全 文 ：表 3 回收率测定结果
编
号
样品含量
m /mg
对照品加入
量 m /mg
测得量
m /mg
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1 2． 70 2． 10 2． 08 99． 05
2 2． 71 2． 10 2． 05 97． 62
3 2． 69 2． 10 2． 06 98． 10 98． 10 0． 69
4 2． 70 2． 10 2． 04 97． 14
5 2． 68 2． 10 2． 06 98． 10
6 2． 72 2． 10 2． 07 98． 57
据文献报道［6］黄酮类化合物分子中有游离的 3 － OH 或 5 －
OH存在时，均可与 ZrOCl2在醇溶液中形成稳定的黄色锆络合
物，产生新的吸收。苦碟子提取物中 4 种黄酮均具有上述结构。
因此测定结果与高效液相色谱法检测结果相符。
文献报道［7］，AlCl3的显色反应主要发生在 3 位羟基、4 位羰
基和邻二酚羟基，只存在 5 位羟基、4 位羰基时黄酮类物质与三
氯化铝不发生反应。苦碟子提取物中的芹菜素 － 7 － O － β － D －
吡喃葡萄糖醛酸苷不具有邻二酚羟基，因此与三氯化铝不发生反
应。使用该方法未测出来。
通过方法学验证试验，最终确定采用差示分光光度法测定苦
碟子提取物中总黄酮的含量。该方法操作简单，并具有良好的稳
定性，重复性和准确性等优点。
参考文献:
［1］ 马 辉，沙 明．苦碟子化学成分和药理研究述要［J］．辽宁中医学
院学报，2005，7(3) :224．
［2］ 马陶陶，张群林，李 俊．中药总黄酮的含量测定方法［J］． 安徽医
药，2007，11(11) :1030．
［3］ 何 珺，颜仁梁，刘志刚． NaNO2 － Al(NO)3 － NaOH 比色法测定总
黄酮应用中的常见问题［J］．今日药学，2009，19(12) :18．
［4］ 郭亚建，范 莉，王晓强，等． 关于 NaNO2 － Al(NO)3 － NaOH 比色
法测定总黄酮方法的探讨［J］．药物分析杂志，2002，22(2) :97．
［5］ 郑媛媛，李 辰，封士兰，等．油橄榄叶中总黄酮含量测定方法的探
讨［J］．光谱学与光谱分析，2011，31(2) :547．
［6］ 康旭珍．差示分光光度法测定桑叶总黄酮含量［J］． 光谱实验室，
2005，22(3) :506．
［7］ 马陶陶，张群林，李 俊，等．三氯化铝比色法测定中药总黄酮方法
的探讨［J］．时珍国医国药，2008，19(1) :54．
收稿日期:2010-04-07; 修订日期:2011-08-01
基金项目:陕西省教育厅科学研究计划项目(No． 2010JK499) ;
陕西省咸阳市科技发展计划项目［No． 2010 － K14 － 02(5) ］
作者简介:卫 昊(1979-) ，男(汉族) ，陕西蓝田人，现任陕西中医学院讲
师，硕士学位，主要从事中药物质基础与药效毒理的相关性研究工作．
秦岭柴胡抗菌解热作用的实验研究
卫 昊1，刘 清1，卫伟光2
(1．陕西中医学院，陕西 咸阳 712046; 2．陕西省西安植物园，陕西 西安 710061)
摘要:目的 考察秦岭柴胡的解热、抗菌作用。方法 采用二倍稀释法检测秦岭柴胡对大肠杆菌、绿脓杆菌、金葡菌的
MIC、MBC;采用大肠杆菌内毒素家兔致热实验研究解热作用。结果 秦岭柴胡根部和地上部分大肠杆菌、金葡菌、绿脓杆
菌的 MIC分别为 9． 12，18． 25，18． 25，306，153，153 mg /ml;根部 MBC 均为 73 mg /ml。与模型对照组比较，秦岭柴胡根部
大、中、小剂量组对内毒素致发热家兔降温作用显著(P ＜ 0． 05)。结论 秦岭柴胡具有较强的解热、抗菌作用。
关键词:秦岭柴胡; 解热; 抗菌
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 02． 027
中图分类号:R285． 5 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2012)02-0315-02
秦岭柴胡 B． longicayle Wall． es DC． var． giradii Wolff 又名金
柴胡，为长颈柴胡 Bupleurum longicaule Wall． ex Dc．的一个变种，
具有发表祛风、清肝利胆、清心火、通经之功效，主治感冒、虚劳骨
蒸、月经不调、肝气不舒、黄疸等症［1］，药理学初步研究表明秦岭
柴胡及其所含皂苷具有解热、镇痛、镇静、镇咳等中枢神经系统抑
制作用，且能特异性的阻断胆碱酯酶活性，并具有显著的利尿作
用，其中柴胡皂苷 a具有抗炎、抗菌、保肝、强心，降压、降低血脂
等作用。秦岭柴胡常以全草入药，与同属药用植物柴胡以根部入
药有所差异。为了验证疗效，优选药用部位，本实验分别考察了
秦岭柴胡根部和地面部分的抗菌解热作用。
1 仪器与材料
1． 1 仪器 恒温恒湿培养箱(LRHS － 250B，上海跃进医疗器械
厂) ;电热手提式压力蒸气消毒器(YXQ·SG46·280 型，哈尔滨
松花江医疗器械厂)。
1． 2 药材与试剂 秦岭柴胡原植物采集于陕西省太白县海拔约
2 800 m的西太白鳌山，取其带根全草，经陕西中医学院王西芳教
授鉴定为伞形科(Umbelliferae)柴胡属(Bupleurum)金柴胡。复方
阿司匹林(陕西白鹿制药股份有限公司，批号:080101)。实验菌
株:大肠杆菌内毒素(SIGMA － ALDRICH． Inc)、大肠艾希氏菌
(ATCC35218)、金黄色葡萄球菌 (ATCC25923)、绿脓杆菌
(ATCC25923)均由陕西中医学院微生物实验室提供。其余试剂
均为分析纯。
1． 3 实验动物 新西兰大白兔:陕西长安斗门实验动物养殖场，
动物合格证号:2009 － 002。
2 方法与结果［2 ～ 8］
2． 1 抗菌作用
2． 1． 1 秦岭柴胡样品的制备 取柴胡根部药材适量，置合适圆底
烧瓶中，加入 10 倍量 65%乙醇，回流提取 2 次，每次约 2 h，合并
提取液，减压回收溶剂，挥至无醇味，定容即得。
2． 1． 2 MIC、MBC测定 按体外抗菌试验试管二倍稀释法测定药
物最低抑菌浓度(MIC)。秦岭柴胡根部提取液经 MH 肉汤培养
液二倍稀释为 7 ～ 10 管，其药物浓度分别为 73． 00，36． 50，18． 25，
9． 12，4． 56，2． 28 mg /ml 等依次递减，另设细菌对照管(不加药
液)、空白组。实验用菌株先用 MH 培养液配成 106CFU /ml 浓
度。上述各试验管中分别加入 0． 1 ml 菌液，混匀后各管内细菌
菌液终浓度为 105CFU /ml，置 37℃培养 24 h 后观察结果。凡药
物最低浓度的试管内无细菌生长者，确定为 MIC。取 MIC 终点
浓度以上未生长细菌的各稀释管内培养物，分别接种在琼脂平板
上，置 37℃培养 24 h后观察平板有无细菌生长，无细菌生长的最
低药物浓度为最小杀菌浓度(MBC)。结果见表 1 ～ 2。
·513·
LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 2 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 2 期
表 1 秦岭柴胡根部提取液 MIC的测定
菌株 药用部位
菌落生长情况
73． 00 mg·ml －1 36． 50 mg·ml －1 18． 25 mg·ml －1 9． 12mg·ml －1 4． 56 mg·ml －1 2． 28 mg·ml －1
大肠杆菌 根部 － － － － + +
金黄色葡萄球菌 根部 － － － + + +
绿脓杆菌 根部 － － － + + +
“ －”表示细菌生长抑制，培养液清亮;“ +”表示细菌生长，培养液混浊
表 2 秦岭柴胡地上部分提取液 MIC的测定
菌株 药用部位
菌落生长情况
306 mg·ml －1 153 mg·ml －1 76． 5 mg·ml －1 39． 2 mg·ml －1 19． 6 mg·ml －1 9． 8 mg·ml －1
大肠杆菌 地上部分 － + + + + +
金黄色葡萄球菌 地上部分 － － + + + +
绿脓杆菌 地上部分 － － + + + +
“ －”表示细菌生长抑制，培养液清亮;“ +”表示细菌生长，培养液浑浊
根部抑菌实验结果显示:大肠杆菌试管，1 至 3 管清亮透明，
从第 4 管开始出现轻度浑浊，第 5 管开始出现菌膜，提示大肠杆
菌的 MIC为 9． 12 mg /ml;金黄色葡萄球菌试管，1 至 2 管清亮透
明，从第 3 管开始出现浑浊，第 4 管开始出现菌膜，提示金黄色葡
萄球菌的 MIC 为 18． 25 mg /ml;绿脓杆菌试管，1 至 2 管清亮透
明，从第 3 管开始出现浑浊，第 4 管开始出现菌膜;提示绿脓杆菌
的 MIC为 18． 25 mg /ml。同法测得秦岭柴胡地上部分大肠杆菌
的 MIC为 306 mg /ml;金葡菌的 MIC为 153 mg /ml;绿脓杆菌 MIC
为 153 mg /ml。杀菌实验结果显示:秦岭柴胡根部大肠杆菌、金葡
菌、绿脓杆菌的 MBC均为 73 mg /ml，地上部分现有浓度未检出 3
种菌株的 MBC。
2． 2 解热作用［9，10］ 选用体质量 2kg 左右的健康家兔置于实验
环境中，取体温合格的健康家兔 30 只，按性别、体质量随机均分
为 5 组，即:模型对照组、秦岭柴胡(根部)小、中、大剂量组及阿
司匹林组。兔置固定器内固定，分别测肛温 2 次，以均值作为正
常体温。模型对照组和各药物组分别耳缘静脉注射大肠杆菌内
毒素(1μg /kg)。待体温升高超过 1℃后，分别灌胃秦岭柴胡小、
中、大剂量组(73，36． 5，18． 25 mg /ml)10 ml /kg 及阿司匹林组
300 mg /kg，模型对照组灌胃 0． 5%羧甲基纤维素钠 10 ml /kg。给
药后 60，90 ，120，180，240，300 min时，分别测量肛温。实验结果
以实测值表示，并通过致热 90 min 和给药后各时间点体温 －正
常体温的差值变化百分率进行组间 t检验处理，比较各组间的差
异。结果见表 3。
表 3 秦岭柴胡根部药材提取物对家兔体温的影响(珋x ± s)
组别 正常 致热后 90 min 给药后 60 min 给药后 90 min 给药后 120 min 给药后 180 min 给药后 240 min 给药后 300 min
模型对照 38． 75 ± 0． 17 39． 55 ± 0． 34 39． 83 ± 0． 12 39． 87 ± 0． 11 39． 82 ± 0． 08 39． 55 ± 0． 19 39． 46 ± 0． 18 39． 37 ± 0． 18
(2． 06 ± 0． 83) (2． 79 ± 0． 45) (2． 88 ± 0． 47) (2． 76 ± 0． 30) (2． 07 ± 0． 61) (1． 83 ± 0． 72) (1． 58 ± 0． 72)
阿司匹林 38． 70 ± 0． 15 39． 79 ± 0． 14 39． 75 ± 0． 17 39． 59 ± 0． 20﹡ 39． 41 ± 0． 19﹡﹡ 39． 24 ± 0． 23﹡ 39． 10 ± 0． 24﹡ 39． 01 ± 0． 24﹡
(2． 82 ± 0． 23) (2． 70 ± 0． 20) (2． 30 ± 0． 24)﹡ (1． 83 ± 0． 26)﹡﹡ (1． 39 ± 0． 39) (1． 03 ± 0． 41) (0． 79 ± 0． 39)
小剂量 38． 74 ± 0． 09 39． 83 ± 0． 11 39． 77 ± 0． 20 39． 69 ± 0． 21 39． 61 ± 0． 19﹡ 39． 42 ± 0． 22 39． 23 ± 0． 18 39． 11 ± 0． 20﹡
(2． 84 ± 0． 16) (2． 66 ± 0． 36) (2． 43 ± 0． 35) (2． 23 ± 0． 32)﹡ (1． 76 ± 0． 38) (1． 27 ± 0． 34) (0． 94 ± 0． 40)
中剂量 38． 66 ± 0． 17 39． 75 ± 0． 13 39． 70 ± 0． 11 39． 56 ± 0． 17 39． 42 ± 0． 20﹡﹡ 39． 33 ± 0． 18﹡﹡ 39． 20 ± 0． 17﹡ 39． 06 ± 0． 14﹡﹡
(2． 81 ± 0． 57) (2． 68 ± 0． 49) (2． 32 ± 0． 34) (1． 96 ± 0． 38)﹡ (1． 73 ± 0． 43)﹡﹡ (1． 39 ± 0． 34) (1． 03 ± 0． 18)
大剂量 38． 68 ± 0． 17 39． 74 ± 0． 16 39． 69 ± 0． 18 39． 50 ± 0． 18﹡﹡ 39． 34 ± 0． 20﹡﹡ 39． 18 ± 0． 24﹡ 39． 05 ± 0． 25﹡﹡ 38． 97 ± 0． 24﹡﹡
(2． 73 ± 0． 48) (2． 60 ± 0． 70) (2． 10 ± 0． 64)﹡ (1． 69 ± 0． 73)﹡﹡ (1． 29 ± 0． 79) (0． 95 ± 0． 80) (0． 73 ± 0． 56)﹡
与模型对照组比较，﹡ P ＜0． 05，﹡﹡P ＜0． 01;n =6;括号中数据为体温上升百分率(%)
实验结果显示:模型组、对照组和各药物组耳缘静脉注射
大肠杆菌内毒素(1 μg /kg)90 min 后，体温升高均在 1℃左
右，秦岭柴胡大剂量组于给药后 90，120，180，240，300 min，中
剂量组于给药后 90，120，240，300 min，小剂量组于给药后
120，300 min对大肠杆菌内毒素所致发热大鼠的体温均有不
同程度的降低作用。
3 讨论
秦岭柴胡属陕西重点保护的高山珍稀药用植物种类之一，临
床疗效显著，是陕西秦巴山区民间习用的重要中草药。抗菌实验
中，秦岭柴胡根部溶液浓度相对较小，便于观察透明或浑浊程度，
但秦岭柴胡地上部分因药液浓度大且颜色深，不便于观察其浑浊
程度，只能菌膜生长情况判定 MIC，最终结果亦证实，秦岭根部抗
菌活性要明显强于地面部分。预实验研究发现，秦岭柴胡地上部
分解热作用亦不明显，故本实验最终选择对秦岭柴胡根部进行解
热作用研究。另外，本实验药材样品采收时间、采收地域比较单
一，这些因素都会影响秦岭柴胡有效成分富集及药理作用，故下
一步研究应考虑选择不同地域，不同生长期的秦岭柴胡进行含量
比较研究，同时增加样本数量，以便更客观准确的分析地域、时间
对其有效成分含量积累变化及药效的影响。
参考文献:
［1］ 中国科学院西北植物研究所． 秦岭植物志(第 1 卷，第三册) ［M］．
北京:科学出版社，1981:390．
［2］ 李仪奎，王钦茂．中药药理实验方法学［M］．上海:上海科学技术出
社，1991:311．
［3］ 李钧敏，金则新，邵 红．大血藤叶片提取物的抑菌活性分析［J］．
中药材，2005，28(10) :906．
［4］ 张 俭，伍贤进，尹桂花，等． 痂囊腔菌素 A 体外抑菌作用的探讨
［J］．时珍国医国药，2006，17(12) :2414．
［5］ 徐元宏，万士林．中西药结合抗菌性“壳聚多糖”的体外抗菌效果的
实验研究［J］．中国微生态学杂志，2000，1(6) :327．
［6］ 冯文宇，肖顺汉，贾文祥．青银注射液抗病原菌实验研究［J］． 中成
药，2006，28(3) :424．
［7］ 陈苏婉，张守钗，王晓娟，等． 不同配比头孢噻肟钠 /他唑巴坦钠的
体外抗菌作用［J］．华西药学杂志，2009，24(1) :38．
［8］ 刘 堃． 牛蒡子水煎液、牛蒡苷和牛蒡苷元体外抗菌实验研究
［J］．天津药学，2008，20(4) :10．
［9］ 梁 涛，方泰惠，袁冬平，等．银翘败毒片抗炎与解热作用的实验研
究［J］．解放军药学学报，2007，23(6) :411．
［10］ 刘 萍，杨芳寅，周 素，等． 中药柴胡抗细菌内毒素的实验研究
［J］．中成药，2002，24(8) :627．
·613·
时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 2 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 2