全 文 ：北方园艺２０１４（０６）：１０７～１１１ ·生物技术·
第一作者简介：刘雯雯（１９８８－），女，河北衡水人，硕士，研究方向为
植物基因工程及分子生物学。Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｉａｏｋｅｌａｌａ１２１４＠１６３．ｃｏｍ．
责任作者：梁玉玲（１９６５－），女，河北保定人，教授，研究方向为植物
基因工程及分子生物学。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｕｌｉｎｇ＿ｌｉａｎｇ＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：河北大学自然科学研究计划资助项目（２０１１－２１７）。
收稿日期：２０１３－１１－１８
多裂叶荆芥离体再生体系的建立
刘 雯 雯１，梁 玉 玲１，２，管 延 英３，鲜 于 梁 艳１
（１．河北大学 生命科学学院，河北 保定０７１００２；２．河北省生物工程技术研究中心，河北 保定０７１００２；
３．保定学院 生化系，河北 保定０７１０００）
　　摘　要：以多裂叶荆芥无菌幼苗根、茎段、叶片等为外植体，进行不定芽离体再生，建立了多
裂叶荆芥离体快速繁殖体系，研究了不同外植体和附加不同外源激素配比对不定芽离体再生的
影响。结果表明：多裂叶荆芥离体再生的最佳外植体为带有叶腋的茎段，诱导不定芽再生的适宜
培养基为ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋１．０ｍｇ／Ｌ　ＴＤＺ，每个外植体产生不定芽数平均为１８个；不定芽
增殖培养每４周为１个周期，理论年繁殖系数可达１×１８１２；当不定芽生长至３～４ｃｍ时移入生根
培养基诱导生根；适宜的生根培养基为ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ，移栽成活率为５３．８５％。
关键词：多裂叶荆芥；离体再生；６－ＢＡ；ＴＤＺ
中图分类号：Ｒ　２８２．７１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１４）－０６－０１０７－０５
　　多裂叶荆芥（Ｎｅｐｅｔａ　ｍｕｌｔｉｆｉｄａ（Ｌ．）Ｂｒｉｑ．）属唇形科
裂叶荆芥属一年生草本植物，具有解表散风、透疹功效，
用于感冒、头痛、麻疹、风疹和疮疡初起，炒炭后可用于
消炎、止血等［１］，为八大祁药之一。中药荆芥为裂叶荆
芥和多裂叶荆芥的茎叶和花叶，药用价值高［２］。多裂叶
荆芥喜阳光充足，怕干旱，生长期忌大雨，雨水过多容易
导致大面积死亡，忌重茬，种植风险较大。目前国外对
荆芥的研究多集中于非挥发油的化学部分［３］，如在荆芥
当中提取一些新的化合物具有抗真菌的活性［４］，另外荆
芥还可作为一种抗焦虑药物使用［５］。国内则对挥发油
的研究较多，包括挥发油的化学组成、炮制对油的影响、
制剂、药理作用、以挥发油为主要成分的药材质量控制
等方面［３］。而对多裂叶荆芥再生体系建立的研究甚少
且不全面。该研究利用多裂叶荆芥根、带叶腋的茎段、
不带叶腋的茎段和叶片４种幼嫩外植体材料进行离体
再生，建立起多裂叶荆芥离体快繁体系，以期为其大规
模工厂化育苗奠定基础，并为利用基因工程技术进行品
质改良提供基本的技术保障。
１　材料与方法
１．１　试验材料
　　多裂叶荆芥（Ｎｅｐｅｔａ　ｍｕｌｔｉｆｉｄａ（Ｌ．）Ｂｒｉｑ．）成熟种子
购自河北省安国药材市场。将种子用７０％的酒精消
毒１ｍｉｎ，１．５％的次氯酸钠消毒１０～１５ｍｉｎ，用无菌水
冲洗４～５遍，接种于 ＭＳ培养基上，２５℃下无菌萌发，
光照时间１４ｈ／ｄ。约３ｄ后种子萌发，培养２０ｄ后，待
无菌苗高４ｃｍ以上时分别切取根、带叶腋茎段、不带叶
腋茎段和叶片作为外植体进行培养。
１．２　试验方法
１．２．１　培养基成分与培养条件　基本培养基为含３％
蔗糖和０．７％琼脂粉的 ＭＳ培养基（ｐＨ　５．８）。ＭＳ基本
培养基附加不同浓度的植物激素组合用于诱导不定芽
再生和诱导根的再生。培养基配制后经１２１℃高压灭
菌１５ｍｉｎ待用。外植体接种后，在温度（２５±２）℃、光
照强度３　０００ｌｘ、光照时间１６ｈ／ｄ条件下培养。
１．２．２　诱导不定芽再生　在 ＭＳ培养基中固定ＮＡＡ
的浓度为０．２ｍｇ／Ｌ，分别添加０、０．５、１．０、１．５、２．０ｍｇ／Ｌ
等不同浓度的６－ＢＡ或ＴＤＺ诱导不定芽再生，观察６－ＢＡ
以及ＴＤＺ对外植体不定芽诱导的影响。选取根、带叶
腋的茎段、不带叶腋的茎段、叶片４种不同种类的外植
体，分别接种到不同激素梯度的分化培养基中进行培
养。４种外植体选择要求长势相近，每种外植体每瓶接
种５个，共接种１０瓶。接种后观察不定芽的再生情况，
筛选出不定芽诱导的适宜培养基。待不定芽生长形成
丛生芽后，将不定芽分割后进行继代培养以促进芽的增
殖。愈伤组织诱导率＝（形成愈伤组织的外植体个数／
接种外植体个数）×１００％；生根率＝（分化根的外植体个
数／接种外植体个数）×１００％；分化率＝（分化出芽的外
植体个数／接种外植体个数）×１００％；丛生芽率＝（分化
出丛生芽的外植体个数／接种外植体个数）×１００％；每
个外植体上超过２个芽均定义为丛生芽。
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·生物技术· 北方园艺２０１４（０６）：１０７～１１１
１．２．３　诱导不定芽生根　分别采用１／２ＭＳ、ＭＳ＋
０．１ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ、ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ、ＭＳ＋０．１ｍｇ／Ｌ
ＩＢＡ培养基为诱导不定芽生根的培养基。将芽丛中生
长１个月，高１～２ｃｍ健壮且生长一致的芽苗切下接种
于以上培养基中。每瓶接种５个，接种１０瓶。接种后观
察不定芽的生长和生根状况。生根率（％）＝（生根苗个
数／总再生苗个数）×１００％；生根数（条）＝每个再生苗生
根数之和／生根苗个数。
１．２．４　练苗与移栽　当根长至３～４ｃｍ左右时，练苗
３ｄ后将小苗取出，移栽入花卉土中，２０～２５℃的环境中
培养，３０ｄ后统计存活率，期间注重保湿管理。
１．２．５　年繁殖系数的计算　参考计算公式ｙ＝ｍ×ｘｎ，
其中，ｙ＝年繁殖系数；ｍ＝无菌母株苗数；ｘ＝每个培养
　　　　
周期增殖倍数；ｎ＝全年可增殖的周期数即ｎ＝３６５／Ｔ；
Ｔ＝每个继代周期的天数；多裂叶荆芥的理论上的年繁
殖系数为ｙ＝１×１８１２。
２　结果与分析
２．１　多裂叶荆芥离体快繁体系的建立
通过种子消毒获得无菌苗，然后选取其根、带叶腋
的茎段和不带叶腋的茎段、叶片作为外植体在不同培养
基方案下进行不定芽诱导。研究发现，带叶腋的茎段，
分化速度最快，２～３ｄ叶腋处出现丛生芽，７ｄ左右茎段
生理学下端切口处出现嫩绿色愈伤组织，１５ｄ后愈伤组
织上再生出丛生芽，丛生芽率最高可达到７６％。培养１
个月后统计再生丛生芽数，发现平均每个外植体可产
　　　　
图１　多裂叶荆芥的组织培养与植株再生
注：（Ａ）带叶腋茎段再生的丛生芽；（Ｂ）再生植株；（Ｃ）移栽苗。
Ｆｉｇ．１　Ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔｌｅｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｎｅｐｅｔａ　ｍｕｌｔｉｆｉｄａ（Ｌ．）Ｂｒｉｑ．
Ｎｏｔｅ：（Ａ）Ｃｅｓｐｉｔｏｓｅ　ｂｕｄｓ　ｏｆ　ｓｔｅｍ　ｗｉｔｈ　ａｘｉｌａｒｙ；（Ｂ）Ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；（Ｃ）Ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ．
生１８个丛生芽（图１Ａ）。虽然在培养过程中带叶腋茎段
下端的愈伤组织出现了褐化现象，但并不影响丛生芽的
再生与生长。如果将愈伤组织与外植体分离开进行继
代培养，愈伤组织则会褐化死亡。将２～３ｃｍ长的丛生
芽从基部切割下来进行继代培养，可再产生丛生芽。待
苗长到３ｃｍ左右时，转入生根培养基诱导不定芽生根。
１个月之后获完整的多裂叶荆芥再生植株（图１Ｂ），练苗
后进行移栽（图１Ｃ）。
２．２　不同外植体诱导不定芽再生情况比较
以多裂叶荆芥无菌苗根、带叶腋茎段、不带叶腋
茎段、叶片４种外植体接种在不同的不定芽诱导培养
基上诱导不定芽再生，培养３０ｄ后比较不同外植体
的再分化情况。结果表明，多裂叶荆芥不同外植体的
再分化能力明显不同，根在培养５～７ｄ开始肿大膨
胀形成绿色愈伤组织，愈伤组织上可再分化出新的根，
而没有不定芽的分化（图２Ａ）；带叶腋茎段在培养１～
２ｄ后，叶腋处便开始再生出不定芽，随后基部产生嫩
绿色块状愈伤组织，愈伤组织上再生出新的不定芽
（图２Ｂ）和根；不带叶腋的茎段则不易分化出芽，而是
在切口处脱分化形成愈伤组织，培养１５ｄ可再生出
根（图２Ｃ）；叶片则在培养７～１０ｄ时切口边缘膨胀形
图２　多裂叶荆芥不同外植体培养１个月后的生长情况
注：（Ａ）根愈伤组织和再生根；（Ｂ）带叶腋的茎段再生的不定芽；（Ｃ）
不带叶腋茎段愈伤组织和再生根；（Ｄ）叶片愈伤组织和再生根。
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ
Ｎｅｐｅｔａ　ｍｕｌｔｉｆｉｄａｌ（Ｌ．）Ｂｒｉｑ．
Ｎｏｔｅ：（Ａ）Ｒｏｏｔ　ｃａｌｕｓ　ａｎｄ　ｒｏｏｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；（Ｂ）Ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｎｓ　ｂｕｄ　ｏｆ
ｓｔｅｍ　ｗｉｔｈ　ａｘｉｌａｒｙ；（Ｃ）Ｃａｌｕｓ　ｏｆ　ｓｔｅｍ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ａｘｉｌａｒｙ　ａｎｄ　ｒｏｏｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａ－
ｔｉｏｎ；（Ｄ）Ｌｅａｆ　ｃａｌｕｓ　ａｎｄ　ｒｏｏｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．
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北方园艺２０１４（０６）：１０７～１１１ ·生物技术·
成浅绿色愈伤组织，培养１５ｄ左右开始再生出少量的根
（图２Ｄ）。
多裂叶荆芥无菌苗的根、带叶腋茎段、不带叶腋茎
段和叶片等外植体均可直接分化，其中根、不带叶腋茎
段和叶片可分化出根，分化出根的百分率最高分别是
９８．００％、５０．００％、２２．００％（表１），而带叶腋茎段分化不
定芽分化率最高可达到１００．００％（表２），分化不定芽能
力显然要强于另外３种。且分化出不定芽可继续进行
增殖，最终进行大规模工厂化育苗。４种外植体对比，带
叶腋茎段最适合诱导不定芽再生。
　　表１ 不同细胞分裂素对多裂叶荆芥不同外植体分化根的影响
　　Ｔａｂｌｅ　１ Ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｙｔｏｋｉｎｉｎｓ　ｏｎ　ｒｏｏｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｎｅｐｅｔａ　ｍｕｌｔｉｆｉｄａ（Ｌ．）Ｂｒｉｑ．
细胞分裂素浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｙｔｏｋｉｎｉｏｎｓ
／ｍｇ·Ｌ－１
根分化率Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｒｏｏｔ／％
根Ｒｏｏｔ 不带叶腋茎段Ｓｔｅｍ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ａｘｉｌａｒｙ 叶片Ｌｅａｆ
６－ＢＡ　 ＴＤＺ　 ６－ＢＡ　 ＴＤＺ　 ６－ＢＡ　 ＴＤＺ
０　 ９８．００ － ５０．００ － ３．３３ －
０．５　 ９５．００　 ９６．００　 ３０．００　 ０　 ２２．００　 ０
１．０　 ８４．００　 ６０．００　 １５．００　 ０　 ２２．００　 ０
１．５　 ７４．００　 ５７．４５　 ０　 ０　 ２．００　 ０
２．０　 ３１．００　 ２５．００　 ０　 ０　 ３．００　 ０
３．０　 ２８．００　 １４．００　 ０　 ０　 ４．００　 ０
４．０　 ３３．３３ － ０ － ０ －
　　注：“－”代表试验未进行。下同。
２．３　不同细胞分裂素对带叶腋茎段分化不定芽的影响
将多裂叶荆芥带叶腋茎段接种到不同６－ＢＡ和ＴＤＺ
浓度培养基上，３０ｄ后统计不定芽分化情况。由表２可
知，细胞分裂素为６－ＢＡ时，带叶腋茎段芽分化率可达到
９４．２９％以上，随着６－ＢＡ浓度的升高，丛生芽率也升高，
当６－ＢＡ浓度为３．０ｍｇ／Ｌ时丛生芽率达到最大５７．１４％。
因此，ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋３．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ最适合带
叶腋茎段的不定芽诱导，平均丛生芽数为９个，但不定
芽会出现玻璃化现象，玻璃化苗在后期的生根培养基中
又恢复健康状态。
　　表２ 不同细胞分裂素对多裂叶荆芥带叶腋茎段分化不定芽的影响
　　Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｙｔｏｋｉｎｉｎｓ　ｏｎ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｓｅｇｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ｓｔｅｍ　ｗｉｔｈ　ａｘｉｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎｅｐｅｔａ　ｍｕｌｔｉｆｉｄａ（Ｌ．）Ｂｒｉｑ．
细胞分裂素浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｙｔｏｋｉｎｉｏｎｓ
／ｍｇ·Ｌ－１
愈伤组织诱导率
Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
根分化率
Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｒｏｏｔ／％
芽分化率
Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｂｕｄ／％
丛生芽率
Ｃｅｓｐｉｔｏｓｅ　ｂｕｄｓ　ｒａｔｅ／％
６－ＢＡ　 ＴＤＺ　 ６－ＢＡ　 ＴＤＺ　 ６－ＢＡ　 ＴＤＺ　 ６－ＢＡ　 ＴＤＺ
０．５　 １００．００　 １００．００　 ２０．００　 ０　 １００．００　 １００．００　 １０．００　 ２６．００
１．０　 １００．００　 １００．００　 １３．３３　 ０　 １００．００　 １００．００　 １３．３３　 ７６．００
１．５　 ７０．００　 １００．００　 ５．００　 ０　 １００．００　 １００．００　 ２５．００　 ４４．９０
２．０　 ７７．１４　 １００．００　 ５．７１　 ０　 １００．００　 １００．００　 ２２．８６　 ３３．３３
３．０　 ９７．１４　 １００．００　 ０　 ０　 １００．００　 ９４．００　 ５７．１４　 ２０．００
４．０　 ５４．２９ － ０ － ９４．２９ － ４８．５７ －
　　细胞分裂素为ＴＤＺ时，带叶腋茎段芽分化率均在
９４．００％以上，愈伤组织诱导率均为１００．００％，丛生芽率
随着ＴＤＺ的浓度的升高先升高后降低，当ＴＤＺ的浓度
为１．０ｍｇ／Ｌ时，带叶腋茎段的分化情况最好，无玻璃化
现象，分化率１００．００％，且丛生芽率达到最高值
７６．００％，平均丛生芽数为１８个。
对比２种细胞分裂素丛生芽率、丛生芽数和不定
芽生长状况，ＴＤＺ作为细胞分裂素是最佳选择，
ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋１．０ｍｇ／Ｌ　ＴＤＺ为最优的多裂叶
荆芥不定芽诱导培养基方案。
２．４　细胞分裂素对不同外植体诱导愈伤组织的影响
试验选取的４种外植体均可产生愈伤组织，其中，根
系表面肿大产生浅褐色愈伤组织，最后愈伤组织上面产生
新根，根很难分化出芽；带叶腋茎段在形态学下端切口处
产生绿色愈伤组织，并分化出根系和不定芽；不带叶腋茎
段两端切口处产生愈伤组织，低浓度细胞分裂素下，产生
新根，高浓度细胞分裂素下不分化，保持愈伤化状态，２０ｄ
左右愈伤组织褐化；叶片在切口部位产生绿色愈伤组织，
低浓度细胞分裂素下可产生少量根，高浓度细胞分裂素下
保持愈伤化状态不分化，２０ｄ后愈伤组织褐化。
由表３可知，叶片、带叶腋茎段和不带叶腋茎段均
可以形成绿色愈伤组织。叶片生成愈伤组织诱导率普
遍较高，６－ＢＡ浓度在０．５～２．０ｍｇ／Ｌ之间达到最高，愈
伤组织诱导率高达９０．００％，但是１５ｄ之后开始出现褐
化；不带叶腋茎段在１．５ｍｇ／Ｌ时，愈伤组织诱导率最
高，为１００．００％，但褐化现象同样存在；带叶腋茎段在形
态学下端也会产生愈伤组织，在６－ＢＡ浓度为３．０ｍｇ／Ｌ
时候愈伤组织诱导率最高为９７．１４％，且比其它６－ＢＡ浓
度处理愈伤组织块状大、颜色嫩绿、生长状况健康，后期
会褐化，但对不定芽生长无影响。由此可知，带叶腋愈
伤组织虽然后期出现褐化现象，但是对不定芽生长影
响较低，而叶片和不带叶腋茎段，应采取多次继代培养
基和加入活性炭等方法去改善褐化的状况，保持健康
的愈伤化状态，此步骤还有待探究。而ＴＤＺ浓度变化
９０１
·生物技术· 北方园艺２０１４（０６）：１０７～１１１
对愈伤组织的影响不显著，诱导叶片产生愈伤率均为
１００．００％，但是６－ＢＡ具有高效、稳定、廉价和易于使用
等特点，应用更为广泛。
表３　　　　不同６－ＢＡ浓度对多裂叶荆芥不同外植体
　　　　愈伤组织诱导率的影响
　　Ｔａｂｌｅ　３　Ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　６－ＢＡ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ
ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｎｅｐｅｔａ　ｍｕｌｔｉｆｉｄａ（Ｌ．）Ｂｒｉｑ．
６－ＢＡ浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
６－ＢＡ／ｍｇ·Ｌ－１
愈伤组织诱导率Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
根
Ｒｏｏｔ
带叶腋茎段
Ｓｔｅｍ　ｗｉｔｈ　ａｘｉｌａｒｙ
不带叶腋茎段
Ｓｔｅｍ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ａｘｉｌａｒｙ
叶片
Ｌｅａｆ
０　 ７４．００　 ９５．００　 ４６．００　 ７０．００
０．５　 ９５．００　 １００．００　 ６５．００　 ９０．００
１．０　 １００．００　 １００．００　 ８５．００　 ９０．００
１．５　 １００．００　 ７０．００　 １００．００　 ８８．００
２．０　 １００．００　 ７７．１４　 ８６．６７　 ８８．００
３．０　 １００．００　 ９７．１４　 ６６．６７　 ８４．００
４．０　 ８４．４４　 ５４．２９　 ４６．９４　 ７６．００
２．５　生根培养
将丛生芽中高度达２～３ｃｍ的芽切下，接种到不同
的生根培养基中，３～４ｄ后形态学下端开始形成愈伤组
织，７ｄ开始产生新根。表４为不同激素组合对多裂叶
荆芥培养３０ｄ后生根情况统计，当 ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ
ＮＡＡ时，生根率达到９０．００％，幼苗长势较好，无褐化现
象，株高能达到５ｃｍ左右；根系粗壮，且平均每个芽能产
生４条粗壮幼根。
表４　　　　　不同的激素组合对多裂叶荆芥
　　　　再生植株生根的影响
　　Ｔａｂｌｅ　４　　　Ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｎ
　　　　　　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｏｆ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｐｌａｎｔｌｅｔ　ｏｆ　Ｎｅｐｅｔａ　ｍｕｌｔｉｆｉｄａ（Ｌ．）Ｂｒｉｑ．
培养基 Ｍｅｄｉｕｍ
生根数
Ｒｏｏｔｉｎｇ
ｎｕｍｂｅｒ／条
生根率
Ｒｏｏｔｉｎｇ
ｒａｔｅ／％
生长情况Ｇｒｏｗｔｈ
１／２ＭＳ　 ３　 ６６．６７ 幼苗全部出现褐化、枯萎现象，长势差
ＭＳ＋０．１ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ　 ３　 ５４．５５
幼苗长势较高，能达到５ｃｍ左右，个别
褐化现象，个别长出花穗，生根较粗壮
ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ　 ４　 ９０．００
幼苗长势较好，无褐化现象，株高能达
到５ｃｍ左右，生根很粗壮
ＭＳ＋０．１ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ　 ２　 ７２．７３
幼苗基部有褐化现象，长势较好，生乳
白色小细根
２．６　练苗与移栽
当再生根长达３～４ｃｍ左右时，打开瓶盖，在培养基
表层铺一层无菌水以达到保湿和软化培养基作用。室内
自然光照下练苗３ｄ后可将小苗取出，用自来水冲洗掉附
着在苗上的培养基，直接将幼苗移栽入花卉土中，处于温
度２０～２５℃的环境中，期间注重保湿管理。移栽出来的荆
芥幼苗经过３０ｄ的培养，成活率为５３．８５％。
３　讨论
该试验通过不同外植体的选择以及不同细胞分裂素
处理，建立起多裂叶荆芥的快繁体系，带有叶腋的茎段在
ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋１．０ｍｇ／Ｌ　ＴＤＺ培养基中平均诱
导出１８个不定芽，切下不定芽可继续继代培养扩繁出丛
生芽，也可在ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ培养基中生根，最后移
栽。此体系为其大规模工厂化育苗奠定基础，并为利用基
因工程技术进行品质改良提供基本的技术保障。
栽培后期有些分化苗出现玻璃化现象，而转到生根
培养基中之后却慢慢恢复正常，可能的原因是如Ｋｅｖｅｒｓ
等［６］指出的，培养基中的细胞分裂素容易导致玻璃化。
细胞分裂素的主要功能之一是促进芽的分化，而玻璃苗
也易表现出茎节短、分枝多的特性。玻璃化苗产生率和
细胞分裂素含量呈正相关［７］。而试验中得出，使用６－ＢＡ
极易产生玻璃化现象，浓度越高，玻璃化现象越严重；而
ＴＤＺ则不易出现玻璃化，且诱导不定芽的最佳培养基方
案所使用浓度也比６－ＢＡ低，这与上述预测原因相符。
叶片和不带叶腋茎段诱导的愈伤组织在１５ｄ左右出
现褐化现象，并无法增殖和分化，造成了多裂叶荆芥组织
培养困难。出现褐化现象的多为木本植物，而多裂叶荆芥
作为草本植物出现这种状况，恰恰说明了组培过程中褐化
机理的复杂性、影响因子多样性、培养条件相关性的特
点［８］。可以通过尝试更换基本培养基，调整生长素、细胞
分裂素，不同防褐化剂处理以及短时间多次继代等方法去
抑制褐化的发生［９］。此步骤有待今后试验求证。
目前的药市行家认为，由于市场需求量大，多裂叶
荆芥的栽培很有前景和市场，另外多裂叶荆芥在东北等
地亦作荆芥入药，因此多裂叶荆芥的快繁体系建立，有
着很重要的价值。而且直接茎段取材，具有简易、快速、
污染率低、繁殖系数高的特点［１０］，短期内可以提供大量
栽培用苗。
参考文献
［１］　刘巨涛，杨智蕴．裂叶荆芥中非挥发油化学成分的提取［Ｊ］．解放军
医学高等专科学校学报，１９９８，２（２０）：６５－６７．
［２］　陈宏伟，崔林．微波法提取荆芥叶中的挥发油［Ｊ］．时珍国医国药，
２００２，１３（１０）：５８９．
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０１１
北方园艺２０１４（０６）：１１１～１１４ ·生物技术·
第一作者简介：彭海君（１９８８－），男，浙江临安人，硕士研究生，研究
方向为药用植物资源利用。Ｅ－ｍａｉｌ：ｐｅｎｇｈａｉｊｕｎ８８８１＠１６３．ｃｏｍ．
责任作者：胡润淮（１９５７－），男，教授，研究方向为药用植物化学分
析检测。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｕｒｈ５７＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：２０１２年浙江省大学生科技创新活动计划（新苗人才计
划）资助项目（２０１２Ｒ４１２０５３）。
收稿日期：２０１３－１１－２２
正交优化西红花组培快繁优化
彭 海 君，胡 润 淮
（浙江农林大学 林业与生物技术学院，浙江 临安３１１３００）
　　摘　要：以西红花带芽的球茎切块为外植体，采用正交实验，通过极差分析、方差分析和
多重比较，优选愈伤组织诱导条件、丛生芽增殖条件和球茎诱导条件。结果表明：适宜愈伤
组织诱导培养基为１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　２．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　０．４ｍｇ／Ｌ；丛生芽增殖培养基为
１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　０．６ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　２．０ｍｇ／Ｌ；球茎诱导培养基为１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋
１０％香蕉汁。
关键词：西红花；正交实验；诱导率；组培；快繁
中图分类号：Ｒ　２８２．７１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１４）０６－０１１１－０４
　　西红花（Ｃｒｏｃｕｓ　ｓａｔｉｖｕｓ　Ｌ．）属鸢尾科番红花属球根
类多年生草本植物，别名藏红花、番红花，素有“红色金
子”、“植物黄金”等美称［１］，原产于伊朗、西班牙、希腊等
地中海沿岸地区，我国于２０世纪６０年代引种栽培，现上
海、浙江、江苏、山东等地有较大规模栽植［２］。西红花以
花朵的红色柱头入药，有解郁安神、活血化瘀之功效，对
　　　　
经期不调、气血瘀滞、肿痛、肝肿硬、中风、瘫痪、久咳、虚
弱、炎症等有显著疗效，且无毒副作用，在民间广泛使
用［３－４］。现代药理研究表明，西红花可辅助治疗和预防
肝炎、肝硬化、肾病、冠心病、心绞痛、心脑血管疾病、肿
瘤、调节内分泌、抗缺氧、提高免疫力等［３］。西红花除了
在传统和现代医药上具有很高的药用价值外，作为一种
珍贵调味剂、香料和染料在欧洲应用已经有几百年的悠
久历史［４］。
西红花染色体为三倍体，花粉败育高，开花后罕见
结实，只能靠球茎繁殖。西红花球茎繁殖率很低，一般
比率只有１∶（１．２～１．５），因此繁殖速度较慢。组培快
繁因其快速的繁殖能力而在许多濒危珍稀植物繁殖方
面得到广泛应用。目前，解决西红花球茎资源短缺的思
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Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｎｅｐｅｔａ　ｍｕｌｔｉｆｉｄａ（Ｌ．）Ｂｒｉｑ．
ＬＩＵ　Ｗｅｎ－ｗｅｎ１，ＬＩＡＮＧ　Ｙｕ－ｌｉｎｇ１，２，ＧＵＡＮ　Ｙａｎ－ｙｉｎｇ３，ＸＩＡＮＹＵ　Ｌｉａｎｇ－ｙａｎ１
（１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈｅｂｅｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂａｏｄｉｎｇ，Ｈｅｂｅｉ　０７１００２；２．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｉｎ　Ｈｅｂｅｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，
Ｂａｏｄｉｎｇ，Ｈｅｂｅｉ　０７１００２；３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂａｏｄｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂａｏｄｉｎｇ，Ｈｅｂｅｉ　０７１０００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ　ａｓｅｐｔｉｃ　ｒｏｏｔ，ｓｔｅｍ　ａｎｄ　ｌｅａｆ　ｏｆ　Ｎｅｐｅｔａ　ｍｕｌｔｉｆｉｄａ （Ｌ．）Ｂｒｉｑ．ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔｓ，ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ，ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｒａｐｉｄ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ｂｅｔｗｅｅｎ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ａｎｄ　ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ　ｈｏｒｍｏｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ
ｅｘｐｌａｎｔ　ｆｏｒ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｓｅｇｍｅｎｔ　ｏｆ　ｓｔｅｍ　ｗｉｔｈ　ａｘｉｌｓ　ｏｆ　Ｎｅｐｅｔａ　ｍｕｌｔｉｆｉｄａ（Ｌ．）Ｂｒｉｑ．
Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｍｅｄｉｕｍ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋１．０ｍｇ／Ｌ　ＴＤＺ，ａｎｄ　ｅａｃｈ
ｅｘｐｌａｎｔ　ｃｏｕｌｄ　ｐｒｏｄｕｃｅ　ａｖｅｒａｇｅ　１８ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ．Ｔｈｅ　ｃｙｃｌｅ　ｔｏ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｗａｓ　４ｗｅｅｋｓ．Ｔｈｅ
ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅｏｒｙ　ｗａｓ　１×１８１２．Ｍｏｖｅ　ｔｈｅ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄ　ｉｎｔｏ　ｒｏｏｔ　ｍｅｄｉｕｍ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｗｈｅｎ　ｔｈｅ
ｂｕｄ　ｇｒｅｗ　ｔｏ　３～４ｃｍ．Ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｌａｎｔｌｅｔ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｗａｓ　ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ　ｓｕｒｖｉｖａｌ
ｒａｔｅ　ｗａｓ　５３．８５％．　
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｎｅｐｅｔａ　ｍｕｌｔｉｆｉｄａ（Ｌ．）Ｂｒｉｑ．；ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；６－ＢＡ；ＴＤＺ
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