全 文 ：·论 著·
六月雪的提取工艺研究
王红爱，黄位耀，张云，张霞
作者单位:510317 广州市，广东省第二人民医院药学部
【摘 要】 目的 优选六月雪的最佳提取工艺。方法 采用正交实验法，以提取液中齐墩果酸的含量及总固体
得率为指标，综合评分优选药材的提取工艺。结果 药材较优的提取工艺为加水 5 倍，提取 2 次，每次 1． 5h。结论
优选的提取工艺各活性成分提取率高，操作简便，适用于生产。
【关键词】 六月雪;正交实验法;提取工艺;齐墩果酸
【中图分类号】 R 284． 1 【文献标识码】 A 【文章编号】 1674 － 3296(2011)12A － 0049 － 02
Study of the extraction process of Iiuyuexue WANG Hong-ai，HUANG Wei-yao，ZHANG Yun，et al． Department of Pharma-
cy，The Second Peoples Hospital of Guangdong，Guangzhou，Guangdong 510317，China
【Abstract】 Objective To study the technology of optimal extraction for Iiuyuexue． Methods Orthogonal test was
employed for selecting the optimum of extraction technology by composite score，as an indicator to the contents of oceanolic
acid，total solid matters in water extraction． Results Five volumes of water，extracting 2 times with half an hour for each time
was considered the optimum extraction technology of herbs． Conclusion The considerable extraction rate of active components
in the drugs is achieved by applying the selected technology，and the simple method is fit for production．
【Key words】 Liuyuexue;Orthogonal design;Extraction technology;Oceanolic acid
六月雪为茜草科植物白马骨、六月雪的全株，具有清热利
湿、消肿止痛的作用［1，2］。六月雪用于退热，仅限于古代本草
的记载，现代临床上未见报道。但民间用大剂量煎水服治疗不
明原因的高热或高热用药无效者，效果显著［3］。本文以齐墩
果酸与总固体得率为指标，重点考察六月雪的提取工艺，为制
剂研发提供参考。
1 材料与仪器
WATERS2695 /2996 型高效液相色谱仪(美国) ;S8-5200
超声波清洗机(宁波新芝科器研究所) ;BL-220H 型电子分析
天平(日本岛津) ;电热鼓风恒温干燥器(上海讯能电热设备有
限公司)。所有药材均购自广州市致信药业有限公司。齐墩
果酸(中国药品生物制品检定所，批号:110709-200505) ;甲醇、
乙腈(美国迪马公司，批号:20110612、20110713，色谱纯) ;其余
试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 含量测定方法
2． 1． 1 色谱条件:色谱柱 Kromasil C18(250． 0mm × 4． 6mm，
5μm) ;以甲醇-0． 04%冰醋酸水溶液(内含 0． 02%的三乙胺)
(85∶ 15) ，为流动相;流速 1． 0ml /min;进样量 20μl;柱温 30℃;
检测波长为 215nm。在此条件下，供试品中齐墩果酸峰与其他
组分峰能达到基线分离，理论板数按齐墩果酸峰计算≥3000。
2． 1． 2 标准曲线的绘制:精密称取齐墩果酸对照品 25． 21mg，
置 50ml 棕色量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，得到
0. 5042mg /ml的齐墩果酸对照品溶液。精密量取齐墩果酸对
照品溶液(0． 5042mg /ml)5、10、15、20、25、30μl 注入液相色谱
仪，按上述色谱条件测定齐墩果酸色谱峰面积，以齐墩果酸进
样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得齐墩果酸的回归方
程:Y = 324276． 1X － 616． 3(r = 0． 9997) ，线性范围:2. 521 ～
15. 126μg。结果表明在此范围内齐墩果酸进样量与峰面积呈
良好的线性关系。
2． 1． 3 供试品溶液的制备:按处方比例称取药材 100g，提取，
提取液浓缩定容至 1000ml 容量瓶中。精密移取提取液 10ml，
置蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇超声溶解，定容至 50ml 容量瓶
中，作为供试品溶液。
2． 1． 4 含量测定:照《中国药典》2010 年版一部附录高效液相
色谱法测定。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各
20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。色谱图见图 1、图 2。
图 1 齐墩果酸标准品 HPLC色谱图
图 2 六月雪水提取液样品 HPLC色谱图
2． 2 正交实验设计与结果
2． 2． 1 正交实验设计:根据六月雪药物活性成分的理化性质、
药理学研究结果，本文以水为提取介质，以测定提取液中齐墩
果酸含量和总固体得率为指标，采用正交实验法，优选处方中
药材的提取工艺条件。根据预实验结果，选取影响提取效果的
·94·临床合理用药 2011 年 12 月第 4 卷第 12A期 Chin J of Clinical Rational Drug Use，December 2011，Vol. 4 No. 12A
DOI:10.15887/j.cnki.13-1389/r.2011.23.025
因素和水平。实验方案见表 1。
表 1 实验因素水平表
水平
因素
加水量(A，倍) 提取时间(B，h) 提取次数(C，次)
1 3 0． 5 1
2 5 1． 0 2
3 7 1． 5 3
2． 2． 2 样品溶液的制备:按处方量称取药材，按 L9(3
4)实验
列号各条件分别回流提取、滤过，并浓缩定容到 1000ml，放置
备用。
2． 2． 3 总固体得率的测定:精密量取各提取液 100ml 置已恒
重的蒸发皿内，水浴蒸干，置 105℃烘箱中，干燥 3h，取出置干
燥器中冷却 0． 5h，称重，置 105℃烘箱中，干燥 1h，至恒重，计算
总固体得率。
2． 2． 4 含量测定:按“2． 1”项下测定供试品溶液中齐墩果酸
的含量(mg /g，即每克药材所含齐墩果酸的含量)。实验数据
见表 2，方差分析见表 3。
表 2 正交实验结果
实验号
因素
A B C D
实验结果
总固体得
率(%)
齐墩果酸
(mg /g)
综合得分
(分)
1 1 1 1 1 10． 17 7． 16 47． 3
2 1 2 2 2 15． 32 11． 42 74． 0
3 1 3 3 3 23． 46 12． 23 91． 2
4 2 1 2 3 14． 39 13． 51 81． 1
5 2 2 3 1 22． 31 14． 32 98． 0
6 2 3 1 2 15． 26 10． 28 69． 1
7 3 1 3 2 21． 26 13． 26 91． 8
8 3 2 1 3 13． 54 9． 09 61． 2
9 3 3 2 1 19． 71 11． 16 80． 4
Ⅰj 70． 833 73． 400 59． 200 75． 233
Ⅱj 82． 733 77． 733 78． 500 78． 300 ∑
9
i = 1
yi = 694． 2
Ⅲj 77． 800 80． 233 93． 667 77． 833
Rj 11． 900 6． 833 34． 467 3． 067 CT =53 541． 6
注:综合评分 =(总固体得率 /最大总固体得率)× 100 × 0． 4 +(齐墩果酸含
量 /最大齐墩果酸含量)×100 × 0． 6
2． 2． 5 结果分析:由方差分析可知，C因素对提取效果有显著
表 3 方差分析结果
方差来源 离均差平方和 自由度 F值 F临界值 显著性检验
A 214． 482 2 13． 093 19． 000
B 71． 722 2 4． 387 19． 000
C 1790． 469 2 109． 295 19． 000 P ＜0． 05
D 16． 38 2 19． 000 —
F0． 01(2，2)=99，F0． 05(2，2)=19
影响，即提取次数对提取效果有显著差异，由直观分析结果和
比较各因素的极差值可看出，影响提取效果的因素顺序为 C ＞
A ＞ B，较优的提取工艺是 A2B3C2。综合分析结果，选择加水
量为 5 倍量，提取 2 次，每次 1． 5h。所以确定药材较优的提取
工艺条件为 A2B3C2。
3 讨 论
危莉等［4］将六月雪全草粗粉的甲醇提取物在高效硅胶 G
板上以齐墩果酸标准品对照，用氯仿 ∶ 甲醇 ∶ 水(30 ∶ 10 ∶ 1)展
开;董立莎等［5］则以丙酮回流提取六月雪，分别用车叶草苷和
齐墩果酸对照，以氯仿∶乙酸乙酯 ∶ 异丙醇(1∶ 2 ∶ 2)展开，于对
照品相应位置上均显示有斑点。本文经高效液相色谱法测定，
以齐墩果酸为对照品，在同一保留时间处，可见相同色谱峰，可
鉴别六月雪成分中含有齐墩果酸。本文则以齐墩果酸为有效
成分的代表，以其与总固体得率为指标，优选出六月雪的提取
工艺。
参考文献
1 中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志［M］．北京:科学出
版社，1999:159 － 163．
2 颜超，胡仙青．浙中野生木本植物药用资源介绍［J］．基层中药杂志，
2002，16(2) :37 － 38．
3 江苏新医学院． 中药大辞典［M］． 上海:上海人民出版社，1977:
697 － 698．
4 危莉，贾宪生，陈德缓．民族药白马骨与六月雪的比较鉴别［J］．中国
民族医药杂志，2000，6(12) :86．
5 董立莎，何中鑫． 六月雪的质量标准研究［J］． 陕西中医，2001，22
(2) :112 － 113．
(收稿日期:2011 － 08 － 31)
(上接第 46 页)
用方便，依从性好，值得临床推广［6］。
4 讨 论
RRI患儿需广泛地应用抗生素治疗。近年来随着抗生素
的应用范围逐渐扩大，呼吸道感染病原菌不同程度的产生了抗
药性，致使部分患儿呼吸系统出现反复感染，治疗起来比较
棘手。
匹多莫德为多相广谱免疫促进剂，可显著提高免疫水平低
下患儿的各项免疫指标。根据匹多莫德辅助治疗小儿 RRI 的
疗效观察，可有效地缩短抗生素的用药时间，也可减少耐药菌
株的产生，同时对 RRI有预防作用。因此，积极促进影响机体
免疫功能药安全、有效、经济的使用是医院药学人员的重要
职责。
参考文献
1 朱丽娟，梁力泳．匹多莫德防治儿童反复呼吸道感染疗效观察［J］．
中国实用医药，2009，5(13) :125．
2 周焕炯．儿科呼吸系统反复感染的治疗体会［J］． 中国医药指南，
2011，1(9) :79．
3 张海涛．浅谈抗生素的临床应用［J］． 中国民族民间医药，2010，4
(2) :25．
4 黄际薇，麦海燕，江先合．广东地区 97 家医院 2006 － 2009 年影响机
体免疫功能药利用分析［J］．中国药房，2011，2(2) :101．
5 孙凌新，杨晓松．匹多莫德防治反复呼吸道感染 55 例临床疗效分析
［J］．临床军医杂志，2010，12(6) :982．
6 张雷，王风圈．匹多莫德口服液辅助治疗儿童反复呼吸道感染临床
疗效观察［J］．中国现代药物应用，2010，10(4) :19．
(收稿日期:2011 － 08 － 04)
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