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藏药西藏棱子芹抗炎镇痛药效学研究



全 文 :天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2012,24:972-975
文章编号:1001-6880(2012)07-0972-04
收稿日期:2011-09-15 接受日期:2012-05-25
基金项目:青海大学国家大学生创新性实验计划项目(091074305)
* 通讯作者 Tel:86-971-6119561;E-mail:qhym66@ 126. com
藏药西藏棱子芹抗炎镇痛药效学研究
袁 明1* ,李云周1,许 苗1,赵协慧2
1青海大学医学院药学系;2 青海大学医学院中医系,西宁 810001
摘 要:本文采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法、棉球致小鼠肉芽肿法观察藏药西藏棱子芹的抗炎作用,采用热板
法、醋酸扭体法观察藏药西藏棱子芹的镇痛作用。结果表明藏药西藏棱子芹能明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓
肿胀和棉球所致小鼠肉芽肿;能提高小鼠对热板疼痛的阈值,减少小鼠扭体反应的次数,延长醋酸所致小鼠扭
体反应的潜伏时间。藏药西藏棱子芹具有显著的抗炎镇痛作用,值得开发研究。
关键词:西藏棱子芹;抗炎;镇痛;药效学
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A
Pharmacodynamic Study on Anti-inflammatory and Analgesic Effects of
Tibetan Medicine Pleurospermum hookeri var. thomsonii
YUAN Ming1* ,LI Yun-zhou1,XU Miao1,ZHAO Xie-hui2
1Department of Pharmacy of Medical College of Qinghai University;
2Department of Traditional Chinese Medicine of Medical College of Qinghai University,Xining 810001,China
Abstract:The anti-inflammatory effects of Tibetan Medicine Pleurospermum hookeri var. thomsonii in mice was observed
in test of ear swelling caused by xylene and cotton pellet-induced granuloma mouse method. The analgesic effect of P.
hookeri var. thomsonii in mice was observed in hot-plate test and acetic acid-induced writhing. The experiments showed
that P. hookeri var. thomsonii could apparently inhibit auricle swelling induced by xylene and cotton pellet-induced gran-
uloma,obviously prolong the pain threshold of temperature stimuli,decrease the number of writhe induced by acetic
acid,and reduce the latent twisted body reaction times in mice. Tibetan Medicine P. hookeri var. thomsonii has both anti-
inflammatory and analgesic effects obviously,and is worthy of research and development.
Key words:Pleurospermum hookeri var. thomsonii;anti-inflammatory;analgesic;pharmacodynamics
西藏棱子芹(Pleurospermum hookeri var. thomso-
nii)是传统常用的藏药材资源,藏药名为“加哇”,为
伞形科 (Umbelliferae)棱子芹属 (Pleurospermum
Hoffm.)植物,药用部位为根和根茎,生长在海拔
3500 ~ 5300 m的砾石山坡草地或沟边水湿处,主要
分布于西藏、青海、云南和四川等地[1-4]。据《四部
医典》记载:“干黄水”,《晶珠本草》记载:“治黄水
病”,《度母本草》记载:“治黄水病”,藏医临床应用
西藏棱子芹历史悠久,在长期的医疗实践中总结了
许多宝贵的用药经验,鉴于该药药理作用的研究未
见文献报道,本文对其水提物和醇提物的抗炎镇痛
作用进行初步探讨。
1 材料与仪器
1. 1 药品
西藏棱子芹购买于青海省西宁市八一路中藏药
批发市场,经青海大学医学院藏医系子巴教授鉴定
为伞形科棱子芹属植物西藏棱子芹 Pleurospermum
hookeri C. B. Clarke var. thomsonii C. B. Clarke.的根。
水提物制备:西藏棱子芹粗颗粒 100 g 加入 10
倍量水煎煮 2 遍,每次 1 h,两次药液过滤后合并,用
旋转蒸发器于 50 ~ 60 ℃减压浓缩至每 ml药液含生
药 0. 8 g。
醇提物的制备:西藏棱子芹粗颗粒 100 g 加入
10 倍量 95%乙醇,回流提取 2 遍,每次 1 h,两次药
液过滤后合并,浓缩至每 mL药液含生药 0. 8 g。
阿司匹林,由青海制药厂有限公司生产(批号:
20101205) ;吲哚美辛,由山西亨瑞达制药有限公司
生产(批号:20100522)。
DOI:10.16333/j.1001-6880.2012.07.003
1. 2 动物
昆明种雄性小鼠,体重 18 ~ 22 g,均购自青海省
地方病预防控制所实验动物中心(动物合格证书:
2010013)。试验前,所有动物适应性饲养 3 d(室温
18 ~ 22 ℃,相对湿度 45% ~55%) ,喂食鼠颗粒饲料
和自来水,食水自由。
1. 3 仪器
TG-328B型电子分析天平(上海天平仪器厂) ;
DK-S26 型电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限
公司) ;RE-52 型旋转蒸发器(上海仪器设备有限公
司) ;YLS-Q4 耳肿打孔器(济南益延科技发展有限
公司) ;BGZ-140 电热鼓风干燥箱(上海博讯实业有
限公司) ;YLS-6B 智能热板仪(山东省医学科学院
设备站) ;秒表(上海医疗器械公司)。
1. 4 试剂
二甲苯 (Xylene,天津化工试剂厂,批号:
20101208) ;冰醋酸(Glacial acetic acid,北京化工厂,
批号:20101104) ;0. 9%生理盐水;蒸馏水。
2 方法与结果
2. 1 数据统计处理
实验数据以 x ± s 表示,采用 SPSS13. 0 软件进
行统计,比较采用单因素方差分析,方差齐者采用
LSD法检验,方差不齐者采用 Tamhane’s法检验。
2. 2 西藏棱子芹对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响[5]
取体重 18 ~ 22 g 昆明种雄性小鼠 64 只,随机
分为 8 组,每组 8 只,即空白对照组、阳性对照组、水
提物(高、中、低剂量)组、醇提物(高、中、低剂量)
组,各组灌胃给药 1 次 /d,连续 5 d,空白对照组给等
体积蒸馏水。末次给药后 1 h,每鼠左耳均匀涂抹二
甲苯 0. 2 mL,1 h后脱颈椎处死小鼠,沿耳廓基线剪
下左右耳,用打孔器在左右耳相同部位打孔,两侧耳
片分别称重(mg) ,以两耳片重量差作为肿胀度。结
果见表 1。
表 1 西藏棱子芹对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(n = 8)
Table 1 Effect of P. hookeri var. thomsonii on ear oedema in-
duced by xylene in mice (n = 8)
组别
Group
剂量
Does (g /kg)
耳肿胀度
Ear oedema
degree (mg)
空白对照 Control - 12. 47 ± 3. 96
吲哚美辛 Indomethacin 0. 2 7. 43 ± 2. 86*
水提物高剂量 Water extract-H 1. 6 8. 43 ± 3. 19
水提物中剂量 Water extract-M 0. 8 5. 60 ± 4. 09*
水提物低剂量 Water extract-L 0. 4 10. 53 ± 3. 11
醇提物高剂量 Alcohol extract-H 1. 6 2. 80 ± 2. 33**
醇提物中剂量 Alcohol extract-M 0. 8 8. 80 ± 5. 20
醇提物低剂量 Alcohol extract-L 0. 4 5. 18 ± 3. 13*
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05,** P < 0. 01。
Note:Compare with control,* P < 0. 05,** P < 0. 01.
结果表明:西藏棱子芹醇提物高、低剂量组、水
提物中剂量组与吲哚美辛组均能明显抑制二甲苯所
致的小鼠耳肿胀程度,与空白对照组比较均有显著
性差异(P < 0. 05,P < 0. 01) ,提示西藏棱子芹醇提
物对急性炎性肿胀具有良好的抑制作用。
2. 3 西藏棱子芹对棉球致小鼠肉芽肿的影响[6]
取体重 18 ~ 22 g 昆明种雄性小鼠 64 只,随机
分为 8 组,每组 8 只,即空白对照组、阳性对照组、水
提物(高、中、低剂量)组、醇提物(高、中、低剂量)
组。剪开每只小鼠左侧腋下的皮层,将已经称重并
消毒的棉球埋入皮内,缝合伤口,注射青霉素以防止
感染。术后 24 h各组灌胃给药 1 次 /d,连续 5 d,空
白对照组给等体积蒸馏水。第 6 天脱颈椎处死小
鼠,取出棉球,小心剥离附着的结缔组织,用滤纸吸
干组织液,置烘箱中干燥 4 h(温度设置为 60 ℃) ,
电子天平称重,用所得重量减去棉球已知重量的差
值作为肉芽肿重(mg)。结果见表 2。
表 2 西藏棱子芹对棉球致小鼠肉芽肿的影响(n = 8)
Table 2 Effect of P. hookeri var. thomsonii on granuloma in-
duced by cotton pellet in mice (n = 8)
组别
Group
剂量
Does (g /kg)
肉芽肿重
Weight of
granuloma (mg)
空白对照 Control - 22. 68 ± 9. 82
吲哚美辛 Indomethacin 0. 2 13. 20 ± 5. 57*
水提物高剂量 Water extract-H 1. 6 13. 09 ± 4. 33
水提物中剂量 Water extract-M 0. 8 16. 60 ± 3. 21
水提物低剂量 Water extract-L 0. 4 17. 47 ± 3. 82
醇提物高剂量 Alcohol extract-H 1. 6 12. 50 ± 4. 92*
醇提物中剂量 Alcohol extract-M 0. 8 13. 33 ± 6. 25*
醇提物低剂量 Alcohol extract-L 0. 4 14. 57 ± 4. 88
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05。
Note:Compare with control,* P < 0. 05.
结果表明:西藏棱子芹醇提物高、中剂量组与吲
哚美辛组均能明显抑制棉球所致小鼠肉芽肿模型的
增生反应,与空白对照组比较有显著性差异(P <
0. 05) ,提示西藏棱子芹醇提物对小鼠棉球植入诱
发肉芽肿有明显的抑制作用。
379Vol. 24 袁 明等:藏药西藏棱子芹抗炎镇痛药效学研究
2. 4 西藏棱子芹对热板法致小鼠疼痛的影响[7]
调节智能热板仪使温度控制在(55 ± 0. 5)℃,
加热板预热 10 min。取体重 18 ~ 22 g 昆明种雌性
小鼠,每次 1 只放在热板上,记录自小鼠放在热板上
至出现舔后足所需时间(s)作为该鼠的痛阈值。凡
小于 5 s或大于 30 s出现舔后足者,以及喜跳跃者,
一律弃去不用。将合格者随机分为 8 组,即空白对
照组、阳性对照组、水提物(高、中、低剂量)组、醇提
物(高、中、低剂量)组,每组 8 只。分组后重新测量
小鼠痛阈,取两次平均值作为该鼠给药前的痛阈值。
用药组分别灌胃相应药物,空白对照组给等体积蒸
馏水,给药后 60 min、90 min 再次测定小鼠痛阈值
(s)。结果见表 3。
表 3 西藏棱子芹对热板法致小鼠疼痛的影响(n = 8)
Table 3 Effect of P. hookeri var. thomsoniion pain in mice in hot plate test (n = 8)
组别
Group
剂量
Does (g /kg)
药前痛阈值
Pain threshold before
administration (s)
药后痛阈值 Pain threshold after administration (s)
60 min 90 min
空白对照 Control - 18. 52 ± 5. 62 25. 61 ± 8. 51 26. 22 ± 5. 26
阿司匹林 Aspirin 0. 2 17. 51 ± 3. 28 19. 86 ± 6. 11 18. 08 ± 4. 31
水提物高剂量 Water extract-H 1. 6 14. 57 ± 3. 43 19. 67 ± 6. 05 23. 24 ± 7. 60*
水提物中剂量 Water extract-M 0. 8 13. 83 ± 2. 97 17. 66 ± 5. 81 14. 85 ± 6. 00△
水提物低剂量 Water extract-L 0. 4 15. 02 ± 5. 43 23. 83 ± 7. 51* 25. 79 ± 5. 17**
醇提物高剂量 Alcohol extract-H 1. 6 18. 25 ± 5. 68 27. 19 ± 5. 86* 22. 79 ± 5. 50
醇提物中剂量 Alcohol extract-M 0. 8 19. 05 ± 5. 56 23. 08 ± 7. 72 21. 66 ± 5. 00
醇提物低剂量 Alcohol extract-L 0. 4 20. 96 ± 7. 46 29. 49 ± 8. 66 28. 20 ± 4. 78▲
注:与给药前痛阈值比较,* P < 0. 05,** P < 0. 01;与空白对照组比较,△P < 0. 05;与阿司匹林组比较,▲P < 0. 05。
Note:Compare with the pain threshold before administration,* P <0. 05,** P <0. 01;Compare with control,△P <0. 05;Compare with Aspirin,▲P <0. 05.
由表 3 可见,西藏棱子芹水、醇提取物均可提高
小鼠痛阈,各组小鼠给药前后痛阈值比较,西藏棱子
芹水提物低剂量组给药后 60、90 min 均有显著性差
异(P < 0. 05,P < 0. 01) ,醇提物高剂量组给药后 60
min有显著性差异(P < 0. 05) ,水提物高剂量组给药
后 90 min有显著性差异(P < 0. 05) ,提示西藏棱子
芹水提物对热刺激引起的疼痛有一定缓解作用。
2. 5 西藏棱子芹对醋酸所致小鼠扭体反应的影响[8]
取体重 18 ~ 22 g 昆明种雄性小鼠 64 只,随机
分为 8 组,每组 8 只,即空白对照组、阳性对照组、水
提物(高、中、低剂量)组、醇提物(高、中、低剂量)
组,每组分别灌服相应药物,空白对照组灌服同体积
蒸馏水,1 次 /d,连续 3 d。末次给药后 30 min,各鼠
腹腔注射 0. 7%醋酸溶液 10 mL /kg,观察并记录注
射醋酸后 15 min 内出现扭体反应的次数及第一次
出现扭体反应的时间(潜伏时间 s)。结果见表 4。
表 4 西藏棱子芹对醋酸所致小鼠扭体反应的影响(n = 8)
Table 4 Effect of P. hookeri var. thomsonii on writhing response in mice induced by acetic acid (n = 8)
组别
Group
剂量
Does (g /kg)
潜伏时间
Latent time (s)
扭体次数
Writhing times
空白对照 Control - 3. 53 ± 0. 70 34. 13 ± 5. 69
阿司匹林 Aspirin 0. 2 7. 85 ± 1. 38** 23. 12 ± 5. 26*
水提物高剂量 Water extract-H 1. 6 6. 09 ± 1. 16* 23. 71 ± 4. 17*
水提物中剂量 Water extract-M 0. 8 4. 62 ± 1. 95▲▲ 26. 13 ± 3. 60
水提物低剂量 Water extract-L 0. 4 3. 97 ± 1. 75▲▲ 29. 04 ± 5. 33
醇提物高剂量 Alcohol extract-H 1. 6 6. 62 ± 0. 90* 24. 64 ± 6. 26*
醇提物中剂量 Alcohol extract-M 0. 8 5. 39 ± 1. 07▲ 26. 29 ± 6. 40
醇提物低剂量 Alcohol extract-L 0. 4 4. 08 ± 2. 11▲▲ 27. 13 ± 7. 57
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05,** P < 0. 01;与阿司匹林组比较,▲P < 0. 05,▲▲P < 0. 01。
Note:Compare with control,* P < 0. 05,** P < 0. 01;Compare with Aspirin,▲P < 0. 05,▲▲P < 0. 01.
479 天然产物研究与开发 Vol. 24
由表 4 可见,与空白对照组比较,阿司匹林组对
醋酸所致小鼠扭体反应的潜伏时间和扭体次数均有
显著性差异(P < 0. 05,P < 0. 01) ,西藏棱子芹水提
物高剂量组、醇提物高剂量组对醋酸所致小鼠扭体
反应的潜伏时间和扭体次数均有显著性差异(P <
0. 05) ,提示西藏棱子芹水、醇提物对醋酸腹腔注射
引起的小鼠疼痛有抑制作用。
3 讨论
本实验采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法、棉球致
小鼠肉芽肿法研究西藏棱子芹提取物的抗炎作用,
结果表明,西藏棱子芹水提物、醇提物对急慢性炎症
均有良好的抗炎作用,既可抑制炎症早期的水肿,又
可抑制炎症的晚期的肉芽组织形成,有效阻止炎症
反应期的胶原和黏多糖在炎症部位的蓄积,减轻肿
胀和渗出等局部炎症反应。采用热刺激和化学刺激
动物模型初步分析西藏棱子芹水提物、醇提物的镇
痛作用类型,在醋酸所致小鼠扭体反应试验中,能明
显延长醋酸所致小鼠扭体反应的潜伏时间,减少小
鼠扭体反应的次数,对小鼠腹腔注射醋酸引起急性
腹膜炎而产生的疼痛有明显的镇痛效果;在热板法
致小鼠疼痛试验中,虽能延长小鼠对热板疼痛的阈
值,但抑制热刺激引起的疼痛作用不显著,考虑西藏
棱子芹水提物、醇提物对炎性因子造成的疼痛有较
好的镇痛作用,与藏医临床应用西藏棱子芹“治黄
水病”的功效相符合,为该药在临床上治疗风湿性
疾病提供了药效学依据。综上所述,西藏棱子芹具
有一定的抗炎镇痛作用,对其有效成分及作用机制
有待进一步深入研究。
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