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尖尾芋水培营养液配方的筛选



全 文 :尖尾芋水培营养液配方的筛选
叶 飞,黑淑梅* ,常海飞 (延安大学生命科学学院,陕西延安 716000)
摘要 [目的]为尖尾芋水培生产提供理论依据和技术支撑。[方法]用不同种营养液培养尖尾芋,测定比较形态和生理指标,对尖尾芋
水培的 4种营养液进行优化选择。[结果]用斯泰纳营养液培养的尖尾芋植株,其株高、叶片数、鲜重、叶绿素含量、光合速率及根系活力
均高于日本园试、霍格兰和洛桑营养液,而丙二醛(MDA)含量较低,仅低于日本园试营养液培养的植株。[结论]斯泰纳营养液为尖尾
芋的最优水培营养液。
关键词 尖尾芋;水培;形态和生理指标;营养液优化
中图分类号 S132 文献标识码 A 文章编号 0517 -6611(2011)16 -09505 -02
Optimization of the Hydroponics Nutrient Solutions for Alocasia cucullata
YE Fei et al (College of Life Science,Yan'an University,Yan'an,Shaanxi 716000)
Abstract [Objective]To provide theoretical basis and technical support for the hydroponics of Alocasia cucullata. [Method]After the hy-
droponics in four different nutrient solutions,the morphological and physiological indexes of Alocasia cucullata were determined and then the
four nutrient solutions were optimized. [Results]The plant height,leaf number,fresh weight,chlorophyll content,photosynthetic rate and
root vigor of Alocasia cucullata cultured in Steiner nutrient solution were all higher than that in Japanese garden general nutrient solution,Hoag-
land nutrient solution and Losang nutrient solution,and the MDA content was only lower than that in Japanese garden general nutrient solution.
[Conclusion]Steiner nutrient solution was the best hydroponics solution for Alocasia cucullata.
Key words Alocasia cucullata;Hydroponics;Morphological and physiological indexes;Optimization of nutrient solution
基金项目 延安市科学技术研究发展计划项目(2010Kn-18) ;延安大学
专项科研资金项目(YD2010 - 16)。
作者简介 叶飞(1990 - ) ,男,陕西西安人,本科生,专业:生物科学。
* 通讯作者,讲师,硕士,从事植物抗性生理生化研究,E-
mail:heishumei@ 163. com。
收稿日期 2011-03-04
水培花卉是一种采用现代生物工程技术,应用物理、化
学、生物工程手段,对花卉进行驯化,使其在水中生长、开花
的一种新型栽培技术[1]。其具有美观大方、清洁卫生、便于
养护、格调高雅、观赏性强等优点,是布置居室、净化空气的
优良花卉[2 -3]。由于水培的独特栽培方式,植物根系直接生
长在营养液里,营养比例是否合适直接关系到植株的生长。
因此,营养液成为花卉水培能否成功的关键因素[4]。尖尾芋
[Alocasia cucullata (Lour.)Schott]又名佛手芋、滴水观音,为
天南星科海芋属多年生常绿草本植物,是一种良好的观叶花
卉。有关尖尾芋在不同营养液中水培效应的研究未见报道,
笔者采用 4种不同的营养液配方进行水培试验,通过研究不
同营养液配方对水培尖尾芋生长及相关生理指标的影响,选
出适宜的水培营养液配方,以期为尖尾芋水培生产提供理论
依据和技术支撑。
1 材料与方法
1. 1 材料 尖尾芋[Alocasia cucullata (Lour.)Schott],购自
延安市花卉市场。
1. 2 方法 试验于 2010年 8 ~10月在延安大学生命科学学
院中心实验室进行,温度为 15 ~25 ℃。相对湿度 60%。参
考其他花卉水培营养液有关资料,选择了日本园试营养液
(A)、斯泰纳营养液(B)、霍格兰营养液(C)和洛桑营养液
(D)4种配方营养液(表 1)。
1. 2. 1 尖尾芋的处理。从花卉市场购买生长健康、无病虫
害、长势一致的尖尾芋,从土盆中取出,用清水冲洗干净根
系泥土,修剪掉 2 /3 老根。用浓度 1% KMnO4 对根部消毒
10 min,清水冲洗后将植株置于清水中缓苗培养 7 d,进行
驯化。
1. 2. 2 营养液培养处理。将经过驯化的尖尾芋植株随机分
组转入 4种不同营养液中进行培养处理,每瓶 1 株,每种营
养液培养处理 3株,即 3次重复,以清水培养为对照(E)。培
养期间将植株根部保持与溶液接触,其余暴露在空气中;每
隔 7 d更换 1次营养液,换液时去除腐根、烂根等。
1. 2. 3 测定指标。每15 d测定1次株高和鲜重;每5 d统计
1次新叶数和黄叶数。培养结束时,叶绿素含量用丙酮提取,
分光光度计法测定;根系活力采用 α-萘胺法测定;丙二醛
(MDA)含量采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定[5]。光合
速率用 CB-1101光合蒸腾作用测定系统测定。
1. 2. 4 数据分析。用 SPSS11. 0统计软件进行数据分析。
表 1 营养液配方
Table 1 Nutrient Solution formulations mg /L
配方编号
No. of form-
ulation
大量元素 Major element
硝酸钙
Nitric
acid
calcium
硝酸钾
Potassi-
um nitrate
磷酸二氢铵
Ammonium
biphosphate
磷酸二氢钾
Monopot-
assium
phosphate
磷酸氢二钾
Dipotassium
hydrogen
phosphate
硫酸镁
Magne-
sium
sulfate
硫酸钙
Calcium
sulfate
微量元素 Trace element
乙二胺四乙
酸二钠铁
Nafeedta
硫酸锰
mangane-
se sulfate
硼酸
Boric
acid
硫酸锌
Zinc
sulfate
硫酸铜
Bluestone
钼酸铵
Ammonium
molybdate
A 945 809 153 - - 493 - 20 2. 13 2. 86 0. 22 0. 05 0. 02
B 738 303 136 - - 261 - 10 2. 50 2. 50 0. 50 0. 08 0. 12
C 1 181 505 - 136 - 690 - 20 2. 12 5. 28 0. 23 0. 08 0. 02
D - 1 000 - 449 69. 6 493 516 20 2. 12 5. 28 0. 23 0. 08 0. 02
2 结果与分析
2. 1 不同营养液对尖尾芋形态生长的影响 由表 2 可知,
配方 B处理下的尖尾芋各形态指标除了新叶和黄叶数与配
方 A无显著差异外,其他均与配方 A、C、D、E差异显著,而且
安徽农业科学,Journal of Anhui Agri. Sci. 2010,39(16):9505 - 9506,9509 责任编辑 张杨林 责任校对 况玲玲
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.16.210
在株高、鲜重增加量和新叶数值上都表现最好,观察期间也
未出现黄叶;配方 A除鲜重增加量与配方 D无显著差异外,
其余均与配方 C、D、E 有显著差异,各形态指标测定结果表
现较好;而配方 C、D 和 E 除新叶外各项指标间的差异均不
显著。另外,由于配方 E (清水)缺乏营养元素,植株出现
黄叶脱落,新叶生长缓慢,故其鲜重增加量为负增长;加上配
方 C、D和 E 处理期间经常出现烂根现象,植物根系代谢能
力差,进而地上部分生长,故其各项指标都较差。综合来看,
尖尾芋形态生长最佳的营养液为配方 B。
表 2 不同营养液对尖尾芋形态指标增加量的影响
Table 2 Effect of different nutrient solutions on the increment of the
morphological indexes of Alocasia cucullata
配方
Formu-
lation
株高
Plant
height∥cm
鲜重
Fresh
weight∥g
新叶
New
leaf∥片
黄叶
Wilted
leaf∥片
A 4. 36 ±0. 71b 48. 40 ±2. 86b 3. 7 ±0. 12a 0. 0 ±0. 00b
B 7. 05 ±1. 03a 82. 77 ±2. 04a 4. 0 ±0. 59a 0. 0 ±0. 00b
C 1. 24 ±0. 64c 16. 89 ±2. 90c 1. 7 ±0. 61bc 1. 3 ±0. 05a
D 1. 27 ±0. 75c 21. 49 ±2. 06bc 2. 3 ±0. 82b 1. 0 ±0. 03a
E 1. 21 ±1. 27c -8. 88 ±2. 17c 1. 0 ±0. 91c 1. 0 ±0. 07a
注:同列后不同小写字母表示在 0. 05水平存在差异。
Note:Different lowercase letters in the same columns indicate difference at
0. 05 level.
2. 2 不同营养液对尖尾芋叶绿素含量和光合速率的影响 叶
绿素是光合作用的主要色素,在光合作用中起着很重要的作
用。对于观叶植物来说,叶色浓绿有利于提高其观赏价值,
因而叶绿素含量也是植株分析的重要生理指标[6 -7]。由表 3
可知,配方 B培养的夹尾芋叶绿素含量最高,且和配方 A、C、
D、E差异均显著;配方 A与配方 D差异不显著,与配方 C、E
差异显著;而配方 C、D、E之间差异不显著。在光合速率上,
配方 A、B与配方 C、D、E差异达显著水平,且配方 B的光合
速率值最大。综合叶绿素含量和光合速率,尖尾芋在配方 B
中生长状态最好,这和形态生长情况吻合。
2. 3 不同营养液对尖尾芋根系活力和MDA含量的影响 根
系活力大小反映了根系代谢能力强弱,直接影响植株生长[8]。
由图 1可知,配方 B培养的尖尾芋根系活力值最高,与配方
A、C、D、E的差异均达显著水平;其余配方相互之间差异不
显著。这说明尖尾芋在配方 B 中较适应,根系生长良好。
MDA含量变化可以代表质膜受损伤的程度,反映植物遭受
逆境伤害的程度[9]。由图 2 可知,配方 A 培养的尖尾芋
MDA 含量最低,且与其他配方均差异显著,说明配方 A对尖
尾芋的膜脂伤害程度最小;配方 B的MDA 含量较低,说明该
配方也较适合尖尾芋生长。
表 3 不同营养液对尖尾芋叶绿素含量和光合速率的影响
Table 3 Effect of different nutrient solutions on the chlorophyll content and photosynthetic rate of Alocasia cucullata
配方
Formulation
叶绿素 a
Chlorophyll a∥mg /g
叶绿素 b
Chlorophyll b∥mg /g
叶绿素 a + b
Chlorophyll a + b∥mg /g
光合速率
Photosynthetic rate
μmol(CO2)/(m
2·s)
A 2. 274 3 ±0. 079 0b 0. 822 6 ±0. 064 6b 3. 096 9 ±0. 026 1b 66. 62 ±2. 700 1a
B 2. 614 1 ±0. 003 2a 1. 009 5 ±0. 008 7a 3. 633 5 ±0. 017 4a 74. 24 ±2. 085 3a
C 1. 690 7 ±0. 016 7c 0. 781 3 ±0. 043 5bc 2. 472 0 ±0. 060 2c 40. 36 ±2. 852 0b
D 1. 968 1 ±0. 239 5bc 0. 765 9 ±0. 102 4bc 2. 734 2 ±0. 341 8bc 37. 72 ±2. 033 0b
E 1. 504 5 ±0. 324 2c 0. 644 7 ±0. 080 9c 2. 149 3 ±0. 399 9c 24. 27 ±2. 170 2b
注:同列后不同小写字母表示在 0. 05水平存在差异。
Note:Different lowercase letters in the same columns indicate difference at 0. 05 level.
图 1 不同营养液对尖尾芋根系活力的影响
Fig. 1 Effect of different nutrient solutions on the root vigor of
Alocasia cucullata
3 结论
试验结果显示,尖尾芋形态生长最佳的营养液为斯泰纳
营养液;叶绿素含量和光合速率值最高的营养液为斯泰纳营
养液;根系活力最强的营养液也为斯泰纳营养液;MDA含量
最低的营养液为日本园试营养液,MDA 含量较低的营养液
为斯泰纳营养液。综合不同配方处理植株的各项形态、生理
指标及逆境生理指标,该试验结果表明,斯泰纳营养液是比
较理想的尖尾芋水培营养液。
图 2 不同营养液对尖尾芋MDA的影响
Fig. 2 Effect of different nutrient solutions on the MDA content
of Alocasia cucullata
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(下转第 9509页)
6059 安徽农业科学 2011 年
2. 0说明降解严重或含大量 RNA,A260 /A230值小于 2. 0时表明
多糖等杂质较多。根据检测的浓度,取部分 DNA 母液稀释
成 25或 50 ng /μl的工作液冷藏备用,其余母液 - 20 ℃冷冻
保存。
4 农作物总 DNA提取的主要方法
根据提取缓冲液的主要成分不同,DNA 提取方法主要
分为 CTAB法和 SDS法,在其基础上又衍生出高盐低 pH法、
柠檬酸钠法、尿素法等。根据是否要配制提取药品又分为常
规提取法和试剂盒提取法;按照提取 DNA 量的多少可分为
大量法、少量法和微量法;按照 DNA质量要求高低不同又有
复杂法和简便法,同一种方法在不同植物中又略有不同[8]。
下面笔者介绍了所在实验室常用的 3 种提取油菜 DNA 的
CTAB方法,即大量法、少量法和微量法。
4. 1 大量法 该方法提取的 DNA 量大、质量好,适合于进
行 RFLP、AFLP分析和基因文库构建等研究。以 15 ml 离心
管操作为例介绍该方法:取材料 1 ~ 2 g放入研钵中,加入液
氮研磨成粉末,将粉末转移到 15 ml 离心管中;加入 7 ml 预
热的 CTAB 提取缓冲液[2% CTAB,1. 4 mol /L NaCl,20. 0
mmol /L EDTA,100. 0 mmol /L Tris-HCl (pH8. 0) ,2% β-巯基
乙醇],摇晃混匀后置于 65 ℃水浴 45 min,其间轻柔颠倒混
匀 1 ~ 2次;取出离心管冷却至室温,加入 7 ml氯仿 /异戊醇
(24∶1) ,上下颠倒轻轻混匀数分钟,4 ℃、3 200 r /min离心 10
min;将上清转移至另一新的 15 ml 离心管中,加两倍体积预
冷的无水乙醇混匀放置 30 min 左右,3 200 r /min 离心 10
min,去上清,加入 76%乙醇(10 mmol /L NH4Ac)洗涤沉淀 30
min,室温干燥后加入 5 ml 超纯水(含 10 ng /ml RNase A)37
℃水浴 30 min,加入等体积的氯仿 /异戊醇(24∶1)上下颠倒
轻轻混匀数分钟,4 ℃、3 200 r /min离心 10 min;转移上清至
另一新的 15 ml离心管中,加入 1 /10体积 NaAc(3 mol /L)混
匀冰上放置 5 ~10 min,加 2倍体积预冷的无水乙醇混匀,室
温或低温放置至形成 DNA 絮状沉淀;用干净的 Tip 头将
DNA挑出,置于新离心管内,加入 76% 乙醇(10 mmol /L
NH4Ac)洗涤沉淀 2 ~3次,直到沉淀物纯白为止;倒出乙醇,
将 DNA放置于管壁,室温自然干燥,加入 TE溶解备用。
4. 2 少量法 该方法提取的 DNA 量少,其质量适合普通
PCR分析,操作方法如下:取嫩叶 2 cm2 左右的叶块放入干
净研钵中,加入 2% CTAB提取缓冲液 0. 7 ml,充分磨碎后转
入 1. 5 ml离心管中;60 ~ 65 ℃水浴 45 min,其间轻柔颠倒 1
~2次,取出后冷却至室温;加入等体积的氯仿∶异戊醇(24∶
1) ,轻柔颠倒若干次至充分混匀后 12 000 r /min离心 5 min;
取上清于新离心管中,加入等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1) ,轻
柔颠倒若干次至充分混匀后 12 000 r /min离心 5 min;取上清
于新离心管中,加 2倍体积的无水乙醇(- 20 ℃) ,室温放至
絮状 DNA析出;Tip头挑取絮状 DNA于新离心管中,76%乙
醇(10 mmol /L NH4Ac)洗涤 2 ~3次至纯白后室温干燥;加入
TE溶解备用。
4. 3 微量法 该方法提取的 DNA量少,适合大规模 PCR检
测,如杂交种纯度鉴定、目标基因的 PCR检测等。操作方法
如下:取植物组织 5 ~10 mg、适量的 DNA抽提缓冲液和钢珠
放入 2. 0 ml离心管中,编号后放入高通量组织细胞研磨仪
(一次可处理 48个样品) ,磨好后加入等体积的氯仿∶异戊醇
(24∶1) ,轻柔颠倒混匀后 12 000 r /min离心 5 min;取上清于
新离心管中,加入 2倍体积的无水乙醇(- 20 ℃) ,室温放置
30 min,8 000 r /min 离心 5 min,去上清,加入 76%乙醇(10
mmol /L NH4Ac)洗涤 2 ~3次至纯白后室温干燥,加入 TE溶
解备用。
此外,目前实验室研发出了更简便的提取方法,只需将
装有植物组织、适量的 DNA抽提缓冲液(实验室配制)和钢
珠的 2. 0 ml离心管放入组织细胞研磨仪中,磨好离心后的上
清液直接作为 PCR 检测的模板,该方法已用于杂交油菜种
子纯度的快速检测。
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