全 文 ：蒙药卷柏和细叶杜香超声波提取物的分析研究
胡其图 ,贺锋嘎 ,东　海
(内蒙古民族大学 ,内蒙古 通辽　028043)
〔摘　要〕以 95%乙醇为溶剂 , 采用超声波提取法提取细叶杜香和蒙药卷柏中黄酮类成分 ,将黄酮类提取物继
续利用高效液相色谱和红外光谱分析 , 结果表明 ,提取产物具有明显的色谱和光谱行为.
〔关键词〕细叶杜香;蒙药卷柏;黄酮;高效液相色谱仪;超声波
〔中图分类号〕TQ028　　〔文献标识码〕A　　〔文章编号〕1671-0185(2008)05-0519-03
Analysis Study of Ultrasonic Extract in Ledum Palustre and Selaginella Sinens
Huqitu ,HE Feng-ga ,Donghai
(I nner Mongolia University for Nationalities , Tongliao 028043 , China)
Abstract:To 95%percent ethanol as solvents , used ult rasonic ext raction from Ledum palust re L ,
var anyustum E , BuBch M rs pumilum -Selaginella and M ongolian M edicine in f lavonoids ,
flavonoid ex tract continue to use high-performance liquid chromatography and inf rared spectral
analysis show ed that the product has obvious from the color Spect rum and spectral behavior.
Key words:Ledum Palust re L ;Selaginella sinens;Flavanone;Highly effective liquid phase chro-
matog raph;Ultrasonic
蒙药卷柏系卷柏属植物(SeLaginella sinens)的全草.该属植物药 700 多种 , 广布于世界各地.我国约产 50 种 , 其中供药
用者 20 多种 , 广泛分布于我国华北 、东北等地.
细叶杜香(Ledum palustre L)杜鹃花科杜香属常绿小木 , 主要生长于苔藓类水甸子及湿润的山坡或石坡上 ,在东北大兴
安岭林区有比较丰富的资源 ,主要生长在落叶松林和落叶松桦木混交林下〔1〕.黄酮类化合物是天然产物中非常重要的一类
化合物 , 现代研究证明 , 黄酮类化合物具有降血脂 、抗动脉硬化 、降低胆固醇 、抗肿瘤 、抗炎等多种生理活性功效〔2〕.目前国
内外对银杏黄酮〔3〕、大豆异黄酮〔4〕等研究报道较多 , 对于细叶杜香和蒙药卷柏中黄酮类物质的研究少有报道.本文采用高
效液相色谱法对细叶杜香和蒙药卷柏中黄酮含量进行了分析测定 , 为细叶杜香资源的综合利用提供科学依据.
1　实验部分
1.1　实验材料　样品为内蒙古大兴安岭山坡上采摘的细叶杜香.采摘经晾干后的细叶杜香粉碎 , 待用.蒙药卷柏是内蒙古
乌兰浩特市采集.经蒙药卷柏晾干后粉碎 , 待用.
1.2　主要仪器与试剂
1.2.1　主要仪器　KQ3200 V 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);旋转 蒸发器 RE-52(上海青浦沪西仪器厂);
SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂);光学度盘旋光仪(上海二光);双目显微熔点测定仪(北京泰克仪器
有限公司制造);色谱柱 1m×15mm 玻璃柱(自制).
1.2.2 　试剂　芦丁对照品(为中国药品生物制品检定所产品);95%乙醇;甲醇(色谱纯);二次重蒸馏水;石油醚;聚乙酰胺
均为分析纯.
收稿日期:2008-05-16
作者简介:胡其图(1966-),男(蒙古族),内蒙古科左中旗人 ,讲师 ,在读博士 ,主要从事化学成分研究.
第 23 卷　第 5 期 内蒙古民族大学学报(自然科学版) Vol.23　No.5
2008年 9 月 Journal of Inner Mongolia University for Nationalities Sep.2008
DOI :10.14045/j.cnki.15-1220.2008.05.018
1.3　细叶杜香和蒙药卷柏黄酮类成分的提取　以 95%乙醇为溶剂 ,采用超声波提取.分别称取 15 g的粉碎细叶杜香和蒙
药卷柏 ,各自放入烧瓶中加 150 mL 石油醚 ,超声波清洗器中加热蒸馏 20 min.除去石油醚 ,然后用 95%乙醇超声波提取 6
次 ,每次用 95%乙醇 200 mL , 提取时间 20 min.过滤 , 合并滤液得超声波提取液 ,减压蒸馏 ,浓缩得浸膏 , 浸膏上加少量的水
放置即析出沉淀 ,抽滤 , 干燥 30 min.即得浅绿色粗产品 2.162 g.
以同样方法处理蒙药卷柏.即得到浅绿色粗产品 2.083 g.
1.4　提取物的柱色谱分离　将以上所得的粗黄酮约 0.5 g ,加甲醇 5 m L ,使之溶解 , 再加聚酰胺 0.5 g , 用刮刀轻轻搅动 ,在
水浴上赶去甲醇待用.
将色谱柱垂直夹于铁架台上推一小团脂棉至柱底部 , 加洗净的黄砂于棉花上 , 约 0.5 cm 厚.关闭柱塞(不要涂油脂),
加蒸馏水约 至色谱柱一半高.将 6 g色谱用聚酰胺(粒度 60-100 目)倒入烧杯中 ,加蒸馏水 50 mL , 轻轻拌和均匀 , 再打开
柱塞 ,使柱内水不断流出的同时把烧杯内的聚酰胺缓缓加入 , 边加边用套有橡皮塞的玻璃棒轻轻敲打 , 使填充均匀 , 无气
泡.当色谱柱顶部水下降到距聚酰胺层高约 1.5 cm 时 ,关闭旋塞.将上述拌好聚酰胺的提取物均匀倒入柱内 , 用刮刀轻轻
铺平 ,勿有气泡 , 其上盖约 0.5 cm 厚的黄砂.
先用蒸馏水洗脱 ,至有淡黄色液体从柱端流下止 ,然后用 70%工业乙醇溶液洗脱并收集洗脱液.
把洗脱液浓缩 ,冷却 , 干燥 ,测定熔点 , 旋光度.
1.5　分析样品的制备　取细叶杜香和蒙药卷柏中提取的黄酮类乙醇提取液;挥干溶剂;加 5 mL 25%HCL , 30 mL 甲醇 ,水
浴回流酸水解 1 h;冷却后甲醇定容 50 mL , 得细叶杜香黄酮的酸水解溶液 , 精密吸取 2.0 mL 至 25 mL 容量瓶中 , 甲醇定
容;用 0.45微米微滤膜过滤后 ,用于 HPLC分析标准芦丁和细叶杜香和蒙药卷柏黄酮类化合物.
1.6　色谱条件　流动相为 V(甲醇)∶V(0.4%磷酸)=60∶40;检测波长 360 nm;流速 1 mL/ min , 柱温, 室温;进样量 , 10微升.
1.7　样品中黄酮含量测定　样品色谱图见图 1 ,采用峰面积外标法定量 ,由色谱图相应峰面积 , 分别代入各自的回归方程 ,
求出相应的质量浓缩值 ,再计算出细叶杜香中槲皮素(w 0%), 黄酮(w k%)的含量.然后由这些黄酮的含量换算成兑黄酮的
含量 w%〔5〕.w %=(w 0%+w k%+w L%)×2.15
2　结果与分析
2.1　标准曲线绘制　精密称取干燥至恒重的芦丁 25.4 mg 用甲醇溶解 , 定容 50 mL 作为对照品储备液.吸取上述储备液
1.0 , 2.0 , 4.0 , 6.0 , 8.0 m L放入 5 个 25 mL 容量瓶中 ,用甲醇定容 ,按 1.6 色谱条件进行 HPLC 分析 ,对照品色谱图见图(1
～ 3).以峰面积(A)对质量浓度(P·g/ L)进行回归计算得回归方程 A=3.3146×10＊P-1594 , r=0.9997 ,线性范围 0.02032
～ 0.1626g/ L.
2.2　精密度试验　精密称取芦丁对照品 6.6 μg ,置于 50 mL容量瓶中 , 甲醇溶解并定容 ,摇匀.精密吸取 8 μL , 连续进样 5
次 , RSD=1.917%(n=5).
2.3　重现性试验　精密称取本品 5 份各约 2.5 g按供试液的制备方法制备得甲醇提取液 , 在以上的色谱条件下进样 , 每
个样品进样 8 μL ,连续进样 3 次 , 峰面积取 3 次进样平均值 , 结果测得细叶杜香和蒙药卷柏粗产品中芦丁的含量为 0.218
mg/g , RSD=1.48%(n=5),表明该法的重现性很好.
图 1　标准芦丁的 HPLC 图
Figure 1　Rutin standard HPLC map 　　
图 2　蒙药卷柏的 HPLC 图
Figure 2　Selaginella sinens the HPLC-map
520 内　蒙　古　民　族　大　学　学　报 2008年
图 3　细叶杜香的 HPLC 图
Figure 3　Mrs pumilum the HPLC-map
2.4　回收率实验　精密称取已知含量的细叶杜香和蒙药卷柏 5份 , 各约 2.5 g ,分别精密加入 2.0 mL浓度为 0.2 mg/ mL
的芦丁标准品溶液 ,按供试品溶液制各项方法处理后 ,取 8μL注入液相色谱仪 , 计算得加样回收率 101.97%, RSD=0.79%
(n=5).
2.5　样品测定结果与分析
2.5.1　物理性质测定:测熔点:208-208.5℃;旋光度:〔α〕20λ=+32.10(水做溶剂)
2.5.2　用红外光谱分析细叶杜香和蒙药卷柏提取物 , 见图(4 , 5)
2.5.3　HPLC 分析标准芦丁和细叶杜香和蒙药卷柏黄酮类化合物图.
　　
图 4　细叶杜香中提取物的红外光谱图
Figure 4　Mrs pumilum-in extracts
of the infrared spectra
　　
图 5　蒙药卷柏中提取物的红外光谱图
Figure 5　Mongolian medicine selaginella
in the extmct of the infrared spectra
3　讨论
(1)从红外光谱图看出 1640 nm-1时非对称伸缩振动峰 C=O 的 , 3400 nm-1处宽峰是-OH 的 , 3420 nm-1处有强峰是
-OH 的 , 1083 nm-1是 O-H 变角振动峰.
(2)HPLC 分析标准芦丁和细叶杜香和蒙药卷柏在 8.757处有吸收峰 , 证明该提取物中含有芦丁.
参　考　文　献
〔1〕赵振东 , 王亚玲 ,杜晓光 , 等.杜香精油主要组成及利用的研究〔J〕.林产化工通讯 , 2001 , 35(5):3-5.
〔2〕王玮 , 王琳.黄酮类化合物的研究进展〔J〕.沈阳医学院学报 , 2002 , 4(2):115-119.
〔3〕惠勤 , 程志青 ,张桂英 , 等.南雄银杏黄酮含量的 HPLC 测定〔J〕 , 分析测试学报 , 2001 , 20(6):53-54.
〔4〕王帆 ,胡小钟 ,匡建军 , 等.高效液相色谱法检测保健食品中大豆异黄酮含量〔J〕.分析测试学报 , 2003 , 22(6):66-
69.
〔5〕吴晓明 , 殷斌志.黄酮类化合物的测定方法〔J〕.药物分析杂志 , 2001 , 21(2):138-141.
〔责任编辑　郑　瑛〕
521第 5期 胡其图等:蒙药卷柏和细叶杜香超声波提取物的分析研究