全 文 :书第37卷 第1期
2015年3月
延 边 大 学 农 学 学 报
Agricultural Science Journal of Yanbian University
Vol.37No.1
Mar.2015
收稿日期:2015-01-06 基金项目:吉林省世行贷款农产品质量安全项目(J14)
作者简介:李俭(1990—),女,吉林镇赉人,在读硕士,研究方向为农田杂草防除。吴明根为通信作者,
E-mail:5minggen@163.com
文章编号:1004-7999(2015)01-0018-07 DOI:10.13478/j.cnki.jasyu.2015.01.004
吉林省稻区稻稗、稻李氏禾的抗药性特征
李 俭, 李海粟, 陈 凯, 张 琳, 单国侠, 吴明根*
(延边大学农学院,吉林 延吉133002)
摘要:针对吉林省主稻区的部分稻区化控难的稻稗和稻李氏禾进行五氟磺草胺和苄嘧磺隆抗性特征的鉴定。
结果表明:吉林省稻区已存在对五氟磺草胺和苄嘧磺隆产生抗性的抗药突变型稻稗(Echinochloa oryzicola)
和抗药性强的外来入侵杂草稻李氏禾[Leersia orygoides L.(SW)]。不同稻区间抗药特征、发生频度有差异,
延边稻区、松原稻区发生多种抗药生态型稻稗,而且抗药突变型发生频度高;延边稻区、通化稻区发生抗药性
强的外来入侵杂草稻李氏禾。
关键词:稻区;稻稗;稻李氏禾;抗药性;特征
中图分类号:S451.1 文献标识码:A
The resistance characteristics of Echinochloa oryzicola and
Leersia orygoides in paddy fields of Jilin Province
LI Jian, LI Haisu, CHEN Kai, ZHANG Lin, SHAN Guoxia, WU Minggen*
(Agricultural College of Yanbian University,Yanji Jilin 133002,China)
Abstract:For the rampant Echinochloa oryzicola and Leersia orygoides in some of main paddy fields of Ji-
lin province,the identification of the resistance characteristics to Penoxsulam and Bensulfuron-methyl was
carried out.The results showed that,in paddy fields of Jilin province,there had been the drug-resistant
mutant Echinochloa oryzicola and strong resistant exotic weeds Leersia orygoides,both revealed the drug
resistance to Penoxsulam and Bensulfuron.There are differences in resistant characteristics and occurrence
frequency in different paddy fields.In the east part paddy fields including Yanbian and Songyuan,multiple
resistant ecological Echinochloa oryzicola were found,with high frequency in drug-resistant mutation.in
Yanbian and Tonghua paddy fields,the exotic weed Leersia orygoides with high drug resistance occurred.
Key words:paddy fields;Echinochloa oryzicola;Leersia orygoides;drug resistance;characteristics
目前,全球各国对抗药、耐药、外来入侵杂草十
分关注[1-2]。稻田轻简化栽培要求广泛使用除草
剂[3],随着机插稻区的大面积推广,除草问题越来越
凸显出来[4]。吉林省主稻区化学除草依赖度的提
高,加快了抗药突变型杂草类的出现,使抗药突变型
杂草成为农田主要问题种群[5]。
杂草抗药性的形成由杂草本身的生物学特性、
遗传学特性、除草剂的选择以及种植制度等多方面
因素造成。包括杂草个体的多实性、易变性、多型性
及其对环境的高度适应性和遗传多样性等[6-7],而除
第1期 李俭,等:吉林省稻区稻稗、稻李氏禾的抗药性特征
草剂的长期、单一使用,起了诱发抗性个体产生和筛
选抗性的作用[8]。
乙酰乳酸合成酶[9](Acetolactate synthase或
Acetohydroxyacid synthase),简称 ALS,是磺酰脲
类、咪唑啉酮类、嘧啶苯甲酸类、三唑并嘧啶类、磺酰
胺羰基三唑酮类等5大类除草剂的主要靶标[10]。
杂草对ALS抑制剂产生抗药性的机制主要有2个
方面,一是在植物体内对ALS抑制剂的代谢增强,
如水稗[11]。二是乙酰乳酸合成酶的作用位点发生
了改变,如瑞士黑麦草[12-13]。其中,作用位点发生改
变是杂草产生抗药性的主要原因[14]。
稻稗属于禾本科稻稗属,原产于欧洲和印度,为
1年生禾本科植物,是世界性恶性杂草,也是我国稻
区中分布最广、危害最重的主要稻区杂草之一,危害
面积高达42%[15]。稻李氏禾属于多年生禾本科假
稻属,水生或沼泽,主要分布在中国南部。稻李氏禾
又名秕壳草,具地下横支根茎和匍匐茎,以根茎和种
子繁殖[16]。分布范围广,繁殖能力强,不易控制,严
重的影响水稻的产量。
本文在前期普查吉林省延边、通化、吉林、长春
和松原主稻区发生的问题杂草分布特征的基础
上[17],挑选部分稻区化控难的稻稗和外来入侵杂草
稻李氏禾,鉴定了其对五氟磺草胺(Penoxsulam)和
苄嘧磺隆(Bensulfuron)的抗性特征,为各稻区有效
防除抗药性禾本科杂草提供了理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 稻稗、稻李氏禾种子收集
供试稻稗种子定点采集于2010—2013年8~9
月吉林省主稻区中稻稗大发生稻区,稻李氏禾种子
采集于延吉,通化。采集后装在纸袋内,储藏于2~
4℃的冰箱中备用。
1.1.2 ALS活性测定试剂
供试除草剂为五氟磺草胺和苄嘧磺隆(原剂含
量>97%)。ALS活性测定试剂有磷酸氢二钾
(K2HPO4),磷酸二氢钾(KH2PO4),丙酮酸钠(So-
dium Pyruvate),氯化镁(MgCl2),焦磷酸硫胺素
(Thiamine Pyrophosphate,简称 TPP),黄素腺嘌
呤二核苷酸(Flavine Adenine Dinucleotide,简称
FAD),肌酸(Creatine),甲萘酚(α-naphnol),标准蛋
白,3-羟基丁酮等化学试剂和Sephadex G-25M 层
析柱及CP100MX型低温高速离心机、UV1102型
分光光度计。
1.2 方法
1.2.1 化学除草剂对稻稗和稻李氏禾的药效试验
方法
选取成熟饱满的稻稗和稻李氏禾种子4份,催
芽至露白,从中选取10粒分别播种于塑料盒中(长:
27.5cm,宽:20.0cm,高:7.0cm)。播种1d后,按
苄嘧磺隆商品的有效剂量(48g a.i./hm2)对其进
行土壤处理,设对照。施药后30d调查苄嘧磺隆对
其相对株防效,40d调查相对鲜重防效;当另一部
分杂草叶龄达到3~4叶时,按五氟磺草胺商品的有
效剂量(22.5g a.i./hm2)进行茎叶喷雾处理,设对
照,施药后30d调查相对株防效,40d调查相对鲜
重防效。各处理均3次重复。
株防效/%=[(对照区杂草株数-施药区杂草
株数)/对照区杂草株数]×100%
鲜重防效/%=[(对照区杂草重量-施药区杂
草重量)/对照区杂草重量]×100%
1.2.2 稻稗和稻李氏禾对除草剂抗药性的鉴定方
法
将2012年及以前采集的草种低温浸种(2~
4℃),以打破休眠。2012年11月-2013年1月,
将稻稗和稻李氏禾种子分别播种在塑料杯(直径:
10cm,高:13cm)中,待杂草发芽出土前,按苄嘧磺
隆商品有效剂量(48g a.i./hm2)的1倍和3倍进行
土壤处理;待植株叶龄达到3~4叶时,按五氟磺草
胺商品有效剂量(22.5g a.i./hm2)的1倍和3倍进
行茎叶喷雾处理。同时,设置清水处理为对照,各处
理均3次重复,施药15d后调查稻稗和稻李氏禾对
2种除草剂的感、抗性情况。
抗性水平分为感性(Susceptible)、中抗(Mid-
resistant)和高抗(Resistant)。
感性(简称S):标准剂量除草剂处理后杂草死
亡为感性;
中抗(简称 MR):标准剂量处理后杂草不死亡,
而标准剂量3倍处理后死亡为中抗;
高抗(简称R):标准剂量3倍处理后杂草不死
亡为高抗。
1.2.3 ALS活性测定方法
1)ALS活性测定试剂配制
1mol/L K2HPO49.1mL和100mmol/L磷酸
钾0.9mL,1mol/L磷酸二氢钾双蒸馏水定容至
100mL pH 值为7.5的100mmol/L磷酸钾缓冲
液,再用此缓冲液配制含 MgCl2(0.5mmol/L)、丙
91
延 边 大 学 农 学 学 报 第37卷
酮酸钠(1mmol/L)、TPP(0.5mmol/L)和 FAD
(10μM)的溶液,为酶提取缓冲A液。
用pH值为7.5的100mmol/L磷酸钾缓冲液
配制0.5mmol/L MgCl2溶液,为酶提取配置B液。
取1mol/L 的 K2HPO41.5mL和1mol/L
KH2PO41mL,用双蒸水定容至100mL,制成pH值
7.0的25mmol/L磷酸钾缓冲液,再用此缓冲液配制
含有 MgCl2(0.5mmol/L)、丙酮酸钠(20mmol/L)、
TPP(1mmol/L)、FAD(10μM)的溶液,为酶促反应
缓冲C液。
考马斯亮蓝溶液:50mL 95% 乙醇中加入
100mg G-250和100mL 85%磷酸,用蒸馏水稀释
至1 000mL,滤纸过滤,低温保存(4℃),备用。
2)ALS提取
各地取样的种子在温室盆栽(长:56.5cm,宽:
37.5cm,高:15.5cm),取嫩叶4g,洗净,吸干。液
氮研磨,分3次加入酶提取缓冲液 A 12mL,研磨
10min左右,成匀浆,装入预冷离心管中。离心弃
去沉淀(15 000r/min,4℃,15min),上清液进行超
离(25 000r/min,4℃,25min)。再将上清液装入
预冷离心管中,加入4℃预冷的等体积饱和硫酸铵,
同时震荡,静置45min,蛋白质沉淀。然后,13 000
r/min,4℃离心20min。弃去上清液,加2mL酶
提取配置缓冲液B溶解沉淀。溶液通过4℃用缓
冲液B洗过的Sephadex G-25M层析柱,流下的蛋
白液装入15mL试管,并依据标准蛋白质曲线计算
其蛋白质浓度(μg/mL)。
3)体外法测定ALS活性
酶反应体系为1mL,其中,加入0.1mL酶抑
制剂(苄嘧磺隆浓度300nM,五氟磺草胺浓度
200nM),0.7mL酶促反应液C和0.2mL ALS提
取液,对照以水代替抑制剂。反应体系在30℃水浴
反应1h后,加6N 的 H2SO450μL停止反应;
60℃水浴放置15min后,加0.5% 肌酸0.5mL和
5%α-萘酚0.5mL(溶解在10% NaOH中),60℃
水浴显色反应15min。冷却至室温后,525nm波长
下比色。以生成3-羟基丁酮的量表示 ALS的活性
(μM acetoin/mg protein·h),3-羟基丁酮标准曲线
如图1所示。
图1 3-羟基丁酮标准曲线
Fig.1 The standard curve of 3-hydroxy butaone
2 结果与分析
2.1 稻稗、稻李氏禾对除草剂抗药性鉴定
2.1.1 除草剂对稻稗的防除效果
按五氟磺草胺和苄嘧磺隆商品的有效剂量处理
4个不同地区的材料(表1)。经SPSS19.0统计分
析表明:2种除草剂对柳河向阳材料的株防效和鲜
重防效均达100%,五氟磺草胺对吉林土城子-2材
料的株防效和鲜重防效均达98%以上,五氟磺草胺
和苄嘧磺隆对松原农场-1材料的株防效和鲜重防
效均为100%,表明这些材料相对应的除草剂防除
效果非常好,对相对应的除草剂表现为感性。2种
除草剂对和龙东城1~2材料的株防效和鲜重防效
在58%以下,防效最差的仅为5%,表明2种除草剂
对和龙东城1~2材料的防除效果较差,此地区的稻
稗可能发生了抗药性突变。
前期采用田间实验法鉴定吉林省主稻区稻稗多
发生51个点的稻稗抗药性(表2),对五氟磺草胺表
现感性生态型样点概率为68.6%,中抗概率为
25.5%,高抗概率为5.9%。对苄嘧磺隆表现感性
生态型样点概率为58.8%,中抗概率为15.7%,高
抗概率为25.5%;
02
第1期 李俭,等:吉林省稻区稻稗、稻李氏禾的抗药性特征
表1 两种除草剂对稻稗的防除效果
Table 1 Control effects of two kinds of herbicides on Echinochloa oryzicola (%)
取样地点
五氟磺草胺
株防效 鲜重防效
苄嘧磺隆
株防效 鲜重防效
柳河向阳(未用药) 100.0a 100.0a 100.0a 100.0a
吉林土城子-2 98.0a 99.9a 45.0b 68.3b
松原红光农场-1 100.0a 100.0a 100.0a 100.0a
和龙东城1-2 55.0b 57.5b 5.0c 16.8c
注:显著水平为0.05,不同字母表示差异显著(P<0.05)。
表2 稻稗对除草剂的抗性鉴定
Table 2 The resistance identification of Echinochloa orzicola for herbicide
取样地点
抗性水平
五氟磺草胺 苄嘧磺隆
取样地点
抗性水平
五氟磺草胺 苄嘧磺隆
和龙头道 MR S 龙井龙池-5 MR R
和龙八家子1-1 S S 龙井庆安-1 S MR
和龙八家子1-2 S R 龙井平安-1 S R
和龙八家子-2 S S 龙井平安-2 MR R
和龙八家子-3 S S 龙井平安-3 S S
和龙东城1-1 S S 龙井平安-4 S S
和龙东城1-2 MR R 龙井三峰洞 S S
和龙东城2-1 S MR 延吉太阳 MR S
和龙东城2-2 S MR 延吉朝阳川 MR S
和龙东城-3 MR S 延吉太东-1 S S
和龙东城-4 MR MR 延吉九水河-1 S S
和龙东城-5 S MR 延吉九水河-2 S S
龙井光新 MR R 延吉勤劳-1 S S
龙井光新-1 R R 延吉勤劳-2 S R
龙井海兰 MR S 松原新立-1 S R
龙井海兰-1 R R 松原新立-2 S S
龙井海兰1-1 S S 松原红光农场-1 S MR
龙井海兰1-2 S R 松原红光农场-2 S S
龙井铜佛寺 R MR 吉林土城子-1 S S
龙井铜佛寺-1 S S 吉林土城子-2 S S
龙井老头沟 MR MR 吉林十里桥 S S
龙井老头沟-1 MR R 舒兰嘎鸭河 S S
龙井龙池-1 S S 舒兰白旗 S S
龙井龙池-2 S S 柳河向阳(药) S S
龙井龙池-3 S S 柳河向阳(未用药) S S
龙井龙池-4 MR R
注:S为感性、MR为中抗、R为高抗。
2.1.2 除草剂对稻李氏禾的防除效果
两种除草剂中,五氟磺草胺对稻李氏禾种子实
生苗和根再生苗的株防效完全没有影响,对鲜重防
效有一定影响,但是影响不大,最高仅达到42%(表
3,4);苄嘧磺隆对稻李氏禾种子实生苗和根再生苗
均能起到一定的抑制作用,对种子实生苗的抑制效
果好。前期研究结果表明[18],吉林省稻区稻李氏禾
既能种子繁殖,也能营养根繁殖;有效防除禾本科杂
草的除草剂对种子繁殖与根系繁殖个体的药效有差
异。对种子繁殖的个体,苄嘧磺隆的鲜重防效达到
81%,对根系繁殖的个体,苄嘧磺隆的鲜重防效为
60.3%,五氟磺草胺的药效较低。本试验结果也表
明:外来入侵杂草稻李氏禾具有较强的耐药性性特
征[19-21]。因为稻李氏禾主要以根茎再生苗繁殖,所
12
延 边 大 学 农 学 学 报 第37卷
以用这两种除草剂进行防除,效果均不理想。
表3 2种除草剂对稻李氏禾种子实生苗的防除效果
Table 3 The effect of two kinds herbicides control
Leersia orygoides seedling of seed
除草剂 株防效/% 鲜重防效/%
五氟磺草胺 0b 42b
苄嘧磺隆 48a 81a
注:显著水平为0.05,不同字母表示差异显著(P<0.05)。
表4 2种除草剂对稻李氏禾根茎再生苗的防除效果
Table 4 The effect of two kinds herbicides control Leersia
orygoides regeneration seedling of rhizome
除草剂 株防效/% 鲜重防效/%
五氟磺草胺 0b 21.4b
苄嘧磺隆 34a 60.3a
注:显著水平为0.05,不同字母表示差异显著(P<0.05)。
由表5可知,稻李氏禾种子实生苗和根茎再生苗
对五氟磺草胺表现为高抗性,对苄嘧磺隆均表现为中
抗性,因此,这两种除草剂不适合于防除稻李氏禾。
表5 稻李氏禾对除草剂的抗性鉴定
Table 5 The resistance identification of Leersia orygoides for herbicide
名称 取样地点
抗性水平
五氟磺草胺 苄嘧磺隆
种子实生苗 延吉太东 R MR
种子实生苗 龙井龙池 R MR
根茎再生苗 延吉太东 R MR
根茎再生苗 龙井龙池 R MR
注:S为感性、MR为中抗、R为高抗。
2.2 ALS抑制剂类除草剂对稻稗和稻李氏禾
ALS活性的影响
2.2.1 五氟磺草胺、苄嘧磺隆对吉林省不同稻区稻
稗ALS活性的抑制效果
表6 五氟磺草胺、苄嘧磺隆对不同抗药生态型稻稗ALS活性的抑制作用
Table 6 Penoxsulam and Bensulfuron inhibition of different ecotypes of Echinochloaoryzicola ALS activity
取样地点
ALS活性
0 五氟磺草胺/200nM 苄嘧磺隆/300nM
五氟磺草胺ALS
活性抑制率/%
苄嘧磺隆ALS
活性抑制率/%
龙井铜佛寺 35.54 14.03 20.75 60.5 41.6
龙井海兰 38.11 29.07 13.73 23.7 64.0
和龙东城-3 40.09 15.58 26.42 61.1 44.1
延吉勤劳-1 35.53 22.61 23.69 36.4 33.3
吉林土城子-1 41.74 13.99 25.76 66.5 38.3
吉林舒兰 36.38 17.83 9.90 75.0 97.3
吉林十里桥 39.44 10.72 27.48 72.9 30.4
吉林白旗 34.59 3.49 5.53 89.9 84.0
松原新立-1 40.64 5.77 23.28 85.8 42.7
松原红光农场-1 36.44 18.17 13.18 50.1 36.8
长春榆树 36.72 5.78 8.91 84.3 75.7
长春德惠 39.62 5.68 18.99 85.7 52.1
通化梅河口 32.27 14.95 20.48 53.7 36.5
柳河向阳 39.67 7.73 18.94 80.5 52.3
柳河向阳(池塘) 23.66 3.43 3.27 85.5 86.2
延吉(池塘) 38.61 8.75 6.53 77.3 83.1
22
第1期 李俭,等:吉林省稻区稻稗、稻李氏禾的抗药性特征
本试验采取体外测定ALS活性抑制效果的结
果表明:对苄嘧磺隆表现中抗以上的样点概率为
50%(中抗标准:苄嘧磺隆300nM 剂量处理下抑制
率<50%),延边、松原稻区中抗水平的稻稗生态型
发生频度高;对五氟磺草胺表现中抗以上的样点概
率为12.5%(中抗标准:五氟磺草胺200nM 剂量处
理下抑制率<50%),分布在延边稻区(表6)。
2.2.2 五氟磺草胺、苄嘧磺隆对外来入侵杂草
稻李氏禾ALS活性的抑制效果
对稻李氏禾种子繁殖的实生苗提取ALS,测定
2种除草剂对其ALS活性的结果表明(表7):苄嘧
磺隆对稻李氏禾ALS活性的抑制效果好于五氟磺
草胺。五氟磺草胺对其 ALS的抑制率为48.1%,
苄嘧磺隆对其 ALS活性的抑制率为85.9%,说明
稻李氏禾种子的实生苗对五氟磺草胺表现出高抗
性,对苄嘧磺隆表现出感性。
表7 五氟磺草胺和苄嘧磺隆对稻李氏禾ALS活性的抑制作用
Table 7 Activity of ALS on Leersia orygoides by Penoxsulam and Bensulfuron
取样地点
ALS活性
0 五氟磺草胺/200nM 苄嘧磺隆/300nM
五氟磺草胺ALS
活性抑制率/%
苄嘧磺隆ALS
活性抑制率/%
延吉勤劳 20.47 10.62 2.89 48.1 85.9
通化梅河口 26.58 14.36 12.89 46.0 51.5
3 讨论与结论
2010—2013年调查发现,吉林省稻区发生多种
疑似抗药、耐药性禾本科杂草。其中,延边稻区发现
对五氟磺草胺、苄嘧磺隆2种除草剂产生不同程度
抗性的稻稗抗药生态型,而部分稻区未发生或少发
生抗药生态型稻稗。这种地区间的抗药性特征差
异,首先与地区间杂草防除技术体系差异有关。延
边稻区、城市郊区稻区除草剂使用历史长,使用次
数、量多,依赖化学除草程度高,抗药生态型发生频
度高,反而易收集到抗药突变型。其次与取样方法
有关,本试验材料田间取样,首选7~9月,挑选稻稗
大发生稻区定点取样;延边稻区经农户详细了解除
草剂使用情况、初步认定抗药生态型后取样;而外地
稻区定点,多数依据当时稻稗发生程度而定,会出现
取样误差。
经ALS活性测定分析,吉林省主稻区水稻生育
后期为止稻稗多发生稻区的稻稗抗苄嘧磺隆生态型
概率为50%,延边、松原稻区发生频度高,抗五氟磺
草胺生态型概率为12.5%,分布在延边稻区。不同
种ALS抑制剂类除草剂对稻稗有不同程度的抑制
作用,所以建议采用更换其他不同作用机制或靶标
的除草剂的方法,可以对抗药性稻稗起到良好的防
除效果。对于未出现抗药生态型稻稗的地区应加强
杂草的抗性监测,注意除草剂要混用和轮用[22]。
研究表明:稻李氏禾种子实生苗和根茎再生苗
对不同种类的除草剂表现出不同的敏感程度,这可
能与种子实生苗和根茎再生苗的幼嫩程度有关。苄
嘧磺隆对稻李氏禾种子繁殖的实生苗ALS活性抑
制效果好于五氟磺草胺,但由于其主要以根茎繁殖,
所以防除难度比较大,人工防除的难度更大,费时费
力。建议采取秋季深翻的措施对稻李氏禾进行有效
的防除,也可在稻里氏禾3~5叶期,用5%韩乐天
乳油进行茎叶喷雾处理,防治效果达95%以上[20]。
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