全 文 ：基金项目:首都中医药研究专项课题(编号:16ZY07)
作者简介:巴寅颖(1986. 02—)，女，博士，讲师，研究方向:中药化学，Tel:(010)83911633，E-mail:byy3333@ sina. com
通信作者:吴霞(1967. 10—)，女，博士，教授，研究方向:中药化学，Tel:(010)83911671，E-mail:wuxia6710@ 163. com
HPLC法测定芪红水煎剂中花旗松素和槲皮素的含量
巴寅颖1 于 萍1 杜宇琼1 车念聪1 靳 华2 吴 霞1
(1 首都医科大学中医药学院，中医络病研究北京市重点实验室，北京，100069;2 首都医科大学附属佑安医院，北京，100069)
摘要 目的:建立高效液相色谱法测定芪红水煎剂中 2 种主要有效成分花旗松素和槲皮素的含量。方法:采用 Waters
Sunfire C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)色谱柱，以甲醇-0. 5%磷酸溶液为流动相梯度洗脱，流速 1 mL /min，检测波长 290 nm
(花旗松素)、365 nm(槲皮素)。结果:花旗松素和槲皮素线性范围分别为 0. 075 5 ～ 0. 120 8 μg(r = 0. 999 4)和 0. 030 8 ～
0. 092 4 μg(r = 0. 999 9);平均加样回收率(n = 6)分别为 102. 74%(ＲSD = 1. 71%)和 102. 45%(ＲSD = 1. 52%)。结论:本
法简便、准确，重复性好，可用于芪红水煎剂中花旗松素和槲皮素的含量测定。亦可作为芪红水煎液质量控制方法之一。
关键词 芪红水煎剂;水红花子;黄芪;花旗松素;槲皮素
Determination of Taxifolin and Quercetin in Qihong Decoction:HPLC Method
Ba Yinying1，Yu Ping1，Du Yuqiong1，Che Niancong1，Jin Hua2，Wu Xia1
(1 Beijing Key Laboratory of TCM Collateral Disease Theory Ｒesearch，School of Traditional Chinese Medicine，Capital Medical
University，Beijing 100069，China;2 Beijing You An Hospital Affiliated to Capital Medical University，Beijing 100069，China)
Abstract Objective:To establish an HPLC method for the determination of taxifolin and quercetin in Qihong decoction． Meth-
ods:The determination was carried out with Waters Sunfire C18 column (250 mm ×4. 6 mm，5 μm)，using methanol-0. 5% phos-
phoric acid as mobile phase with gradient elution at a flow rate of 1. 0 mL /min and it was detected that the wave length was 290 nm
(taxifolin)and 365 nm (quercetin)． Ｒesults:The linear ranges of taxifolin and quercetin were 0. 0755 ～ 0. 1208 μg(r = 0. 9994)
and 0. 0308 ～ 0. 0924 μg(r = 0. 9999) ;the average recovery rate (n = 6)was 102. 74% (ＲSD = 1. 71%)and 102. 45% (ＲSD
= 1. 52%)respectively． Conclusion:This method was simple，steady and reliable，which could be used to determine the contents
of taxifolin and quercetin and to control the quality of Qihong decoction．
Key Words Qihong decoction;Fructus polygoni orientalis;Ｒadix astagali;Taxifolin;Quercetin
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标识码:A doi:10． 3969 / j． issn． 1673 － 7202． 2016． 11． 057
芪红水煎剂是“全国名老中医药专家钱英教授
传承工作室”和中医络病研究北京市重点实验室基
于肝纤维化络病“虚”“瘀”并存的基本病机及结合
国家级名老中医药专家钱英教授多年的临床经验总
结，选用水红花子:黄芪 = 1∶ 4 相配伍制成的用于治
疗肝纤维化的中药方剂［1-2］。此配伍与中医学对肝
纤维化气虚血瘀、正虚邪恋的病机认识相一致。文
献调研和前期的药理研究表明，水红花子、黄芪及芪
红水煎剂对免疫肝纤维化大鼠的肝组织纤维化程度
有明显改善作用［3-8］。为保证药物质量可控，芪红水
煎剂亟待建立稳定、可靠的质量控制方法。水红花
子为蓼科植物红蓼(Polygonum orientale L. )的成熟
果实。味辛、咸，性微寒。归肝、脾、胃经。具有散血
消癓，消积止痛的功效。在临床上可用于急慢性肝
病中的各期的治疗。花旗松素和槲皮素是水红花子
的主要有效成分［9-14］，花旗松素也是 2015 版药典中
水红花子含量测定的指标性成分［15］。因此，研究芪
红水煎剂中花旗松素和槲皮素的含量测定方法具有
重要意义。本实验采用 HPLC 法建立芪红水煎剂中
花旗松素和槲皮素的含量测定方法，为系统建立芪
红水煎液的质量控制方法提供实验依据。
1 材料与方法
1. 1 材料 Waters 2695 高效液相色谱仪(waters科
技有限公司)，2998PDA检测器，Empower 工作站，自
动进样;Sartorious AG ME2355 型 1 /100000 电子分
析天平(北京赛多利斯仪器有限公司);KQ-500DE
型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司);HH-S
型电热恒温水浴锅(北京市长风仪器仪表公司)。
水红花子药材购自北京同仁堂有限公司(批号:
091117，产地:辽宁本溪);黄芪购自北京同仁堂有限
公司(批号:100918，产地:甘肃渭原)。槲皮素(批
号:100081-201408，纯度:99. 1%)和花旗松素(批
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号:111816-201102，纯度:98. 9%)对照品均购自中
国食品药品检定研究院。甲醇、乙腈(Fisher 公司，
色谱纯);娃哈哈纯净水;磷酸(北京试剂厂，分析
纯)。其他试剂均为分析纯。
1. 2 试验方法
1. 2. 1 溶液制备 对照品溶液制备:精密称取花旗
松素 7. 55 mg、槲皮素 7. 70 mg，分别置于 25 mL 容
量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀，作为对照品储备
液。花旗松素对照品储备液浓度 0. 302 mg /mL，槲
皮素对照品储备液浓度 0. 308 mg /mL。供试品溶液
制备:称取水红花子 10. 0 g，黄芪 40. 0 g，置于圆底
烧瓶中，加 8 倍量蒸馏水，回流提取 1. 5 h，过滤，滤
渣继续加 6 倍量蒸馏水，回流提取 1 h，过滤。合并
滤液，浓缩干燥成干粉，备用。精密称取芪红水煎剂
样品粉末约 400 mg，置于三角瓶中，精密量取甲醇
10 mL，称重，超声 30 min，放至室温后再称重，补足
至原重量，0. 45 μm 微孔滤膜过滤，即得供试品溶
液。
1. 2. 2 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱:Wa-
ters Sunfire C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm);检测波长
290 nm(花旗松素)、365 nm(槲皮素);流速:1. 0
mL /min;柱温:25 ℃;进样量:20 μL。流动相:甲醇
(A)-0. 1%磷酸(B)，梯度洗脱:30% ～ 39% 甲醇
(0—10 min)，39% ～ 47%甲醇(10—20 min)，47%
甲醇(20—30 min)，47% ～ 58%甲醇(30—40 min)。
依上述色谱条件，分别精密吸取花旗松素和槲皮素
对照品溶液各 10 μL、供试品溶液 20 μL 分别进样，
进行系统适应性试验。
1. 2. 3 线性关系考察 精密吸取一定量的花旗松
素和槲皮素对照品储备液，置于 10 mL容量瓶中，甲
醇定容摇匀，配制成 6 份不同浓度的混合对照品溶
液。6 份混合对照品溶液中花旗松素对照品浓度为
0. 007 55、0. 015 1、0. 030 2、0. 060 4、0. 090 6、
0. 120 8 mg /mL，槲皮素对照品浓度为 0. 003 08、
0. 007 7、0. 015 4、0. 030 8、0. 061 6、0. 092 4 mg /mL。
分别取以上对照品溶液，用自动进样器进样 10 μL，
按“2. 1”项下色谱条件测定色谱峰峰面积。以对照
品进样量为横坐标，以色谱峰峰面积为纵坐标绘制
标准曲线，并分别进行线性回归。
1. 2. 4 精密度考察 精密吸取同一混合对照品溶
液 10 μL，注入高效液相色谱仪，按“2. 1”项下色谱
条件测定色谱峰峰面积，连续测定 6 次，计算花旗松
素和槲皮素色谱峰面积 ＲSD。
1. 2. 5 稳定性试验 精密吸取同一芪红水煎剂样品
溶液，分别于样品溶液制备后 0、2、4、6、8、12、24 h 样，
每次进样20 μL，按“2. 1”项下色谱条件测定色谱峰峰
面积。计算花旗松素和槲皮素色谱峰面积 ＲSD。
1. 2. 6 重复性试验 精密称取同一批芪红水煎剂
样品粉末 6 份，每份约 400 mg。按“2. 1. 2”项下方
法制成供试品溶液，按“2. 1”项下色谱条件，分别进
样 20 μL，记录花旗松素和槲皮素峰面积。计算芪
红水煎剂样品中花旗松素和槲皮素的平均含量和
ＲSD。
图 1 芪红水煎剂样品与对照品高效液相色谱图
注:A花旗松素对照品(290 nm);B 槲皮素对照品(365
nm);C芪红水煎剂样品溶液(290 nm) ;D芪红水煎剂样品溶
液(365 nm)。1 花旗松素;2 槲皮素。
1. 2. 7 加样回收率试验 精密称取同一批芪红水煎
剂样品粉末(花旗松素和槲皮素的平均含量为 0. 548
mg /g和 0. 438 mg /g)6 份，每份约 200 mg，置于三角
瓶中，分别加入花旗松素对照品溶液0. 35 mL(浓度为
0. 030 2 mg /mL)、槲皮素对照品溶液 0. 3 mL(浓度为
0. 308 mg /mL)，精密量取甲醇 5 mL，称重，超声 30
min，放至室温后再称重，补足至原重量，0. 45 μm 微
·3242·世界中医药 2016 年 11 月第 11 卷第 11 期
孔滤膜过滤，制成供试品溶液，按“2. 1”下色谱条件，
进样 20 μL，记录花旗松素和槲皮素峰面积。计算
花旗松素和槲皮素的平均回收率和 ＲSD。
2 结果
2. 1 系统适应性试验 依上述色谱条件，花旗松素
的洗脱时间为 15. 8 min，槲皮素的洗脱时间为 39. 5
min，在对照品溶液和供试品溶液色谱图相应位置
上，有相同保留时间且有相同紫外吸收的色谱峰，且
与其他成分分离良好。结果见图 1。
2. 2 线性关系考察 花旗松素回归方程为:Y = 34
801 528. 75 X + 15 909. 96，r = 0. 999 4(n = 6);槲皮
素回归方程为:Y =59 529 654. 69 X + 21387. 78，r =
0. 999 9(n = 6)。结果表明，花旗松素、槲皮素分别
在 0. 075 5 ～ 0. 120 8 μg和 0. 030 8 ～ 0. 092 4 μg 质
量范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。
2. 3 精密度考察 花旗松素和槲皮素色谱峰面积
ＲSD分别为 0. 68%、1. 07%。表明该方法精密度良
好，符合定量分析要求。
2. 4 稳定性试验 花旗松素和槲皮素色谱峰面积
ＲSD分别为 1. 71%和 1. 36%。表明供试品溶液在
24 h内稳定。
2. 5 重复性试验 计算得芪红水煎剂样品中花旗
松素和槲皮素的平均含量分别为 0. 548 mg /g 和
0. 438 mg /g，ＲSD分别为 1. 98%和 2. 21%。表明该
方法重复性良好。
2. 6 加样回收率试验 计算得花旗松素和槲皮素
的平均回收率(n = 6)分别为 102. 74%和 102. 45%，
ＲSD分别为 1. 71%和 1. 52%。具体结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果(n = 6)
成分 称样量(mg) 样品中对照品含量(mg) 对照品加入量(mg) 检出量(mg) 回收率(%) 均值(%) ＲSD(%)
花旗松素 200. 70 0. 1100 0. 1057 0. 2194 103. 54 102. 74 1. 71
201. 02 0. 1102 0. 1057 0. 2196 103. 56
199. 22 0. 1092 0. 1057 0. 2181 103. 10
200. 55 0. 1099 0. 1057 0. 2205 104. 61
200. 99 0. 1101 0. 1057 0. 2178 101. 89
200. 28 0. 1098 0. 1057 0. 2152 99. 76
槲皮素 200. 70 0. 0879 0. 0924 0. 1835 103. 41 102. 45 1. 52
201. 02 0. 0880 0. 0924 0. 1838 103. 67
199. 22 0. 0873 0. 0924 0. 1795 99. 86
200. 55 0. 0878 0. 0924 0. 1839 104. 00
200. 99 0. 0880 0. 0924 0. 1822 101. 90
200. 28 0. 0877 0. 0924 0. 1818 101. 86
2. 7 样品含量测定 按芪红水煎剂处方比例(水
红花子:黄芪 = 1∶ 4)将药材混合，共 50 g，8 倍量水
回流提取 1. 5 h，过滤，滤渣继续用 6 倍量水回流 1
h，过滤，合并滤液，浓缩干燥成干粉，同时制备 3 批。
精密称取每批芪红水煎剂样品粉末约 400 mg，分别
置于三角瓶中，精密量取甲醇 10 mL，称重，超声 30
min，放至室温后再称重，补足至原重量，0. 45 μm微
孔滤膜过滤，进样 20 μL，按“2. 1”项下色谱条件测
定色谱峰峰面积。计算花旗松素和槲皮素含量。结
果见表 2。
表 2 芪红水煎剂中花旗松素和槲皮素含量(n = 3)
样品号 花旗松素含量(mg /g) 槲皮素含量(mg /g)
1 0. 548 0. 438
2 0. 554 0. 444
3 0. 539 0. 434
3 讨论
本试验首次采用高效液相色谱法测定芪红水煎
剂中花旗松素和槲皮素的含量，所建立的方法简单、
准确、可靠，可作为芪红水煎剂质量控制方法之一。
为保持与临床药理实验的一致性，本试验所采
用的提取方法与临床药理实验样品一致。流动相选
择时，曾考察了乙腈-0. 5%甲酸水溶液、乙腈-0. 5%
磷酸水溶液、甲醇-0. 5%甲酸水溶液、甲醇-0. 5%磷
酸水溶液等，结果用甲醇-0. 5%磷酸水溶液进行梯
度洗脱分离度较好。
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(下接第 2429 页)
·4242· WOＲLD CHINESE MEDICINE November 2016，Vol． 11，No． 11
现出很好的单系性，而肾唇虾脊兰的 matK 序列只
有网上一条，在此并不能否定 matK 序列对虾脊兰
属植物的鉴定效率，所以利用 ITS2 + matK基因组序
列能够对虾脊兰属植物进行快速鉴别。而 psbA-
trnH序列 NJ 树的表明，虾脊兰属大部分植物不能
被区分，其鉴定准确率太低，不适于虾脊兰属植物的
鉴定。
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(2016 － 03 － 31 收稿 责任编辑:洪志强)
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