全 文 ：第 21 卷第 3 期
20 5 年 9月
齐 齐 哈 尔 大 学 学 报
J o u r n a lo f Qiq ih a r U n iv e rs it y
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2 1
,
N o 3
S e P , 2 00 5
细叶杜香挥发油抑菌和杀菌作用的研究
谈 华
(l 黑龙江省齐齐哈尔市教育教学研究院 齐齐哈尔 161 0 5 ;
刘庆华 ’
2
.齐齐哈尔大学生命科学与工程学院 齐齐哈尔 161 0肠
摘 要 : 应用水蒸气蒸馏法提取细叶杜香挥发油 , 采用丙酮溶剂溶解杜香挥发油 , 以青霉菌 、 酵母菌和金黄色葡
萄球菌作供试菌种 , 在实验中观察不同浓度的细叶杜香挥发油溶液对不同菌种的作用 , 研究其抑菌和杀菌作用 。
关 键 词 : 细叶杜香 ; 挥发油 ; 抑菌作用 ; 杀菌作用
中图分类号 : Q9 49 ,% 文献标识码 : A 文章编号 : 10 7一9 84 X( 2o 5 )03一 0 33一。
细叶杜香 ( eL du m aP l u st er va .r an gu st u m ) 是杜鹃花科杜香属植物 ,植物体有浓烈芳香气味 。 细叶杜香的
嫩枝 、 叶 、 花和果实中含有的挥发油可人药 , 具有很强的抗原生物作用 , 挥发油对皮肤真菌有很强的抑制
作用 , 对金黄色葡萄球菌有抗菌作用 。 近年来 , 医学中关于各种皮肤病病原菌的研究进展较大 , 据报道 ,
金黄色葡萄球菌是儿童皮肤病中常见的致病菌 1 。 在成人座疮病的治疗中发现 , 痊疮皮损中葡萄球菌与丙
酸痊疮杆菌的检出率接近仪 ” ’ 金黄色葡萄球菌与座疮的感染及炎症的形成有着密切的关系 。 临床资料表明 ,
常见的皮肤病如座疮 、 手足癣等皮肤病的主要致病菌为霉菌 、 酵母菌间 、 皮肤癣菌和葡萄球菌 。 其中 , 霉
菌主要包括青霉菌 、 黄曲霉 、 烟曲霉 、 链格抱 、 帚霉 、 毛霉 、 柱顶抱 、 白地霉和构巢曲霉 。 酵母菌主要包
括白色念珠菌 、 近平滑念珠菌 、 热带念珠菌 、 高里念珠菌 、 克柔念珠菌 、 红酵母和其它酵母菌 。 皮肤癣菌
主要包括红色毛癣菌 、 须毛癣菌 、 絮状表皮癣菌 、 犬小饱子菌 、 紫色毛癣菌和庆状毛癣菌 。 葡萄球菌则主
要包括表皮葡萄球菌 、 腐生葡萄球菌 、 金黄色葡萄球菌 、 木糖葡萄球菌和中间葡萄球菌等 。 本研究即根据
上述临床资料 , 选取微生物实验室常备的青霉菌 、 酿酒酵母菌和金黄色葡萄球菌为供试菌种 , 用丙酮作为
细叶杜香挥发油的有机溶剂 , 来找出实验条件下细叶杜香挥发油对某一浓度菌悬液的适当杀菌浓度 , 研究
细叶杜香挥发油抑菌和杀菌作用 。
实验材料与仪器设备
,
.
1 材料
干燥细叶杜香叶片 ( 4 月下旬采集 , 采集地为黑龙江省加格达齐克一河地区 ) ; 供试菌株 : 青霉菌
( P
e n i e l li u m )
、 酵母菌 ( S a e e h a or m y e e s e e er 诚 s i a e ) 、 金黄色葡萄球菌 ( S ta p h al o e o e e u s a u er u s ) ; 丙酮
( CH
3
CO C H
,
) ; 培养基 : 马丁氏培养基 、 牛肉膏蛋白陈培养基 、 E AY 培养基
1
.
2 仪器设备
剪刀 、 接种针 、 振荡器 、 培养皿 、 水蒸气蒸馏装置 、 电热套 ( KD M 型连续可调控温度电热套 )、 血球
计数板 、 显微镜 ( X S一2 0 )、 恒温培养箱
2 实验方法与步骤
2
.
1 细叶杜香挥发油的提取
称取 5飞 干燥的细叶杜香叶片 , 将其剪碎 , 放人蒸馏瓶中 , 加人蒸馏水 , 高度约为蒸馏瓶的 1尼 。 将
蒸馏瓶放人电热套中加热 , 温度控制在 90 ℃ 一 10 ℃之间 , 从蒸馏水开始沸腾起计时 , 蒸馏 h4 , 收集蒸馏
液。 将收集到的蒸馏液倒人分液漏斗 , 静止一段时间后分液 。 由于杜香挥发油密度比水小 , 分液漏斗上层
收藕日期 : 五力卜刊辫一 10
作者摘介 : 谈 华 . 196 5年 , 大学本科 , 副研究员 , 主要从攀生物学研究 。
齐 齐 哈 尔 大 学 学 报 2X) ( 5年
液体为挥发油 , 下层为水溶液 , 保留上层部分 , 将下层水排除后 , 量出挥发油量 , 收集后密封保存待用 。
另分液排出的水溶液也要保留 , 作对比实验用 。
.2 2 制备培养基
马丁氏培养基 (蛋白陈 .0 5% , 葡萄糖 .0 5% , K H护0 .40 4% , M庐0 4 · 7 H 20 . 05 % ,琼脂 .2 5% 一 3 . 0% , p H
值自然 , 适于霉菌生长 )
牛肉膏蛋白陈培养基 (牛肉膏 0 . 3% , 蛋白陈 1 . 0% , N ac 1.0 5% , 琼脂 .2 5% , p H .7 4 一 7 . 6 , 适于金黄色葡
萄球菌生长)
EA Y 培养基 (蛋白陈 2 . 0% , 酵母膏 1 . 0% , 葡萄糖 一。% , N a e lo . 5% , K H ZP o ; 0 . 5% , 琼脂 2 . 5% , pH S . 5 ,
适于酵母菌生长 )
将上述培养基分别倒人 d = 9 0~ 的灭菌培养皿中
, 制成平板 , 每种制备 6 个待用 。
.2 3 制备菌悬液
2 3
.
1 配制三种菌的等渗溶液 ( N a CI 水溶液 )
金黄色葡萄球菌 0 . 1% N aC I溶液 ; 酵母菌 .0 5% NaC I溶液 ; 青霉菌 蒸馏水
2 3 2 计数
在无菌条件下用接种针分别取少量实验菌放人相应等渗溶液中 , 用振荡器振荡 1 一 h2 , 从而是菌类抱
子均匀分散于等渗溶液中 。 然后用血球计数板检出菌悬液浓度 。 金黄色葡萄球菌 : 5 . 2 x I J 个 /ml ; 酵母菌 :
3
.
5 5 x 10
6个 /m l ; 青霉菌 1 . 3 x 10 6个zm l 。
2
.
4 制备细叶杜香挥发油溶液
用丙酮作溶剂 , 制备浓度为 2 . 5% 、 5 . 0% 、 l a o% 、 12 . 5% 四个梯度的细叶杜香挥发油溶液 , 溶液配好
后注意密封 , 以免由于挥发造成浓度偏差 , 影响实验结果的准确 。
.2 5 菌株的接入与培养
将培养皿编号 , 1一 6 号为马丁 氏培养基的培养皿 , 7一 12 号为 EA Y 培养基的培养皿 , 13 一 17 号为牛肉
膏蛋白陈培养基的培养皿 。 按表 1方式接种菌株
表 l 菌种接种方式表
编号 接人菌种液 ( 。 , Zm l) 对比填人物 ( 。 . 2 m l) 填入物浓度%( )
青霉菌
青霉菌
青霉菌
青霉菌
青霉菌
青霉菌
酵母菌
酵母菌
酵母菌
酵母菌
酵母菌
酵母菌
金黄葡萄球菌
金黄葡萄球菌
金黄葡萄球菌
金黄葡萄球菌
金黄葡萄球菌
蒸馏水
细叶杜香蒸馏水
丙酮
细叶杜香油
细叶杜香油
细叶杜香油
燕馏水
细叶杜香蒸馏水
丙酮
细叶杜香油
细叶杜香油
细叶杜香油
蒸馏水
细叶杜香蒸馏水
丙酮
细叶杜香油
细叶杜香油
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注 : 上述操作应在无菌条件下完成 , 接人的菌悬液和杜香油要均匀涂布 。
塑兰一一— 一鲤竺塑垫鲤鲤燮塑鲤色一一一一操作完成后 , 将培养皿放人恒温培养箱中培养 (金黄色葡萄球菌在 37 ℃ , 青霉菌 、 酵母菌在 25 一 28 ℃ ) ,培养 4 一 6 天 。
3 结果及分析
实验从菌落数量和菌体生长总体状况观察中 , 看菌株培养性状的变化 , 并分析得出结论 。
实验结果见图版 。
1 号 2 号 3 号 6 号
7 号 8 号 9 号 12 号
1 3 号 14 号 1 5 号 16 号 17 号
3
.
1 细叶杜香蒸馏水有抑菌作用
从图 2 与图 1 、 3 、 4 对比 , 杜香蒸馏水本身不能起到杀灭菌体的作用 , 但它在一定程度上能抑制菌体
生长 。
.3 2 杜香挥发油的杀菌作用
3
.
2
.
1 杜香挥发油对青霉菌的杀灭作用
从图 5 、 6 的对比看 , .5 0% 、 or .0 %浓度的杜香挥发油都有杀菌作用 , 完全杀灭青霉菌的最低浓度在
1.0 0% 一 1.2 5%之间 。
3
.
.2 2 杜香挥发油对酵母菌的杀灭作用
从图 7 、 8 、 9 的对比看 , 挥发油浓度在 .2 5%时培养皿中有少量菌落生成 。 挥发油浓度在 .5 0% 、 or .0 %
时没有看到菌落 , 说明起到了完全杀菌作用 。
3
.
.2 3 杜香挥发油对金黄色萄萄球菌的杀菌作用
从图 10 、 1 培养皿的对比看 , 挥发油浓度在 .10 0%时杀灭了部分菌体 , 挥发油浓度在 1.2 5%时完全杀
灭菌株 , 说明完全杀灭金黄色葡萄球菌的最低浓度在 1.0 %0 一 12 .5 %之间 。
4 实验结论 ·
本实验证明了细叶杜香挥发油对青霉菌 、 酵母菌和金黄色葡萄球菌有抑制和杀灭作用 。 不同菌类、 菌
体对杜香挥发油的敏感程度不同 , 酵母菌最为敏感 , 青霉菌和金黄色葡萄球菌次之 , 挥发油浓度在 1.2 5%
齐 齐 哈 尔 大 学 学 报 20() 5 年
以上能够完全杀灭上述菌体 。 所以在制备治疗皮肤病的药剂时可考虑加人细叶杜香恢复有的浓度为 2. 15% 。
参 考 文 献
【] l贾虹 .儿童皮肤病治疗进展 .国外医学皮肤性病学分册 . 9 15 9, 25 ( 2) : 97
【2 ] M e y n a d i e n J . hT e r o il Of bac t e ir a i n a c n e in “ oF e u s o n A u n e V ul ga n s ” p找犯 e e id n罗〔明 . 助 n d o n : R叮al s o e ie t y of M e id e in 。 uS vr ie e
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3[] 孔俐君 , 孙令.座疮皮损内细菌分离研究 .大连医学院学报田 , 1994 , 16 ( 2 ) : l以一 106
4[] 万开元 , 黄宏文等 , 几种植物精油及单体粟疫病病菌的抑制作用 .武汉植物学研究。 2加 1 , 19 ( 1) : 89
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