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紫背天葵药材质量标准研究



全 文 :紫背天葵药材质量标准研究
谭雄斯,王景,唐铁鑫
(肇庆医学高等专科学校 医技药学系,广东 肇庆 526020)
摘要:目的 建立紫背天葵药材的质量控制标准。方法 用聚酰胺薄层色谱法鉴别矢车菊素-3-O-葡萄糖
苷;按照《中国药典》方法测定多批药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分和水溶性浸出物,确定以上检查
项目的限度;用高效液相色谱法进行药材中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量测定。结果 聚酰胺薄层色谱
斑点清晰、专属性强、重现性好;药材水分、总灰分、酸不溶性灰分分别不得过 14%、15%、2. 5%,沸水煮
浸法水溶性浸出物量不得少于 13%;紫背天葵药材含矢车菊素-3-O-葡萄糖苷不得少于 0. 5%。结论 建
立的质量标准适用于评价紫背天葵药材的质量。
关键词:紫背天葵;质量标准;薄层色谱法;高效液相色谱法
中图分类号:R917 文献标志码:A doi:10. 3969 / j. issn. 1006-8783. 2012. 04. 015
文章编号:1006-8783(2012)04-0415-04
Study on the quality standard of Begonia fimbristipulata Hance
TAN Xiong-si,WANG Jing ,TANG Tie-xin
(Department of Medical Technology and Pharmacy,Zhaoqing Medical College,Zhaoqing 526020,China)
Abstract:Objective To establish the quality control standard of Begonia fimbristipulata Hance. Methods
Cyanidin-3-O-glucoside was identified by polyamide TLC. The water content,total ash,acid insoluble ash and
water-soluble extract of multiple batches were determined according to the Chinese Pharmacopoeia,and their
limits were set. And HPLC was performed to determine the content of cyanidin-3-O-glucoside. Results Clear
spots were observed in the polyamide TLC with high specificity and good repeatability. The water content,total
ash,acid insoluble ash and water-soluble extract for B. fimbristipulata should be less than 14%,15%,2. 5%
and 13% individually. The content of cyanidin-3-O-glucoside in B. fimbristipulata should not be less than
0. 5% . Conclusion The quality control standard established in this study was suitable for evaluate the quality
of B. fimbristipulata.
Key words:Begonia fimbristipulata Hance;quality standard;TLC;HPLC
收稿日期:2012-05-23
基金项目:肇庆市科技创新项目(2009E182)
作者简介:谭雄斯(1979 -) ,男,讲师,药师,硕士,主要从事药学教育与研究,电话:0758-2857607,Email:txs2392908@126. com。
网络出版时间:2012-07-06 14:42 网络出版地址:http:/ /www. cnki. net /kcms /detail /44. 1413. R. 20120706. 1442. 002. html
紫背天葵 Begonia fimbristipulata Hance[B.
cyclophylla Hook. f.]是秋海棠科秋海棠属的多年生
无茎草本植物,全草入药,为中国的特有物种,因其
叶背紫色,故名紫背天葵,又名红天葵、红叶、红水
葵、散血子等,瑶族医药中称为“木姑垂使”[1]。紫
背天葵作为草药收载于《中华本草》,味甘、性凉,具
有清热凉血、止咳化痰、戒毒消肿之功能,主治外感
高热、中暑、肺热咳嗽、伤风声嘶、痈肿疮毒、跌打肿
痛等症[2]。紫背天葵属于药食同源植物,既可入
药,又是 1 种很好的营养保健品[3],在广东地区,它
作为夏日清凉饮料中的佳品,久已名闻中外[4]。其
主要化学成分包括矢车菊素氯化物 (cyanidin
chloride)、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-
glucoside)、矢车菊素-3-O-芸香糖苷(cyanidin-3-O-
rutinoside)等花色苷[5]。由于目前尚无紫背天葵药
材的质量标准,很难保证其资源的质量,故本文对紫
背天葵药材进行研究,拟定质量标准草案。
广东药学院学报
Journal of Guangdong Pharmaceutical University Aug. 2012,28(4)
1 仪器与试药
HN1006 型超声清洗机(中国华南超声设备厂,
频率 40 kHZ、功率 220 W) ;BP211D分析天平(德国
赛多利斯公司) ;DHS20-1 多功能红外水分测定仪
(上海精密科学仪器有限公司) ;KO-C 型玻璃仪器
气流烘干器(上海精宏实验设备有限公司) ;SX2-4-
10 型箱形电阻炉(长沙市远东电炉厂) ;聚酰胺薄膜
(浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂) ;高效液相色
谱仪(LC-10AT 泵,SPD-10Avp 可变波长紫外检测
器)、Shim-pack VP-ODS色谱柱(150 mm × 4. 6 mm,
5 μm)。
矢车菊素 3-O-葡萄糖苷对照品(上海永恒生物
科技有限公司,质量分数≥98%,规格:10 mg /支,批
号:FB-15001)、甲醇、乙腈(色谱纯,天津四友化学
品有限公司)。其他试剂均为分析纯。
紫背天葵原药材分别于 2009 ~ 2010 年采自福
建青云山、广东英德石门台、广东肇庆鼎湖山,每个
地方采集 2 批,共 6 批,以《中华本草》和《中国植物
志》为依据,经本校唐铁鑫博士鉴定为紫背天葵
Begonia fimbristipula Hance的全草。详见表 1。
表 1 紫背天葵样品采集信息表
Table 1 The sample collecting information of B. fimbristipulata
编号 采集日期 采集地点
1 2009-08-21 福建青云山
2 2009-08-21 福建青云山
3 2009-07-19 广东英德石门台
4 2009-08-19 广东英德石门台
5 2010-08-25 广东肇庆鼎湖山
6 2010-08-22 广东肇庆鼎湖山
2 方法与结果
2. 1 性状特征 紫背天葵干燥全草卷缩成不规则
团块,无地上茎,基生叶 1 片,完整叶呈卵形或阔卵
形,长 2. 5 ~ 7 cm,宽 2 ~ 6 cm,先端渐尖,基部心形,
近对称,边缘有不规则重锯齿和短柔毛,紫红色至暗
紫色,两边均被疏或密的粗伏毛,脉上被毛较密,掌
状脉 7 ~ 9 条,小脉纤细,明显。叶柄长 2 ~ 6 cm,被
粗毛,薄纸质。气特异,味酸,用手搓之刺鼻,水浸液
呈玫瑰红色[6 - 8]。见图 1。
2. 2 显微鉴别 取紫背天葵干燥全草粉末,用水
封片,显微镜下可见红色薄壁组织、叶脉、腺毛、草
酸粒晶。
2. 3 薄层色谱鉴别 取矢车菊素 3-O-葡萄糖苷
对照品适量,置 100 mL 容量瓶中,加甲醇适量溶
解,定容,得到每 1 mL含 72 μg的对照品溶液。分
别取 3 批紫背天葵药材粉末各 0. 5 g,分别置 3 个
具塞锥形瓶中,分别加甲醇 50 mL,超声处理 30
min,滤过,滤液为供试品溶液。按照薄层色谱法
(《中国药典》2010 年版一部附录Ⅵ B)试验规定,
分别吸取上述溶液点于聚酰胺薄膜上,点样量 5
μL,用乙醇-乙酸-水(体积比 3 ∶ 1 ∶ 6)为展开剂,展
开,取出晾干,记录。日光下检视,供试品色谱中,
在与对照品色谱相应的位置上,显相同的红色斑
点,见图 2。
图 1 紫背天葵药材干燥全草
Figure 1 The dry grass herbs of B. fimbristipula
1 2 3 4 5
1 ~ 3.表 1 中编号分别为 1、3、5 的紫背天葵供试品;
4.矢车菊素 3-O-葡萄糖苷对照品;5.甲醇阴性对照。
图 2 紫背天葵药材薄层鉴别色谱图
Figure 2 The TLC chromatogram of B. fimbristipula
2. 4 检查和浸出物测定
2. 4. 1 检查 按照《中国药典》2010 年版一部附录
Ⅸ H和附录Ⅸ K分别测定 6 批紫背天葵药材的水
分、总灰分、酸不溶性灰分。根据测定结果(见表
2) ,暂定紫背天葵药材水分不得过 14%,总灰分不
得过 15%,酸不溶性灰分不得过 2. 5%。
2. 4. 2 浸出物测定 按照《中国药典》2010 年版一
部附录Ⅹ A方法测定 6 批紫背天葵药材的浸出物。
结果表明醇浸泡法效果较差,沸水煮浸泡法浸出物
量多、效果好、重复性较好,故采用沸水煮浸泡法提
取浸出物。
614 广东药学院学报 第 28 卷
根据实验结果(见表 2) ,以浸出物最低值下限
的 20%为限,暂定紫背天葵药材水溶性浸出物量不
得少于 13%,脱酸后经 60%(体积分数,下同)乙醇
洗脱后不得少于 4%。
表 2 水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物测定结果
Table 2 The determination results of water content,total ash,acid insoluble ash and water-soluble extract w /%
编号 水分 总灰分
酸不溶性
灰分
沸水浸物 冷水浸物
热醇(体积分数
75%乙醇)浸物
冷醇(体积分数
75%乙醇)浸物
脱酸后 60%
乙醇洗浸物
1 11. 1 12. 6 1. 52 21. 6 12. 5 13. 3 6. 71 5. 39
2 11. 3 11. 7 1. 26 18. 5 13. 1 12. 6 6. 92 6. 12
3 10. 8 11. 6 1. 37 16. 2 11. 1 10. 9 6. 25 5. 52
4 11. 0 10. 5 1. 46 18. 1 12. 5 11. 2 6. 93 6. 22
5 11. 2 11. 9 1. 88 22. 2 12. 8 10. 9 7. 37 6. 53
6 11. 6 13. 2 2. 05 23. 4 13. 5 11. 5 7. 21 6. 25
2. 5 含量测定
2. 5. 1 色谱条件与专属性试验
参考文献[9 - 10],经试验确定色谱条件:色谱
柱为 Shim-pack VP-ODS 柱(150 mm × 4. 6 mm,5
μm) ;流动相为乙腈-0. 1% H3PO4(体积比 12 ∶ 88) ;
流速为 0. 5 mL·min -1;检测波长为 530 nm;进样量
为 5 μL。分别精密吸取对照品及供试品溶液依上
法测定,记录色谱图。甲醇阴性对照无干扰,理论塔
板数按矢车菊素-3-O-葡萄糖苷峰计,应不低于
2 000。见图 3。
7.
73
2
U/
m
V
0 1 3 5 7 9 11 13 15
26
18
14
6
0
7.
76
5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18
30
20
10
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
20
12
8
4
0
-2
t/min
U/
m
V
U/
m
V
A
B
C
图 3 对照品(A)、供试品(B)及阴性对照(C)溶液的 HPLC
色谱图
Figure 3 The HPLC chromatogram of reference substance
(A) ,sample(B)and negative(C)
2. 5. 2 溶液的制备
2. 5. 2. 1 对照品溶液的制备 取矢车菊素-3-O-葡
萄糖苷对照品适量,精密称定,置 100 mL量瓶中,加
甲醇溶解,定容,得每 1 mL 含对照品 72 μg 的对照
品储备液。分别精密吸取对照品储备液 1、3、4、6、
8、10 mL置 10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,得到
质量浓度分别为 7. 2、21. 6、28. 8、43. 2、57. 6、72 μg
·mL -1的系列对照品溶液。
2. 5. 2. 2 供试品溶液的制备 取本品 0. 25 g,精密
称定,置具塞锥形瓶中,精密加甲醇 50 mL,称定质
量,超声处理 30 min。放冷至室温,再称定质量,用
甲醇补足减失的质量。取上述提取液,用 0. 45 μm
微孔滤膜滤过,滤液即为供试品溶液。
2. 5. 3 线性关系的考察 分别精密吸取“2. 5. 2. 1”
项下系列质量浓度的对照品溶液 5 μL,依法测定矢
车菊素-3-O-葡萄糖苷峰面积。以峰面积(Y)为纵坐
标,进样量(X)为横坐标进行线性回归,得回归方
程:Y = 1. 6533 × 103X + 1. 7824 × 105(r = 0. 999 7,
n = 6) ,矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在 36 ~ 360 ng 范围
内与峰面积线性关系良好。
2. 5. 4 精密度试验
精密吸取 6 号供试品溶液 5 μL,连续进样 6
次,依法测定矢车菊素-3-O-葡萄糖苷峰面积积分
值。结果峰面积 RSD为 1. 13%,表明仪器精密度良
好。
2. 5. 5 稳定性试验
取 6 号供试品溶液,分别在 0、2、4、6、8 h 进样,
依法测定。结果矢车菊素-3-O-葡萄糖苷峰面积
RSD值为 1. 36%,表明供试品溶液在 8 h内稳定。
2. 5. 6 重复性试验
714第 4 期 谭雄斯,等.紫背天葵药材质量标准研究
分别精密称取同一批紫背天葵样品,共 6 份,按
“2. 5. 2. 2”项下方法制备供试品溶液,依法进样测
定。结果各样品中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质量分
数的 RSD值为 1. 47%(n = 6) ,表明本方法重复性
良好。
2. 5. 7 加样回收率试验
取已知质量分数(8. 029 mg·g -1)的 6 号紫背
天葵药材 6 份,每份约 0. 125 g,精密称定。分别精
密加入矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对照品储备液 14
mL,于减压干燥器中挥去溶剂,按“2. 5. 2. 2”项下方
法制备供试品溶液。分别精密吸取 5 μL进样,依法
测定,计算回收率。结果见表 3。
表 3 矢车菊素-3-O-葡萄糖苷回收率试验结果
Table 3 The recovery results of cyanidin-3-O-glucoside(n = 6)
序号 样品量 m /g 样品中的量 m /mg 加入量 m /mg 测得量 m /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /%
1 0. 124 6 1. 000 1. 008 2. 003 98. 7
2 0. 124 8 1. 002 1. 008 2. 051 103. 5
3 0. 125 2 1. 005 1. 008 2. 035 101. 9 100. 7 2. 26
4 0. 124 1 0. 996 1. 008 2. 038 102. 2
5 0. 125 4 1. 007 1. 008 2. 022 100. 6
6 0. 125 6 1. 008 1. 008 1. 991 97. 5
2. 5. 8 样品测定
分别取 3 批紫背天葵,每批平行操作 3 份,按
“2. 5. 2. 2”项下方法制备供试品溶液,依法测定矢
车菊素-3-O-葡萄糖苷的质量分数。结果 3 批样品
中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的质量分数分别为
8. 029、6. 235、7. 479 mg·g -1,RSD 分别为 1. 8%、
1. 3%、1. 1%。根据测定结果拟定紫背天葵药材含
矢车菊素 3-O-葡萄糖苷不得低于 0. 5%。
3 讨论
有关紫背天葵化学成分研究表明[11 - 13],紫背天
葵全草以矢车菊素氯化物、矢车菊素-3-O-葡萄糖
苷、矢车菊-3-O-芸香糖苷等花色苷为主要化学成
分[11 - 12],其中又以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量
最高,且它的活性与紫背天葵的功效最相近,故选用
矢车菊-3-O-芸香糖苷作为指标性成分进行定性鉴
别和含量测定。
本品主要活性成分为矢车菊素苷,为极性较大
的花青素类黄酮化合物,因此适宜采用聚酰胺薄膜
进行薄层鉴别。黄酮苷类成分的聚酰胺薄层展开剂
较多采用乙醇、乙酸和水,因此选用这 3 种溶剂进行
试验,结果发现乙醇-乙酸-水(体积比 3 ∶ 1 ∶ 6)效果
最好。
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( 责任编辑: 刘晓涵)
814 广东药学院学报 第 28 卷