全 文 ：Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2016 November，Vol． 27 No． 6
收稿日期：2016-03-15
作者简介：高美华，女，主管药师，研究方向：中药质量分析。Email：1023372504@qq.com。通信作者：张军，男，博士，研究员，研究方向：
中药新药研究与开发。Email：zhjxsh@aliyun.com。
基金项目：国家自然科学资金项目（81274191，81503523）；广东省产学研结合项目（2013B090500119）。
隔山香为伞形科山芹属植物隔山香 Ostericum
citriodorum（Hance）Yuan et Shan 的根，主要分布于
两广、闽、湘等地。性平，味辛、微苦，具有疏风
清热、祛痰止咳、活血散瘀、行气止痛之功效，临
隔山香药材中异莳萝脑乙二醇的薄层鉴别及含量测定
高美华 1，刘 磐 2，梁土亮 2，张双伟 3，李 华 1，张 军 2（1. 广东省药品检验所，广东 广州 510180；
2. 广州中医药大学，广东 广州 510006；3. 广州医科大学附属第二医院心血管疾病研究所，广东 广州
510260）
摘要：目的 建立隔山香药材中异莳萝脑乙二醇的TLC鉴别及HPLC含量测定方法。方法 采用TLC法，以
三氯甲烷-丙酮（5∶1）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，对隔山香药材中的异莳萝脑乙二醇进行鉴
别。采用HPLC法测定隔山香药材中异莳萝脑乙二醇的含量，色谱柱：DiamonsilC18色谱柱（5μm，250mm×
4.6mm）；流动相为甲醇-水（32∶68）；流速为1.0mL· in-1；检测波长为210nm；柱温为25℃；进样量：10
μL。结果 在优化色谱条件下薄层斑点清晰，分离效果好，方法耐用性佳；异莳萝脑乙二醇在0.0468～0.468
μg范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为101.4%，RSD为1.4%。结论 本研究所建立的定性定量
方法简便、准确、重现性好，可用于隔山香药材的质量控制。
关键词：隔山香；异莳萝脑乙二醇；薄层色谱法；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1文献标志码：A 文章编号：1003-9783（2016）06-0860-04
doi：10.19378/j. issn. 1003-9783. 2016. 06. 023
Identification and Content Determination of Isodillapiolglycol in Radix Osterici Citriodori by TLC and
HPLC
GAO Meihua1，LIU Pan2，LIANG Tuliang2，ZHANG Shuangwei3，LI Hua1，ZHANG Jun2（1. Guangdong Institute for
Drug Control，Guangzhou 510180 Guangdong，China；2. Development & Research Center of New Chinese Drugs，
Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006 Guangdong，China；3. Institute of Cardiovascular
Disease，the Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou 510260 Guangdong，China）
Abstract：Objective To establish methods for the identification and determination of isodillapiolglycol in Radix
Osterici Citriodori（Geshanxiang）.Methods Thin layer chromatography（TLC） was performed using chloroform-
acetone（5∶1）as developing solvent and 10 % sulfuric acid ethanol solution as colorimetric agent. High performance
liquid chromatography（HPLC）was performed on Diamonsil C18column（5μm，250 mm×4.6 mm）with the mobile
phase of methanol-water（32∶68）. The flow rate was 1.0 mL·min-1and the column temperature was kept at 25℃. The
detective wavelength was set at 210 nm and the injection volume was 10μL.Results The TLC spots were clear and
can be well separated under the optimal chromatographic conditions. The calibration curve of isodillapiolglycol showed a
good linearity in the range of 0.0468-0.468μg（r=0.9999）. The average recovery was 101.4 % and RSD was 1.4 %
（n=6）.Conclusion The methods are simple，accurate and reproducible，and can be used for the quality control of
Radix Osterici Citriodori.
Keywords：Radix Osterici Citriodori；isodillapiolglycol；thin layer chromatography（TLC）；high performance liquid
chromatography
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中药新药与临床药理 2016年 11月第 27卷第 6期
床用于心绞痛、腹痛、胃痛以及跌打损伤等疾病的
治疗[1-2]。《植物名实图考》、《中华本草》、《中药大辞
典》、《全国中草药汇编》、《福建药物志》、《广西实用
中草药新选》等对隔山香药材的功效与应用均有收
载[3-7]。同时，中药部颁标准[8]也记载了以隔山香为主
药的成方制剂如护心胶囊。课题组在前期开展了隔
山香中异芹菜脑的TLC鉴别以及其含量测定研究[9-11]，
但未对隔山香中其成分的质量控制进行研究。《湖南
省中药材标准》[12]、《云南省中药材标准》[13]仅建立了以
β-谷甾醇为对照品的TLC 鉴别，缺乏特异性和专
属性。
苯丙素类化合物异莳萝脑乙二醇主要分布于隔
山香乙酸乙酯部位，预试验发现其具有较好的舒张
大鼠离体胸主动脉血管的活性，是隔山香药材“行
气止痛”功效的一个主要药效物质。丁云梅等[14]从隔
山香根的石油醚提取物中分离鉴定出包括异莳萝脑
乙二醇在内的4种结晶性成分，但并没有开展关于
异莳萝脑乙二醇的TLC鉴别以及含量测定；目前也
未见其定性定量的文献报道。本实验建立了异莳萝
脑乙二醇的TLC鉴别以及含量测定方法，为隔山香
药材的质量控制了提供方法和依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 LC- 20A 高效液相色谱仪（包括 UV 检测
器，LC-20AT 泵，SIL-20A 自动进样器，Labsolution
色谱工作站），岛津仪器苏州有限公司；KQ-400KDE
型高功率数控超声波清洗器，江苏昆山超声仪器有
限公司；CP225D 型电子分析天平（十万分之一）、
AB204-N 型电子分析天平（万分之一），均为美国
Mettler Toledo 公司；硅胶 G60 预制板，德国 Merck
公司。
1.2 试药 隔山香药材3批（产地分别为广西壮族自
治区的河池、桂林和灵山），经广州中医药大学张
军研究员鉴定，均为隔山香 Ostericum citriodorum
（Hance）Yuan et Shan的根；异莳萝脑乙二醇对照品
（Isodillapiolglycol，白色棱状结晶，分子式：C12H16O6，
分子量：256），结构式见图1，为广州中医药大学新
药开发研究中心分离、鉴定，经面积归一化法确定
纯度大于99.0 %；水为超纯水；甲醇为色谱纯；其
他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 隔山香药材中异莳萝脑乙二醇的 TLC鉴别
2.1.1 对照品溶液的制备 取异莳萝脑乙二醇对照品
适量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对
照品溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备 取隔山香药材粉末 1 g，
加甲醇50 mL，超声处理1 h，滤过，滤液蒸干，残
渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。
2.1.3 鉴别方法 照薄层色谱法（《中国药典》2010版
一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述溶液各10μL，分别
点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮（5∶1）
为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 %硫酸乙醇
溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检
视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，
显相同颜色的斑点，见图2。
1. 异莳萝脑乙二醇对照品；2. 隔山香（河池）；3. 隔山香（桂林）；4. 隔
山香（灵山）
图 2 隔山香 TLC色谱图
Figure 2 TLC chromatograms of Radix Osterici Citriodori
2.2 隔山香药材中异莳萝脑乙二醇的含量测定
2.2.1 色谱条件 采用 Diamonsil C18色谱柱（5μm，
250 mm×4.6 mm）；流动相为甲醇-水（32∶68）；流
速为 1.0 mL· in-1；检测波长为 210 nm；柱温为
25℃；进样量为 10μL。隔山香 HPLC 色谱图见图
3。
图 1 异莳萝脑乙二醇结构式[15]
Figure 1 Structure of isodillapiolglycol
1 2 3 4
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2016 November，Vol． 27 No． 6
2.2.2 对照品溶液的制备 取异莳萝脑乙二醇对照品
适量，精密称定（11.71 mg），置于50 mL量瓶中，加
甲醇溶解并稀释至刻度，精密量取2 mL置20 mL量
瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2.3 供试品溶液的制备 取隔山香药材粉末（过4
号筛）约 1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加
入甲醇 50 mL，称定质量，超声处理（功率 250 W，
频率33 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补
足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.4 线性关系的考察 精密吸取上述异莳萝脑乙二
醇对照品溶液2，4，8，10，12，16，20μL注入高
效液相色谱仪，依法测定，以对照品的进样质量
（μg）对平均峰面积进行线性回归，得线性方程为
Y=7095315.69X+11123.27（r=0.9999）。结果表明异莳
萝脑乙二醇在0.0468～0.468μg范围内呈良好的线性
关系。
2.2.5 精密度试验 分别精密吸取 2.2.2 项下对照品
溶液10μL，连续测定6次，测定峰面积，得峰面积
分别为 1671595，1692837，1692016，1720190，
1696910，1711365，RSD为1.0 %。结果表明精密度
良好。
2.2.6 重复性试验 取同一批隔山香药材（桂林）粉末
6份，精密称定，按 2.2.3项下方法制备供试品溶液，
依法测定，异莳萝脑乙二醇的平均含量（n=6）为0.291
mg·g-1，RSD为0.9 %，结果表明重复性良好。
2.2.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，依法
分别于 0，1，2，4，8，12，24 h 各进样 10μL测
定，结果异莳萝脑乙二醇的平均含量为0.293mg·mL-1，
RSD 为1.1 %。结果表明，供试品溶液在24 h内稳
定。
2.2.8 加样回收率试验 取6份已知含量（0.291mg·g-1）
的同一批隔山香药材（桂林）粉末约0.5 g，精密称定，
分别精密加入约相当于药材中异莳萝脑乙二醇质量
的对照品适量，按2.2.3项下制备供试品溶液，依法
测定，计算回收率。结果显示，异莳萝脑乙二醇的
平均加样回收率为101.4 %，RSD=1.4 %。提示本法
回收率良好，适合本品的含量测定，见表1。
表 1 加样回收率试验结果（n=6）
Table 1 Recovery of isodillapiolglycol in the samples
2.2.9 样品含量测定 分别取广西不同产地隔山香药
材粉末各约1 g，精密称定，按 2.2.3 项下制备供试
品溶液，依法测定，计算异莳萝脑乙二醇的含量，
结果见表2。
表 2 不同产地的隔山香药材中异莳萝脑乙二醇的含量测定
Table 2 Content determination of isodillapiolglycol in Radix
Osterici Citriodori from different regions
a. 异莳萝脑乙二醇对照品；b. 隔山香药材
图 3 隔山香 HPLC色谱图
Figure 3 HPLC chromatograms of Radix Osterici Citriodori
t/min
a
t/min
b
序号
1
2
3
4
5
6
供试品
/g
0.5002
0.5089
0.5165
0.5032
0.5208
0.5009
供试品
含量/mg
.146
0.148
0.150
0.147
.152
.146
对照品
加入量/mg
0.143
0.143
0.143
0.143
0.143
0.143
实测量
/mg
0.294
0.295
0.294
0.292
0.296
0.289
回收率
/%
103.3
102.7
100.0
101.9
100.8
99.9
平均回
收率/%
101.4
RSD
/%
1.4
产地
河池1
河池2
桂林1
桂林2
灵山1
灵山2
含量/mg· -1
0.297
0.294
0.291
0.292
0.307
0.328
平均含量/mg· -1
0.295
0.291
0.318
mV mV
50
40
30
20
10
0
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.50.0 .5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5
50
40
30
20
10
0
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中药新药与临床药理 2016年 11月第 27卷第 6期
3 讨论
在开展异莳萝脑乙二醇的TLC鉴别中，本实验
分别考察了70 %乙醇、甲醇回流、甲醇超声提取对
薄层斑点的影响；在异莳萝脑乙二醇的含量测定中，
依次考察了溶媒种类、提取方式、溶媒用量、提取
时间对隔山香中异莳萝脑乙二醇含量测定的影响，
最终选定了本研究所建立的方法。隔山香中异莳萝
脑乙二醇的TLC鉴别以及HPLC含量测定结果显示，
隔山香药材在优化色谱条件下的薄层斑点清晰，分
离效果好。异莳萝脑乙二醇液相色谱峰分离良好，
标准曲线在 0.0468～0.468μg 范围内线性关系良好
（r=0.9999），精密度、重复性以及稳定性试验的RSD
值分别为1.0 %、0.9 %、1.1 %，样品平均回收率为
101.4 %，RSD=1.4 %。以上结果表明，本实验所建
立的异莳萝脑乙二醇的定性定量方法简便、准确、
重现性好，为进一步完善其质量控制提供了参考。
参考文献：
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社，1979：2425.
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美术出版社，2005：53.
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学报，1983，25（3）：251-252.
[15] 汤须崇. 隔山香化学成分分离及药理活性初探[D]. 泉州：华侨大
学，2015：2-3.
（编辑：梁进权）
收稿日期：2016-01-19
作者简介：刘丽萍，女，硕士研究生，研究方向：中药制剂及质量控制研究。Email：llp911113@163.com。通信作者：雷鹏，男，副教授，研究方
向：中药新药研发及中药质量控制。Email：lp7222003@163.com。
基金项目：湖南省自然科学基金项目（12JJ6090）。
炮制对清宁片中5种蒽醌含量的影响
刘丽萍 1，雷 鹏 1，2，黄 琪 1，刘海涛 1，谭润雅 1，2，周 政 1，2（1. 中南大学湘雅医院药学部，湖南 长沙
410008；2. 中南大学药学院，湖南 长沙 410013）
摘要：目的 建立反相高效液相色谱法同时测定清宁片中5种蒽醌的含量，研究炮制对清宁片中5种蒽醌含量
的影响。方法 采用反相高效液相色谱法测定清宁片中总的和游离的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、
大黄素甲醚的含量。色谱柱：Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；柱温：30℃；流速：1.0 mL· in-1；流
动相：甲醇-0.1 %磷酸（83∶17）；检测波长为254 nm。结果 芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄
素甲醚的线性范围分别为 0.0056~0.1137μg（r=0.9999）、0.0164~0.3296μg（r=0.9998）、0.0108~0.2176μg（r=
0.9999）、0.0191~0.3824μg（r=0.9999）、0.0097~0.1952μg（r=0.9993）；平均加样回收率（n=5）分别为 98.74 %
（RSD=2.93%）、95.45%（RSD=1.61%）、94.76%（RSD=0.91%）、90.10%（RSD=0.97%）、95.14%（RSD=0.88%）。
清宁片中总、游离及结合的蒽醌类成分均比生大黄中少。结论 建立的方法简便、准确、重复性好，可用于清
宁片中5种蒽醌的含量测定。
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