全 文 ：网络出版时间：２０１４－０４－２５
网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｏｉ／１０．７６０６／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－１３８９．２０１４．０４．０２９．ｈｔｍｌ
梵净山雷山杜鹃根部真菌分离与鉴定
收稿日期：２０１３－１０－２０　　修回日期：２０１３－１２－２０
基金项目：贵州省农业科技攻关项目（黔科合ＮＹ字［２０１１］３０７６号）；贵州大学研究生创新基金（研农２０１３００４）。
第一作者：刘仁阳，男，硕士研究生，研究方向为野生植物资源保护与利用。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｕｒｅｎｙａｎｇ＠ｓｉｎａ．ｃｎ
通信作者：欧　静，女，副教授，博士，从事园林植物资源利用研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｏｌｏｒｏｊ＠１２６．ｃｏｍ
刘仁阳，欧　静，李冠楠，刘　玲，张伟丽
（贵州大学 林学院，贵阳　５５００２５）
摘　要　对雷山杜鹃根部真菌进行分离、鉴定，以期为雷山杜鹃等高山常绿杜鹃优良菌株的筛选奠定基础。
采用根段直接培养法分离真菌，根据形态学特征和ｒＤＮＡ　ＩＴＳ序列分析鉴定分离的菌株。结果表明，经形态
学观察，分离菌株分为２５个形态类型；ｒＤＮＡ　ＩＴＳ序列分析显示，２５个形态类型的菌株中，除６个形态类型的
菌株分类地位尚不能确定外，其余１９个形态类型的菌株都属于子囊菌门（Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）的真菌。综上说明，雷
山杜鹃根部真菌种类丰富，其中包括典型的欧石楠类菌根（ＥＲＭ）真菌－树粉孢属（Ｏｉｄｉｏｄｅｎｄｒｏｎ，Ｍｙｘ－
ｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ）真菌。
关键词　雷山杜鹃；欧石楠类菌根；ｒＤＮＡ　ＩＴＳ；树粉孢属
中图分类号　Ｓ６８５．２１　　　文献标志码　Ａ　　　　　文章编号　１００４－１３８９（２０１４）０４－０１７８－０８
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｕｎｇｉ　ｏｎ　Ｒｏｏｔｓ　ｏｆ
Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｌｅｉｓｈａｎｉｃｕｍｉｎ　Ｆａｎｊｉｎｇ　Ｍｏｕｎｔａｉｎ
ＬＩＵ　Ｒｅｎｙａｎｇ，ＯＵ　Ｊｉｎｇ，ＬＩ　Ｇｕａｎｎａｎ，ＬＩＵ　Ｌｉｎｇ　ａｎｄ　ＺＨＡＮＧ　Ｗｅｉｌｉ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ　５５００２５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｆｕｎｇｉ　ｏｎ　ｒｏｏｔｓ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｌｅｉｓｈａｎｉｃｕｍ ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ａｎｄ　ｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ　ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｅｓｔａｂ－
ｌｉｓｈ　ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｅｘｃｅｌｅｎｔ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｖｅｒ　ｇｒｅｅｎ　Ａｌｐｉｎｅ　ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｌｉｋｅ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎ－
ｄｒｏｎ　ｌａｐｐｏｎｉｃｕｍ．Ｆｕｎｇｕｓ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ　ｒｏｏｔ　ｓｅｇｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｆｕｎ－
ｇａｌ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｒＤＮＡ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｏｂｓｅｒ－
ｖａｔｉｏｎ，ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｉｎｔｏ　２５ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｔｙｐｅｓ；Ｉｎ　ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｒＤＮＡ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ，１９ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｔｙｐｅｓ　ｏｆ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｂｅｌｏｎｇｅｄ　ｔｏ　Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ　ｏｔｈｅｒ
６ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｔｙｐｅｓ　ｏｆ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｒｅｍａｉｎｅｄ　ｕｎｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｉｔ　ａｌｓｏ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｆｕｎｇａｌ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｎ　ｒｏｏｔｓ
ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｌｅｉｓｈａｎｉｃｕｍ ｗｅｒｅ　ｒｉｃｈ．Ｓｐｅｃｉａｌｙ，Ｏｉｄｉｏｄｅｎｄｒｏｎ，ａ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　ｔｙｐｉｃａｌ　ｅｒｉｃｏｉｄ　ｍｙｃｏｒ－
ｒｈｉｚａｌ　ｆｕｎｇｉ，ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｌｅｉｓｈａｎｉｃｕｍ ｅｔ　Ｘ．Ｓ．Ｚｈａｎｇ　ｅｘ　Ｃｈａｍｂ；Ｅｒｉｃｏｉｄ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ；ｒＤＮＡ　ＩＴＳ；
Ｏｉｄｉｏｄｅｎｄｒｏｎ
　　杜鹃花科（Ｅｒｉｃａｃｅａｅ）约３０５属３　３５０种植
物，除沙漠地区外在全世界多地区均有分布，广布
于南北半球的温带及北半球亚寒带，少数属种环
北极或北极分布，也分布于热带高山［１］。调查研
究认为，杜鹃花科植物之所以分布广泛、且可以在
恶劣环境下生长，这与和杜鹃花科植物共生的真
菌有着举足轻重的关系，因为杜鹃花类植物能形
成欧石楠类菌根（Ｅｒｉｃｏｉｄ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ，ＥＲＭ）。
·８７１·
ＥＲＭ真菌能够提高杜鹃幼苗移植成活率［２］，增强
杜鹃花类植物对有毒金属的耐性［３］，促进植株生
长和养分吸收［４－６］。１９７４年，Ｒｅａｄ等［７］首次从杜
鹃花科植物中分离出ＥＲＭ真菌Ｐｅｚｉｚｅｌｌａ　ｅｒｉｃａｅ
Ｒｅａｄ，以后许多学者对ＥＲＭ 解剖结构与侵染特
征［８－１０］、真菌多样性［１１－１４］、功能［２，６，１５］等方面进行
了研究。分离与鉴定是ＥＲＭ真菌多样性及功能
研究的基础；近年来，随着分子生物学的发展，利
用分子技术手段进行菌根真菌的鉴定及系统发育
研究，已经成为菌根研究的热点之一。例如，陈真
等［１６］分离培养了锦绣杜鹃（Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｐｕｌ－
ｃｈｒｕｍＳｗｅｅｔ）根部的菌根真菌，利用ｒＤＮＡ　ＩＴＳ
序列对分离的１６株菌株进行分类分析，发现锦绣
杜鹃根系主要菌根真菌类型都与其他杜鹃花科植
物的菌根真菌或根系内生真菌具有较近的亲缘
关系。
雷山杜鹃（Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｌｅｉｓｈａｎｉｃｕｍ Ｆａｎｇ
ｅｔ　Ｘ．Ｓ．Ｚｈａｎｇ　ｅｘ　Ｃｈａｍｂ．）是杜鹃花科杜鹃属
（Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ）常绿灌木，分布于贵州雷山（雷
公山）、印江（梵净山）等地海拔１　８５０～２　３００ｍ
的山坡灌木丛或草地上，树冠圆整，花姿婀娜，花
期４月，是一种观赏潜力较大的园林树种。有关
雷山杜鹃菌根方面的研究鲜见报道。且中国西南
是杜鹃花类植物分布中心，全面开展杜鹃花类植
物菌根真菌多样性研究，必将有助于理解植物与
真菌共生关系对环境的适应及生物多样性维持机
制［１４］。本研究采用根段直接培养法［１２］，将传统形
态分类与现代分子生物学技术相结合，对雷山杜
鹃根部真菌进行分离、鉴定，旨在为开展雷山杜鹃
等高山常绿杜鹃ＥＲＭ真菌研究奠定基础。
１　材料与方法
１．１　材 料
１．１．１　根样采集　于２０１２年５月上旬采集贵州
省梵净山自然保护区自然生境中雷山杜鹃的生活
根，连同泥土保湿放置在冰桶内，带回实验室。梵
净山自然保护区（北纬２７°４９′５０″～２８°１′３０″，东经
１０８°４５′５５″～１０８°４８′３０″），位于贵州省东北部江
口、印江、松涛三县交界处。雷山杜鹃分布于高山
杜鹃常绿矮林，海拔２　１００～２　３００ｍ，山地暗色矮
林土，优势种为高山杜鹃（Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｌａｐ－
ｐｏｎｉｃｕｍ（Ｌ．）Ｗａｈｌ．）和冷箭竹（Ｂａｓｈａｎｉａ　ｆａｎｇｉ－
ａｎａ（Ａ．Ｃａｍｕｓ）Ｋｅｎｇ　ｆ．）。
１．１．２　供试培养基　菌株分离和鉴定所使用的
培养基分别为马丁－孟加拉红培养基（ＭＡ）和麦芽
提取物培养基（ＭＥＡ）［１７］。菌落生长速度及生长
速率测定采用ＰＤＡ培养基。
１．２　方 法
１．２．１　菌株分离　采用根段直接培养法，清洗和
挑选健康的生活根，沥干水分后用φ＝７２％的酒
精漂洗，然后用φ＝１０％的家用８４消毒液浸泡１５
～２０ｍｉｎ，最后用无菌水冲洗３～５次，剪切成长
０．５ｃｍ的根段，共剪取１００条根段，放入 ＭＡ培
养基（每板５条）。用接种棒蘸少量洗涤根段后的
无菌水均匀涂抹于培养皿，作为对照。置于２５℃
培养箱黑暗培养２～４周［１７］。
１．２．２　菌株形态观察　待菌丝从根段横切面长
出后，采用菌丝尖端挑取法将其转入 ＭＥＡ培养
基，２５℃黑暗倒置培养２周，肉眼观察菌落形态
的一致性和均匀性，若有形态差异，进行２次分
离；２周后对菌落形态特征稳定的菌株观察记录。
菌落形态特征描述依据 ＭｃＬｅａｎ等［１８］和Ｊｏｈａｎｓ－
ｓｏｎ等［１９］的方法。指标包括菌落颜色、质地、外
形、是否有分泌物、直径等。
１．２．３　菌落生长速度及生长速率测定　将目的
菌株接种至 ＰＤＡ 培养基，２５ ℃黑暗倒置培养
１０ｄ后，沿菌落边缘用直径为５ｍｍ的打孔器打
出菌饼，接种至ＰＤＡ培养基。每平板接１个菌
饼，菌丝面朝下，每个培养皿３次重复，２５℃培养
箱中黑暗倒置培养。接种２ｄ后，每隔２４ｈ用十
字交叉法测量菌落直径，依据菌落直径的净生长
随时 间 变 化 绘 制 菌 落 生 长 曲 线，数 据 采 用
ＳＰＳＳ１８．０统计软件分析。
１．２．４　菌株分子生物学鉴定　真菌总ＤＮＡ提
取及ＰＣＲ扩增参见陈真等［１６］的方法。ＰＣＲ扩增
产物的检测及测序：ＰＣＲ产物１２ｇ／Ｌ的Ａｇａｒｏｓｅ
在８０Ｖ电压下电泳４０ｍｉｎ，ＢＩＯ－ＲＡＤ凝胶成像
系统检测，若条带清晰，则样品可用于测序。ＰＣＲ
扩增产物由北京诺赛基因组研究中心有限公司进
行测序。将所得序列在 ＧｅｎＢａｎｋ数据库中进行
ＢＬＡＳＴ相似性比对，下载相似性较高的序列，经
Ｃｌｕｓｔａｌ　Ｘ软件比对并校正后［２０］，采用 ＭＥＧＡ３．１
软件的Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ程序构建系统发育树。
２　结果与分析
２．１　菌株形态观察
从雷山杜鹃根部分离纯化出２５株菌株，依据
菌落形态特征，分为２５个类型（表１）。
·９７１·４期 刘仁阳等：梵净山雷山杜鹃根部真菌分离与鉴定
表１　ＭＥＡ培养基上菌落特征
Ｔａｂｌｅ　１　Ｃｏｌｏｎｙ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ　ｏｎ　ＭＥＡ　ｍｅｄｉｕｍ
类型
Ｔｙｐｅ
菌株编号
Ｃｏｄｅ
颜色
Ｃｏｌｏｒ
质地
Ｔｅｘｔｕｒｅ
菌落外形
Ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ
ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｌｏｎｙ
液体分泌物
Ｅｘｕｄａｔｅ
直径／ｍｍ
Ｄｉａｍｅｔｅｒ
１ ＬＳＡ０１ 白色 Ｗｈｉｔｅ 绒毡 Ｔａｐｅｔｕｍ 不规则 Ａｂｎｏｒｍｉｔｙ 浅黄色Ｌｉｇｈｔ　ｙｅｌｏｗ　 ４０～４７
２ ＬＳＡ０２ 白色 Ｗｈｉｔｅ 绒毡 Ｔａｐｅｔｕｍ 不规则 Ａｂｎｏｒｍｉｔｙ 黑色Ｂｌａｃｋ　 ３８～５１
３ ＬＳＡ０３ 棕灰色Ｂｒｏｗｎ　ｇｒｅｙ 绒毡 Ｔａｐｅｔｕｍ 圆形隆起 Ｍｉｄｄｌｅ　ｂｕｌｇｅ 黑色Ｂｌａｃｋ　 ３８～３９
４ ＬＳＡ０４ 棕黑色Ｂｒｏｗｎ　ｂｌａｃｋ 绒毡 Ｔａｐｅｔｕｍ 圆形 Ｃｉｒｃｕｌａｒ 棕色Ｂｒｏｗｎ　 ５４
５ ＬＳＡ０５ 浅黄色 Ｌｉｇｈｔ　ｙｅｌｏｗ 绒毡 Ｔａｐｅｔｕｍ 圆形 Ｃｉｒｃｕｌａｒ 黑色Ｂｌａｃｋ　 ３１～４５
６ ＬＳＡ０６ 浅灰色 Ｌｉｇｈｔ　ｇｒｅｙ 绒毛Ｆｌｕｆｆｙ 圆形隆起 Ｍｉｄｄｌｅ　ｂｕｌｇｅ 浅绿色 Ｌｉｇｈｔ　ｇｒｅｅｎ　 ３２～３３
７ ＬＳＡ０７ 青棕色 Ｌｉｖｉｄ　ｂｒｏｗｎ 绒毡 Ｔａｐｅｔｕｍ 圆形 Ｃｉｒｃｕｌａｒ 无 Ｎｏｔｈｉｎｇ　 ３８～４１
８ ＬＳＡ０８ 乳白色 Ｍｉｌｋ　ｗｈｉｔｅ 绒毡 Ｔａｐｅｔｕｍ 圆形隆起 Ｍｉｄｄｌｅ　ｂｕｌｇｅ 无 Ｎｏｔｈｉｎｇ　 ２１～２８
９ ＬＳＡ０９ 白色 Ｗｈｉｔｅ 绒毡 Ｔａｐｅｔｕｍ 圆形 Ｃｉｒｃｕｌａｒ 无 Ｎｏｔｈｉｎｇ　 １０
１０ ＬＳＡ１０ 浅黄色 Ｌｉｇｈｔ　ｙｅｌｏｗ 蜡状 Ｗａｘｙ 圆形 Ｃｉｒｃｕｌａｒ 黑色Ｂｌａｃｋ　 ３１
１１ ＬＳＢ０１ 外白色内棕色 Ｗｈｉｔｅ　ｏｕｔｓｉｄｅ　ａｎｄ　ｂｒｏｗｎ　ｉｎｓｉｄｅ 绒毡 Ｔａｐｅｔｕｍ 圆形褶皱 Ｃｉｒｃｕｌａｒ　ｆｏｌｄｓ 绿色 Ｇｒｅｅｎ　 ３１～３４
１２ ＬＳＢ０２ 外乳白色内白色 Ｍｉｌｋ　ｗｈｉｔｅ　ｏｕｔｓｉｄｅ　ａｎｄ　ｗｈｉｔｅ　ｉｎ－ｓｉｄｅ 绒毛Ｆｌｕｆｆｙ 圆形隆起 Ｍｉｄｄｌｅ　ｂｕｌｇｅ 无 Ｎｏｔｈｉｎｇ　 ２３～２４
１３ ＬＳＢ０３ 外浅黄色内浅灰色 Ｌｉｇｈｔ　ｙｅｌｏｗ　ｏｕｔｓｉｄｅ　ａｎｄ　Ｌｉｇｈｔｇｒｅｙ　ｉｎｓｉｄｅ
绒毡 Ｔａｐｅｔｕｍ 圆形隆起 Ｍｉｄｄｌｅ　ｂｕｌｇｅ 黑色Ｂｌａｃｋ　 １６～１７
１４ ＬＳＢ０４ 外白色内黑色 Ｗｈｉｔｅ　ｏｕｔｓｉｄｅ　ａｎｄ　ｂｌａｃｋ　ｉｎｓｉｄｅ 绒毡 Ｔａｐｅｔｕｍ 圆形 Ｃｉｒｃｕｌａｒ 棕黑色Ｂｒｏｗｎ　ｂｌａｃｋ　 ２８～３１
１５ ＬＳＢ０５ 外白色内灰色 Ｗｈｉｔｅ　ｏｕｔｓｉｄｅ　ａｎｄ　ｇｒｅｙ　ｉｎｓｉｄｅ 绒毛Ｆｌｕｆｆｙ
圆形或不规则 Ｃｉｒｃｕｌａｒ
ｏｒ　ａｂｎｏｒｍｉｔｙ
黑色Ｂｌａｃｋ　 ２１～２６
１６ ＬＳＢ０６ 白色 Ｗｈｉｔｅ 蜡状 Ｗａｘｙ 圆形 Ｃｉｒｃｕｌａｒ 褐色Ｂｒｏｗｎｉｓｈ　 ２２～２４
１７ ＬＳＢ０７ 外白色内乳白色 Ｗｈｉｔｅ　ｏｕｔｓｉｄｅ　ａｎｄ　ｍｉｌｋ　ｗｈｉｔｅ　ｉｎ－ｓｉｄｅ 绒毡 Ｔａｐｅｔｕｍ 圆形 Ｃｉｒｃｕｌａｒ 无 Ｎｏｔｈｉｎｇ　 １９～２１
１８ ＬＳＢ０８ 外乳白色内白色 Ｍｉｌｋ　ｗｈｉｔｅ　ｏｕｔｓｉｄｅ　ａｎｄ　ｗｈｉｔｅ　ｉｎ－ｓｉｄｅ 绒毛Ｆｌｕｆｆｙ 圆形 Ｃｉｒｃｕｌａｒ 无 Ｎｏｔｈｉｎｇ　 ２６～２９
１９ ＬＳＢ０９ 青棕色 Ｌｉｖｉｄ　ｂｒｏｗｎ 绒毡 Ｔａｐｅｔｕｍ 圆形 Ｃｉｒｃｕｌａｒ 浅灰色 Ｌｉｇｈｔ　ｇｒｅｙ　 ２０～２２
２０ ＬＳＢ１０ 深灰色 Ｄａｒｋ　ｇｒｅｙ 绒毛Ｆｌｕｆｆｙ
圆形或不规则 Ｃｉｒｃｕｌａｒ
ｏｒ　ａｂｎｏｒｍｉｔｙ
浅灰色 Ｌｉｇｈｔ　ｇｒｅｙ　 １４～１６
２１ ＬＳＢ１１ 乳白色 Ｍｉｌｋ　ｗｈｉｔｅ 绒毡 Ｔａｐｅｔｕｍ 圆形 Ｃｉｒｃｕｌａｒ 无 Ｎｏｔｈｉｎｇ　 ３２～３５
２２ ＬＳＢ１２ 外乳白色内白色 Ｍｉｌｋ　ｗｈｉｔｅ　ｏｕｔｓｉｄｅ　ａｎｄ　ｗｈｉｔｅ　ｉｎ－ｓｉｄｅ 绒毡 Ｔａｐｅｔｕｍ 圆形 Ｃｉｒｃｕｌａｒ 无 Ｎｏｔｈｉｎｇ　 ２４～２７
２３ ＬＳＢ１３ 乳白色 Ｍｉｌｋ　ｗｈｉｔｅ 蜡状 Ｗａｘｙ 圆形隆起 Ｍｉｄｄｌｅ　ｂｕｌｇｅ 无 Ｎｏｔｈｉｎｇ　 １３～１４
２４ ＬＳＢ１４ 外乳白色内白色 Ｍｉｌｋ　ｗｈｉｔｅ　ｏｕｔｓｉｄｅ　ａｎｄ　ｗｈｉｔｅ　ｉｎ－ｓｉｄｅ 绒毡 Ｔａｐｅｔｕｍ
圆形褶皱，中间隆起 Ｃｉｒ－
ｃｕｌａｒ　ｆｏｌｄｓ，ｍｉｄｄｌｅ　ｂｕｌｇｅ
无 Ｎｏｔｈｉｎｇ　 ２６～２７
２５ ＬＳＢ１５ 外乳白色内青绿色 Ｍｉｌｋ　ｗｈｉｔｅ　ｏｕｔｓｉｄｅ　ａｎｄ　ｄａｒｋｇｒｅｅｎ　ｉｎｓｉｄｅ
绒毡 Ｔａｐｅｔｕｍ 圆形 Ｃｉｒｃｕｌａｒ 黑色Ｂｌａｃｋ　 １８～２１
　　菌落颜色深浅不一，有白色、灰色、黑色等，但
以浅色为主。质地多为绒毛状和绒毡状，少数为
蜡状。生长最快的菌株菌落直径可达５４ｍｍ；最
慢的仅有１０ｍｍ。多数菌落有明显的液体分泌
物，且液体分泌物颜色以深色为主。菌落外形以
圆形占主导地位，少数为不规则。
２．２　菌落生长速度及生长速率
由图１可知，２５株菌株在相同的培养条件
下，生长速度不同，根据生长快慢可将其分为慢速
组、匀速组、较快组、快速组４组。菌落生长速度
差异聚类分析结果见图２，以株菌落生长速度为
样本，以欧氏距离为尺度，采用 Ｗａｒｄ法进行系统
聚类，对菌株生长速度差异进行化分，当欧式值为
５．９６时，慢速组为１３、１５、１７、１９、２０、２３、２５类７
个类型，匀速组为３、８、９、１１、１４、２１、２２类７个类
型；较快组为１、６、１２、１６、１８、２４类６个类型；快速
组为２、４、５、７、１０类５个类型。
２５株菌株在ＰＤＡ培养基上２５℃黑暗倒置
培养第６天时的菌落生长速率见图３。由图３可
知，菌落生长速率最快的为第７类型的菌株，生长
速率最慢的为第２３类型的菌株。在０．０１水平
上，第２与第４类、第８与第１４类、第１７与第１９、
·０８１· 西　北　农　业　学　报 ２３卷
２０类２个类型、第１３与２３类、第１与第２４类、第
１５和与２５类之间差异不显著；其余各菌株菌落
生长速率之间差异极显著。
２．３　菌株ＩＴＳ序列鉴定及系统发育分析
测得的序列与 ＮＣＢＩ数据库进行比对，获得
与Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｌｅｉｓｈａｎｉｃｕｍ 相似度最高的真
菌ＩＴＳ序列（表２）。以亲缘关系相对较远的
Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ　ｃｏｍｍｕｎｅ （ＧｅｎＢａｎｋ 登 录 号
ＥＦ１５５５０５）为外群，利用 ＭＥＧＡ　３．１的 Ｎｅｉｇｈ－
ｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ构建系统发育树（图４）。菌落类型１、
２、７、１２、１３、１６、１８、２２、２４的这９株菌株在 ＮＪ树
上与 Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ　ｅｒｉｃａｅ 聚在一起，获得
１００％的支持率，序列相似率为９９％～１００％；但
出现了２个小分支，支持率均为８５％，表明这９
株菌株与Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ　ｅｒｉｃａｅ具有同源性。
菌落类型２３与 Ｈｅｌｏｔｉａｌｅｓ　ｓｐ．聚在一起获得
９９％的支持率，序列相似率为１００％，说明此类型
菌株是Ｈｅｌｏｔｉａｌｅｓ　ｓｐ．的同源或同一种。菌落类
型１５、１７、１９、２０、２５的５株菌株与Ｏｉｄｉｏｄｅｎｄｒｏｎ
ｓｐ．聚在一起，获得９９％的持率，序列相似率达到
１００％，表明这５株菌株是Ｏｉｄｉｏｄｅｎｄｒｏｎｓｐ．的同
源或同一种。
菌落类型１１和２１与 Ｍｏｌｌｉｓｉａ　ｃｉｎｅｒｅａ聚在
一起，分别获得７４％和９９％的支持率，序列相似
率均为９９％，说明菌落类型１１是 Ｍｏｌｌｉｓｉａ　ｃｉｎｅ－
ｒｅａ的同源或同一种，菌落类型２１与Ｍｏｌｌｉｓｉａ　ｃｉ－
ｎｅｒｅａ的亲缘关系较近。菌落类型４、１４分别与未
知类型聚在一起，组内相似率和支持率均为
１００％，说明这２个菌落类型的真菌是未知类型的
同源或同一种。菌落类型８与Ｈｙｐｏｃｒｅａ　ｐａｒａｐ－
ｉｌｕｌｉｆｅｒａ聚在一起，获得９９％的支持率，序列相
似率达到１００％，说明此类型菌株是 Ｈｙｐｏｃｒｅａ
ｐａｒａｐｉｌｕｌｉｆｅｒａ的同源或同一种。菌落类型９与
Ｐｏｃｈｏｎｉａ　ｂｕｌｂｉｌｌｏｓａ聚在在一起，获得１００％的支
持率和相似率，表明此类型菌株是Ｐｏｃｈｏｎｉａ　ｂｕｌ－
ｂｉｌｌｏｓａ的同源或同一种。
菌落类型３、５、６、１０都与 Ｕｎｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｆｕｎｇｕｓ
聚在一起，序列相似率均为１００％，但支持率较
低，仅为６８％，表明它们可能属于亲缘关系较近
的４个不同种。
图１　分离菌株在ＰＤＡ培养基上菌落生长曲线
Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｉｎ　ＰＤＡ　ｍｅｄｉｕｍ
图２　分离菌株在ＰＤＡ培养基上菌落生长聚类图
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｉｎ　ＰＤＡ　ｍｅｄｉｕｍ
·１８１·４期 刘仁阳等：梵净山雷山杜鹃根部真菌分离与鉴定
　　柱状图上端不同大写字母表示差异达到极显著水平（Ｐ＜０．０１）　Ｄａｔａ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃａｐｉｔａｌ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ａｒｅ　ｈｉｇｈｌｙ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｏｐ（Ｐ＜０．０１）
图３　分离菌株在ＰＤＡ培养基上菌落直径生长速率
Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｉｎ　ＰＤＡ　ｍｅｄｉｕｍ
表２　雷山杜鹃菌根真菌ｒＤＮＡ　ＩＴＳ序列ＢＬＡＳＴ结果
Ｔａｂｌｅ　２　ＢＬＡＳＴ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｒＤＮＡ　ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ　ｓｐａｃｅｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｌｅｉｓｈａｎｉｃｕｍ
菌株编号
Ｃｏｄｅ
亲缘关系最近的菌种
Ｃｌｏｓｅｓｔ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｍａｔｃｈ
亲缘关系最近种的ＧｅｎＢａｎｋ登录号
ＧｅｎＢａｎｋ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ
Ｎｏ．ｏｆ　ｃｌｏｓｅｓｔ　ｍａｔｃｈ
覆盖比率
Ｑｕｅｒｙ
ｃｏｖｅｒａｇｅ
序列相似率／％
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ｉｄｅｎｔｉｔｙ
ＬＳＡ０２　 Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ　ｅｒｉｃａｅ　 ＪＸ４０６５１６　 ９９　 １００
ＬＳＡ０７　 Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ　ｅｒｉｃａｅ　 ＨＱ１５７９０３　 １００　 ９９
ＬＳＢ０２　 Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ　ｅｒｉｃａｅ　 ＥＵ８８０５８７　 １００　 ９９
ＬＳＢ０３　 Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ　ｅｒｉｃａｅ　 ＥＵ８８０５８７　 １００　 ９９
ＬＳＢ０８　 Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ　ｅｒｉｃａｅ　 ＥＵ８８０５８７　 １００　 ９９
ＬＳＢ１２　 Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ　ｅｒｉｃａｅ　 ＥＵ８８０５８７　 １００　 ９９
ＬＳＢ１４　 Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ　ｅｒｉｃａｅ　 ＥＵ８８０５８７　 １００　 ９９
ＬＳＢ０６　 Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ　ｅｒｉｃａｅ　 ＡＹ８５３１６７　 １００　 ９９
ＬＳＡ０１　 Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ　ｅｒｉｃａｅ　 ＪＸ４０６５１６　 １００　 ９９
ＬＳＡ０４ Ｆｕｎｇａｌ　ｓｐ． ＫＣ５０６３３４　 １００　 １００
ＬＳＢ０４ Ｆｕｎｇａｌ　ｓｐ． ＦＪ６１２８４２　 １００　 １００
ＬＳＢ１３　 Ｈｅｌｏｔｉａｌｅｓ　ｓｐ． ＨＱ２０７０６８　 １００　 １００
ＬＳＡ０８　 Ｈｙｐｏｃｒｅａ　ｐａｒａｐｉｌｕｌｉｆｅｒａ　 ＡＹ２４１５８７　 １００　 １００
ＬＳＢ０１　 Ｍｏｌｌｉｓｉａ　ｃｉｎｅｒｅａ　 ＡＹ２５９１３７　 １００　 ９９
ＬＳＢ１１　 Ｍｏｌｌｉｓｉａ　ｃｉｎｅｒｅａ　 ＡＹ２５９１３７　 １００　 ９９
ＬＳＢ０５　 Ｏｉｄｉｏｄｅｎｄｒｏｎｓｐ． ＥＵ８８８６３２　 １００　 １００
ＬＳＢ０７　 Ｏｉｄｉｏｄｅｎｄｒｏｎｓｐ． ＥＵ８８８６３１　 ９９　 １００
ＬＳＢ０９　 Ｏｉｄｉｏｄｅｎｄｒｏｎｓｐ． ＥＵ８８８６３２　 １００　 １００
ＬＳＢ１０　 Ｏｉｄｉｏｄｅｎｄｒｏｎｓｐ． ＥＵ８８８６３２　 ９９　 １００
ＬＳＢ１５　 Ｏｉｄｉｏｄｅｎｄｒｏｎｓｐ． ＥＵ８８８６３２　 １００　 １００
ＬＳＡ０９　 Ｐｏｃｈｏｎｉａ　ｂｕｌｂｉｌｌｏｓａ　 ＪＱ７８０６６１　 １００　 １００
ＬＳＡ０３ Ｕｎｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｆｕｎｇｕｓ　 ＦＮ６１０９９６　 １００　 １００
ＬＳＡ０５ Ｕｎｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｆｕｎｇｕｓ　 ＦＮ６１０９９６　 １００　 １００
ＬＳＡ０６ Ｕｎｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｆｕｎｇｕｓ　 ＦＮ６１０９９７　 １００　 １００
ＬＳＡ１０ Ｕｎｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｆｕｎｇｕｓ　 ＦＮ６１０９９７　 １００　 １００
·２８１· 西　北　农　业　学　报 ２３卷
图４　基于各菌株及来自ＧｅｎＢａｎｋ的相似真菌的ＩＴＳ序列构建的ＮＪ系统发育树
Ｆｉｇ．４　ＮＪ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒｅｅ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｒＤＮＡ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｆｒｏｍ　ｈａｉｒ　ｒｏｏｔｓ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ
ｌｅｉｓｈａｎｉｃｕｍａｎｄ　ａｌｏｎｇ　ｗｉｔｈ　ｋｎｏｗｎ　ｅｒｉｃｏｉｄ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ＧｅｎＢａｎｋ　ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ
３　讨 论
本研究从雷山杜鹃根部分离出２５株菌株。
依据菌落形态特征分为２５类，菌落颜色以浅色为
主，这与张春英等［１７］从云锦杜鹃（Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ
ｆｏｒｔｕｎｅｉ　Ｌｉｎｄｌ．）根系中分离的菌株菌落颜色类
似。多数菌落有明显的液体分泌物，而从锦绣杜
鹃根系中分离的菌株菌落液体分泌物很少［１６］。
ＩＴＳ序列分析表明，雷山杜鹃根系分离真菌的主
体是子囊菌门（Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）的Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ
ｅｒｉｃａｅ，共有９株菌株与Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ　ｅｒｉｃａｅ
具有同源性。Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ　ｅｒｉｃａｅ已从杜鹃
花科植物根系中分离出来［１３，２１］，且有研究表明子
囊菌门、皮盘菌科（Ｄｅｒｍａｔｅａｃｅａｅ）的真菌可在无
菌培养条件下形成菌根［２２－２３］；同时，Ｚｉｊｌｓｔｒａ等［２４］
认为柔膜菌目（Ｈｅｌｏｔｉａｌｅｓ）真菌与寄主植物的共
生后，对寄主植物有帮助作用。２０００年 Ｍｏｎｒｅａｌ
等［２５］研究发现肉座菌目（Ｈｙｐｏｃｒｅａｌｅｓ）真菌属于
杜鹃花类菌根，本研究中有２株菌株属于肉座菌
目 真 菌。 树 粉 孢 属 （Ｏｉｄｉｏｄｅｎｄｒｏｎ，Ｍｙｘ－
ｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ）真菌是杜鹃花科植物根系中常见的
ＥＲＭ真菌类型，也是研究最多的杜鹃花类菌根真
·３８１·４期 刘仁阳等：梵净山雷山杜鹃根部真菌分离与鉴定
菌［２６－２７］。Ｕｓｕｋｉ 等［２２］、Ｗａｎｇ 等［２８］、Ｂｏｕｇｏｕｒｅ
等［２３］和陈真等［１６］从杜鹃花科植物根系中分离出
的树粉孢菌多为Ｏｉｄｉｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｍａｉｕｓ。本研究中
有５株菌株被鉴定为Ｏｉｄｉｏｄｅｎｄｒｏｎｓｐ，说明树粉
孢属真菌也普遍存在于雷山杜鹃根系中。
石楠柔膜菌（Ｈｙｍｅｎｏｓｃｙｐｈｕｓ　ｅｒｉｃａｅ（Ｒｅａｄ）
Ｋｏｒｆ　＆ Ｋｅｒｎｅｎ）是最早从杜鹃花科植物根系中
分离出来的ＥＲＭ 真菌，在多种杜鹃花科植物菌
根真菌中占主导地位。本研究未从雷山杜鹃根部
分离到石楠柔膜菌，这与陈真等［１６］、欧静等［２９］的
研究结果一致。这些研究表明由于寄主植物不
同，ＥＲＭ真菌类型也有差异。但ＥＲＭ 真菌与寄
主植物是否存在专一共生关系，还需将分离的真
菌回接到寄主植物上进一步研究。
致谢：贵州山地农业病虫害重点实验室彭丽
娟博士及梵净山保护局张维勇局长、邱阳高工、石
磊工程师对研究工作给予无私帮助，谨致谢忱。
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（参考文献）：
［１］　ＺＨＡＮＧ　Ｃｈｕｎｙｉｎｇ（张春英），ＤＡＩ　Ｓｉｌａｎ（戴思兰）．Ｒｅｓｅａｒｃｈ
ａｄｖａｎｃｅｓ　ｏｎ　ｅｒｉｃｏｉｄ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｆｏｒ－
ｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（北京林业大学学报），２００８，３０（３）：１１３－１１９
（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）．
［２］　ＯＵ　Ｊｉｎｇ（欧　静），ＬＩＵ　Ｒｅｎｙａｎｇ（刘仁阳），ＣＨＥＮ　Ｘｕｎ（陈
　训），ｅｔ　ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｆｕｎｇｉ　ｏｎ　ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍｉｎａ－
ｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ
ａｎｎａｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ（南方农业学报），
２０１３，４４（２）：２９３－２９８（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）．
［３］　Ｃａｉｒｎｅｙ　Ｊ　Ｗ　Ｇ，Ｍｅｈａｒｇ　Ａ　Ａ．Ｅｒｉｃｏｉｄ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ：ａｐａｒｔｎｅｒ－
ｓｈｉｐ　ｔｈａｔ　ｅｘｐｌｏｉｔｓ　ｈａｒｓｈ　ｅｄａｐｈｉｃ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｅｕｒｏｐｅａｎ
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｏｉｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，５４（４）：７３５－７４０．
［４］　ＹＵ　Ｆａｎｇ（于　芳），ＺＨＡＮＧ　Ｃｈｕｎｙｉｎｇ（张春英），ＹＩＮ　Ｌｉ－
ｊｕａｎ（尹丽娟），ｅｔ　ａｌ．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｒｈｏ－
ｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｆｏｒｔｕｎｅｉ　Ｌ．ｗｉｔｈ　ｅｒｉｃｏｉｄ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｆｕｎｇｉ　ａｎｄ　ｉｔｓ
ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｕｊｉａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒ－
ｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ（福建农林大学学
报：自然科学版），２００８，３７（４）：３６０－３６４（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ
Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）．
［５］　ＺＨＡＮＧ　Ｃｈｕｎｙｉｎｇ（张春英），ＣＨＥＮ　Ｚｈｅｎ（陈　真），ＹＵ
Ｆａｎｇ（于　芳），ｅｔ　ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｅｒｉｃｏｉｄ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｆｕｎｇｉ　ｏｎ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｆｏｒｔｕｎｅｉ　ａｎｄ　ｓｅ－
ｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｕｐｅｒｉｏｒ　ＥＭＲ　ｆｕｎｇｉ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅ　Ｓｈａｎｇ－
ｈａｉ（上海农业学报），２０１０，２６（２）：３８－４１（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ
Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）．
［６］　ＹＩＮ　Ｌｉｊｕａｎ（尹丽娟），ＺＨＡＮＧ　Ｃｈｕｎｙｉｎｇ（张春英），ＹＡＮＧ
Ｂｉｎｇ（杨　兵）．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ａｂｓｏｒｂｅｄ　ｂｙ　ｅｒｉ－
ｃｏｉｄ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｆｕｎｇｉ　ａｎｄ　ｉｍｐａｃｔ　ｏｎ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎ－
ｄｒｏｎ　ｆｏｒｔｕｎｅｉ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｔｉａ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａ　Ｓｉｎｉｃａ（中国农业科
学），２０１０，４３（４）：８６８－８７２（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂ－
ｓｔｒａｃｔ）．
［７］　Ｒｅａｄ　Ｄ　Ｊ．Ｐｅｚｉｚｅｌｌａ　ｅｒｉｃａｅ　ｓｐ．ｎｏｖ．，ｔｈｅ　ｐｅｒｆｅｃｔ　ｓｔａｔｅ　ｏｆ　ａ
ｔｙｐｉｃａｌ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ　ｏｆ　ｅｒｉｃａｃｅａｅ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ
ｏｆ　ｔｈｅ　Ｂｒｉｔｉｓｈ　Ｍｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｏｃｉｅｔｙ，１９７４，６３（２）：３８１－３８２．
［８］　ＺＨＡＮＧ　Ｃｈｕｎｙｉｎｇ（张春英），ＨＯＵ　Ｙｉｍｉｎ（侯奕敏），ＤＡＩ
Ｓｉｌａｎ（戴思兰）．Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｍｙｃｏｒｒｈｉ－
ｚａｌ　ｒｏｏｔ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｆｏｒｔｕｎｅｉ　Ｌ．［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕ－
ｒａｅ　Ｓｉｎｉｃａ（园艺学报），２００８，３５（１１）：１６４１－１６４６（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ
ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）．
［９］　ＹＵＡＮ　Ｊｉｘｉｎ（袁继鑫），ＨＯＵ　Ｚｈｉｘｉａ（侯智霞），ＳＵＮ　Ｙｉｎｇ
（孙　莹）．Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｓｅｒｔ　ｓｔａｔｕｓ　ｏｆ　ｍｙ－
ｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｆｕｎｇｉ　ｏｆ　ｗｉｌｄ　ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ　ｆｒｏｍ　Ｇｒｅａｔ　Ｈｉｎｇ＇ａｎ
Ｍｏｕｎｔａｉｎｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇａｎｓｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（甘
肃农业大学学报），２０１２，４７（５）：１０５－１０８（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ
Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）．
［１０］　ＯＵ　Ｊｉｎｇ（欧　静），ＬＩＵ　Ｒｅｎｙａｎｇ（刘仁阳），ＣＨＥＮ　Ｘｕｎ（陈
训）．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎ－
ｄｒｏｎ　ａｎｎａｅ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｓｏｕｔｈ　Ｕｎｉ－
ｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（中南林业科技大学学
报），２０１２，３２（１１）：２８－３３（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂ－
ｓｔｒａｃｔ）．
［１１］　Ｂｅｒｃｈ　Ｓ　Ｍ，Ａｌｅｎ　Ｔ　Ｒ，Ｂｅｒｂｅｅ　Ｍ　Ｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，
ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ　ｏｆ　ｅｒｉｃｏｉｄ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ
ｆｕｎｇｉ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　ａｎｄ　Ｓｏｉｌ，２００２，２４４（１－２）：５５－６６．
［１２］　Ａｌｅｎ　Ｔ　Ｒ，Ｍｉｌａｒ　Ｔ，Ｂｅｒｃｈ　Ｓ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ　ａｎｄ　ｄｉｒｅｃｔ
ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｆｉｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｕｎｇｉ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｅｒｉｃｏｉｄ
ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｒｏｏｔｓ［Ｊ］．Ｎｅｗ　Ｐｈｙｔｏｌｏｇｉｓｔ，２００３，１６０（１）：２５５－
２７２．
［１３］　Ｚｈａｎｇ　Ｃ　Ｙ，Ｙｉｎ　Ｌ　Ｊ，Ｄａｉ　Ｓ　Ｌ．Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｒｏｏｔ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ
ｆｕｎｇａｌ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ　ｉｎ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｆｏｒｔｕｎｅｉ　ｉｎ　ｓｕｂｔｒｏｐｉ－
ｃａｌ　ｆｏｒｅｓｔｓ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ，２００９，１９（６）：４１７－４２３．
［１４］　ＺＨＥＮＧ　Ｙｕ（郑　钰），ＧＡＯ　Ｂｏ（高　博），ＳＵＮ　Ｌｉｆｕ（孙立
夫），ｅｔ　ａｌ．Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｆｕｎｇｉ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ
ａｒｇｙｒｏｐｈｙｌｌｕｍａｎｄ　Ｒ．ｆｌｏｒｉｂｕｎｄｕｍｈａｉｒ　ｒｏｏｔｓ　ｉｎ　Ｓｉｃｈｕａｎ，
Ｃｈｉｎａ［Ｊ］，Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｓｃｉｅｎｃｅ（生物多样性），２０１０，１８（１）：
７６－８２（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）．
［１５］　Ｇｉｂｓｏｎ　Ｂ　Ｒ，Ｍｉｔｃｈｅｌ　Ｄ　Ｔ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ
ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｅｔａｌ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｙ　ｅｒｉｃｏｉｄ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ
ｆｕｎｇｉ［Ｊ］．Ｍｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４，１０８（８）：９４７－９５４．
［１６］　ＣＨＥＮ　Ｚｈｅｎ（陈　真），ＹＡＮＧ　Ｂｉｎｇ（杨　兵），ＺＨＡＮＧ
ＣｈｕｎＹｉｎｇ（张春英），ｅｔ　ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　ｉｎｏｃｕｌａ－
ｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｆｕｎｇｉ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｈａｉｒ　ｒｏｏｔｓ　ｏｆ
Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｐｕｌｃｈｒｕｍ［Ｊ］．Ｍｙｃｏｓｙｓｔｅｍａ（菌物学报），
２０１１，３０（５）：７２９－７３７（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）．
［１７］　ＺＨＡＮＧ　Ｃｈｕｎｙｉｎｇ（张 春 英），ＹＩＮ　Ｌｉｊｕａｎ（尹 丽 娟），
ＷＡＮＧ　Ｙｉｎ（王　胤），ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｓｉｍｐｌｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ
ｏｆ　ｅｒｉｃｏｉｄ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｆｕｎｇｉ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（生物技
术），２００７，１７（６）：２８－３２（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂ－
ｓｔｒａｃｔ）．
·４８１· 西　北　农　业　学　报 ２３卷
［１８］　ＭｃＬｅａｎ　Ｃ　Ｂ，Ｃｕｎｎｉｎｇｔｏｎ　Ｊ　Ｈ，Ｌａｗｒｉｅ　Ａ　Ｃ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｄｉ－
ｖｅｒｓｉｔｙ　ｗｉｔｈｉｎ　ａｎｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｅｒｉｃｏｉｄ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ
Ｅｒｉｃａｃｅａｅ　ａｎｄ　Ｅｐａｃｒｉｄａｃｅａｅ［Ｊ］．Ｎｅｗ　Ｐｈｙｔｏｌｏｇｉｓｔ，１９９９，
１４４（２）：３５１－３５８．
［１９］　Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ　Ｍ．Ｆｕｎｇａｌ　ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｄａｎｉｓｈ　Ｃａｌｌｕｎａ　ｖｕｌ－
ｇａｒｉｓ　ｒｏｏｔｓ　ｗｉｔｈ　ｓｐｅｃｉａｌ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｔｏ　ｅｒｉｃｏｉｄ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ
［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　ａｎｄ　Ｓｏｉｌ，２００１，２３１（２）：２２５－２３２．
［２０］　Ｔｈｏｍｐｓｏｎ　Ｊ　Ｄ，Ｇｉｂｓｏｎ　Ｔ　Ｊ，Ｐｌｅｗｎｉａｋ　Ｆ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ
ＣＬＵＳＴＡＬ＿Ｘ　ｗｉｎｄｏｗｓ　ｉｎｔｅｒｆａｃｅ：ｆｌｅｘｉｂｌｅ　ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ　ｆｏｒ
ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　ａｉｄｅｄ　ｂｙ　ｑｕａｌｉｔｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｔｏｏｌｓ
［Ｊ］．Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２４）：４８７６－４８８２．
［２１］　Ｔａｎ　Ｘ　Ｍ，Ｃｈｅｎ　Ｘ　Ｍ，Ｗａｎｇ　Ｃ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉ－
ｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｉｎ　ｒｏｏｔｓ　ｏｆ　ｎｉｎｅ　Ｈｏｌｃｏｇｌｏｓｓｕｍ
ｐｌａｎｔｓ（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｙｕｎｎａｎ，Ｇｕａｎｇｘｉ，
ａｎｄ　Ｈａｉｎａｎ　ｐｒｏｖｉｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，
２０１２，６４（２）：１４０－１４７．
［２２］　Ｕｓｕｋｉ　Ｆ，Ａｂｅ　Ｊ　Ｐ，Ｋａｋｉｓｈｉｍａ　Ｍ．Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｅｒｉｃｏｉｄ　ｍｙ－
ｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｆｕｎｇｉ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｈａｉｒ　ｒｏｏｔｓ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ
ｏｂｔｕｓｕｍｖａｒ．ｋａｅｍｐｆｅｒｉ　ｉｎ　ａ　Ｊａｐａｎｅｓｅ　ｒｅｄ　ｐｉｎｅ　ｆｏｒｅｓｔ［Ｊ］．
Ｍｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，４４（２）：００９７－０１０２．
［２３］　Ｂｏｕｇｏｕｒｅ　Ｄ　Ｓ，Ｃａｉｒｎｅｙ　Ｊ　Ｗ　Ｇ．Ｆｕｎｇｉ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｈａｉｒ
ｒｏｏｔｓ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｌｏｃｈｉａｅ（Ｅｒｉｃａｃｅａｅ）ｉｎ　ａｎ　Ａｕｓｔｒａｌ－
ｉａｎ　ｔｒｏｐｉｃａｌ　ｃｌｏｕｄ　ｆｏｒｅｓｔ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｂｙ　ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｕｌｔｕｒｅ－
ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍｅｔｈｏｄｓ［Ｊ］．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｉｃｒｏ－
ｂｉｏｌｏｇｙ，２００５，７（１１）：１７４３－１７５４．
［２４］　Ｚｉｊｌｓｔｒａ　Ｊ　Ｄ，Ｖａｎ＇ｔ　Ｈｏｆ　Ｐ，Ｂｒａａｋｈｅｋｋｅ　Ｗ　Ｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｏｆ　ｓｙｍｂｉｏｔｉｃ　ｒｏｏｔ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｈｅｌｏｔｉａｌｅｓ　ｉｎ　ｅｒｉｃａ－
ｃｅｏｕｓ　ｐｌａｎｔｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｇｒａｓｓ，Ｄｅｓｃｈａｍｐｓｉａ　ｆｌｅｘｕｏｓａ［Ｊ］．
Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｉｎ　Ｍｙｃｏｌｏｇｙ，２００５，５３（１）：１４７－１６２．
［２５］　Ｍｏｎｒｅａｌ　Ｍ，Ｂｅｒｃｈ　Ｓ　Ｍ，Ｂｅｒｂｅｅ　Ｍ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ
ｅｒｉｃｏｉｄ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｆｕｎｇｉ［Ｊ］．Ｃａｎａｄｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｏｔａｎｙ，
２０００，７７（１１）：１５８０－１５９４．
［２６］　Ｒｅａｄ　Ｄ　Ｊ．Ｔｈｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｒｉｃｏｉｄ　ｍｙｃｏｒ－
ｒｈｉｚａｌ　ｒｏｏｔ［Ｊ］．Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　Ｂｏｔａｎｙ，１９９６，７７（４）：３６５－３７４．
［２７］　Ｓｔｒａｋｅｒ　Ｃ　Ｊ．Ｅｒｉｃｏｉｄ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ：ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｈｏｓｔ　ｓｐｅｃｉ－
ｆｉｃｉｔｙ［Ｊ］．Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ，１９９６，６（４）：２１５－２２５．
［２８］　Ｗａｎｇ　Ｌ，Ｚｈｕａｎｇ　Ｗ　Ｙ．Ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ　ｐｒｉｍｅｒ　ｓｅｔｓ　ｆｏｒ　ａｍｐｌｉｆｉｃａ－
ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐａｒｔｉａｌ　ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ　ｇｅｎｅｓ　ｆｒｏｍ　ｐｅｎｉｃｉｌｉａ［Ｊ］．Ｍｙｃｏ－
ｓｙｓｔｅｍａ，２００４，２３：４６６－４７３．
［２９］　ＯＵ　Ｊｉｎｇ（欧　静），ＨＥ　Ｙｕｅｊｕｎ（何跃军），ＬＩＵ　Ｒｅｎｙａｎｇ（刘
仁阳），ｅｔ　ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ＥＲＭ　ｉｓｏ－
ｌａｔｅｓ　ｏｎ　ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｐａ－
ｒａｍｅｔｅｒ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ａｎｎａｅ　Ｆｒａｎｃｈ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ［Ｊ］．Ｍｉ－
ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　Ｃｈｉｎａ（微生物学通报），２０１３，４０（８）：１４２３－１４３６
（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）．
·５８１·４期 刘仁阳等：梵净山雷山杜鹃根部真菌分离与鉴定