全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１４（０２）：１０４～１０７
第一作者简介：于娜（１９７９－），女，山西阳城人，硕士，助教，研究方
向为草地资源与草地管理。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｕｎａ１０２３＠１２６．ｃｏｍ．
责任作者：董宽虎（１９５６－），男，博士，教授，博士生导师，研究方向
为草地资源与草地管理。Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｏｎｇｋｕａｎｈｕ＠１２６．ｃｏｍ．
基金项目：山西省科技攻关资助项目（２０１２０３１１０１１－１）；山西省科
技基础条件平台建设资助项目（２０１２０９１００４－０１０１）；教育部高等学
校博士学科点专项科研基金资助项目（２０１０１４０３１１０００２）。
收稿日期：２０１３－０９－１０
白羊草成熟种子组织培养再生体系研究
于 娜１，董 宽 虎２
（１．山西省林业职业技术学院 园林系，山西 太原０３０００９；２．山西农业大学 动物科技学院，山西 太谷０３０８０１）
摘 要：以白羊草成熟种子为外植体，采用组织培养的方法，研究不同种子处理方法对愈伤
组织诱导差异的影响。结果表明：手工剥去外稃为较好的处理方式，在愈伤组织诱导阶段，以
ＭＳＢ＋２，４－Ｄ ２．０ｍｇ／Ｌ和ＭＳＢ＋２，４－Ｄ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ诱导效果较好，愈伤诱导率达
到７０％和７５％，经继代后，分化率明显提高。
关键词：白羊草；成熟种子；继代；愈伤组织；植株再生
中图分类号：Ｓ ５４３．９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１４）０２－０１０４－０４
白羊草（Ｂｏｔｈｒｉｏｃｈｌｏａ ｉｓｃｈａｅｍｕｍ）属禾本科孔颖草
属多年生草本植物，又名白草、茎草，其生长势强、产草
量高、抗旱、耐盐碱、适应性广，以其营养价值高而在牧
草生产中具有广阔的前景［１］。白羊草在世界各暖温带
都有分布，我国主要分布于华北和西北的南部、中南区
北部的山区坡地和黄土高原［２］。为充分利用这一广布
建群优势种，培育优良的白羊草品种，课题组在以其成
熟种子、真叶、茎段不同外植体为研究对象的基础上［３－６］，
进一步研究以白羊草成熟种子为外植体，完善相应组培
快繁的技术措施和培养基配方。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
供试白羊草种子于２００６年１０月采自山西省太谷
县凤山，海拔１ １００ｍ，植被为喜暖灌草丛类草地，建群
种 为 白 羊 草 （Ｂｏｔｈｒｉｏｃｈｌｏａ ｉｓｃｈａｅｍｕｍ），千 粒 重
０．６９７５ｇ［７］。
以ＭＳＢ培养基加３％蔗糖，加５％琼脂粉制备基础
培养基，ｐＨ值调至５．８；在参考大量资料基础上设计在
基本培养基上附加不同水平的激素。
ＭＳＢ培养基：ＭＳ无机盐＋Ｂ５有机成分。
１．２ 试验方法
１．２．１ 白羊草种子的处理 取充分成熟，结构完整的供
试白羊草种子；先用无菌水浸泡１５ｍｉｎ，然后用７５％酒
精浸泡４０ｓ，期间不断摇动，用无菌水冲洗３遍，再用
０．１％升汞溶液消毒１５ｍｉｎ，用无菌水冲洗４～５次后，用
滤纸吸干水渍。然后接种到诱导愈伤组织培养基上；拨
去外稃，先用无菌水浸泡１０ｍｉｎ，去除杂质并使其沉淀，
然后用７５％酒精浸泡３０ｓ，期间不断摇动，用无菌水冲
洗３次，再用０．１％升汞溶液消毒１５ｍｉｎ，用无菌水冲洗
４～５次后，用滤纸吸干水渍。然后接种到诱导愈伤组织
培养基上。
１．２．２ 以成熟种子为外植体的组培体系 以成熟种子
为外植体时，试验基本可以不受季节限制，也不受采样
数量限制，所以在试验时可以有更多的选择。该试验共
设计了９种愈伤诱导培养基进行愈伤诱导和组织培养，
１种继代培养基，８种分化培养基，ｐＨ均为５．８。愈伤诱
导培养基：１～９号培养基是以 ＭＳＢ培养基内加入不同
组合的生长调节物质。１号培养基：ＭＳＢ＋２，４－Ｄ
１．６ｍｇ／Ｌ；２号培养基：ＭＳＢ＋２，４－Ｄ １．８ｍｇ／Ｌ；３号培养
基：ＭＳＢ＋２，４－Ｄ ２．０ｍｇ／Ｌ；４号培养基：ＭＳＢ＋２，４－Ｄ
２．２ｍｇ／Ｌ；５号培养基：ＭＳＢ＋２，４－Ｄ ２．４ｍｇ／Ｌ；６号培养
基：ＭＳＢ＋２，４－Ｄ １．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ；７号培养基：
ＭＳＢ＋２，４－Ｄ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ；８号培养基：
ＭＳＢ＋２，４－Ｄ ４．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ；９号培养基：
ＭＳＢ＋２，４－Ｄ ６．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ。１１种继代培养
基：Ｆ１培养基：６－ＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．０４ｍｇ／Ｌ；Ｆ２培
养基：６－ＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．０６ｍｇ／Ｌ；Ｆ３培养基：
６－ＢＡ ０．０５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．０５ｍｇ／Ｌ。分化培养基：Ｆ４
培养基：ＭＳＢ＋６－ＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．０２ｍｇ／Ｌ；Ｆ５
培养基：ＭＳＢ＋６－ＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．０３ｍｇ／Ｌ；Ｆ６
培养基：ＭＳＢ＋６－ＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．０４ｍｇ／Ｌ；Ｆ７
培养基：ＭＳＢ＋６－ＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．０５ｍｇ／Ｌ；Ｆ８
培养基：ＭＳＢ＋６－ＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．０６ｍｇ／Ｌ；Ｆ９
培养基：ＭＳＢ＋６－ＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．０７ｍｇ／Ｌ；Ｆ１０
４０１
北方园艺２０１４（０２）：１０４～１０７ ·生物技术·
培养基：ＭＳＢ＋６－ＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．０８ｍｇ／Ｌ；Ｆ１１
培养基：ＭＳＢ＋６－ＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１０ｍｇ／Ｌ。生
根培养基：分化出绿芽的小苗在１５～２５ｄ内迅速生长为
小植株，并伴有纤细的根状物，转入生根培养基（无附加
成分）１周后便产生根，形成完整小植株。
１．２．３ 培养条件 诱导愈伤为黑暗、室温２５±２℃；分
化、生根培养光照为１６ｈ／ｄ、室温２５±２℃、光照强度
２ ０００～３ ０００ｌｘ。
１．２．４ 练苗与移栽 将壮根后的白羊草幼苗进行移栽。
移栽前先去掉封口膜在培养室中锻炼２～３ｄ后，把幼苗
基部的残留琼脂洗净，移栽至小盆内，移栽基质为腐殖
质、细沙和菜园土以１∶１∶１的比例混匀配制而成。
１．３ 数据分析
出芽率（％）＝出芽种子数／接种种子数×１００％；出
愈率（％）＝产生愈伤组织块数／接种种子数×１００％；污
染率（％）＝污染种子数／接种种子数×１００％；胚性愈伤
组织诱导率（％）＝产生胚性愈伤组织块数／接种愈伤组
织数×１００％；分化率（％）＝出芽愈伤数／接种愈伤
数×１００％。
２ 结果与分析
２．１ 白羊草种子去稃种子与未去稃种子的比较
有研究表明白羊草组织培养均用去稃完整种子或
幼穗作外植体［１，３，８］，鉴于白羊草种子太小，千粒重只有
０．６ｇ左右［７］，在肉眼下手工剥离内外稃费时费力，因此
对其成熟种子在愈伤组织诱导阶段进行去稃、不去稃的
对比试验。从表１可知，去稃后种子愈伤组织出现早，
后期诱导率高，完整种子愈伤组织迟５ｄ才出现，与胚芽
鞘结合紧密，使愈伤组织不易与之分离，这直接影响分
化率（图１Ａ、Ｂ）。
表１ 白羊草去稃种子与未去稃种子愈伤组织诱导情况
Ｔａｂｌｅ １ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｗｈｏｌｅ ｓｅｅｄｓ ａｎｄ ｄｉｓｐｏｓｅｄ ｓｅｅｄｓ
出愈速度
Ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｓｐｅｅｄ
培养基表面
Ｓｕｒｆａｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ
愈伤质量
Ｃａｌｕｓ ｑｕａｌｉｔｙ
愈伤诱导率
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｃａｌｕｓ
未去稃种子
Ｗｈｏｌｅ ｓｅｅｄｓ
接种７ｄ左右能
看到部分长出
表面干燥，干净
颜色发白或发黄，结
构较紧密，表面干燥
低
去稃种子
Ｄｉｓｐｏｓｅｄ ｓｅｅｄｓ
接种２ｄ左右能
看到部分长出
表面较湿，干净
颜色透明或发白，结构疏松，
表面湿润，少许胚性愈伤
高
２．２ 愈伤组织的诱导
２．２．１ ２，４－Ｄ浓度和培养基组合对白羊草愈伤组织诱
导的影响 肖辅珍等［８］指出２，４－Ｄ ２．０ｍｇ／Ｌ出愈率最
好，课题组以前的试验中也得到证明［３－４］。从表２可以看
出，２，４－Ｄ浓度在１．６～２．２ｍｇ／Ｌ时对白羊草种子发芽
率、出愈率没有显著差异，以２，４－Ｄ ２．０ｍｇ／Ｌ的出芽率、
出愈率最高。只有当２，４－Ｄ ２．４ｍｇ／Ｌ时发芽率、出愈率
具有显著降低（Ｐ＜０．０５）。可见在２，４－Ｄ浓度在１．６～
２．４ｍｇ／Ｌ时，种子出芽率、出愈率随２，４－Ｄ浓度增高而
递减的趋势，在２．０ｍｇ／Ｌ时出愈率最高。在出愈率最
高的２，４－Ｄ ２．０ｍｇ／Ｌ浓度条件下研究不同培养基对愈
表２ 不同２，４－Ｄ浓度对发芽率和
愈伤组织诱导率的影响
Ｔａｂｌｅ ２Ｔｈｅ ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ２，４－Ｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｎ
ｒａｔｅ ｏｆ ｂｕｄｓ ａｎｄ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
２，４－Ｄ浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ２，４－Ｄ
／ｍｇ·Ｌ－１
出芽率
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｂｕｄｓ／％
愈伤组织诱导率
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ
ｃａｌｕｓ／％
１ １．６ ６９．５６±１．５６ａ ６８．８９±１．１０ａｂ
２ １．８ ７１．３３±４．０６ａ ６６．００±６．４０ａｂ
３ ２．０ ７２．３３±３．７１ａ ７０．６７±５．３６ａ
４ ２．２ ６５．００±２．８９ａｂ ６５．００±２．８９ａｂ
５ ２．４ ５６．６７±１．６７ｂｃ ５６．６７±１．６７ｃ
注：同列不同小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５）。下同。
Ｎｏｔｅ：Ｍｅａｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｗｉｔｈ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｓｍａｌ ｌｅｔｔｅｒｓ ａｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｅｒ－
ｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ．
伤组织诱导的影响。由表３可知，在相同２，４－Ｄ浓度下，
白羊草愈伤组织诱导以ＭＳＢ培养基表现较好，比ＭＳ培
养基愈伤组织诱导率高１６．６个百分点。
表３ 相同２，４－Ｄ浓度下不同培养基对
愈伤组织诱导率的影响
Ｔａｂｌｅ ３ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｍｅｄｉｕｍ ｏｎ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
接种数
Ｉｎｏｃｕｌａｔｅ
／个
形成愈伤
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｃａｌｕｓ
ｉｎｄｕｃｅｄ／块
愈伤组织诱导率
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ
ｏｆ ｃａｌｕｓ／％
愈伤状态
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ
ＭＳ １１７ ６８ ５８．１ｂ
透明或发白，疏松，少许
胚性愈伤
ＭＳＢ １１９ ８９ ７４．７ａ
透明或发白，疏松较软，
表面湿润，少许胚性愈伤
２．２．２ 不同２，４－Ｄ和ＫＴ浓度组合对愈伤组织诱导的
影响 由表４可知，在含２，４－Ｄ培养基中加入ＫＴ后，对
愈伤组织诱导率的影响显著，随着２，４－Ｄ浓度的增加愈
伤诱导率下降，在２，４－Ｄ浓度２．０ｍｇ／Ｌ时加入 ＫＴ
０．５ｍｇ／Ｌ，愈 伤 组 织 诱 导 率 显 著 高 于 其 它 处 理
（Ｐ＜０．０５），同时它对愈伤组织的质量也起着重要作用，
与只添加２，４－Ｄ的各处理比较，愈伤组织致密，量大。
２．２．３ 愈伤组织的继代改造 种子经过３０ｄ的暗培养
后，形成的愈伤组织大多为白色透明状，质地较柔软，有
的呈水浸棉絮状，这种愈伤组织在各种分化培养基中很
难分化成苗，为初生愈伤组织。把这些愈伤组织转继到
继代培养基上，经过２次（１０ｄ１次）的继代培养，部分愈
５０１
·生物技术· 北方园艺２０１４（０２）：１０４～１０７
表４ 不同２，４－Ｄ和ＫＴ浓度组合对
愈伤组织诱导的影响
Ｔａｂｌｅ ４ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｌｅｖｅｌ ２，４－Ｄ ａｎｄ
ＫＴ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
激素浓度
Ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ／ｍｇ·Ｌ－１
２，４－Ｄ ＫＴ
出芽率
Ｒａｔｅ ｏｆ ｂｕｄｓ
／％
出愈率
Ｒａｔｅ ｏｆ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
／％
６ １．０ ０．５ ６４．３２±１２．２３ａ ５４．９１±４．３１ｄ
７ ２．０ ０．５ ７２．４７±５．４３ａ ７５．０１±１３．５３ａ
８ ４．０ ０．５ ６９．３１±８．９３ａ ７１．５１±６．２８ａｂ
９ ６．０ ０．５ ６９．２１±２１．７２ａ ５８．６１±４．０９ｂｃ
伤组织发生转变，可转化为淡黄色、质地致密、颗粒状愈
伤组织，在分化培养基中可分化成苗，为胚性愈伤组织
（图１Ｃ）。经过１５～２０ｄ继代培养才能产生致密的胚性
愈伤组织。由表５可知，继代后分化率显著高于不继
代，同时褐化率降低，与不继代差异显著。
表５ 继代培养对胚性愈伤组织褐化率及
分化率的影响
Ｔａｂｌｅ ５ Ｔｈｅ ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ ｏｎ
ｃａｌｕｓ ｂｒｏｗｎｉｎｇ ａｎｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｒａｔｅ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
激素浓度
Ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
／ｍｇ·Ｌ－１
分化率
Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ／％
褐化率
Ｂｒｏｗｎｉｎｇ ｒａｔｅ／％
Ｆ１ ６－ＢＡ ０．１０＋ＮＡＡ ０．０４ ６４．１８±５．９３ａ １７．３２±１３．０４ｂ
继代 Ｆ２ ６－ＢＡ ０．１０＋ＮＡＡ ０．０６ ５４．４４±４．７５ａｂ ２．７８±２．７８ｂ
Ｆ３ ６－ＢＡ ０．０５＋ＮＡＡ ０．０５ ４０．１４±２．１７ａｂｃ ０ｂ
Ｆ１ ６－ＢＡ ０．１０＋ＮＡＡ ０．０４ ２９．８８±１３．６３ｂｃ ６４．０６±９．８２ａ
不继代 Ｆ２ ６－ＢＡ ０．１０＋ＮＡＡ ０．０６ ２３．２３±７．３１ｃ ６７．３４±１３．４２ａ
Ｆ３ ６－ＢＡ ０．０５＋ＮＡＡ ０．０５ ３６．６７±１３．７１ａｂｃ ５６．６７±１１．７１ａ
２．３ 不同激素配比对胚性愈伤组织分化的影响
将胚性愈伤组织置于 ＭＳＢ附加不同浓度６－ＢＡ和
ＮＡＡ的Ｆ４～Ｆ１１培养基上，研究不同组合对愈伤组织
分化的影响。非胚性愈伤组织，在使用各种激素配比的
分化培养基中只有极少量能分化出植株；而胚性愈伤组
织在含有适宜浓度６－ＢＡ和ＮＡＡ的培养基上，多数能分
化出绿色小苗（图１Ｄ）。
在６－ＢＡ保持０．１ｍｇ／Ｌ不变的情况下，ＮＡＡ从
０．０２～０．１０ｍｇ／Ｌ浓度比例来促进白羊草愈伤组织的分
化。从表６可以看出，ＮＡＡ在８个水平中胚性愈伤组织
保持均较好，但在Ｆ４、Ｆ１１号培养基中愈伤组织质地显
著差于其它培养基，相应的在Ｆ４、Ｆ１１号培养基中分化
率也显著低于其它培养基，说明ＮＡＡ浓度过低过高都
不利于胚性愈伤组织的保持和分化。随着ＮＡＡ浓度的
增加，愈伤组织分化率呈现先上升后下降的趋势，Ｆ６、Ｆ７
显著高于其它激素组合（Ｐ＜０．０５），Ｆ８次之，Ｆ９、Ｆ１０、Ｆ５
显著高于Ｆ４，说明ＮＡＡ ０．０４、０．０５ｍｇ／Ｌ时分化达到最
高，且胚性愈伤保持最高，说明这２个激素组合在以白
羊草成熟种子为外植体分化中作用最好。Ｆ５、Ｆ９、Ｆ１０
分化率差异不显著（Ｐ＜０．０５），当 ＮＡＡ 浓度降到
０．０２ｍｇ／Ｌ时分化率差异显著，只有２．５６％。
２．４ 生根与移栽
分化出绿色小苗待芽长到６～７ｃｍ左右，根长３～
４ｃｍ时转到没有激素培养基上壮根（图１Ｅ）。将壮根后
的白羊草幼苗进行移栽即可成活并生长良好（图１Ｆ）。
图１ 白羊草植株再生过程
注：Ａ．完整成熟种子诱导出的非胚性愈伤组织；Ｂ．手工剥去外稃种子诱导出的非胚性愈伤组织；Ｃ．继代后干燥、紧密、颗粒状的愈伤组织；Ｄ．分化
培养基上分化的簇生苗；Ｅ．壮根阶段；Ｆ．再生植株。
Ｆｉｇ．１ Ｔｈｅ ｃｏｕｒｓｅ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ Ｂｏｔｈｒｉｏｃｈｌｏａ ｉｓｃｈａｅｍｕｍ
Ｎｏｔｅ：Ａ．Ｎｏｎｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｆｒｏｍ ｗｈｏｌｅ ｎａｔｕｒｅ ｓｅｅｄｓ；Ｂ．Ｎｏｎｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｓｐｏｓｅｄ ｎａｔｕｒｅ ｓｅｅｄｓ；Ｃ．Ｃａｌｕｓ ｏｆ ｄｒｙ，ｃｏｍ－
ｐａｃｔ，ｓｍａｌ ｐｅｌｅｔ ａｆｔｅｒ ｃａｌｕｓ ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ；Ｄ．Ｓｈｏｏｔｓ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｉｎ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ；Ｅ．Ｓｔａｇｅ ｏｆ ｒｏｏｔｉｎｇ；Ｆ．Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｐｌａｎｔｓ．
６０１
北方园艺２０１４（０２）：１０４～１０７ ·生物技术·
表６ 不同培养基对白羊草成熟种子为
外植体愈伤分化的影响
Ｔａｂｌｅ ６ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｍｅｄｉｕｍ ｏｎ
ｃａｌｕｓ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｍａｔｕｒｅ ｅｍｂｒｙｏ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
激素浓度
Ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ／ｍｇ·Ｌ－１
６－ＢＡ ＮＡＡ
胚愈率
Ｒａｔｅ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ
ｃａｌｕｓ／％
分化率
Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ／％
Ｆ４ ０．１ ０．０２ ６６．３５±１．４８ｃ ２．５６±２．５６ｅ
Ｆ５ ０．１ ０．０３ ９２．５９±３．７０ａ １７．６１±４．６３ｃｄ
Ｆ６ ０．１ ０．０４ ９６．９７±３．０３ａ ６４．１８±５．９３ａ
Ｆ７ ０．１ ０．０５ ８８．８９±１１．１１ａｂ ５４．４４±４．７５ａ
Ｆ８ ０．１ ０．０６ ８３．８１±５．３２ａｂ ３８．８８±７．３３ｂ
Ｆ９ ０．１ ０．０７ ８２．２２±９．６９ａｂ ２２．７３±３．６７ｃ
Ｆ１０ ０．１ ０．０８ ８５．３５±４．８３ａｂ １７．９３±５．４７ｃｄ
Ｆ１１ ０．１ ０．１０ ６６．１６±９．１９ｃ ７．０４±３．５３ｄｅ
３ 讨论与结论
尽管早在２０世纪５０年代植物细胞的全能性理论
就已确立，但是细胞全能性的表达在各种植物之间甚至
不同属种之间的植物都有很大差别，植物的再生性由它
们的基因型决定。白羊草不同组织或器官来源的外植
体再生能力也有很大差别。可能因为它们对激素等外
源信号的感应程度不同，须改变培养条件，提高其再生
能力。
成熟种子与真叶、茎段相比，易于获取，且不受季
节、植株发育时期等因素限制，具备取材方便、操作简单
等优点，同时愈伤组织诱导率、分化率都比另２种外植
体要高，故认为成熟种子是较好的外植体。
外植体有无去稃处理对诱导愈伤组织的结果有很
大差异，可能是由于去稃后对培养基敏感度增强的原
因。去稃后种子愈伤组织出现早、质量优、诱导率高，完
整种子愈伤组织多在第７天左右才出现，且较硬、干燥、
与胚芽鞘结合紧密，使愈伤组织不易与之分离，这直接
影响分化率。根据以上结果，以手工剥离成熟种子内外
稃，颖果消毒后为外植体进行愈伤组织诱导情况较优。
除了以上因素外，其它因素如所用的基本培养基、培养
基的碳源、维生素、ｐＨ值以及培养温度等都对白羊草愈
伤组织的形成和变化都有一定程度的影响。
植物生长调节剂的诱导作用对植物的脱分化有着
重要的意义，不同的植物生长调节剂及其配比可能对愈
伤组织的诱导作用不同。从不同的诱导培养基上形成
的愈伤组织，愈伤组织的生长情况明显不同。ＫＴ对于
白羊草愈伤组织继代和分化效果明显，在附加ＫＴ的培
养基上白羊草成熟种子愈伤组织诱导率高，生长较快，
当２，４－Ｄ的浓度保持在２．０ｍｇ／Ｌ，ＫＴ的浓度保持在
０．５ｍｇ／Ｌ时，成熟种子愈伤组织就会有较高诱导率，良
好的结构，同时保持较高的增殖速度。加低浓度的细胞
分裂素６－ＢＡ，能有效的提高植物细胞诱导愈伤组织的再
生能力。６－ＢＡ作为外源激素，能改善细胞内源生长素和
细胞分裂素的比例，调节细胞生理生化状态，有利于胚
性愈伤组织的发生，从而增加分化频率。
参考文献
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大学学报（自然科学版），２０１０，３０（１）：６１－６４．
［７］ 黄锋华，董宽虎．白羊草灌丛草地植物量及优势种牧草营养动态研
究［Ｊ］．草原与草坪，２００７（２）：１４－１７．
［８］ 肖辅珍，王景林．从白羊草成熟胚和幼穗培养诱导再生植株［Ｊ］．首
都师范大学学报，１９９６，１７（４）：７６－７８．
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ｔｈｅ
Ｍａｔｕｒｅ Ｓｅｅｄｓ ｏｆ Ｂｏｔｈｒｉｏｃｈｌｏａ ｉｓｃｈａｅｍｕｍ
ＹＵ Ｎａ１，ＤＯＮＧ Ｋｕａｎ－ｈｕ２
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌａｎｄｓｃａｐｅ，Ｓｈａｎｘｉ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｃｏｌｅｇｅ，Ｔａｉｙｕａｎ，Ｓｈａｎｘｉ ０３０００９；２．Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ
Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｇｕ，Ｓｈａｎｘｉ ０３０８０１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｅｅｄｓ ｏｆ Ｂｏｔｈｒｉｏｃｈｌｏａ ｉｓｃｈａｅｍｕｍａｓ ｔｈｅ ｅｘｐｌａｎｔｓ，ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ，ｔｈｅ ｅｆｅｃｔ ｏｆ
ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｏｆ ｓｅｅｄｓ ｏｎ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｈａｎｄ ｓｔｒｉｐｐｉｎｇ ｌｅｍｍａ ｆｏｒ ｂｅｔｔｅｒ
ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ，ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｐｈａｓｅ，ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ＭＳＢ ＋２，４－Ｄ
２．０ｍｇ／Ｌ ａｎｄ ＭＳＢ＋２，４－Ｄ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｄａｒｋｎｅｓｓ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｈａｔ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒｅａｃｈｅｄ
７０％ａｎｄ ７５％；ｃａｌｕｓ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｃａｌｕｓ ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｂｏｔｈｒｉｏｃｈｌｏａ ｉｓｃｈａｅｍｕｍ；ｍａｔｕｒｅ ｅｍｂｒｙｏ；ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ；ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ ｃａｌｕｓ；ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
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