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白刺花不同极性提取部分的主要药效学研究



全 文 :• 23 •中华中医药杂志(原中国医药学报)增刊
白刺花为为蝶形花科植物白刺花(S o p h r o a
viciifolia Hance)的花,为汉族民间及苗族、哈尼族等少
数民族习用,有广泛的民间用药基础和丰富的药物资
源,也是一个药食两用之品[1]。性味苦,寒,具有清热燥
湿、凉血解毒、利湿消肿等功效,主要治疗皮肤瘙痒、
滴虫性阴道炎;对咽喉肿痛,膀胱炎等病证有较好的
疗效[2]。课题组前期实验研究结果表明[3]白刺花具有抗
Ⅰ型和Ⅳ型超敏反应作用,还有一定的抗炎作用,对家
兔完整及破损皮肤无刺激性,且能促进破损皮肤的愈
合,值得进一步研究开发利用。据此,本文根据白刺花
所含成分的极性不同,以不同极性的溶剂提取分离成
不同极性段成分,根据其主要临床应用,选择抗炎、抗
过敏药效指标进行筛选其有效部分。
材料
1. 动物 昆明种小白鼠,体质量18-22g,雌雄兼
用;Wistar大鼠,体质量180-220g,雄性,均购自昆明
医学院实验动物中心。实验动物生产许可证:SCXK
(滇20050008)。
2. 供试品的制备 白刺花于2005年3月采自云南
省宜良,经云南中医学院毛晓健副教授鉴定为蝶形
花科植物白刺花Sophroa viciifolia Hance的花。将
阴干后的白刺花用75%乙醇提取3次,得到总提物,
除去乙醇,取部分留样后,其余总提取物依次经石油
醚(Pet)、醋酸乙酯(EtOAc)、正丁醇(BuOH)萃取,得到
Pet萃取物部分、EtOAc萃取物部分、BuOH萃取部分
和水层,加上总提物部分共5个组分供试验用。
3. 药品与试剂 醋酸泼尼松:浙江仙琚制药股
份有限公司生产,批号:0501146;马来酸氯苯那敏:
白刺花不同极性提取部分的主要药效学研究*
毛晓健,陈海丰,温敏
(云南中医学院中药学院 ,昆明 650200)
摘要:目的:筛选白刺花的药效部位。方法:根据白刺花所含成分的极性不同,对其分离出乙醇总提物、
石油醚(Pet)、醋酸乙酯(EtOAc)、正丁醇(BuOH)及水溶性等不同成分。根据其主要临床应用,选择抗炎、抗过敏药
效指标进行筛选实验。结果:BuOH部分对二甲苯所致小鼠耳肿胀有显著抑制作用,能显著降低小鼠腹部皮肤毛
细血管通透性,对DNCB所致的DTH的影响有显著抑制作用,对右旋糖酐所致小鼠皮肤瘙痒的瘙痒次数有显著减
少和显著缩短瘙痒时间的作用。EtOAc部分对右旋糖酐所致小鼠皮肤瘙痒的瘙痒次数有显著影响。结论:BuOH部
分、EtOAc部分是白刺花的有效部位群,可对该两部分作进一步的分离和有效部位群的筛选。
关键词:白刺花提取物;抗炎;抗过敏;药效
*植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室开放基金资助项目(No.P200413)
大同市卫华药业有限责任公司,批号:041104;所用
试剂按试验要求均为市售化学纯或分析纯试剂。
4. 主要仪器 752N紫外可见分光光度计(上海
精密科学仪器有限公司);LHS_100CL型电热恒温恒
湿培养箱(上海一恒科技有限公司);BS 224 S型电
子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。
方法与结果
1. 给药剂量及方法 试验动物均分为7组:给药
剂量按体表面积折算,均为人用量(生药10g/天)的
5倍。灌胃给药,1天1次。75%乙醇总提取物(EtOH):
1.900g/kg;水层部分:1.350g/kg;正丁醇部分
(BuOH):0.285g/kg;醋酸乙酯部分(EtOAc):0.030g/
kg;石油醚部分(Pet):0.175g/kg;空白对照组:给予
同体积的生理盐水(NS)。阳性对照组:醋酸泼尼松
0.005g/kg或扑尔敏(马来酸氯苯那敏)0.004g/kg。
2. 统计学方法 实验数据符合正态分布,方差
齐者:用t检验;方差不齐者:用t′检验。实验数据如
有偏态,则用参比差值法。
3. 抗炎实验
3.1 对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响[4] 18-22g
雄性小鼠79只,随机分成7组,分组及给药剂量如表1
所示。连续7天,于末次给药后30min,各小鼠右耳涂
二甲苯60µl,1.5h后将小鼠颈椎脱臼处死,剪下左右
耳廓,用打孔器打下直径7mm的耳片,称质量。计算
肿胀率[肿胀率=(右耳质量-左耳质量)/左耳质量×
100%];将取耳后的小鼠迅速剖腹,取出胸腺、脾脏,
用电子天秤称其鲜质量并计算胸腺指数和脾脏指数
[胸腺(脾脏)指数 =胸腺(脾脏)质量(g)/10(g)体质
• 24 • 中华中医药杂志(原中国医药学报)增刊
量],经统计比较结果见表1。 通透性,表明二者具有抗炎作用,并且BuOH部分对二
甲苯所致的小鼠腹部皮肤毛细血管通透性的抑制作
用和EtOH总提取物相当。
4. 抗过敏实验
4.1对DNCB所致小鼠DTH反应的影响[4] 取
18-22g小鼠79只,雌雄各半,随机分成7组,分组及给
药剂量如表3所示。每鼠腹部去毛,将1%DNCB 50µl
均匀涂抹致敏。第2d强化1次,致敏前1d开始灌胃,
连续给药8d。致敏6d后,将1%DNCB丙酮液10µl均匀
涂抹于小鼠右耳进行攻击,攻击后24h即末次给药后
1h,处死小鼠,剪下左右耳廓,用直径7mm的打孔器
取下左右耳片,称质量,以左右耳片质量之差为肿胀
度,并计算抑制率;并取胸腺、脾脏称质量,计算胸
腺指数和脾脏指数。见表3。与空白对照组比较EtOH
总提取物和醋酸泼尼松对DNCB所致小鼠DTH反应
有极显著的抑制作用;BuOH部分对此有显著抑制作
用,表明BuOH部分对DNCB所致小鼠DTH反应的抑
制作用不及EtOH总提取物强。醋酸泼尼松能极显著
降低胸腺指数;EtOH总提取物能显著降低胸腺指
数,说明EtOH总提取物对免疫的抑制不及醋酸泼尼
松强。水层能增加脾脏指数,醋酸泼尼松能显著降
低脾脏指数。
组别
Pet部分
EtOAc部分
BuOH部分
水 层
EtOH总提物
醋酸泼尼松
空白组
n
12
10
12
11
13
10
11
剂量
(g/kg)
0.175
0.030
0.285
1.350
1.900
0.005
等容积NS
肿胀率
(%)
89.80±26.88
96.63±21.31
80.62±25.68*
80.43±31.11*
70.95±15.03**
48.27±18.20**
108.47±26.88
胸腺指数
(g/10g)
0.0485±0.0143△△
0.0408±0.0123△△
0.0452±0.0123△△
0.0365±0.0067*△△
0.0434±0.0102△△
0.0156±0.0054**
0.0485±0.0143△△
脾脏指数
(g/10g)
0.0563±0.0176△△
0.0434±0.0132*△
0.0491±0.0178△△
0.0495±0.0132*△△
0.0472±0.0149△△
0.0332±0.0083**
0.0563±0.0176
表1 对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响(x-±s)
注:与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;与阳性药
品组比较,△P<0.05,△△P<0.01。下表同。
表2 对小鼠腹部皮肤毛细血管通透性的影响(x-±s)
组别
Pet部分
EtOAc部分
BuOH部分
水 层
EtOH总提物
醋酸泼尼松
空白组
n
13
11
12
14
13
14
11
剂量 (g/kg)
0.175
0.030
0.285
1.350
1.900
0.005
等容积NS
吸光度 (A)
0.027±0.007
0.026±0.007
0.023±0.008*
0.025±0.009
0.023±0.006*
0.019±0.006**
0.029±0.005
组别
Pet部分
EtOAc部分
BuOH部分
水 层
EtOH总提物
醋酸泼尼松
空白组
n
12
10
12
11
13
10
11
剂量
(g/kg)
0.175
0.030
0.285
1.35
1.90
0.005
等容积NS
肿胀率
(%)
29.61±7.18
26.11±9.11
21.00±9.97*
28.08±5.34
19.28±5.34**
8.10±2.87**
29.61±7.18
胸腺指数
(g/10g)
0.0239±0.0098△△
0.0267±0.0057△△
0.0266±0.0058△△
0.0240±0.0077△△
0.0218±0.0040*
0.0084±0.0035**
0.0278±0.0082△△
脾脏指数
(g/10g)
0.0384±0.0089△
0.0441±0.0089△△
0.0428±0.0075
0.0509±0.0132*△△
0.0509±0.0132△
0.0300±0.0074*
0.0396±0.0125
表3 对DNCB所致小鼠DTH反应的影响(x-±s)
与空白组相比EtOH总提物、醋酸泼尼松对二甲
苯致小鼠耳肿胀有极显著的抑制作用;BuOH部分、
水层对二甲苯致小鼠耳肿胀有显著的抑制作用,表明
EtOH总提物、BuOH部分、水层有抗炎作用,但BuOH
部分、水层的抗炎作用不及EtOH总提物强。醋酸泼
尼松能极显著降低小鼠的胸腺指数和脾脏指数;水
层能显著降低小鼠的胸腺指数和脾脏指数,EtOAc部
分和水层能显著降低小鼠的脾脏指数。
3.2 对二甲苯所致的小鼠皮肤毛细血管通透性
的影响[4] 取18-22g雄性小鼠88只,随机分成7组,分
组及给药剂量如表2所示。连续7d,于第6d将小鼠腹
部正中位去毛,第7d末次给药后60min,各小鼠尾静
脉注射0.5%依文思兰生理盐水溶液0.1ml/10g,随即
于小鼠腹部去毛皮肤上滴二甲苯30µl/只。30min后小
鼠颈椎脱臼处死,剥下染蓝腹部皮肤,用打孔器打
下两片直径7mm的皮肤,放入有塞玻璃试管内。在每
个试管内加入丙酮:生理盐水=7:3的混合溶液5ml,
置37℃的恒温箱中孵化36h。2 000 r/min离心10min,
取上清液,于610nm处比色测定吸光度(A)。以空白之
丙酮生理盐水校零。见表2。与空白组相比醋酸泼尼
松能极显著降低小鼠皮肤毛细血管通透性;BuOH部
分和EtOH总提取物组能显著降低小鼠皮肤毛细血管
4.2 对右旋糖酐所致小鼠皮肤瘙痒的影响[5] 取
18-22g小鼠96只,雌雄各半,随机分成7组,分组及
给药剂量如表4所示。连续7d,于末次给药后30min,
各小鼠尾静脉注射0.025%右旋糖酐1.25mg/kg。以小
鼠前爪搔抓头部,后爪搔躯干,嘴咬全身各部位作为
瘙痒指征,记录30min内小鼠瘙痒次数及瘙痒持续时
间。见表4。与空白组相比扑尔敏能极显著减少小鼠
的瘙痒次数;EtOAc部分、BuOH部分、EtOH总提取
物能显著减少瘙痒次数。扑尔敏能极显著缩短瘙痒
持续时间;Pet部分、BuOH部分、水层、EtOH总提取
物层能显著缩短瘙痒持续时间。
• 25 •中华中医药杂志(原中国医药学报)增刊
被激活,从而产生炎症。而炎症又有利于血液中免疫
细胞和因子(补体、抗体等)进入炎症部位,故大多
数慢性炎症机制可涉及免疫机制。炎性介质或免疫
因子炎症免疫细胞相应受体作用,可启动、激活细胞
各种功能,从而产生多种炎症、免疫因子。白刺花在
临床可用于治疗湿疹,皮肤过敏,属于Ⅰ型和Ⅳ型超
敏反应。因此选取了DNCB所致的DTH反应模型和小
鼠同种被动皮肤过敏反应。
以上2个实验结果表明:BuOH部分对二甲苯所
致小鼠耳肿胀有显著抑制作用,能显著降低小鼠腹
部皮肤毛细血管通透性,对DNCB所致的DTH的影响
有显著抑制作用,对右旋糖酐所致小鼠皮肤瘙痒的
瘙痒次数有显著减少和显著缩短瘙痒时间的作用。
因此可认为BuOH部分是白刺花的有效部位群,同时
BuOH部分得到的量较多,故对BuOH部分作进一步
的分离和有效部位群的筛选。而EtOAc部分对右旋
糖酐所致小鼠皮肤瘙痒的瘙痒次数有显著影响,也
将对其进行化学成分的研究。
参 考 文 献
[1] 云南省药材公司.云南中药资源名录.北京:科学出版社,1993:248
[2] 江苏新医学院.中药大词典(缩印本).上海:上海科技出版
社,1985: 721
[3] 毛晓健,温敏,蒋孝悝.白刺花水煎剂的部分药效学研究.云南
中医中药杂志,2009,30(5):53
[4] 徐叔云,卞濂如,陈修.药理实验方法学.2版.北京:人民卫生出
版社,1991:303,62-67,323,364,370
[5] 陈明岭,万惠颍,姚干,等.养血止痒胶囊对小鼠血虚及瘙痒模
型的影响.成都中医药大学学报,2001, 24(3): 27-30
[6] 陈慰峰.医学免疫学.3版.北京:人民卫生出版社,2001:6,11,197,206
表4 对右旋糖酐所致小鼠皮肤瘙痒的的影响(x-±s)
组别
Pet部分
EtOAc部分
BuOH部分
水层
EtOH总提物
扑尔敏
空白组
n
14
15
15
14
12
14
12
剂量 (g/kg)
0.175
0.030
0.285
1.350
1.900
0.005
等容积NS
瘙痒次数(次)
45.50±10.78
40.67±14.01*
42.07±12.15*
46.14±12.87
38.58±14.01*
29.21±10.26**
57.82±19.76
瘙痒时间(min)
5.03±1.43*
4.93±0.88
4.69±1.30*
4.60±1.43*
4.40±1.41*
3.09±1.11**
6.03±1.37
讨论
白刺花作为中草药中的清热药,主要用于湿热
痢疾、皮肤瘙痒、咽喉肿痛等症,其抗炎作用以对炎
症早期较强。课题组前期的研究中发现白刺花水煎
液对早期炎症模型:二甲苯引起的小鼠腹部皮肤及
耳廓肿胀均有较好的抑制作用,表明白刺花有对早
期炎症模型有较好的抑制作用,因此在有效部位群
的筛选过程中,笔者选用二甲苯所致小鼠皮肤毛细
血管通透性增加和二甲苯所致小鼠耳肿胀指标来作
为药理筛选指标。
过敏反应 (anaphylaxis)是指机体对某些抗原初
次应答后,再次接受相同抗原刺激时,发生的一种以
机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异免疫
应答。过敏反应又称超敏反应 (hypersensitivity)或变
态反应 (allergy)[6]。炎症与变态反应虽然是机体的两
种不同功能,但又是密切相关不可分割的,甚至是相
符重叠的。免疫因子相当于其化合物和生物学因子,
可引起伴有炎症的免疫反应,通过抗原与抗体或致
敏淋巴细胞相互作用,可导致各种炎症介质释放或
中药治疗73例脑梗塞后经验浅谈
田瑞琴1,田孝弟2
(1兰州军区临潼疗养院,兰州 710600,2临潼区骊兴药店,兰州 710600)
关键词:脑梗塞;中药疗法;临床经验
近年来,随着人们生活质量的不断提高,老年人
的数量也不断增加,与此同时,老年病也日趋增多。
尤其是脑梗塞的患者,常常在脑动脉硬化的基础上
发生的血流缓慢,血黏度增高致使官腔狭窄或闭塞
而引起相应的梗塞。基于脑梗塞的病理基础,降低
血管阻力,降低血黏度,增加脑血流量,改善脑梗塞
区域的血液循环,促进神经细胞功能恢复,一直是人
们关注,积极探索解决的问题。
资料和方法
1. 临床资料 1998年2月-2008年10月共收治脑