全 文 ：赣南六月雪质量标准研究
*
李洪亮1，程齐来1，王 铮1，范小娜2
(赣南医学院 1．药学院;2．科研处，江西 赣州 341000)
摘 要:目的:以车叶草苷酸为指标，研究并完善六月雪药材的质量标准。方法:采用薄层色谱法(TLC)为定性鉴
别方法;高效液相色谱法(HPLC)测定其中车叶草苷酸含量。结果:不同产地 10 批六月雪药材车叶草苷酸薄层鉴
别斑点清晰，分离度好，结果一致;含量测定车叶草苷酸平均含量为 0． 55%，车叶草苷酸的平均回收率分别为
102． 6%，ＲSD分别为 1． 02%(n = 6)。结论:定性定量方法快速、准确、专属性强、重复性好，可用于六月雪药材的
质量控制。
关键词:质量标准;六月雪;薄层色谱;高效液相色谱
中图分类号:TQ460． 6 文献标志码:A 文章编号:1001 － 5779(2015)03 － 0346 － 04
DOI:10． 3969 / j． issn． 1001 － 5779． 2015． 03． 004
The study of quality standard of Gannan Serissa serissoides (DC．)
LI Hong-liang，CHEN Qi-lai，WANG Zheng，FAN Xiao-na
(School of Pharmacy，Gannan Medical University，Ganzhou，Jiangxi 341000)
Abstract:Objective:Use Asperulosidic acid as index to reseach and improve the quality standards of Junesnow．Method:
Thin layer chromatography (TLC )was adopted for the qualitative identification method;Determination of Asperulosidic
acid in Junesnow by high perfarmance liquid chromatograpy(HPLC)． Ｒesult:The Asperulosidic acid TLC spots in 10 bat-
ches of Junesnow from differnt areas were clear，well separated and the results were consistent． The average content of
Asperulosidic acid was 0． 55%，The average recovery rate was 102． 6%;ＲSD was 1． 02%(n = 6)． Conclusions:This
method is rapid，accurate，with high specificity and repeatability． It is applicable for the Junesnow quality control．
Key words:quality standards;Junesnow;TLC;HPLC
六月雪为茜草科六月雪属植物六月雪 Serissa
serissoides(DC．)Druce［1］的全草，是民间常用的一种
草药，具有疏风解表，清热利湿，舒筋活络的功效，用
于感冒，咳嗽，牙痛，急性扁桃体炎，咽喉炎，急、慢性
肝炎，肠炎，痢疾，小儿疳积，高血压头痛，偏头痛，风
湿性关节痛等。六月雪在赣南地区资源非常丰富，
民间一直用于治疗病毒性肝炎及肝硬化。现代药理
学也证实了六月雪诸多药理活性，如相鲁闽［2］等报
道了六月雪治疗小儿疳积，陈文吟等［3］报道了六月
雪提取物体外抗乙肝病毒等作用，六月雪提取物对
急性实验性胃溃疡还具有明显的抑制作用［4］。六
月雪中含有诸多活性成分，如本品中所含的车叶草
苷酸(Asperulosidic acid)等活性成分具降压作用，而
齐墩果酸(Oleanlia acid)则是六月雪中治疗肝炎的
主要有效成分［5］。因此，六月雪在赣南地区是一种
很有研究价值和开发前途的中草药。为制订该药质
量鉴定标准，以便更好开发利用这一植物资源，本课
题组采用薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法
(HPLC)对六月雪进行了生药鉴定相关研究，为保
证准确安全用药提供了科学依据。
1 材料和仪器
本实验所选取样品为赣州市信丰县不同批号的
10 批(20140301，20140302，20140303，20140304，20140305，
20140306，20140307，20140308，20140309，20140310)六月
雪药材，由赣南医学院药学院程齐来副教授鉴定为
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第 35 卷 第 3 期 赣 南 医 学 院 学 报 Vol． 35 NO． 3
2015 年 6 月 JOUＲNAL OF GANNAN MEDICAL UNIVEＲSITY JUN． 2015
* 基金项目:江西省自然科学基金(编号:20132BAB205078)
通讯作者:范小娜，女，教授，硕士生导师，主要从事中草药活性成分筛选及新药研发工作。E-mail:fxn918@ 126． com
茜草科六月雪属植物六月雪 Serissa serissoides(DC．)
Druce的全草。主要仪器有:DM500 莱卡摄影显微
镜，USC-302 超声波清洗器，高效液相色谱仪(Agi-
lent 1100 液相色谱仪)，甲醇为色谱纯，水为重蒸馏
水，车叶草苷酸对照品:四川菲普德生物技术有限公
司，批号:14259-55-3，纯度≥98%;硅胶 G 薄层板
(自制与预制板)。
2 实验方法
2． 1 薄层鉴别
2． 1． 1 样品制备 以车叶草苷酸为对照品，对本品
进行薄层色谱研究。取本品药材粉末 0． 25 g，加甲
醇 25 mL，超声处理 30 min，滤过，滤液作为供试品
溶液。另取车叶草苷酸对照品，加甲醇制成每 1 mL
含 0． 5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法
(《中国药典》2010 年版一部附录 VI)试验。吸取上
述两种溶液各 1 μL，分别点于同一经活化后的硅胶
G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-水-三乙胺
(3∶ 3． 5∶ 1∶ 1． 5∶ 0． 5∶ 1)为展开剂，置浓氨试液
预饱和 20 min 的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫
外灯(λ = 365 nm)下检视。
2． 1． 2 薄层板的选择与点样量的研究 分别采用
预制薄层板和自制薄层板进行点样展开，每块板点
两组斑点，各为 2 μL 与 1 μL 量的供试品溶液和对
照品溶液，展开后比较两块板的展开结果。
2． 1． 3 薄层色谱试验方法的重现性研究 采用自
制薄层板对本品 10 批样品照 2． 1． 2 项下方法进行
展开。
2．2 高效液相色谱法测定六月雪中车叶草苷酸的含量
2． 2． 1 对照品溶液的配制 取车叶草苷酸适量，加
甲醇制成每 1 mL含 50 μg的溶液。
2． 2． 2 供试品溶液的配制 取本品粉末(过二号
筛)约 0． 1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，紧密加入
甲醇-盐酸(100∶ 1)的混合溶液 25 mL，密塞，称定
重量，超声处理 30 min，放冷，再称定重量，以甲醇补
足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 2 mL，
置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，去续滤液。
2． 2． 3 波长选择 取车叶草苷酸对照品溶液，以甲
醇为空白，在 500 ～ 190 nm 波长范围内进行光谱扫
描，以确定最大吸收波长。
2． 2． 4 流动相的选择 分别考察不同比例甲醇-水
溶液、甲醇-醋酸水溶液、乙腈-醋酸水溶液、乙腈-
0． 05 mol·L －1磷酸二氢钾溶液为流动相体系对分
离效果的影响。
2． 2． 5 线性关系 精密吸取 106 μg·mL －1的车叶
草苷酸对照品溶液 1． 0，3． 0，5． 0，7． 0，10． 0 mL，分
别加甲醇稀释定容至 10 mL，摇匀，分别进样 20 μL，
测定，以浓度(μg·mL －1)为横坐标，峰面积为纵坐
标绘制标准曲线。计算车叶草苷酸的回归方程及相
关系数。
2． 2． 6 精密度试验 取本品(批号 20140304)约
0． 1 g，精密称定，按 2． 7． 3 项制备，精密吸取 10 μL
注入液相色谱仪，测定，重复 6 次，记录车叶草苷酸
的峰面积与 ＲSD。
2． 2． 7 稳定性试验 取本品(批号 20140304)约
0． 1 g，精密称定，按 2． 7． 3 项制备，分别于 0，2，4，6，
8，12，24 h测定，记录车叶草苷酸的峰面积并计算其ＲSD。
2． 2． 8 加样回收试验 取本品(批号 20140304)6
份，每份约 0． 06 g，精密称定，分别加入车叶草苷酸
对照品溶液(0． 212 mg·mL －1)25 mL，按 2． 2． 2 项
制备，精密吸取 20 μL注入液相色谱仪，测定并计算
车叶草苷酸的含量及 ＲSD。
2． 2． 9 药材含量测定 取本品 3 批(20140304，
20140305，20140304)分别按试验初步制定的检验条
件检验，测定车叶草苷酸的含量。
3 结 果
3． 1 薄层色谱分离与薄层板的选择 在薄层鉴别
中，所采用的两种薄层板均能使各主斑点较好的分
离，且吸取 1 μL供试品溶液已能使得斑点完整显现
(见图 1)，可在薄层板上分离出清晰完整的斑点，且
该方法操作简单，重现性好。见图 2。
注:1、3 为供试品溶液(点样量分别为 2 μL、1 μL，批号均为
20140302)，2、4 为对照品溶液(点样量分别为 2 μL、1 μL，批
号均为 20140304)
(DM500 莱卡摄影显微镜拍摄，t:27 ℃，Ｒh:62%)
图 1 六月雪薄层鉴别照片
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3 期 李洪亮，等 赣南六月雪质量标准研究
注:6 为对照品，1 ～ 5、7 ～ 11 为供试品(点样量 1 μL，批号分
别为:20140301，20140302，20140303，20140304，20140305，
20140306，20140307，20140308，20140309，20140310)
(t:26 ℃，Ｒh:47%)
图 2 六月雪薄层鉴别照片
按上述方法和色谱条件，并采用自制薄层板对
本品 10 批样品进行展开，结果供试品色谱中均可见
一清晰主斑点，表明该法重现性好，方法可行。
3． 2 HPLC 波长选择 取车叶草苷酸对照品溶液，
以甲醇为空白，在 500 ～ 190 nm 波长范围内进行光
谱扫描，结果在 352、268、233 nm波长处有最大的吸
收(见图 3)，并参考车叶草苷酸的检测波长，确定检
测波长为 345 nm。
图 3 车叶草苷酸紫外光谱图
3． 3 HPLC 流动相的选择 实验证明，采用乙腈-
0． 05 mol·L －1磷酸二氢钾溶液(50∶ 50)(每 100 mL中
加十二烷基硫酸钠 0． 4 g，再以磷酸调节 pH 值为
4． 0)为流动相体系，车叶草苷酸与其它组分分离度
符合要求，结果满意。
按 3． 2，3． 3 实验所得波长与流动相，采用色谱
柱为 ZOＲBAX Eclipse XDB-C18柱(250 mm ×4． 6 mm，
5 μm) ;流速:1． 0 mL·min －1;柱温:25 ℃;进样量:
20 μL;取对照品和供试品溶液，在上述色谱条件下
进样，记录色谱图。理论板数以车叶草苷酸峰计算
均不低于 4 000，主色谱峰与其相邻色谱峰之间分离
度均大于 1． 5，拖尾因子均在 0． 95 ～ 1． 05 之间，对
照品溶液及供试品溶液色谱图见图 4，图 5。
图 4 车叶草苷酸对照品溶液 HPLC图谱
图 5 供试品溶液 HPLC图谱
3． 4 HPLC线性关系 以浓度(μg·mL －1)为横坐
标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计算车叶草苷酸
的回归方程及相关系数，得到 Y =35． 7752X －25． 7295，
r = 0． 999 2，表明车叶草苷酸在 0． 106 ～ 1． 06 μg 范
围内线性良好。
3． 5 HPLC精密度试验 表 1 结果表明仪器精密
度良好。
表 1 精密度试验
编号 峰面积 平均峰面积 ＲSD%
1 3315
3319 0． 07
2 3319
3 3319
4 3321
5 3320
6 3321
3． 6 HPLC稳定性试验 表 2 结果表明供试品试
液在 24 h内稳定。
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赣 南 医 学 院 学 报 2015 年
表 2 稳定性试验
时间 /h 峰面积 平均值 ＲSD%
0 3242
3237 0． 3
2 3246
4 3242
6 3243
8 3229
12 3226
24 3229
3． 7 HPLC加样回收试验 表 3 表明该方法灵敏
度高。
3． 8 HPLC含量测定结果 表 4 表明该含量测定
方法为药典收载成熟的方法，实验表明其操作简单，
重复性好，结果准确，具有一定的代表性，故此结果
可作为该药材含量的检定标准。
表 3 加样回收试验
编号 样品取样量 /g 样品中含量 /mg 加入量 /mg 实测量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD%
1 0． 0599 6． 1697
5． 3
11． 6473 103． 35
102． 6 1． 02
2 0． 0602 6． 2006 11． 7121 103． 99
3 0． 0586 6． 0358 11． 4049 101． 30
4 0． 0575 5． 9225 11． 3503 102． 41
5 0． 0568 5． 8504 11． 2069 101． 07
6 0． 0569 5． 8607 11． 3435 103． 45
表 4 药材含量测定结果
批号 含量 /%
20140302 0． 54
20140306 0． 56
20140308 0． 55
4 讨 论
近些年来，随着科学的迅猛发展，人们生活质量
的提高，健康成了人们关注的焦点。疾病需要正确
的治疗方法和真正的有效的药材。六月雪作为中药
材，具有显著的药用价值和经济价值，并逐渐为人们
所接受。由于多数人缺乏对药材真伪的鉴别能力，
目前不少商家为了牟利而以假乱真，所以如何鉴别
六月雪中药材的真伪和质量成了时之所需，一份六
月雪的质量标准也迫在眉睫。
本文通过实验研究六月雪的鉴别方法，寻找其
最佳的鉴别方案。通过实验结果可知，六月雪在其
理化鉴定上具有其独特的特征，可编制成为标准的
文献供以后对其药材的鉴定使用。同时，此次对六
月雪药材所进行的实验，探索出了对其理化鉴别的
最佳有效方法，为以后的鉴别工作科学、方便、快速、
有效地进行具有重大意义。
参考文献:
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(收稿日期:2014 － 04 － 28) (责任编辑:敖慧斌)
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3 期 李洪亮，等 赣南六月雪质量标准研究