全 文 ：应 用 生 态 学 报 年 ! 月 第 卷 第 期
∀# ∃% &∋ & () ∗ + % ,− ) . ,/ /− ∃& 0 &∀ 12−) 3 4 , . 56 7 , 18 2 9 :; 一 ; <
尊花臂尾轮虫休眠卵萌发的研究 ‘
陈菊芳 1暨南大学水生生物研究所 , 广州 = <: >! 2
周 洁 哗中农业大学水产学院 , 武汉 ? > << ;。2
黄祥飞 1中国科学院水生生物研究所 , 武汉 ? >< ; ! 2
【摘要】 报道了粤花臂尾轮虫休眠卵的低温贮存时间、萌发温度 、光照 、孵化液等因子对
其萌发的影响 7 休眠卵萌发率随低温贮存时间的延长而提高 , 以贮存 >< 一 =< ≅ 作用最显
著 7 在 < 一 >< ℃温度范围内7 萌发率随温度的升高而增加 , 超过 >< ℃时 , 萌发率则有所下
降 7 光对休眠卵的萌发是一非必需条件 7 把休眠卵从不新鲜的孵化液转移到新鲜的孵化液
中能刺激其萌发 7
关镇词 粤花竹尾轮虫 休眠卵 萌发
# Α Β5 ΧΔΕ Φ Γ Η Ι ϑ Κ越眼ΛΜ ΚΑ 伙价。ΗΛ Μ 渭ΒΔΕ Φ 5创笋 7 ∀ Χ 5Ε (Λ ΝΑ 呀 1∃Ε ΜΒΔΒΛ Β5 ΓΝ 8尔才代必初之越口 , (Δ ΟΕΑ Ε 协 ΔΠ ΔΒΘ , 3 祝Α馆动)∗ = < :> ! 2, Ρ6Γ Λ ΣΔ5 1月血Α ΤΧ Γ Ε Φ ,『如8ΒΛ ΗΑ 8 ∗Ε ΔΠ ΔΒΘ , 肠乞入在 ,Υ >< <; < 2, # Λ ΑΕ Φ ς ΔΑ吧Ν5 Δ1 ∃Ε , ΒΔΒ二Β5 ΓΝ 厂如才Η Γ6 勿8昭2 , , ‘口≅ 亡阴ΔΑ ∋ ΔΕ ΔΚΑ , Ω Λ Χ应 Ε Υ >< <; ! 2 7
一以ΔΕ 7 ( 7 , /川 7 王泛。 7 , , 12 9 : ; 一 ; < 7Ξ ΧΔΜ /Α Ψ5 Η /Η Κ Μ5 Ε ΒΜ ΒΧ5 5 Ν 5 5Β ΓΝ ΜΓϑ 5 ΝΑ 5 ΒΓ Η Μ ΑΜ ΜΒΓ Η5≅ ΒΔϑ 5 Α Β 8ΓΖ Β5ϑ Ψ5Η Α ΒΛΗ 5 , Χ ΑΒ5 Χ Δ雌 Β5ϑ Ο伴Η ΑΒΛΗ 5 , Δ88Λϑ ΔΕ Α ΒΔΓ Ε Α Ε ≅ ΧΑ Β5 ΧΔ Ε Φ ϑ Κ≅ ΔΛϑ ΓΕ ΒΧ5 Χ Α Β5 ΧΔΕ Φ ΓΝ ΙΗΑ ΚΧ勿Ε ΛΜ ΚΑ 沙价。邝9 Η5Μ ΒΔΕ Φ5Φ Φ Μ 7 Ξ Χ5 ΧΑ Β5Χ Δ吧 Η ΑΒ 5 = ΔΕΚ Η5ΑΜ 5≅ Ζ ΔΒΧ ΔΕ 5Η 5Α ΜΔΕ Φ ΜΒΓΗ 5≅ ΒΔϑ 5 ΑΒ 8Γ Ζ Β5 ϑ Ψ 5Η ΑΛΒ Η5 1=℃ 2, Ζ ΔΒΧΒΧ5 Χ ΔΦ Χ5 ΜΒ Η ΑΒ5 ΔΕ >< 一 = < ≅ Α” 7 ΔΕ 5 Η5 ΑΜ Κ ≅ 州 ΒΧ ΔΕ 5Η5 Α ΜΔΕ Φ Β5 ϑ Ψ 5 ΗΑ Λ ΒΗ5 Α Β ΒΧ 5 ΗΑ Ε Φ 5 ΓΝ < 一
><℃ , Α Ε≅ ≅ 5Κ Η5 朋5≅ Α Β Α切 [ 5 ><℃ 7 ∃88Λ ϑ ΔΕ Α ΒΔΓΕ = ΕΓ Β Α Ε 555ΜΑ 叮 ΝΑ 5 ΒΓΗ ΝΓΗ Χ Α Β5Χ ΔΕΦ 7 ,8 Β5ΗΒΗ Α Ε Μ Ν5 Η 5≅ ΝΗΓ ϑ Γ8 ≅ ΒΓ ΝΗ 5Μ Χ ϑ 5≅ ΔΛ ϑ 7 ΒΧ5 Η5 ΜΒΔΕ Φ 5朋= ΑΗ 5 ΜΒΔϑ ≅ Α Β5≅ ΒΓ Χ Α Β5Χ 7
∴5 Θ Ζ Γ Η≅Μ Ι Η Α Κ Χ勿 Ε公 ΚΑ 沙识。邝 , + 5 ΜΒΔΕ Φ 吧罗 , 比Β5 ΧΔ Ε Φ ·
引 言
轮虫是一类常见的水生无脊椎动物 ,
通常情况下行孤雌生殖来繁殖后代 , 当环
境条件不利时 , 行两性生殖产生休眠卵以
度过恶劣环境【‘〕7 轮虫休眠卵由于受精作
用而注入了新的活力 , 一旦条件合适则可
以指数增长方式繁衍后代 , 因此休眠卵被
认为是轮虫工厂化生产理想的 “种子 ” 7 关
于刺激休眠卵萌发的环境因子 , 国外有些
学者作过 研 究 , 但 大 多侧重 于 海水 种
类 ]:7 “〕尊花臂 尾轮虫是各类淡 水水体 中
常见往往又是优势的轮虫 , 是水 生经济动
物的优质食物 , 它个体大 , 适应性强 , 具有
大规模培养价值 7 但有关这一种类休眠卵
萌发的研究甚少见报道 7 本文通过单克隆
培养获得粤花臂尾轮虫休 眠卵 , 并就贮存
时间、温度 、光照 、孵化液等若 干因子对其
萌发的影响作了研究 , 以供轮虫的生物学
研究和开发利用参考 7
! 材料与方法
! 7 粤花臂尾轮虫休眠卵的人工形成及收集
实验材料采 自武汉东湖 1Υ ‘ !> , & , >< ‘ > >’
% 2 7 在解剖镜下挑选个体较大 , 游动迅速的夸花
臂尾轮虫母体转移到培养皿中 7 加入轮虫培养液
1培养液采用 3Δ 865Η Β]7 〕配方 2 , 喂以单细胞小球藻
, 国家自然科学基金 资助项 目 1> !; < < 2 7
: 一 < 一 ; 收稿 , ; 一 < 一 < : 接受 7
: 应 用 生 态 学 报 卷
随之提高1表 2 7 休眠卵低温贮存 < ≅ 后 ,
转入较高温度下即可获得一定的萌发率 7
休眠卵贮存 >< ≅ 后 , 除 >= ℃ 组外 , 另两组
萌发率均有较大程度的提高 ?贮存 = < ≅ 后 ,
各组萌发率为贮存 < ≅ 后的萌发率的 ! 倍 ’
或略高 7 但随着贮存时间的继续延长 , 萌发
率只有稍稍增加 , 将贮存时间长达 : 个月
之久的粤花臂尾轮虫休眠卵放在 != ℃ 温
度下萌发 , 其最终萌发率为 ;! ⊥ 7 可见 , 把
粤花臂尾轮虫休眠卵在低温下贮存 >< 一
= < ≅ 可有效地提高其萌发率 7
表 不同贮存时问下枣花, 尾轮虫休眠卯的萌发率
Ξ Α 6 85 # Α Β58Β 8飞 ΗΑ Β5 Γ Ν Ι ΗΑ 比动介ΛΜ 7 忍声沪加此 旧Β8ΛΦ
5 Φ 妞= Λ Ε≅ 5 Η ≅ 8Β5 代Ε Β Μ Β Γ Η 5≅ Β8皿1⊥ 2
萌发时间 # Α Β 5ΧΔ0Φ Β Δϑ 5 1≅ 2
Μ< !∀#∃一%∃ !%一!&#&∃一#%!∋∃一&%
(以勿介)坛 ∗ + , − , 密度约为 % . /0! 12 // · 3 /一 ‘, 在
& 4℃ , 光照强度 ∃ ∃ ∃ 5 . ( 5 6 7 8 ∋! 6 − 下连续培
养 , 每天检查 ∋ 次 , 计数其密度并更换其培养液 ,
当轮虫密度达到一定时 , 雄体开始出现 , & 一
% 9 后便有大量休眠卵产生 , 用微吸管将休眠卵吸
出 , 置于装有少量煮沸 、冷却 、过滤后的东湖水的
小瓶中 , 并将此瓶放入冰箱内 ( 4℃ −低温保存 , 从
原培养皿中挑选 / 个生长良好的非需精雌体 , 在
原有条件下进行新一轮的培养 , 如此重复 , 以收
集足够数量的休眠卵 ,
& , & 不同条件下夸花臂尾轮虫休眠卵萌发实验
& , & , ∋ 不同贮存时间的比较 休眠卵分别低温保
存 ∋∃ 、& ∃ 、%∃ 、 ∃ 和 4 ∃9 后 , 分别在 ∋ 4 、 & 4 、 %4℃时
进行萌发实验 , 另有一组休眠卵贮存 ∋ ∃ 9 后在
&4 ℃条件下进行萌发 , 共 ∋! 组 , 每组包括 ∋∃ 个容
量为 & , 03/ 的凹槽培养皿 , 每个培养皿中放入 ∋∃
粒休眠卵 , 同时加入 & , ∃司 孵化液 , 在光照培养
箱内进行萌发 (光照强度 6 ∃∃ :5 . , 5 6 7 8 ∋! 6 − ,
孵化液采用煮沸 、冷却 、过滤后的东湖水 , 每天更
换 ∋ 次 , 逐 日镜检 & 次 , 发现有轮虫孵出 , 就用微
吸管及时吸出并计数 ,
& , & , & 不同萌发温度的比较 将低温贮存 4∃ 9 的
休眠卵分别在 ∋ 4 、 &∃ 、 & 4 、 % ∃ 、 %4℃ 时萌发 , 共 4
组 , 孵化条件与处理方法 ( & , & , ∋− 相同 ,
& , & , % 不同光照条件的比较 将低温贮存 4∃9 的
休眠卵分两组 (每组 ∋∃ ∃ 粒 −在 &4 ℃ 时进行萌发 ,
一组在萌发过程中完全处于黑暗 , 另一组在光照
∃ ∃ ∃ 5.( 5 6 7 二 ∋! 6 − 的条件下进行萌发 , 其余处
理方法同 ( & , & , ∋ − ,
& , & , 孵化液的不同更换颇率的比较 & ∃ 粒刚
形成未经低 温处理的休眠卵 , 分成两组 (每组 ∋∃
粒 − , 置于 凹槽培养皿中 , ∋∃ 粒; 皿 , 直接放在室外
自然环境中萌发 , 气温变化范围 ∋ 一 & ℃一组
每天更换 / 次孵化液 , 另一组前 ∗ 9 不更换孵化
液 , ∗ 9 后 , 将未萌发的休眠卵转移到新鲜的孵化
液中继续萌发 , 每天观察并记录其萌发情况 ,
萌发沮度(℃ −
< = >2 ? ≅吃
> 2 3 Α 2 Β= >/ Β2
咤Χ哎一、,几&月Δ
% , & 休眠卵的萌发温度
% , & , ∋ 温度对曹花臂尾轮虫休眠卵萌发率
的影响 在 ∋4 一 %∃ ℃温度范围内 , 普花臂
尾轮虫休眠卵萌发率随着温度的升高而增
加 , 当温度继续上 升至 %4 ℃ , 萌发率则有
所下降( 图 ∋ − , 萌发温度的改变对休眠卵
萌发率的影响不均衡 , 巧一 & 4℃ 时 , 温度变
化的作用十分明显 , &4 一 %4 ℃时 , 这种作用
相对缓慢 , 曾取一组粤花臂尾轮虫休眠卵
在 ∋∃ ℃贮存数月之久 , 发现其休眠卵已变
成空壳的数量占总数的 ∋ Ε , 说明在 ∋∃ ℃
% 结 果
Φ冰Γ,‘Η曾Χ上。∋<
哥习Χ赎
沮度 Ι 23 碑>= >ϑ Β2 (℃ −
% , ∋ 休眠卵贮存时间对萌发的影响
实验结果表 明 , 随着尊花臂尾轮 虫休
眠卵的低温贮存 时间的延长 , 其萌发 率也
图 ∋ 沮度对粤花臂尾轮虫休眠卵萌发率的影响
Κ /Λ , ≅ Μ Ν肠2 > 0 Ν >2 3 + 2 Β = > ϑ Β 2 0 Ο ?= > 2坛呀 0 Ν Π , 1= 沙云刀。Β ϑ∗
Β2 ∗ > ≅Ο Λ 2 Λ Λ ∗ ·
期 陈菊芳等 9粤花臂尾轮虫休眠卵萌发的研究
的低温下 , 曹花臂尾轮虫休 眠卵亦具有一
定的萌发能力 7
> 7 ! 7 ! 不同温度休眠卵萌发所需的时间
图 ! 表示曹花臂尾轮虫休眠卵经低温贮存
Υ Γ ≅ 后 , 在 = 、 ! = 、> =℃ 时的孵化过程 7 从实
验开 始到 第一个轮虫孵 出的时间 1Β2 以
> =℃ 时最短 , : Χ 后陆续有轮虫孵 出 ? ! =℃
时 Β 为 Χ ? =℃ 时 Β 值最长 , 为 Υ Χ 7 可
见 , Β 值随萌发温度升高而缩短 , 二者呈负
相关 7 从实验开始到休眠卵不再萌发的时
间1Ξ 2也以 = ℃ 时最长 , 其萌发 曲线在 >
种温度下最平稳 , 没有出现高峰期 7 != ℃ 时
Ξ 值为 :< Χ , 萌发曲线在 一 !Υ Χ 处呈加
速状态 , 在这 ΜΧ 内萌发出的轮虫占总萌发
量的 ; > 7 Υ ⊥ 7 > = ℃时 Ξ 值最短 , 为 >: Χ , 在
: 一 ! Υ Χ 处萌发曲线 比较陡峭 , 在此 : Χ 内
萌发出的轮虫占总萌发量的 ; ! 7 ⊥ 7 所
以 , 虽然在不 同温度下萌发过程不 同 , 但
Ξ 和 Β 值均随着温度升高而减小 7
警花臂 尾轮虫休 眠卵不论萌发 时有无光
照 , 其萌发率和萌发过程几乎完全一样 , 光
照对其萌发是一个非必需条件 7 表 ! 表 明
各培养皿所孵化出的轮虫数 , 对两组实验
进行均数差异显著性检验 1Β 检验 2也表明
两组差异极不显著1表 ! 2 7
衰 ! 不同光照条件下不花份尾轮虫休眠卯蔺发的比较
ΞΑ 8, 85 ! & ΝΕ沈Β Γ Ν 川恤8皿Β8ΓΕ Γ Ε 抽Β Χ ΔΕΦ Γ Ν 刀 7 “加成7了如泄 心∗叱 咤 =光 照条件
∃8Λ ϑ ΔΕ Α Β ΔΓ Ε ! > Υ = : ; <
5 Γ Ε ≅ ΔΒΔΓ Ε
光照组 ; = : ; : ; :
∃88Λ ϑ ΔΕ Α Β ΔΓΕ Φ ΗΓ Λ /
黑暗组 : = Υ ; ; ;
0Α Η _ Φ ϑ Λ/
Β ⎯ < 7 : ; , ΒΓ 7 Γ Μ ⎯ ! 7 < 7 Β α 与7 仍 , / β < 7 < = 7
> 7 Υ 孵化液
刚形成未经低温贮存处理的粤花臂尾
轮虫休眠卵在室外自然环境中可有少量萌
发 7 图 >, 描述当孵化液更换频率为每天
次时休眠卵的萌发曲线 ? 曲线较平坦 , 没有
出现萌发高峰 , 最终萌发率仅为 ! ⊥ 7 图
> Ι 描述另一组萌发实验在更换 孵化液之
前长达 Μ≅ 的时间里 , 只见到休 眠卵间断 、
少量地萌发 , 当更换成新鲜孵化液后即有
一个萌发高峰 , 最终萌发率达 到 >! ⊥ , 说
明把曹花臂尾轮虫休眠卵转移到新鲜的孵
Φ ,Α层丫遇已6口,左Θ。Ρ,工
Ρ翻州招盘咚长
∃4戈Χ哎%ΣΝ‘,‘,且Φ本Γ‘侧巴曾ΤΘ。Ρ<
好州砰擂钱时 间 Ι ≅3 2 ( ? −
图 & 不同温度下粤花臂尾轮虫休眠卵萌发数量比较
Κ ≅Λ , & Υ0 3 += Β ≅∗0 Ο 0 Ν ? = Β 2 ? ≅吃 Ο ϑ 3 ς 2 Β ∗ 0 Ν Π , 1= /ΩΥ ≅Ν/ 0Β 0 ∗
此 ∗> ≅ΟΛ 馆∀ 4 ϑ Ο 9 2 Β 9 ≅ΝΝ2 Β 2 Ο > >2 3 Α2 Β = > ϑΒ 2∗ ,
% , % 光照对休眠卵萌发的影响
曹花臂尾轮虫休眠卵分别在光照和黑
暗条件下萌发 , 当培养 ∋& ? 后 , 两组均开始
萌发 , 再继续培养 ∋& ? 后 , 光照组休眠卵的
萌发率为 4 ∀ Ε , 黑暗组的萌发率为 4 Ε ,
继续培养 , 均仍有少量休眠卵孵出 , 最终结
果 , 光照组为 ! ∀ Ε , 黑暗组为 ! Ε , 可见 ,
& % 4 ! # ∀ ∋∃ ∋ ∋ ∋&
时 间 Ι ≅32 ( 9 −
图 % 孵化液更换频率对粤花臂尾轮虫休眠卵萌发率的
影响
Κ/Λ , % Μ ΝΝ21 > 0 Ν 2 ? =ΟΛ 2 9 ΝΒ 2 Θ ϑ 2Ο 2 Ω 0 Ν ? = > 2 比ΟΛ 3 2 9 ≅ϑ 3 0 Ο
?= > 2 ? ≅Ο Λ Β= >2 0 Ν Π 1= /ΩΥ ≅Ν/ 0Β ϑ ∗ Β 2 ∗ > ≅Ο Λ 2 Λ Λ ∗ ,Ξ , 每天 ∋ 次 Υ?= Ο Λ 2 9 2 Ψ 2 Β Ω9 = Ω , Π , 天后更换 Υ?≅ 3 Λ 29
= Ν>2 Β 9= Ω∗ ,
; < 应 用 生 态 学 报 卷
化液 中将会刺激其萌发 7 最适温度范围 7
Υ 讨 论
Υ 7 贮存期对萌发率的影响
从本实验结果来看 , 人工形成的尊花
臂尾轮虫休眠卵从形成到萌发的最短时间
间隔为 一 Ρ≅ , 所以少数休眠卵在经过一
个较短的潜伏期后即可萌发 7 在潜伏期时
间长短的问题上 , 不同学者有不同的意见 7
一般认为 , 轮虫休 眠卵必须经过 一段时间
的潜 伏 期 1如 一 : 个 月 2才 能 萌 发 ? 而
/Γ ΛΗ ΗΔ ΓΒ 〔“认为尊花臂尾轮虫休眠卵从形
成到萌发最短 只需 8≅ 1! = ℃ 时2 , 与本 实验
结果基本吻合 7
虽然从形成到萌发最短 只需 一Ρ ≅ 时
间 , 但在低温黑暗条件下 1正如冬季休眠卵
沉积于底泥 中的情况 2 , 人为地 延长潜伏
期 , 无疑能促进休眠卵的大量萌发 7 不经低
温贮存 , < ≅ 后只获得 ! ⊥ 的萌发率 , 但低
温贮存 < ≅ 后进行 萌发 , ! 一 > ≅ 内就可获
得 > ⊥ 的萌发率 7 而且随着贮存时间的延
长 , 萌发率逐步提高 , 但贮存 =< ≅ 后再继续
延长贮存时间对萌发率的提高几乎不起作
用 , 所以在生产应用 中一味地延长低温贮
存时间以求休眠卵高萌发率没有必要 7
Υ 7 ! 温度对萌发率的影响
在 < 一 > <℃ 的范围内 , 尊花臂尾轮虫
休眠卵的萌发率随温度升高而增加 , 但到
> < 一 > =℃ 时 , 萌发率略有下降 , 最适萌发温
度在 != 一 >< ℃ 7 这个 结果与温度对生长的
影响相一致 , 而且休 眠卵萌发的适温 范围
处于轮虫生长的适温范 围内1! < 一 >< ℃ 2 7
温度升高可使休眠卵获得更 多的热量 , 促
进其萌发 , 当温度为 >< 一 >= ℃ 时萌发率下
降是因为此时温度 已超过了休眠卵萌发的
同时 , 随着温度升高 , 尊花臂尾轮虫休
眠卵的萌发速度 1或胚胎发育速度 2加快 7
当温度为 = 、!= 和 >= ℃时 , 从实验开始到
第 个轮虫出现的时间分别是 Υ 、 : 、ΜΧ?
而尊花臂尾轮虫的非需精卵在 < 一 > =℃
时胚胎发育时间为 != 一 = Χ] >χ 7 可见 , 休眠
卵的萌发较非需精卵要求更多的热量 7 这
与李永 函 ]!χ 就 东北地 区养鱼池底泥 中轮
虫休眠卵萌发的研究报道相一致 7
Υ 7 > 光照对萌发率的影响
光对轮虫休眠卵萌发的作用存在着种
间差异 7 如光对壶状臂尾轮虫 1Ι ΗΑ ΚΧ ΔΓ Ε ΛΜ
, ‘ΗΚ5 Λ Μ 2和褶皱臂尾 轮虫 1Ι 7 /8ΔΚΑ Β Δ8Δ9 2休
眠卵的萌发是绝对必需的 , 但对角突臂尾
轮虫 1Ι 7 Α Ε Φ “勿Η ΔΜ 2、 蒲达臂尾 轮虫 1Ι 7
6Λ ≅Α 加ΜΒ Δ5 ΕΜ ΔΜ2 等的休眠卵的萌发则不起
作用 ],7 “χ 7 在本研 究中发现光 无论是对尊
花臂尾轮虫休眠卵的萌发过程还是对其萌
发率都没有影响 , 光照条件对曹花臂尾轮
虫的萌发是一个非必需条件 7
参考文献
王家揖 7 : 7 中国淡水轮虫志 7 北京 9科学 出版社 7! 李永 函等 , = 7 养鱼池轮虫休眠卯分布和萌发的研
究 7 水生生物学报 , , 1 2 9 ! < 一 >< 7
> 黄祥 飞 7 7 武汉东湖若干轮虫卵和胚后发育时间
的观察 7 海洋与湖沼 , ! < 1! 2 9 Υ 一 7
Υ 3 Δ86 5 Η Β , ( , ( 7 : > 7 δ Δ5 Β Δ5 Ν5 ϑ Α 85 /Η Γ ≅Λ 5 ΒΔΓ Ε ΔΕ ΒΧ5 ΗΓ Ο
ΒΔΝ5 Η Ι ΗΑ ΚΧ ΔΓ 二 Λ Μ ΚΑ 伙短刀。 Η Λ , 7 ( 7 凡冲 7 乙阅! 7 , = > 9 > 一 ! Υ 7
= ∃( ΔΒ5 7 ( 7 ∀ 7 ε Ω Χ ΔΒ Ε 5Θ , 0 7 0 7 ! = 7 Ξ Χ 5 ΗΓ 85 Γ Ν Α 5ΗΑ Ο
ΒΔΓ Ε ΔΕ ΒΧ 5 ΧΑ Β 5ΧΔΕ Φ Γ Ν Ν5 Η ΒΔ8ΔΤ 5≅ 5Φ Μ Γ Ν ΗΓ Β ΔΝ5 ΗΜ 7 ( 7
& 了/ 7 乙刃 7 , Υ > 9 一 7
: δ ΔΕ_ Γ ΝΝ, 3 二 − Λ 6 Τ 5 ΕΜ , & 7 ε ∴ Α ΧΑ Ε , 0 7 > 7 & Ε[ ΔΟ
ΗΓ Ε ϑ 5 Ε ΒΑ 8 ΝΑ 5 ΒΓ Η Μ Α ΝΝ5 5 ΒΔΕ Φ Χ Α Β5ΧΔ昭 Γ Ν ΗΓ ΒΔΝ5 Η 1月用 Ο
Κ Χ ΔΓ Ε Λ Μ /∃‘ΚΑ Η打泣Μ 2 Η 5Μ Β ΔΕΦ 5Φ Φ Μ 7 月洲八汤泣。吻匆 , < Υ 9
: 一 : 7
; /Γ Λ ΗΒΔ Γ Β7 + 二 + Γ Λ Φ Δ5Η , ∀ 7 ε &短Ε 5 Μ Β, 0 7 < 7
# Α Β5 ΧΔΕΦ Γ Ν Ι ϑ ΚΧ ΔΓ ” Λ Μ Η “加” , < 7 . 7 δΛ 8】5 Η Η5Μ ΒΔΕΦ
& Φ Φ Μ 1+ Γ ΒΔΝ5 ΗΑ 2 7 #州八必白此州≅ , ; > 9 = 一 =Υ 7
/ Γ Λ州 Γ Β , + 7 ε ∋ Ε 58 8, Ξ 7 Ω 7 > 7 + 5Μ Β ΔΕΦ 5Φ Φ ΔΕ
ΗΓ Β ΔΝ5 ΗΜ 7 #加艺Η砧勿8叩必 , <Υ 9 ! > 一 ! ! Υ 7