全 文 ：第 29 卷　第 2 期
2007 年 2 月
武　汉　理　工　大　学　学　报
JOURNAL OF WUHAN UNIVERSITY OF TECHNOLOGY
Vol.29　No.2
　Feb.2007
红蓼果实有效成分的指纹图谱研究
楼一层 ,宋 　青 ,赵　锋 ,龚文婷 ,吴 　帆
(武汉理工大学化学工程学院 ,武汉 430070)
摘　要:　对红蓼果实水红花子的黄酮类成分进行研究 , 采用 HPLC 色谱法对分布于我国 9 个地区的水红花子的有效部
位槲皮素进行指纹图谱研究 , 色谱条件:DiamonsilTMC18 柱(250 mm ×4.6 mm , 5 μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液
梯度洗脱 , 流速 1.0 mL/ min , 检测波长为 310 nm。结果表明 9 个不同产地药材的指纹图谱具有较好的相似度 ,因此可为
水红花子的资源品质评价提供一定的科学依据。
关键词:　水红花子;　槲皮素;　指纹图谱
中图分类号:　R 284.1 文献标志码:　A 文章编号:1671-4431(2007)02-0037-03
Research on Fingerprint of Active Component in Fructus
Polygoni Orientalis
LOU Yi-ceng , SONG Qing , ZHAO Feng , GONG Wen-ting , WU Fan
(School of Chemistry and Eng ineering , Wuhan University of Technolog y , Wuhan 430070 , China)
Abstracts:　To study on flav onoids of traditional Chinese liquid medicine-F ructus Polygoni Orientalis.HPLC system was
used to obtain the fingerprint spectrum of Quercetin o f F ructus Polyg oni Orientalis from 9 places of China.The chromato graphy
condition w as DiamonsilTMC18 column(250 mm×4.6 mm , 5 μm), mobile phase Methanol-0.2%H3PO 4 , and flow speed 1.0
mL/ min , detection waveleng th 310 nm.The fingerprint spectrum of 9 places o f medicinal substances has high similarity.So
the method can be used as a reference for the identification and evaluation of F ructus Polygoni O rientalis.
Key words:　fructus poly goni orientalis;　quercetin;　fingerprint spectrum
收稿日期:2006-09-22.
基金项目:国家自然科学基金(30570184)和湖北省自然科学基金(2004ABA216).
作者简介:楼一层(1960-),男 ,教授.E-mail:louyiceng@163.com
红蓼为蓼科植物荭草(Polygonum orientale L)的全草 ,性味凉辛有毒 ,具有祛风除湿 ,清热解毒 ,活血 、截
疟之功效 。主治风湿痹痛 ,痢疾 ,腹泻 ,吐泻转筋 ,水肿 ,脚气 ,痈疮疔疖 ,蛇虫咬伤 ,小儿疳积疝气 ,跌打损伤 ,
疟疾[ 1] 。红蓼的成熟果实 ,又名水红花子 ,始载于 1977年版《中国药典》 ,是我国传统中药之一[ 2] ,主要用于
症瘕痞块 、瘿瘤肿痛 、食积不消 、胃脘胀痛等症的治疗[ 3] 。目前研究表明 ,水红花子主要有效部位为黄酮类
化合物 ,槲皮素是其中的主要成分 ,具有抗炎 、抗抑郁及抗自由基等药理作用[ 4 ,5] 。文章采用 HPLC 色谱法
对其有效部位进行了指纹图谱研究 ,建立其指纹图谱 ,从而为水红花子药材的资源品质评价提供一定的科学
依据 。
1　实　验
1.1　仪器与原材料
1)仪器与试药　Dionex P680型高效液相色谱仪(德国戴安 , chromelon工作站 , Tcc-100柱温箱 , UVD-
170U紫外检测器);Mettler Toledo AT20型分析天平(十万分之一)。槲皮素对照品(中国药品生物制品检定
所);水红花子购于武汉市医药公司;药材经湖北中医学院张秀桥副教授鉴定为蓼科植物红蓼的成熟果实。
所用试剂均为分析纯 。
2)药材产地　水红花子药材共 9个样品 ,来源见表 1 。
1.2　方　法
1)色谱条件　色谱柱 DiamonsilTMC18柱(250 mm×4.6 mm , 5μm),流动相A 为甲醇 ,B为 0.2%磷酸 ,
按表 2进行梯度洗脱 ,分析时间为 55 min ,检测波长为 310 nm ,进样量为 10 μL。检测了波长在 200 nm 、
310 nm 、400 nm 所得的 HPLC图谱 ,310 nm 波长所得的图谱各色谱峰效果较好 ,见图 1。
表 1　样品来源
样品号 产地 样品号 产地
1 江苏 6 河南郑州
2 江苏苏州 7 河南新乡
3 湖北 8 安徽
4 山东 9 安徽亳州
5 山东潍坊
表 2　流动相梯度
时间/
min
流速/
(mL·min-1)
流动相 A/
%
流动相 B/
%
0 1 30 70
10 1 40 60
40 1 50 50
55 1 80 20
　　2)供试品溶液的制备　称取水红花子药材粉末 3.0 g ,加石油醚(60—90 ℃)50 mL索氏提取至无色 ,挥
干溶剂 ,再加乙酸乙酯 50 mL 回流提取 2次 ,每次 1 h ,过滤 ,滤液挥干 ,残渣用甲醇定容至 5 mL ,摇匀 ,用
0.45 μm微孔滤膜滤过 ,取续滤液作供试品溶液 。各共有峰的图谱见图 2。
3)对照品溶液的制备　精密称取槲皮素对照品适量 ,置 2 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,制成
含槲皮素 0.5 mg/mL 的对照品溶液。
2　方法学考察
1)精密度　取 4号样品 ,按供试品溶液的制备方法制备 ,按上述色谱条件测定 6次 ,记录相对保留时间
和相对峰面积的比值 ,RSD分别为 0.2%—2.8%,0.7%—3.5%,符合指纹图谱的要求。2)重现性　精密称
取3号样品 6份 ,每份 3.0 g ,按上述供试品溶液的制备方法操作 。结果表明 ,各色谱峰的相对保留时间和相
对峰面积比值基本一致 , RSD分别为 0.2%—3.2%,0.5%—4.1%,符合指纹图谱要求。3)稳定性　取 4
号样品 ,按供试品溶液的制备方法制备 ,分别在 0 h 、2 h 、4 h 、8 h 、10 h 和 15 h 检测指纹图谱。结果表明 ,各
色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值基本一致 , RSD分别为 0.08%—1.4%,0.9%—3.1%。
3　指纹图谱及技术参数
3.1　主要色谱峰的鉴别
在相同色谱条件下 ,测定槲皮素对照品 ,并与样品指纹图谱中相应图谱峰进行比较 ,发现样品指纹图谱
中 10号峰的保留时间及紫外吸收色谱图 ,与槲皮素信号峰吻合 ,故样品指纹图谱中 10 号峰鉴定为槲皮素。
见图 3。
3.2　不同产地药材指纹图谱比较
取不同产地样品粉末 ,按供试品溶液的制备方法制备。分别以图谱(图 2)中 8峰为参照峰 ,计算各样品
指纹图谱中各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积。从 9个样品指纹图谱分析结果可见 , 3号样品中 10号
峰(槲皮素)信号弱外 ,其它样品均有 11个共有峰 ,且相对保留时间一致 ,但不同样品相对峰面积比值相差较
大 ,见表 3和表 4 。样品 1—9号图谱叠加效果见图 4。
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表 3　不同产地药材的指纹图谱(相对保留时间)
共有峰
峰号
样品编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9
平均值
1 0.049 0.051 0.049 0.049 0.049 0.051 0.049 0.049 0.054 0.050
2 0.181 0.195 0.193 0.195 0.194 0.196 0.195 0.195 0.197 0.193
3 0.503 0.503 0.503 0.503 0.503 0.504 0.434 0.503 0.506 0.496
4 0.549 0.550 0.559 0.550 0.550 0.552 0.549 0.549 0.553 0.551
5 0.679 0.677 0.676 0.678 0.675 0.676 0.675 0.676 0.677 0.677
6 0.879 0.876 0.874 0.878 0.872 0.874 0.873 0.872 0.874 0.875
7 0.921 0.921 0.921 0.921 0.920 0.921 0.921 0.921 0.922 0.921
8 1 1 1 1 1 1 1 1 1
9 1.315 1.315 1.319 1.319 1.317 1.317 1.318 1.316 1.316 1.317
10 1.546 1.545 1.546 1.546 1.545 1.545 1.550 1.546 1.544 1.549
11 1.750 1.749 1.746 1.747 1.747 1.747 1.747 1.748 1.746 1.747
表 4　不同产地药材的指纹图谱(相对峰面积)
共有峰
峰号
样品编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9
平均值
1 0.046 0.045 0.027 0.056 0.069 0.026 0.031 0.038 0.197 0.034
2 0.208 0.104 0.057 0.095 0.111 0.093 0.056 0.140 0.075 0.104
3 0.418 0.624 0.561 0.475 0.998 0.889 0.964 0.422 0.736 0.676
4 0.453 0.399 0.224 0.367 0.093 0.085 0.085 0.186 0.097 0.214
5 0.208 0.379 0.192 0.200 0.306 0.349 0.182 0.133 0.261 0.246
6 0.197 0.229 0.080 0.060 0.128 0.061 0.083 0.063 0.065 0.107
7 0.739 0.642 0.508 0.743 0.384 0.423 0.312 0.609 0.465 0.536
8 1 1 1 1 1 1 1 1 1
9 0.106 0.081 0.063 0.068 0.120 0.078 0.117 0.086 0.078 0.086
10 0.231 0.204 0.012 0.815 0.389 0.356 0.174 0.409 0.128 0.302
11 0.599 0.472 0.161 0.545 0.569 0.143 0.096 0.375 0.197 0.351
4　结　论
a.分别选用甲醇-水 、乙腈-水 、甲醇-0.2%磷酸水溶液体系进行梯度和等度洗脱 ,结果选择甲醇-0.2%磷
酸水溶液梯度洗脱 ,得到的色谱峰形较好 ,且较稳定。并记录该色谱条件下 120 min 色谱图 ,60 min 后无色
谱峰出现 ,故色谱图纪录时间为 55 min。为确保下次分析时色谱峰的峰形及分离度 ,每次运行梯度后 ,柱平
衡至少需要 10 min。
b.比较了波长 200 nm ,310 nm ,400 nm 所得的HPLC图谱 ,结果在 310 nm 波长检测时 ,其 HPLC 图谱
中可见各色谱峰分离度较好 ,且基线不漂移 ,没有出现倒峰 ,故确定波长 310 nm 为检测波长 。
c.研究所用 9个不同产地药材 ,其指纹图谱具有较好的相似度 ,相对保留时间和相对峰面积的确定 ,为
鉴别不同产地水红花子药材提供了一定依据 。 (下转第 57页)
39第 29 卷　第 2 期　　　　　　　　　　楼一层 , 等:红蓼果实有效成分的指纹图谱研究　　　　　　　　　　　
近 ,而理论计算没有考虑集中力引起的局部变形 ,所以存在较大偏差 。
由图 7可见 ,弯曲挠度的实验结果与计算结果也十分吻合 ,夹层梁的弯曲挠度与载荷基本上是线性关
系 ,随着载荷增加挠度变大 ,载荷与挠度的比值反映了夹层梁的弯曲刚度。
4　结　论
a.提出的玻璃钢/橡胶复合材料夹层梁弯曲内应力和弯曲挠度的理论计算结果与实验结果十分接近 ,
最大相对误差小于 10%,证明此种夹层梁的弯曲应力和挠度的计算分析方法是合理的;
b.夹层梁弯曲变形不符合平断面假设 ,夹芯中存在层间剪切变形 ,起到连接上下表面的作用 ,夹层梁的
弯曲变形挠度主要由表层的弯曲变形决定。
参考文献
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(上接第 39页)
参考文献
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