全 文 ：中国药师 年第 卷第 期 ,
大孔吸附树脂纯化满山红总黄酮工艺研究
张朝绅 安哗 张振秋 沈阳军区总医院药剂科 沈阳
摘 要 目的 从 种树脂中优选纯化满山红总黄酮的最佳型号 ,确定工艺条件及参数。方法 以饱和吸附量为指标 ,考察
种不同型号树脂的吸附能力 采用正交试验设计 ,以固形物中总黄酮含量为考察指标 ,对影响总黄酮提取工艺的因素进行
研究 。结果 种树脂中 , 型树脂对满山红总黄酮具有较好的吸附能力 树脂柱的径高比及样品溶液流速对纯化效果有
显著影响 。结论 经大孔吸附树脂纯化后 ,满山红中总黄酮含量达 ,表明本法可用于纯化满山红总黄酮 。
关键词 大孔吸附树脂 满山红总黄酮 分离纯化 正交试验
中图分类号 文献标识码 文章编号 拱 《 朋 习
雌 初
, , , 邓 叼 , , ,
甲
, 己 滋 ,
,
,
画
满山红为杜鹃花科植物兴安杜鹃 面
的干燥叶 ,是一种传统的药用植物 ,具有止咳 、化痰 、
平喘等功效 。本研究采用大孔吸附树脂对满山红总黄酮进
行富集纯化 ,考察相关影响吸附与解吸的条件 ,得出最佳纯
化工艺条件 ,明显提高了满山红总黄酮的纯度和得率 。
仪器与材料
仪器
一 分光光度仪 日本日立公司 ,电子分析天平 奥
豪斯公司 , 一 旋转蒸发器 上海亚荣生化仪器厂 ,离心
机 金坛市富华仪器有限公司 。
材料
满山红药材 产地云南 ,夏季末采收 ,经辽宁中医药大学
药学院李峰教授鉴定为杜鹃花科植物兴安杜鹃的干燥叶
芦丁对照品 中国药品生物制品检定所 ,批号 一
、 科 、 以 、 、 型大孔吸附树脂
河北沧州宝恩化工有限公司 , 型大孔吸附树脂 天
津海光化工有限公司 , 一 、 一 、 几 、 、
型大孔吸附树脂 上海南开大学化工厂 。
方法与结果
满山红总黄酮含量测定
标准曲线的制备 精密称取在 ℃减压干燥至
恒重的芦丁对照品 ,置 量瓶中 ,加 乙醇
适量使溶解并稀释至刻度 ,摇匀 。精密吸取 ,置
通讯作者 张朝绅 一 双 。
量瓶中 ,加 乙醇稀释至刻度 ,作为对照品溶液 。精密吸
取对照品溶液 , , , , , ,分别置 耐
量瓶中 ,各加 ·一三氯化铝溶液 , ·一醋酸
钾溶液 祖 ,加 乙醇稀释至刻度 ,摇匀 ,放置 ,以
相应的溶液为空白 ,在 波长处测定吸光度 ,以吸光度
为纵坐标 ,浓度 为横坐标 ,得标准曲线
, 。
供试品溶液制备及其总黄酮含量测定 将满山红
药材粉碎成粗粉 ,加 倍量 乙醇回流提取两次 ,每次
,滤过 ,合并滤液 ,回收乙醇并减压浓缩至干膏 ,将干膏粉
碎 ,过 目筛 ,加 倍量水 ,超声处理 而 ,离心 ,取上清
液即得供试溶液 。将供试品液稀释至一定浓度 ,精密量取
耐 ,置 耐量瓶中 ,照标准曲线制备项下的方法测定吸光
度 ,测得总黄酮含量为 · 一 。
工艺条件及参数的优化〔一〕
不同大孔吸附树脂对满山红总黄酮的吸附性能比较
分别称取 种型号树脂各 ,精密称定 ,依方法处理 ,将处
理好的湿树脂置锥形瓶中 ,量取供试品溶液 耐 ,每 而
振摇 巧 , 后测定溶液中的吸光度 ,结果见表 。由表
可知 ,在 种树脂中 型树脂对满山红总黄酮吸附性能
最好 ,每克干树脂可吸附 总黄酮 。
泄漏曲线的考察 取 处理好的 型树脂 ,装
人层析柱 。 中 ,在层析柱顶端不断加入供试
巴郊 夕
w w w · 研究报告
表
︵国已︶租盔淇镇闻混
树脂重量
不同树脂静态饱和吸附 比较
原溶液总黄酮量 吸附后总黄酮量 树脂的饱和吸附量
毗 ·一竺脚哪
即以
柳以
柳厌加
即功田
吨
盯
,
蛇
吨
以
团
」 】
样品瓶编号
品溶液 ,药液通过树脂柱 ,每 耐流出液收集 份 ,从中精密
量取 耐 ,置 量瓶中 ,加印 乙醇稀释至刻度 ,摇匀 ,精
密量取 而 ,置 量瓶中 ,加显色剂显色 ,加 乙醇稀
释至刻度 ,采用紫外一可见分光光度法测定吸光度 ,以吸光度
为纵坐标 ,流份编号为横坐标 ,绘制泄漏曲线 ,见图 。
图 大孔树脂吸附满山红总黄酮梯度洗脱曲线
正交试验设计 根据黄酮的理化性质与大孔树
脂的吸附特点 ,选择了树脂的径高比 、样品溶液流速 、过柱次
数 、洗脱液流速为四个因素 ,并结合预试结果确定了三个水
平设计试验方案 ,因素水平表见表 。
表 因素水平
﹃训
序号 径高比 样品溶液流速· 一 过柱次数
洗脱流速
· 一
正交试验方法及结果 根据因素水平表 ,以满山
红总黄酮的得率和纯度为考察指标 ,采用 蛛 ` 正交表安
排试验 ,每次试验精密取一定量的满山红样品液
一 湿法上样 ,吸附一定时间 ,依次用纯化水洗去水溶性杂
质 , 乙醇洗脱满山红总黄酮 由 “ ”试验结果确定 ,
选 乙醇为洗脱剂 ,收集 乙醇洗脱液 ,减压浓缩 ,低
温真空干燥至恒重 ,得棕黄色粉末 即黄酮粗品 ,计算得
率 ,测定纯度。结果见表 、表 。
表 正交试验设计
凡气`份乙气︸
份数
曰几
︸,`呀飞甘﹄︸,`八
︵代︶侧嗽督
塑摘
图 , 泄漏曲线
从图 可以看出 ,从第 份流份开始 ,吸光度值明显增
加 ,说明总黄酮开始泄漏 ,即当供试品溶液量达到 耐时 ,
树脂即达到泄漏点 ,此时 ,树脂 满山红总黄酮 二你
。从第 份开始 ,吸光度值变化趋于稳定 ,说明总黄酮的
吸附已趋于饱和 ,即当药液量达到 ,树脂即达到最大吸
附点 ,此时 ,树脂 满山红总黄酮 二 。综上所述 ,
树脂与满山红总黄酮的比例应该在 以上 ,才能使满山
红总黄酮完全吸附在树脂上而不损失 。
洗脱液醇浓度的确定 选用已处理好的 型大
孔吸附树脂 装柱 。 。精密吸取满 红样品
液 湿法上样 ,依次用纯化水 、 乙醇 、 乙醇 、
乙醇 、 乙醇各 耐梯度洗脱 ,洗脱液流速为
·而 一 ,每 收集一份 。测定满山红总黄酮含量 ,以样
品瓶编号为横坐标 ,总黄酮含量为纵坐标绘制洗脱曲线 ,见
图 。
洗脱曲线显示 ,满山红总黄酮主要集中在 和
乙醇洗脱液中 ,占全部醇洗脱液中满山红总黄酮的 。
在实验过程中发现洗脱剂醇浓度越高 ,洗脱液中醇溶性杂质
就越多 ,黄酮粗品中满山红总黄酮的纯度就偏低 。所以确定
洗脱条件为先用纯化水洗去水溶性杂质 ,再用 乙醇洗
脱满山红总黄酮 ,后用少量的 乙醇洗脱 ,收集 和
的洗脱部分 。
正交试验确定 型树脂吸附纯化满山红总黄
酮的最佳条件川 。
序号 人 总黄酮纯度 总黄酮得率
钻 获
科
综合平分
卯
卯
凡
一 一 一 一 一
表 方差分析
方差来源 离均差平方和 自由度 方差
,
印 ,
结果分析 由表 的 值可以看出 ,影响大孔吸
附树脂对满山红总黄酮富集的因素由大到小的顺序为
。由表 的方差分析结果可以看出 ,因素 的影响
极显著 ,因素 亦对大孔树吸附脂法富集满山红总黄酮有显
中国药师 年第 卷第 期
著性影响。结合极差分析可以初步得出大孔吸附树脂法富
集满山红总黄酮的最佳工艺条件为 , , ,即径高比为
,样品溶液流速为 而 一 ,药液过柱 次 ,洗脱流
速为 · 一 。
验证试验 取 批满山红药材 ,按上述最佳工艺条
件 ,进行总黄酮的纯化 ,计算得率 ,测定纯度。结果见表 。
表 验证试验结果
批次 药材重量 总黄酮得率 总黄酮纯度
由结果可知 , 批的纯化结果基本一致 ,说明该纯化工
艺合理 、稳定 。
讨论
满山红总黄酮主要成分杜鹃素为二氢黄酮是弱极性物
质 ,本实验通过对 种不同型号树脂对满山红总黄酮饱和
吸附量比较 ,发现弱极性与中等极性的树脂对满山红总黄酮
有较好的吸附作用 。从数据可以看出 ,弱极性树脂 型
树脂的饱和吸附量最大 ,经该树脂吸附后 ,总黄酮含量高 ,是
一种良好的吸附剂 。
本实验研究针对黄酮类化合物易溶于乙醇 ,而微溶于
水 溶于热水 的特点 ,将 乙醇回流提取液浓缩至膏状 ,
加热水超声 ,离心 ,取上层液上大孔树脂柱 ,大大增加了大孔
树脂的吸附能力 。超声之后 ,由于有部分不溶物 ,湿法上样
后堵塞柱子 ,所以对其进行离心处理 。本项研究中考察了超
声法与回流法处理样品溶液 ,发现回流法虽然能使干膏较好
的溶解 ,但对总黄酮的纯度影响较大 ,所以选择超声处理 。
满山红总黄酮的含量不高 ,富集 、分离 、纯化存在一定
的困难 。根据本文研究获得的参数 ,利用 大孔树脂吸
附提取分离满山红总黄酮 ,测得总黄酮得率为 ,纯度
为 的结果 ,而未经大孔树脂纯化的总黄酮得率为
,纯度为 ,表明大孔树脂吸附纯化法用于满山
红总黄酮提取分离 ,具有吸附快 、解吸率高 、吸附容量大 、洗
脱率高 、树脂再生简便等特点 ,而且产品的得率和纯度稳定 ,
是满山红深度利用的有效技术 。
参 考 文 献
中国药典【」 年版一 部
陈顺 ,关延彬 大孔树脂吸附骨碎补总黄酮性质的研究 【 医药导报 ,
,
曹群华 ,瞿伟普 ,李家贵 ,等 大孔树脂吸附纯化沙棘籽渣总黄酮的研究
【〕中国中药杂志 , 以科,
郭永学 ,李楠 ,饥燕昧 ,等 大孔吸附树脂纯化山植叶总黄酮工艺研究【
中成药 , 】巧 ,
张崇禧 ,郑友兰 ,张春红 ,等 大孔树脂吸附人参总皂昔工艺及再生使用的
研究 中国中药杂志 , ,
一 收稿 一一 修回
梯度洗脱法测定舒胸片中轻基红花黄色素 和阿魏酸的含量
高光伟 南阳市中心医院 河南南阳 冯向东 南阳市食品药品检验所
摘 要 目的 建立舒胸片 三七 、川芍 、红花 中舟基红花黄色素 、阿魏酸的含量 测定方法 。方法 用
,柱 , 卿 ,流动相为甲醇习 磷酸溶液 ,梯度洗脱 一 , 甲醇 一 , 一如 甲
醉 流速 耐 · 一 波长分别为 和 柱温 ℃。结果 舟基红花黄色素 、阿魏酸得到很好分离 ,线性关系
良好 ,在基红花黄色素 、阿魏酸的平均加样回收率分别为 , ,尺刀分别为 , 。结论 本法
结果准确 ,便于操作 ,可作为舒胸片的质量控制方法之一。
关键词 高效液相色谱法 舒胸片 舟基红花黄色素 阿魏酸
中图分类号 文献标识码 文章编号 风 伪 刁
目 对
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以刀 此 , , 刁 林 , 卯 五刀 , 人刀
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舒胸片由三七 、川芍 、红花三味中药组成 ,具有活血化 癖 、通络止痛之功效 ,适用于痪血阻滞所引起的胸痹 、胸闷
通讯作者 冯向东 一
外丫