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买麻藤总茋化合物提取工艺研究



全 文 :— 45 —现代中药研究与实践2010年第24卷第3期Chin Med J Res Prac,2010 May,Vol.24 No.3
买麻藤为买麻藤科植物小叶买麻藤 Gnetum
parvifolium Warb. 或买麻藤 Gnetum montamun Markgr.
的干燥藤茎,具有祛风除湿、活血散瘀、消肿止痛等
功效,可用于治疗支气管炎,风湿性关节炎,腰肌劳
损,跌打损伤,溃疡出血等症。现代化学研究表明买
麻藤中含有茋类、生物碱、挥发油、黄酮等化合物,
尤以茋类化合物如异丹叶大黄素、白藜芦醇及其苷类
和低聚物含量最高 [1~5]。近年来以白藜芦醇、异丹叶
大黄素为代表的茋类化合物在抗肿瘤、抗病毒等方面
的应用已成为研究热点。为了对买麻藤资源进一步开
发应用,本研究主要对买麻藤总茋化合物的提取工艺
进行优选。
1 实验材料
岛津 UV-2401型紫外分光光度计,Sartorius-
BP 211D型电子天平,HHS-214型电热恒温水浴
锅,101-2型电热鼓风干燥箱;买麻藤(产地:
广西,购于安徽省亳州市药材公司);白藜芦醇
苷 对 照 品(111575-200502)、 白 藜 芦 醇 对 照 品
(111535-200502)(均购于中国药品生物制品检定
买麻藤总茋化合物提取工艺研究
吴德芹,袁红宇 *,欧 宁,王 涓
(南京医科大学第一附属医院,江苏 南京 210029)
摘要:目的 确定买麻藤总茋化合物的最佳提取工艺。方法 以总茋化合物提取率和固含物得率为评价
指标,比较水煎煮法、乙醇回流法和乙醇渗漉法的优劣,并采用 L9(34)正交实验对乙醇回流法进行了工
艺优选。结果 三种提取方法以乙醇回流法为优,最佳提取工艺为 A1B1C2D3,即用 6倍量 60%的乙醇,回
流 3次,每次 1.5h。结论 优选工艺合理、稳定、简单、可行。
关键词:买麻藤;总茋化合物;提取方法;正交设计
中图分类号:S284.2 文献标识码:A 文章编号:1673-6427(2010)03-0045-04
Study on the Extraction Process of Stilbenes from Caulis Gnetum
WU De-qin, YUAN Hong-yu, OU Ning, WANG Juan
(The First Hospital Affi liated to Nanjing Medical University, Nanjing 210029, China)
Abstract: Objective To determine the best extraction process for stilbenes from Caulis Gnetum.
Methods Three different kinds of methods were compared with extraction rate of stilbenes and yield rate of
solid objects as indexes, and the optimum process with ethanol extraction method was evaluated by L9(34)
orthogonal experiment. Results The ethanol refl uxing extraction method was the best one in the three different
kinds of methods, and optimum condition was A1B1C2D3, as using 6 times amount of 60% ethanol, extracted three
times for 1.5 hours per time. Conclusion The optimized process was reasonable, stable, simple and feasible.
Keywords: Caulis Gnetum; Stilbenes; extraction process; orthogonal design
所)。
2 不同提取方法对总茋化合物提取率的影响
2.1 样品的提取
本研究对买麻藤的提取主要采用水煎煮法、乙醇
回流法、乙醇渗漉法等三种较常用的提取方法进行对
比研究。
2.1.1 水煎煮法 称取买麻藤粗粉 20.0 g,加 10倍
量水,煎煮 2次,每次 1.5 h,抽滤,合并滤液,并
用蒸馏水补足体积至 400 mL。
2.1.2 乙醇回流法 称取买麻藤粗粉 20.0 g,加 10
倍量 70%乙醇,回流 2次,每次 1.5 h,抽滤,合并
滤液,70%乙醇补足体积至 400 mL。
2.1.3 乙醇渗漉法 称取买麻藤粗粉 20.0 g,用 20
倍量 70%乙醇渗漉,抽滤,70%乙醇补足体积至
400 mL。
2.2 总茋化合物的含量测定
2.2.1 白藜芦苷对照品溶液的制备 精密称取白藜
芦苷对照品 5.10 mg,用 80%的乙醇溶解定容至 250
mL棕色量瓶中,得到浓度为 20.4 μg/mL的白藜芦苷
对照品溶液,避光冷藏。
2.2.2 白藜芦苷对照液的制备 分别精密移取白藜
芦苷对照品溶液 2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、收稿日期: 2009-09-15*通讯作者:袁红宇, Email:hyyuan2002@sohu.com
DOI:10.13728/j.1673-6427.2010.03.013
— 46 — 现代中药研究与实践2010年第24卷第3期Chin Med J Res Prac,2010 May,Vol.24 No.3
20.0 mL于 25 mL棕色容量瓶中,用 80%乙醇溶
解定容,得浓度分别为 2.04、4.08、6.12、8.16、
10.20、12.24、16.32 μg/mL的对照品溶液。
2.2.3 样品测定液的制备 精密吸取样品提取液 1
mL,用 80%乙醇溶液定容至 100 mL,避光冷藏待测。
2.2.4 紫外吸收光谱扫描 分别将白藜芦苷对照液和
样品测定液在 200~600 nm范围内做全波长扫描,得
白藜芦苷对照液和样品液紫外吸收光谱图,见图 1
和图 2。可以看出,样品液与白藜芦苷对照品溶液在
321 nm处都有吸收峰,因此可以选择白藜芦苷为对
照溶液,测定波长为 321 nm。

2.2.5 标准曲线的制备 以白藜芦苷各对照液浓度
作为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制成标准曲线,计
算回归方程为:A=0.045 1+0.059 6 C,r=0.999 9;线
性范围为 2.04~16.32 μg/mL。
2.2.6 精密度实验 取同一份样品测定液,连
续测定吸光度 6 次。测定结果 A=0.609±0.001,
RSD=0.09%。
2.2.7 稳定性实验 取同一份样品测定液,分别在
0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h时测定吸光度。测
定结果 A=0.614±0.04,RSD=0.50%,说明样品在 3 h
内稳定性良好。
2.2.8 加样回收率实验 精密吸取 2.0 mL己知含量
的样品测定液 6份,分别加入浓度为 12.24 μg/mL的
白藜芦苷对照液 2.0 mL,混匀,测定吸光度,计算
回收率。结果见表 1。
2.2.9 总茋化合物的含量测定 在 321nm波长处测
定吸光度,计算总茋化合物含量。
2.3 样品提取液的固含物测定 [6]
精密量取样品提取液 20 mL,按 2005版《中国
药典》(一部)附录Ⅹ A规定,测定固含物重量,计
算固含物得率。
2.4 结果与分析
总茋化合物提取率:乙醇回流法 >乙醇渗漉法
>水煎煮法;固含物得率:乙醇回流法 >水煎煮法 >
乙醇渗漉法。从总芪化合物和固含物的提取得率,二
者都以乙醇回流法最优,故确定乙醇回流法为提取方
法。结果见表 2。
3 乙醇回流法提取工艺优选
3.1 正交设计和实验方案
根据总茋化合物的性质与有关文献报道,选取乙
醇用量、乙醇浓度、提取时间、和提取次数为 4个考
察因素,每个因素选取 3个水平,以总茋化合物的提
取率和固含物的得率为评价指标,选用 L9(34)正交
表进行实验。取样品 20.0 g,分别以因素水平表工艺
条件提取,按 “2.2”和 “2.3”项下方法进行总茋化合物
和固含物含量测定,分别计算总茋化合物的提取率和
固含物的得率。因素水平设计见表 3。
表1 总 化合物加样回收试验结果 (n=6)
Tab.1 Results of recovery test
样品量/μg
22.35
22.35
22.35
22.35
22.35
22.35
加入量/μg
24.48
24.48
24.48
24.48
24.48
24.48
测得量/μg
47.45
46.84
46.84
46.71
46.91
46.84
加样回收率/%
102.5
100.1
100.1
99.5
100.3
100.1
平均回收率//%
100.4
RSD/%
1.1
表2 三种不同提取方法总 化合物提取率和固含物得率实验结果(n=3)
Tab.2 Results of Stilbenes and solid content of Caulis Gnetum for different
extraction method
提取方法
水煎煮法
乙醇回流法
乙醇渗漉法
总茋化合物提取率(%)
1.29±0.35
2.87±0.14
2.01±0.17
固含物得率(%)
12.26±0.86
12.95±0.49
9.15±0.73
表3 L9(34)正交设计因素水平表
Tab.3 Factors and level
水平
1
2
3
用量(倍)A
6
8
10
浓度(%)B
60
80
95
时间(h)C
1
1.5
2
次数 D
1
2
3
因素
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3.2 结果分析
将测得的总茋化合物提取率和固含物得率结
果进行转化评分,把总茋化合物提取率 (y1)和固含
物得率 (y2)最高值定为 100%,其余按照公式 y1′
=y1/3.22×100,y2′=y2/16.77×100计算相应得分,再
按公式 y=0.8y1′+0.2y2′计算加权综合评分。再将综
合评分进行统计分析,结果见表 4。
用直观分析法比较 4个因素的极差,可得
RB>RD>RC>RA,即乙醇浓度对提取结果影响最大,
其次是提取次数、提取时间,而乙醇用量影响最小。
因实验无空白列作对照,所以采用常规方法 [7],将
离差平方和最小项来近似作为误差的估计,即以乙
醇用量作为误差参照组,对其他 3个因素水平进行
方差分析,结果见表 5。可以看出,因素 B(乙醇浓
度)和因素 D(提取次数)各水平间有显著性差异
(P<0.05),因素 C(提取时间)各水平间没有显著
性差异(P>0.05)。根据实验结果,因素 A选择最好
水平 3,因素 B选择最好水平 1,因素 C选择最好水
平 2,因素 D可以选择水平 3。但考虑到对节约原料
和能耗问题,最终确定总茋化合物提取最佳工艺为
A1B1C2D3,即 6倍量 60%乙醇,回流提取 3次,每次 1.5
h。

3.3 最佳工艺的验证实验
称取买麻藤粗粉 20.0 g,以 A1B1C2D3条件进行
提取,测定总茋化合物含量和固含物含量,计算总茋
化合物提取率和固含物得率。实验平行三次,三次
实验的总茋化合物提取率和固含物得率结果均在正
交实验的较高水平,而且结果稳定,利于放大生产。
结果见表 6。
4 讨论
本文以总茋类化合物的提取率和固含物得率为
指标对买麻藤提取方法进行选择,并采用 L9(34)正
交实验对乙醇回流法进行了工艺优选。结果表明最佳
提取工艺为 A1B1C2D3,即用 6倍量 60%的乙醇,回
流 3次,每次 1.5 h。考虑到乙醇浓度是影响总茋化
合物提取率和固含物得率的最主要因素,而最佳水平
又处于正交设计的最小值。为此,又以 40%乙醇进
行提取,其他因素按最优水平进行实验,结果总茋化
合物提取率为 3.02%,固含物得率为 15.1%,均不如
60%乙醇提取高,故乙醇浓度仍选择 60%。
买麻藤提取液中含有大量的茋类化合物及其低
聚物,多为反式结构且带有羟基,当反式茋类 AB环
均具有羟基取代时,紫外吸收光谱明显红移,光谱中
最强的吸收带在 λmax320nm附近,而其低聚茋的紫外
光谱最大吸收是依据化合物的聚合方式而确定,结构
中反式茋类为母核的紫外最大吸收峰也在 320 nm附
近 [8]。在选择对照品时,分别对买麻藤样品、白藜芦
醇、白藜芦苷进行了紫外全波长扫描,结果发现买
麻藤样品在 289、321 nm处有吸收峰,而白藜芦醇、
白藜芦苷吸收图谱基本相似,均在 307、321 nm处
吸收峰,说明 321 nm处吸收是买麻藤样品茋类化合
物的特征吸收,而白藜芦苷在 321 nm处为最大吸收
峰,故优先选择白藜芦苷作为对照品进行含量测定。
参考文献
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表4 总 化合物提取正交实验结果
Tab.4 Result of Stilbenes extract by orthogonal test
实验号
1
2
3
4
5
6
7
8
9



R
A
1
1
1
2
2
2
3
3
3
203.3
200.5
214.1
13.7
B
1
2
3
1
2
3
1
2
3
253.2
221.9
142.8
110.4
C
1
2
3
2
3
1
3
1
2
188.0
214.6
215.2
27.2
D
1
2
3
3
1
2
2
3
1
153.4
214.9
249.6
96.2
y1(%)
1.94
2.59
2.16
3.22
1.89
1.43
3.00
2.78
1.20
y1
60.2
80.4
67.1
100.0
58.7
44.4
93.2
86.3
37.3
y2(%)
9.89
12.24
8.95
16.77
8.99
6.09
15.64
13.58
4.92
y2
59.0
73.0
53.4
100.0
53.6
36.3
93.3
81.0
29.3
y
60.0
78.9
64.3
100.0
57.7
42.8
93.2
85.3
35.7
表5 总 化合物提取方差分析结果
Tab.5 Result of variance analysis for Stilbenes extract
方差来源
A
B
C
D

SS
34.7
2157.1
160.5
1584.2
3936.4
f
2
2
2
2
8
MS
17.4
1078.5
80.2
792.1
F
62.1
4.6
45.6
P
<0.05
>0.05
<0.05
注:F0.05(2,2)=19.00
表6 总 化合物提取验证实验结果
Tab.6 Result of Stilbenes extract by verify test
No.
1
2
3
X±SD
总茋化合物提取率(%)
3.35
3.22
3.45
3.34±0.12
固含物得率(%)
17.26
16.01
16.63
16.63±0.63
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运脾糖浆为医院制剂,由苍术、山楂、槟榔等
中药组成,具有健脾益肺、消食化积、行气化滞等
功效,处方中苍术为君药。苍术为菊科植物茅苍术
Atractylodes lancea(thumb.)DC.或北苍术 Atractylodes
chienesis(DC.)Koidz.的干燥根茎 [1]。刘国生等 [2]报
道苍术在对抗胃溃疡,抑制肠蠕动,抗炎作用方面水
溶液部分和挥发油部分作用相近,在利尿作用方面
挥发油部分作用略强。为了有效地提取苍术的挥发
油和水溶液成分,本研究按照正交试验表设计试验,
优选出运脾糖浆中苍术挥发油的最佳提取工艺。
正交试验优选运脾糖浆中苍术挥发油的提取工艺
赵玉兰 1,2,张桂芝 *,徐礼亭 1
(1. 徐州师范大学,江苏 徐州 221116 ;2. 江苏省徐州市中医院,江苏 徐州 221009)
摘要:目的 用正交试验法优选运脾糖浆中苍术挥发油的提取工艺。 方法 以挥发油的提取量 指标,
以粉碎度,加水倍 ,提取时间为因素进行正交试验。结果 苍术挥发油的最佳工艺条件为 :粉碎度为 10目,
加 8倍水量,提取时间为 3 h。结论 提取工艺简便易行。
关键词 : 运脾糖浆 ;苍术 ;挥发油 ;正交试验 ;提取工艺
中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1673-6427(2010)03-0048-02
Study on the Extraction Technology of the Volatile Oil of Rhizoma Atractylodis in
Yunpi Syrup
ZHAO Yu-lan1,2, ZHANG Gui-zhi1 ,XU Li-ting1
(1.School of Chemical and Chemical Engineering,Xuzhou Normal University , Xu zhou 221116, China;
2.Xuzhou Hospital of Traditional Chinese Medecine Jiangsu Province, Xuzhou 221009, China)
Abstract:Objective To optimize the extracting technology condition of the volatile oil of Rhizoma
Atractylodis in Yunpi syrup. Methods Volume of volatile oil as index,orthogonal test method was used for
studying the effect of three extracting factors (the crushing degree ,the amount of water and the extracting
time) and the three levels on the volatile oils yield of Rhizoma Atractylodis. Results The optimum condition
of the volatile oil were: crushing Rhizoma Atractylodis into 10 mesh, adding 8 times amount water for extracting
3 hours. Conclusion The process is simple and useful.
Key words: Yunpi syrup;Rhizoma Atractylodis; extracting technology; orthogonal test; volatile oil
1 材料与仪器
实验用苍术(购于徐州市铜山县同康药店,
经张桂芝主任中药师鉴定来源为菊科植物茅苍术
Atractylodes lancea (Thunb.) DC.的干燥根茎);乙醚
为分析纯。EL104电子天平(梅特勒 -托利多仪器上
海有限公司);TC-15套式恒温器(海宁市新华医疗
器械厂);挥发油提取器(上海建强玻璃仪器有限公
司)。
2 方法与结果
2.1 正交试验设计 参考文献 [3-4]及预实验结果,并
结合运脾糖浆的实际生产情况,选择粉碎度(A),
加水倍数(B),提取时间(C)作为考察因素,每
因素设计 3个水平,主要以挥发油提取量作为考察指
标设计正交试验,因素水平见表 1。
收稿日期:2009-09-28
作者简介:赵玉兰(1963 -),女,主管中药师。
*通讯作者:张桂芝,主任中药师(教授)。Te l : 0 5 1 6-83 8 9 8 8 0 0、
13775988800,E-mail:zgz712@163.com