全 文 ：杜松雌雄植株的过氧化物酶同工酶鉴定 ’
王绍卿
( 辽宁省经济林研究所
杜松 ( Ju ni p er ur si gid ai Se b.et zu e e .)
是雌雄异株 .异花授粉的常绿木本植物 。 因
其树形美观 , 且耐寒抗病性强 , 在辽宁 、 吉
林 、 黑龙江等省各地常作庭 园绿化的观赏树
种 。 在城市园林栽植幼树时 , 或林木育种建
立实生种子园时 , 若能使雌雄植株按一定 比
例加 以配置 , 则可促进结实 以利种子繁殖 。
能否对杜松幼苗进行早期性别鉴定 , 这是当
前迅速发展的城市 园林事业所提出的一个带
有经济意义的课题 。
在植物雌雄性别分化方面 , 曾有人注意
到菠菜 、 银杳的性别分化与过氧化物酶同工
酶的数目和活性有一定关系 。 本研究试图在
杜松雌雄异 株间找到过氧化物酶 同工酶的差
异 , 并讨论这种差异能否作为 一旱期鉴别幼苗
雌雄性的一种生化指标 。
不连续缓冲体系 , 分离胶 : 长 8 . cs m , T 7 . 2 肠 ,
C 2
.
6 肠 , p H S . 9 , 成 层 胶 : 长 I c m ,
T 3
.
l肠 , C 20 肠 , P H 6 . 了 ; 电泳 缓 冲液为
T
r ; ,一甘氨酸系统 , P H S . 3 。 样 品 以 l : 2
的比例与成层胶溶液混合 , 每管加 工s o m l 。
电泳在。一 5 ℃ 下 进 行 , 电流 为 Zm A /管 ,
电压为 2 0 V , 当前沿指示剂嗅酚兰移动到胶
柱底端时停 _ IL I一匕泳 , 「}寸间 约为 2 . 5小时 。
4
. 过氧化物酶 同工酶的染色 : 采用醋
酸联苯胺 法进 行染色 。 用细长注射针头将凝
胶从玻璃管中剥出 , 用蒸馏水漂洗一下 , 然
后放入染色液中 , 染色 8 分 钟左右 , 过氧化
物酶同工酶的区带在凝胶上便染成蓝色 , 洗
脱半小时后转成棕色 , 装入试管保存 , 以供
分析和绘图 。
二 、 结果和讨论
一 、 材料和方法
1
. 试验材料 : 在本所庭园中 , 选择 已
知雌雄性别的 2 0多年生的杜松若干 株 。 于 5
月上旬新梢生长初期进 行定株采样 , 样品为
新生针叶 。
2
. 样品处理 : 将针叶剪碎 , 每克鲜叶
加入 l m l蒸馏水 , 迅速在研钵中研 磨 成 匀
糊 , 过滤后离心 ( 5。 。 o转 /分钟 ) 8分钟 , 取
上清液放入小试管中 , 置。一 5 ℃冰箱中贮存
备用 。
3
. 聚丙烯酞胺凝胶盘 状 电 泳 : 采用
杜松雌雄植株的过氧化酶同工酶测试结
果记入表 , 并根据 区带在胶柱上的位置及其
活性和宽窄绘制成图 。 按负极至正极顺序 ,
酶谱 ( 区带 ) 的编号为 l 号到 6号 , 并 分 为
A
、
B
、
C 三区 ( 详见表和 图 ) 。 由 此 , 杜
松雌雄的过氧化物酶同 工 酶 可分析比较如
下 : ( l ) A 区中 , 雌 株 有 l 、 2 、 3号酶带 ,
而雄株只有 2号和 3号 酶 带 , 缺少一条 1 号
酶带 。 还应值得注意的 是 雌 株 2号 、 3号酶
带是高活性的 , 而雄株 2号 、 3号 酶 带则是
低活性的 。 ( 2 ) B区中 , 雌株有 4 号 和 5 号
甘 本研究得到本所生理生化室协助部分实验工炸 , 特此致谢 。
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杜松雌雄植株过氧化物酶同工酶酶
谱的比较
一~ ~一 曰~一一一 `一 ~一 . , ~ ~ ~ 一 ~ ~ 一~ `一~ ~醉林普编号 雌 株 } 雄 株
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C区 6 0 . 4 0+ 0 . 3 0+
相二松雌 雄植
株的过氧叱
物酶同工酶
酶谱
a
. 雌性植株
!卜 雄性植株
注 : 1 . 酶谱编号顺序以i贝跌 (上 ) 至 止 极 (下 ) 。
2
. 表内数字为酶带平均宽度 c( 。 ) 。
3
. “ 十 ” 表示高活性带 , “ 一 ” 表示坛活性带 .
两条酶带 , 而雄株仅有一 条 较 宽 的 5 号 酶
带 。 ( 3 ) C 区中 , 6 号酶带雌雄植株虽然都
有 , 但雄株的 6号酶带要 比雌株的 6号酶带略
窄一些 , _且距离正极近一些 。
由上述结果可 知 , 成年杜松雌雄植株的
过 氧化物酶同工酶酶谱间存在着显著差异 。
限据钟诲文等的研究 ( 《 林业科学 》 , 1 9 8 2
年第一 期 ) , 银杏 ( G i n k g o b i l o b a L . ) 成
年植株雌雄间过氧化物酶 同工酶的差异 , 在
幼年未分化植株中也同样池表现出来 , 一部
分幼苗显示雌性酶谱 , 另一部分幼苗显示雄
性酶谱 , 二者必居其一 。 目前 , 国内外在树木
性 别早期鉴定的研究中 , 认为用同工酶来 识
别未分化苗木的雌雄性是可能的 。 对 已知性
别的植株进行同工酶分析 , 目的是为了找出
其规律性的差异 , 以便对未知性别的植株作
早期鉴定 。 因此 , 今后仍有必要对幼年杜松
未分化苗木进行过氧化物酶 同工酶的测试 ,
并继续跟踪实验 以验证这一理论 。
( 本文责任编辑 杨敏 )
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