全 文 ：西北农业学报 ２０１３，２２（９）：１５８－１６２
Ａｃｔａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｂｏｒｅａｌｉ－ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ Ｓｉｎｉｃａ ｄｏｉ：１０．７６０６／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－１３８９．２０１３．０９．０２６
大花三色堇花粉生活力测定及贮藏方法
收稿日期：２０１２－１２－１２ 修回日期：２０１３－０１－２５
基金项目：河南省创新人才工程资助项目（２００５－１２６－４９）。
第一作者：穆金艳，女，硕士研究生，研究方向为花卉遗传育种。Ｅ－ｍａｉｌ：ｍｕｊｉｎｙａｎ１３５＠１２６．ｃｏｍ
通信作者：刘会超，男，教授，研究方向为观赏植物生物技术。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｕｈｃ９１８＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
穆金艳，杜晓华，贾文庆，刘会超，黄伶俐
（河南科技学院 园艺园林学院，河南新乡 ４５３００３）
摘 要 为解决大花三色堇杂交育种过程中的时空障碍，提高育种效率，以纯黄大花三色堇品种ＥＹＯ花粉
为试材，采用离体萌发法、碘－碘化钾染色法、醋酸洋红染色法和ＴＴＣ（氯化三苯基四氮唑）染色法对新鲜花粉
生活力进行测定，并研究不同贮藏条件对花粉萌发的影响。结果表明：培养基中添加蔗糖和硼酸对花粉的萌
发有促进作用，且二者之间具有互作效应，当培养基中添加２００ｇ／Ｌ蔗糖 ＋１５０ｍｇ／Ｌ硼酸，萌发率较高，达
３５．０４％。与离体萌发法相比较，碘－碘化钾染色法、醋酸洋红染色法测定的花粉活力值偏高，分别为５０．８０％、
７１．４１％，ＴＴＣ染色法不能使大花三色堇花粉着色。花粉在不同贮藏条件下，生活力变化存在显著差异，常温
贮藏３ｄ后花粉活力降为零，而４℃、－８０℃不干燥贮藏２６ｄ后花粉仍有活力，萌发率分别为６．２６％和
１０．３１％。
关键词 大花三色堇；花粉萌发；生活力；贮藏
中图分类号 Ｓ６８１．９ 文献标志码 Ａ 文章编号 １００４－１３８９（２０１３）０９－０１５８－０５
Ｐａｎｓｙ Ｐｏｌｅｎ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｓｔｏｒａｇｅ Ｍｅｔｈｏｄ
ＭＵ Ｊｉｎｙａｎ，ＤＵ Ｘｉａｏｈｕａ，ＪＩＡ Ｗｅｎｑｉｎｇ，ＬＩＵ Ｈｕｉｃｈａｏ ａｎｄ ＨＵＡＮＧ Ｌｉｎｇｌｉ
（Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｌａｎｄｓｃａｐｅ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ，Ｈｅｎａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ Ｈｅｎａｎ ４５３００３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｓｏｌｖｅ ｔｈｅ ｓｐａｔｉｏ－ｔｅｍｐｏｒａｌ ｏｂｓｔａｃｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｃｒｏｓｓ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ，ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ
ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｐａｎｓｙ，ｔｈｅ ｆｒｅｓｈ ｐｏｌｅｎ ａｂｉｌｉｔｙ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ，Ｉ２－ＫＩ ｓｔａｉｎｉｎｇ，ｃａｒｍｉｎｅ
ａｃｅｔａｔｅ ｄｙｅｉｎｇ ａｎｄ ＴＴＣ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｓ，ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔｏｒａｇｅ ｏｎ ｔｈｅ ｐｏｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｔｏｏ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉａ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｃｒｏｓｅ ａｎｄ
ｂｏｒｉｃ ｈａｄ ｇｏｏｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｐｏｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｐｏｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｒｅａｃｈｅｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈ－
ｅｓｔ ａｆｔｅｒ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｍｅｄｉａ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ２００ｇ／Ｌ ｓｕｃｒｏｓｅ ａｎｄ １５０ｍｇ／Ｌ Ｂｏｒｉｃ ａｃｉｄ，ｔｈｅ ｇｅｒ－
ｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｅｎ ｒｅａｃｈｅｄ ３５．０４％．Ｔｈｅ ｒａｔｅｓ ｏｆ ｐｏｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ５０．８０％ａｎｄ ７１．４１％ｄｅｔｅｃ－
ｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｂｙ Ｉ２－ＫＩ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｅｔｏ ｃａｒｍｉｎｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｅｓｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｖａｌ－
ｕｅｓ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｒａｔｅｓ ｏｆ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｔｈｅ ｆｒｅｓｈ ｐｏｌｅｎ ｏｆ ｐａｎｓｙ ｗａｓ ｎｏｔ ｃｏｌｏｒｅｄ ｂｙ
ＴＴＣ ｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔｏｒａｇｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｈａｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｅｆｆｅｃｔｅｄ ｏｎ ｐｏｌｅｎ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ．Ｔｈｅ ｇｅｒｍｉｎａ－
ｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｐｏｌｅｎ ｒｅａｃｈｅｄ ｚｅｒｏ ａｔ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｆｏｒ ３ｄａｙｓ．Ｔｈｅ ｆｒｅｓｈ ｐｏｌｅｎ ｓｔｉｌ ｈａｄ ｖｉａｂｉｌｉ－
ｔｙ ｗｈｅｎ ｉｔ ｗａｓ ｓｔｏｒｅｄ ａｔ ４℃ａｎｄ－８０℃ｆｏｒ ２６ｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ ｗｅｒｅ ６．２６％ａｎｄ １０．３１％
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｐａｎｓｙ；Ｐｏｌｅｎ；Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ；Ｓｔｏｒａｇｅ
花粉生活力测定和贮存条件的研究，对于解
决杂交育种过程中的时空障碍，提高植物育种效
率具有较高的应用价值［１］。大花三色堇（Ｖｉｏｌａ
ｗｉｔｔｒｏｃｋｉａｎａ Ｇａｍｓ．）别名人面花、猫脸花、蝴蝶
花、鬼脸花，为堇菜科堇菜属植物，其花色丰富艳
丽，花期长且耐寒，在园林绿化上有广泛用途，有
“花坛皇后”的美称［２］。目前，有关大花三色堇花
粉生活力测定方法及贮藏特性的研究鲜见报道，
本试验采用花粉离体萌发法、花粉染色法测定大
花三色堇花粉的生活力，研究适合大花三色堇花
粉萌发的最佳培养基，筛选出适宜大花三色堇花
粉生活力测定的方法，并对其贮藏特性进行研究，
以期为大花三色堇新品种培育及品种改良提供理
论依据。
１ 材料与方法
１．１ 花粉的采集
试验材料为纯黄大花三色堇品种ＥＹＯ，选择
盛花期晴天９：００－１０：００取含苞欲放的花朵，带
回实验室后去除花瓣取花药于培养皿内，置于
（２５±１）℃的培养箱散粉１２ｈ后，收集花粉，备用。
１．２ 花粉生活力的测定
１．２．１ 花粉萌发率 采用二因素（蔗糖、硼酸）完
全随机试验，蔗糖质量浓度分别为０、１００、１５０、
２００、２５０、３００ｇ／Ｌ，硼酸质量浓度分别为０、１００、
１５０、２００、２５０ｍｇ／Ｌ。培养基均添加琼脂８ｇ／Ｌ，用
０．２ｍｏｌ／Ｌ的 ＮａＯＨ、１ｍｏｌ／Ｌ的 ＨＣｌ调节ｐＨ
至５．８。
取少许刚熬制好的培养基于凹玻片的凹处，
待培养基冷却后，用干净的毛笔蘸取少量花粉均
匀散于培养基上，将凹玻片置于铺有两层湿滤纸
的培养皿中，在（２５±１）℃的培养箱中培养８ｈ
后，统计出萌发的花粉粒数和未萌发的花粉粒数。
计算萌发率，每处理重复３次，每重复统计花粉数
不少于５０粒。以花粉管长度大于花粉粒直径为
萌发标准。
萌发率＝观察视野中萌发花粉粒数／观察视
野中总花粉粒数×１００％。
１．２．２ 花粉生活力 采用碘－碘化钾法［１］、ＴＴＣ
（氯化三苯基四氮唑）染色法［１］、醋酸洋红染色
法［３］３种染色法测定大花三色堇花粉生活力。每
种染色法均观察３张片子，每片取３个视野，计算
有生活力花粉百分率的平均值。
１．３ 花粉的贮藏
将采集的花粉，分别装入离心管中，放在以下
６种环境条件下贮存：室温（Ａ）、室温干燥（Ｂ）、
４℃（Ｃ）、４℃干燥（Ｄ）、－８０℃（Ｅ）、－８０℃干燥
（Ｆ）。干燥方法为：将花粉置于硅胶干燥器中干
燥１０ｈ，用５０目标准检验筛过筛，并分装于２ｍＬ
离心管中，加入２粒硅胶粒干燥剂［４］。贮藏１、３、
６、１０、１５、２６ｄ后，取出花粉置于“１．２．１”所得最
佳培养基上培养，８ｈ后观察统计花粉萌发率。
花粉耐贮藏力是以待测花粉活力保持时间即待测
样品活力降为零的时间长度来表示［４］。
１．４ 数据分析
使用ＤＰＳ ７．０５版数据处理软件进行方差分
析和 多 重 比 较，不 同 处 理 之 间 的 差 异 采 用
Ｄｕｎｃａｎ’ｓ新复极差法进行比较。
２ 结果与分析
２．１ 培养基成分对大花三色堇花粉萌发的影响
由表１看出，在不含有蔗糖和硼酸的培养基
中，花粉萌发率极低，８ｈ时花粉萌发率仅为
１．４１％。当培养基中加入蔗糖后，花粉萌发率显
著提高，在蔗糖质量浓度为２５０ｇ／Ｌ时达到最大
值（１３．５１％）；但当蔗糖质量浓度为３００ｇ／Ｌ时，
花粉萌发率反而下降，只有１２．５２％。在仅含硼
酸条件下，花粉萌发率随硼酸质量浓度的升高呈
现先升后降的趋势，当硼酸质量浓度为２００ｍｇ／Ｌ
时，花粉的萌发率最高，达到５．８７％。硼酸质量
表１ 不同质量浓度蔗糖、硼酸下花粉萌发率
Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ｐｏｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｃｒｏｓｅ ａｎｄ ｂｏｒｉｃ ％
蔗糖质量浓度／（ｇ／Ｌ）
Ｍａｓｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｏｆ ｓｕｃｒｏｓｅ
硼酸质量浓度／（ｍｇ／Ｌ）Ｍａｓｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｏｒｉｃ ａｃｉｄ
０ １００ １５０ ２００ ２５０
０ １．４１±０．０３Ｅｆ ２．９３±０．０４Ｄｆ ４．９４±０．０２Ｂｆ ５．８７±０．０３Ａｅ ４．２２±０．０４Ｃｆ
１００ ５．８４±０．０３Ｅｅ ６．１３±０．０２Ｄｅ ８．１２±０．０２Ｃｅ １０．１３±０．０３Ａｄ ９．５４±０．０２Ｂｅ
１５０ ８．５２±０．０２Ｅｄ １２．３５±０．０４Ｄｄ １８．１６±０．０１Ｂｄ ２２．１５±０．０１Ａｂ １３．４７±０．０２Ｃｃ
２００ １０．１２±０．０７Ｅｃ ２６．３７±０．０２Ｃａ ３５．０４±０．０２Ａａ ３０．３３±０．０３Ｂａ １９．２７±０．０２Ｄａ
２５０ １３．５１±０．０２Ｅａ ２０．０６±０．０３Ｃｂ ３１．０４±０．０１Ａｂ ３０．２８±０．０１Ｂａ １５．５４±０．０５Ｄｂ
３００ １２．５２±０．０１Ｄｂ １５．２２±０．０７Ｃｃ １９．２５±０．０２Ｂｃ ２０．０６±０．０３Ａｃ １０．５１±０．０１Ｅｄ
注：大写字母为不同蔗糖质量浓度在０．０１水平上的差异显著性比较，小写字母为不同硼酸质量浓度在０．０１水平上的差异显著性比较。
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃａｐｉｔａｌ ｌｅｔｔｅｒｓ ｄｅｎｏｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｔ ０．０１ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍａｓｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｃｒｏｓｅ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｏｗｅｒｃａｓｅ
ｌｅｔｔｅｒｓ ｄｅｎｏｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｔ ０．０１ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍａｓｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｏｒｉｃ ａｃｉｄ．
·９５１·９期 穆金艳等：大花三色堇花粉生活力测定及贮藏方法
浓度超过２００ｍｇ／Ｌ时，花粉的萌发率随之下降，
当培养基中的硼酸质量浓度增加到２５０ｍｇ／Ｌ
时，花粉的萌发率下降为４．２２％。表２显示，不
同质量浓度的蔗糖、硼酸对花粉萌发影响差异极
显著，蔗糖和硼酸对花粉萌发具有互作效应。当
培养基中同时添加不同质量浓度的蔗糖和硼酸时得
出最佳的培养基为：２００ｇ／Ｌ蔗糖＋１５０ｍｇ／Ｌ硼酸，
花粉萌发率最高，萌发率达３５．０４％（图１）。
２．２ ３种染色方法测定花粉生活力
用碘－碘化钾染色有活力的花粉会呈深蓝
色［５］（图２－ａ），本试验研究结果显示，用碘－碘化钾
对大花三色堇花粉进行染色，染成深蓝色的花粉
有５０．８０％；用醋酸洋红染色有生活力的花粉会
图１ 大花三色堇离体培养下花粉萌发（×１００）
Ｆｉｇ．１ Ｐｈｏｔｏｓ ｏｆ ｐｏｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ（×１００）
呈深红色［５］（图２－ｂ），本试验研究结果显示，被醋
酸洋红染成深红色的花粉粒达７１．４１％。用ＴＴＣ
染色能使有生活力的花粉呈红色［６］，本试验研究
结果显示，用ＴＴＣ染色后，所观察的视野中大花
三色堇的花粉粒均未被染色（图２－ｃ）。
２．３ 不同贮藏条件下花粉生活力的变化
表３表明，在同一贮藏条件下，随着贮藏时间
的增加花粉萌发率呈逐渐下降趋势。表４结果显
示，贮藏时间、贮藏温度及花粉干燥与否对花粉生
活力的影响差异显著。贮藏温度影响花粉萌发率
下降速度，常温贮藏花粉萌发率下降速度最快，干
燥与不干燥处理间差异不显著，贮藏３ｄ后花粉
萌发率降为零，贮藏时间最短。与室温贮藏相比，
４℃、－８０℃不干燥贮藏能够明显延长花粉贮藏
时间，贮藏２６ｄ后花粉仍有萌发，－８０℃不干燥
贮藏比４℃贮藏花粉萌发率高。４℃适用于大花
三色堇短期（＜１０ｄ）贮藏，且干燥贮藏比不干燥
贮藏处理效果好，贮藏１０ｄ后花粉萌发率分别为
３４．９３％、２８．５６％。－８０℃条件下干燥处理与不
干燥处理贮藏１ｄ后花粉萌发率没有差异，但贮
藏３ｄ后花粉萌发率差异很大，分别为８．４０％、
３３．１８％，干燥贮藏６ｄ后花粉不再萌发，不干燥
贮藏２６ｄ后花粉萌发率为１０．３１％。６种贮藏方
法比较，－８０℃不干燥为大花三色堇花粉长期贮
藏最适宜方法，耐贮藏力可超过２６ｄ。
表２ 培养基成分对花粉萌发率影响的方差分析
Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏｎ ｐｏｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ
变异来源
Ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ
平方和
Ｓｑｕａｒｅｓ
自由度
Ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｆｒｅｅｄｏｍ
均 方
Ｍｅａｎ ｓｑｕａｒｅ
Ｆ 值
Ｆｖａｌｕｅ
蔗糖Ｓｕｃｒｏｓｅ ３ ５２０．３９ ５ ７０４．０８ ３４．５８＊＊
硼酸Ｂｏｒｉｃ ａｃｉｄ １ ０６４．１６ ４ ２６６．０４ １３．０７＊＊
蔗糖×硼酸Ｓｕｃｒｏｓｅ×Ｂｏｒｉｃ ａｃｉｄ ４０７．２６ ２０ ２０．３６ １８ ４７９．７２＊＊
误 差 Ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ０．０７ ６０ ０．００
总变异 Ｔｏｔａｌ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ４ ９９１．８８ ８９
注：＊＊表示差异极显著（Ｐ＜０．０１）。
Ｎｏｔｅ：＊＊ｄｅｎｏｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０１）．
ａ．碘－碘化钾染色（×４０） Ｐｈｏｔｏｓ ｏｆ ｐｏｌｅｎ ｄｙｅｄ ｂｙ Ｉ２－ＫＩ（×４０）；ｂ．醋酸洋红染色 （×１００） Ｃａｒｍｉｎｅ ａｃｅｔａｔｅ（×１００）；ｃ．ＴＴＣ染
色 （×１００） ＴＴＣ（×１００）
图２ ３种染色方法下的大花三色堇花粉
Ｆｉｇ．２ Ｔｈｅ ｐａｒｌｙ ｐｏｌｅｎ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｓ
·０６１· 西 北 农 业 学 报 ２２卷
表３ 不同贮藏环境条件下花粉萌发率
Ｔａｂｌｅ ３ Ｔｈｅ ｐｏｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔｏｒａｇｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ％
贮藏时间／ｄ
Ｓｔｏｒａｇｅ
ｔｉｍｅ
常温 Ｎｏｒｍａｌ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
不干燥 Ｕｎｄｒｉｅｄ 干燥 Ｄｒｉｅｄ
４℃
不干燥 Ｕｎｄｒｉｅｄ 干燥 Ｄｒｉｅｄ
－８０℃
不干燥 Ｕｎｄｒｉｅｄ 干燥 Ｄｒｉｅｄ
平 均
Ｍｅａｎ
１ ９．１４±１．４１ｃ １１．１１±１．５ｃ ２５．３１±５．２３ａ １９．２９±２．５６ｂ ２４．７８±３．６７ａ ２４．６±０．４１ａ １９．０４Ａ
３ ２．１３±１．２８ｄ ６．７８±１．２８ｃｄ １９．６５±３．０９ｂ １７．５３±３．８０ｂ ３３．１８±５．０３ａ ８．４０±０．７１ｃ １４．６１Ｂ
６ ０．００±０．００ｄ ０．００±０．００ｄ ２３．６７±０．３３ｂ ２１．６１±０．０９ｃ ２８．６５±０．２１ａ ０．００±０．００ｄ １２．３２Ｃ
１０ ０．００±０．００ｄ ０．００±０．００ｄ ２８．５６±０．８２ｂ ３４．９３±３．１９ａ ２２．０４±０．１６ｃ ０．００±０．００ｄ １４．２６Ｂ
１５ ０．００±０．００ｄ ０．００±０．００ｄ ５．２７±０．１４ｃ １２．４６±０．３８ｂ １７．４４±１．３４ａ ０．００±０．００ｄ ５．８６Ｄ
２６ ０．００±０．００ｃ ０．００±０．００ｃ ６．０５±０．８７ｂ ６．４７±０．４７ｂ １０．３１±０．９８ａ ０．００±０．００ｃ ３．８１Ｅ
注：同行不同小写字母表示在０．０５水平上存在差异，同列不同大写字母表示在０．０１水平上存在差异。
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｏｗｅｒｃａｓｅ ｌｅｔｔｅｒｓ ｄｅｎｏｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｔ ０．０５ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｒｏｗ ａｎｄ ｃａｐｉｔａｌ ｌｅｔｔｅｒｓ ｄｅｎｏｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒ－
ｅｎｔ ａｔ ０．０１ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ．
表４ 不同贮藏条件对花粉生活力影响的方差分析
Ｔａｂｌｅ ４ Ｖａｒｉａｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｄｉｓｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ ｓｔｏｒｅ ｏｎ ｐｏｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ
变异来源
Ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ
平方和
Ｓｑｕａｒｅｓ
自由度
Ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｆｒｅｅｄｏｍ
均 方
Ｍｅａｎ ｓｑｕａｒｅ
Ｆ 值
Ｆｖａｌｕｅ
贮藏时间Ｓｔｏｒａｇｅ ｔｉｍｅ ３ ９４７．８６ ５．００ ７８９．５７ ４３４．５２＊＊
温度 Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ７ １４５．８８ ２．００ ３ ５７２．９４ １ ９６６．２９＊＊
水分 Ｍｏｉｓｔｕｒｅ ９８２．６８ １．００ ９８２．６８ ５４０．７９＊＊
贮藏时间×温度Ｓｔｏｒａｇｅ ｔｉｍｅ×Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ １ ６６４．８９ １０．００ １６６．４９ ９１．６２＊＊
贮藏时间×水分Ｓｔｏｒａｇｅ ｔｉｍｅ×Ｍｏｉｓｔｕｒｅ ２７９．０７ ５．００ ５５．８１ ３０．７２＊＊
温度×水分 Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ×Ｍｏｉｓｔｕｒｅ ２ ７７０．８７ ２．００ １ ３８５．４３ ７６２．４４＊＊
贮藏时间×温度×水分Ｓｔｏｒａｇｅ ｔｉｍｅ×Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ×Ｍｏｉｓｔｕｒｅ ８６９．９６ １０．００ ８７．００ ４７．８８＊＊
误差 Ｄｅｖｉａｔｉｏｎ １３０．８３ ７２．００ １．８２
总和 Ｔｏｔａｌ ｖａｒｉａｔｏｎ １７ ７９２．０４ １０７．００
注：＊＊表示差异极显著（Ｐ＜０．０１）。
Ｎｏｔｅ：＊＊ｄｅｎｏｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０１）．
３ 讨 论
３．１ 蔗糖质量浓度是影响花粉萌发的重要因素
之一。蔗糖不仅可调节花粉的渗透势，使其不会
过分吸水胀破，还可用作呼吸底物和合成淀粉的
原料，促进花粉管的生长［７－８］。供试大花三色堇花
粉萌发率随蔗糖质量浓度的增加而升高，当质量
浓度为２５０ｇ／Ｌ时，萌发率最高，大于２５０ｇ／Ｌ
时，萌发率随蔗糖质量浓度的增大而降低，这可能
是因为蔗糖在培养基中起着维持花粉与培养液之
间渗透平衡的作用，质量浓度过低时，花粉壁就会
破裂，内容物散出；质量浓度过高，会造成花粉的
质壁分离，抑制花粉萌发生长。硼能够促进糖的
吸收与代谢，与糖结合能极大地提高花粉的萌发
率，增加氧气的含量和吸收，参与果胶物质合成，
对于花粉的萌发和花粉管的伸长有一定的促进作
用，因此硼是花粉离体萌发培养基的主要成分之
一［８－９］。综上所述，适宜的蔗糖、硼酸组合是萌发
率高低的关键。本试验表明，最适合大花三色堇
花粉萌发的培养基为：２００ｇ／Ｌ蔗糖＋１５０ｍｇ／Ｌ
硼酸，萌发率最高，为３５．０４％。而李春燕等［１０］对
大花三色堇离体萌发培养基的研究结果显示：蔗
糖质量浓度为３００ｇ／Ｌ时花粉萌发率最高，添加
硼酸对花粉萌发有促进作用，但不同硼酸质量浓
度下花粉萌发率差异不大，花粉萌发率最高为
６．５８％。造成这种差异的原因可能是由于基因型
的差异引起的。
３．２ 利用染色法进行花粉生活力测定具有快速
简便的特点，但由于受花粉自身特性（如花粉壁的
厚薄，花粉外壁的组成物质，花粉内各种酶活性的
强弱等）的影响，不同的染色方法对花粉生活力的
测定结果差异较大［７］。碘－碘化钾染色法是检测
花粉生活力常用的方法，其原理是新鲜的花粉有
淀粉积累，遇碘呈蓝色反应［５］。本试验发现，碘－
·１６１·９期 穆金艳等：大花三色堇花粉生活力测定及贮藏方法
碘化钾染色法测定大花三色堇花粉生活力结果较
离体萌发法明显偏高，这可能是因为大花三色堇
花粉内含物中淀粉含量较多。ＴＴＣ染色法能使
ＴＴＣ渗入细胞，可被呼吸代谢中的还原酶所还
原，并由无色的氧化型变成红色的还原型，由此来
判断花粉的生活力［６］，但本试验的结果表明，
ＴＴＣ无法使大花三色堇花粉着色，这可能是由于
大花三色堇花粉外壁太厚，ＴＴＣ溶液进入花粉内
受到限制的原故。醋酸洋红法的染色主要靠花粉
中的脱氢辅酶而染色［５］，而当花粉失去活力时，该
酶的活性可能仍然存在，因此该方法的测定结果
偏高。综合３种染色方法，都不适用于测定大花
三色堇花粉生活力。
３．３ 花粉在低温和比较干燥的环境下（相对湿度
３０％～４０％），代谢过程减弱，呼吸作用降低，能够
较长时间保持花粉的生活力［１１－１２］。本研究结果表
明，４℃、－８０℃不干燥贮藏比室温贮藏能明显
延长花粉贮藏时间，室温贮藏３ｄ后花粉不再萌
发，４℃、－８０℃不干燥贮藏２６ｄ后仍有花粉萌
发。从节约成本角度考虑，４℃适用于大花三色
堇短期（＜１０ｄ）贮藏，且干燥贮藏比不干燥贮藏
处理效果好。－８０℃贮藏条件下不干燥处理比
干燥处理花粉生活力保持时间长，这与周楠楠
等［１３］对红桤木花粉进行－２０℃保存的研究结果
相似，这可能是大花三色堇花粉在超低温贮藏时
不耐湿度剧烈变化的原因。本试验发现，大花三
色堇花粉经４℃、－８０℃不干燥保存后出现萌发
率先升后降的“冷刺激”现象。贾文庆等［４］对红花
矮牡丹花粉以及张玉进等［１４］在对魔芋花粉的超
低温保存研究中都发现这种“冷刺激”现象，但该
现象出现的机理目前尚不明确，有待进一步研究。
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·２６１· 西 北 农 业 学 报 ２２卷