理
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图1 CaCl2 溶液浸种对模拟酸雨胁迫下高羊茅种子发芽率(A)、
发芽势(B)、发芽指数(C)和活力指数(D)的影响
Fig.1 Effects of seed soaking in CaCl2solution on germination rate(A),germination energy(B),
germination index(C)and vigor index(D)of Festuca arundinacea seeds under simulated acid rain stress
注:不同小写字母表示各处理间差异显著(P<0.05)。下同。
Note:Different lower case letters show significant difference at 0.05level.The same below.
下的高羊茅种子活力指数均显著高于对照,其中25
和50mmol·L-1 CaCl2 溶液处理下的活力指数分
别比对照提高了61.86%和76.10%。
2.3 CaCl2 溶液浸种对模拟酸雨胁迫下高羊
茅幼苗生长的影响 不同浓度下CaCl2 溶液浸
种处理对模拟酸雨胁迫下高羊茅种子幼苗苗高的影
响明显,均显著高于对照(P<0.05),25 和 50
mmol·L-1 CaCl2 处理幼苗苗高与对照相比分别增
加了49.08%和56.35%,但二者差异不显著(图
2A、图2B)。从根长来看,除5mmol·L-1外,其他
CaCl2 浓度处理下的根长均显著高于对照,25和50
mmol·L-1 CaCl2 处理的根长与对照相比分别增加
了10.10和6.96倍。从增加的幅度来看,CaCl2 浸
种处理对根长的影响高于对苗高的影响。
各处理下的幼苗鲜质量均高于对照,除 5
mmol·L-1 CaCl2 处理外,其他处理均与对照差异
显著(P<0.05)(图2C)。随着处理浓度的增加,幼
苗鲜质量先增加,然后在100mmol·L-1 CaCl2 处
理下降低。25和50mmol·L-1 CaCl2 处理可以显
著提高高羊茅种子在模拟酸雨胁迫下的鲜质量,其
鲜质量分别比对照增加了34.82%和37.20%,但这
两个处理之间差异不显著。
2.4不同浓度CaCl2 浸种处理对模拟酸雨胁
迫下高羊茅幼苗质膜相对透性的影响 不同
浓度CaCl2 溶液处理下,高羊茅幼苗的电导率均显著
低于对照(P<0.05)(图2D)。在5~25mmol·L-1
CaCl2 浓度范围,电导率随CaCl2 处理浓度升高而降
低,在25mmol·L-1 CaCl2 溶液处理下,其电导率达
到最低值。在50和100mmol·L-1 CaCl2 处理下,高
羊茅幼苗的电导率随CaCl2 浓度增加而升高,幼苗的
细胞膜透性增加。25和50mmol·L-1 CaCl2 处理的
电导率与对照相比分别减少44.36%与32.39%。
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图2 CaCl2 溶液浸种对模拟酸雨胁迫下高羊茅幼苗苗高 (A)、
根长 (B)、鲜质量 (C)和电导率(D)的影响
Fig.2 Effects of seed soaking in CaCl2solution on seedling height(A),root length(B),fresh weight(C)and
electrical conductivity(D)of Festuca arundinacea seedlings under simulated acid rain stress
2.5不同浓度CaCl2 浸种处理对模拟酸雨胁
迫下高羊茅种子萌发的综合评定 主成分分
析表明,第1主成分中,发芽率等发芽指标对应的相
关系数分别为0.920、0.959、0.984、0.996、0.983、
0.907、0.985和-0.913,特征根为7.319,累积贡献
率为91.49%。根据主成分的累积方差贡献率大于
80%~85%的原则[28],选留第1主成分。发芽指
数、活力指数、苗高在此成分上有较高载荷,说明钙
溶液浸种处理对模拟酸雨胁迫下的高羊茅这3个指
标的影响很大。提取这一主成分基本上可以反映全
部指标的信息,因此,应用这一综合变量来代替原来
的8个变量。通过计算,获得主成分表达式:
F1=0.340x1+0.354x2+0.364x3+0.368x4+
0.363x5+0.335x6+0.364x7-0.337x8。
式中,x代表主成分表达式中的主成分变量,x1 为
发芽率,x2 为发芽势;x3 为发芽指数,x4 为活力指
数,x5 为苗高,x6 为根长,x7 为鲜质量,x8 为电导
率。
根据主成分表达式各指标权重值的大小可以看
出各指标在钙浸种对模拟酸雨胁迫下种子发芽特性
影响大小的重要性,由大到小依次为发芽指数、活力
指数、苗质量、鲜质量、发芽势、根长、发芽率、电导
率。根据主成分表达式计算出各钙溶液浸种处理的
得分,5种浓度CaCl2 溶液浸种处理影响耐酸雨胁
迫的能力由强到弱依次为 50、25、10、100、5、0
mmol·L-1(表1)。
表1 CaCl2 浸种对模拟酸雨胁迫下高羊茅
种子发芽特性的影响能力得分
Table 1 The scores of effects of seed soaking in CaCl2
solution on germination characteristics of Festucaarundinacea
seeds under simulated acid rain stress
CaCl2 浓度
CaCl2concentration/mmol·L-1
得分
Score
排序
Order
0 -3.814 6
5 -2.022 5
10 0.211 3
25 2.570 2
50 3.353 1
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100 -0.298 4
为避免单一指标的片面性并克服多个指标的复
杂性,全面而准确地评价CaCl2 溶液浸种处理对高
羊茅种子发芽特性及幼苗生长状况的影响,本研究
采用隶属函数法对不同浓度CaCl2 溶液浸种处理对
模拟酸雨胁迫的影响进行评定,确定不同CaCl2 溶
液浸种处理对模拟酸雨胁迫的影响大小。依据各指
标的隶属函数值,结合主成分分析中各指标的权重
值进行综合评定,综合评定值越大,表明钙溶液浸种
对高羊茅在模拟酸雨胁迫下发芽能力的提高作用愈
明显。由表2可知,5种钙溶液浸种处理对酸雨胁
迫下高羊茅种子发芽能力的影响由强到弱的顺序依
次为50、25、10、100、5、0mmol·L-1。两种方法分
析结果的一致性说明了本研究结果科学可靠。
表2 CaCl2 浸种对模拟酸雨胁迫下的高羊茅发芽各指标影响的隶属函数分析
Table 2 Subordinate function analysis of effects of seed soaking in CaCl2solution on indices of seeds germination of
Festuca arundinacea under simulated acid rain stress
CaCl2 浓度
CaCl2
concentration/
mmol·L-1
隶属函数值Subjection value
发芽率
Germination
rate
发芽势
Germination
energy
发芽指数
Germination
index
活力指数
Vigor
index
苗高
Seedling
height
根长
Root
length
鲜质量
Fresh
weight
电导率
Electrical
conductivity
综合评定
Comprehensive
evaluation value
排名
Order
0 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 6
5 0.143 0.143 0.312 0.185 0.372 0.049 0.169 0.440 0.645 5
10 0.357 0.286 0.528 0.556 0.704 0.439 0.687 0.600 1.477 3
25 0.571 0.714 0.731 0.815 0.870 1.000 0.936 1.000 2.346 2
50 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0.689 1.000 0.720 2.627 1
100 0.571 0.333 0.462 0.481 0.507 0.199 0.569 0.520 1.289 4
3 讨论
3.1钙溶液浸种处理可以提高对模拟酸雨胁
迫下的高羊茅种子发芽的数量与品质 钙是
植物的必需元素之一,在细胞伸长、分裂以及细胞膜
构成、渗透性等方面具有重要作用,已有大量研究证
明其可以有效提高种子的活力[10,17,29]。与对照相
比,适宜的钙溶液浸种不仅显著提高种子的发芽势、
活力指数及幼苗的苗高、根长、鲜质量,而且降低了
幼苗的电导率,说明钙溶液浸种在提高种子发芽率
的同时,种子的品质与活力也得以大幅度提高,这与
前人的相关研究结果一致[8,30]。钙溶液浸种可以提
高模拟酸雨胁迫下高羊茅种子的发芽能力,一方面
在于钙溶液可以缓解模拟酸雨本身的酸度[31],另一
方面在于钙可以激活 H+-ATP酶增强植物对细胞
质pH值的调节,同时激活部分保护酶活性,从而减
轻模拟酸雨胁迫对细胞膜结构的破坏,增强细胞抗
酸胁迫的能力[16,32-34]。
3.2钙溶液浸种处理对模拟酸雨胁迫下高羊
茅种子的发芽特性相关指标的影响作用不同
钙处理对模拟酸雨胁迫下高羊茅发芽的各指标
中的幼苗根长影响作用最大,50mmol·L-1 CaCl2
溶液浸种处理的根长是对照的7.96倍,其次为活力
指数,50mmol·L-1 CaCl2 溶液浸种处理的活力指
数比对照提高76.10%,该处理下的发芽势与苗高
分别比对照提高58.40%和56.35%,仅对发芽率的
影响在各指标中最小,比对照提高21.82%。模拟
酸雨胁迫显著抑制草坪草根系的生长,对根长的影
响要显著大于对幼苗苗高的影响[35],而钙溶液浸种
处理则可显著减少模拟酸雨胁迫对幼苗苗高与根长
的影响,对根长的影响作用显著大于对幼苗苗高的
影响作用。原因可能在于随着钙对模拟酸雨胁迫的
缓解,幼苗胚根所受胁迫减轻,高羊茅种子的胚根生
长速度快于胚芽,因而钙处理表现对高羊茅根长的
影响较大。在钙处理对盐胁迫下的高羊茅种子萌发
影响的研究中,高浓度钙处理对高羊茅种子萌发产
生伤害,其处理效果甚至低于对照[30]。而在本研究
中,高浓度处理虽然效果较差,但仍高于对照,原因
可能在于钙处理对酸雨胁迫的缓解效果好于对盐胁
迫的缓解效果。
3.3模拟酸雨胁迫下高羊茅种子发芽随钙处
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理浓度增大具有先促进后抑制的特点 钙能
参与膜结构的保持与修复,稳定膜脂及膜蛋白的结
构,维持植物细胞内离子的平衡,保持细胞结构与功
能的完整,使植物维持正常的生理活动[15,17]。添加
适量的钙,可以维持钙信号系统的正常发生与传递,
加强质膜的稳定性,并进一步维持细胞内离子的平
衡。从本研究结果也可以看出,适宜浓度的钙溶液
浸种有效降低幼苗的电导率,减少植物体内细胞膜
的损伤。而在50和100mmol·L-1 CaCl2 处理下
电导率则开始升高,相对增加了膜透性,原因可能在
于较高浓度的钙处理可能超过植物的吸收能力使植
物造成渗透胁迫,导致细胞内的离子平衡被打破,形
成类似盐害的破坏作用从而增加膜透性[30]。
综合分析认为,钙溶液浸种可有效提高模拟酸
雨胁迫下高羊茅种子的发芽能力,随着CaCl2 处理
浓度的增加,高羊茅在模拟酸雨胁迫下种子发芽能
力逐渐提高,但超过一定浓度后反而使高羊茅种子
的发芽能力降低。其中以50mmol·L-1 CaCl2 处
理对模拟酸雨胁迫下的高羊茅种子发芽作用最好,
本研究对于长江中下游酸雨地区高羊茅草坪建植具
有一定的指导意义,至于应用于其他草坪草种是否
有明显的缓解效果则有待于进一步验证。
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Effects of Ca2+on germination characteristics of
Festucaarundinaceaseeds under simulated acid rain stress
CHANG Qing-shan1,ZHANG Li-xia2,WAN Tao3,WANG Qing-ya4,WANG Rui 5
(1.Colege of Forestry,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China;
2.Colege of Agriculture,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China;
3.Department of Biology and Chemistry,Jingdezhen Comprehensive Colege,Jingdezhen 333000,China;
4.Colege of Life Sciences,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China;
5.Colege of Horticulture,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China)
Abstract:In order to find the optimum CaCl2concentration and study effects of CaCl2on seed germination
characteristics under simulated acid rain stress,Festuca arundinaceaseeds were treated with different con-
centration CaCl2solutions and the related germination indexes were measured after seed soaking.The
results indicated that seed germination percentage,germination energy,germination index,vigor index,
seedling height,root length and seedling fresh weight increased firstly,and then declined with increaseing
CaCl2concentrations continualy,while electrical conductivity of seedlings was oppsite,declined firstly and
then increased.The results obtained from the comprehensive evaluation of principal component and subor-
dinate function analysis showed that the order(from strong to weak)of effects promoted by Ca2+ was 50,
25,10,100,5and 0mmol·L-1.The 50mmol·L-1 CaCl2solution soaking seeds was the best for
F.arundinaceato improve the resistance to acid rain at the germination phase.
Key words:Festuca arundinacea;CaCl2solution;principal components analysis
Corresponding author:ZHANG Li-xia E-mail:zhanglixia210@163.com
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