全 文 ：JIANGXI JOURNAL OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
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溪黄草又名熊胆草、黄汁草、手擦黄，来源于唇
形科香茶菜属植物线纹香茶菜Rabdosia lophanthoi⁃
des（Buch.-Ham. ex D. Don）Hara的干燥全草[1]，功能
清热利湿，退黄，凉血散瘀。主要用于湿热黄疸，湿
热泻痢，跌打肿痛等证[2-4]，是我国南方地区民间常
用中药材之一。现代药理研究表明，溪黄草具有抗
炎、抗病毒、抑菌、护肝、抗肿瘤及增强免疫力等作
用[5]，日益受到众多专家学者的关注。
同时，当前市场上的溪黄草还存在着习用品众
多的情况。同属植物狭基线纹香茶菜 Rabdosia
Lophanthoides var. Gerardiana（Benth.）Hara、纤花香
茶菜Rabdosia Lophanthoides var. graciliflora（Benth.）
Hara和溪黄草 Rabdosia serra（Maxim.）Hara在民间
常用来充当中药溪黄草的习用品而加以使用[6]。国
内已有众多专家学者从药材性状鉴别、显微鉴别以
及理化鉴别的角度鉴别溪黄草及其习用品[7-9]，但有
关其分子生物学方面的研究仍然较少，Genbank上
有关其序列登记的信息亦较少。本文拟通过对比
研究溪黄草及其习用品的叶绿体基因 psbA-trnH序
列的差异，从分子生物学的角度探讨其差异，为溪
黄草及其习用品的鉴别提供新的参考依据。
1 仪器、材料与试药
1.1 材料
实验样品均采集于广东省华南药用植物种质
资源库，样品具体情况（详见表1）。
表1 样品信息表
编号
1
2
3
4
材料
线纹香
茶菜
狭基线纹
香茶菜
纤花香
茶菜
溪黄草
采集地
广东省华南药用
植物种质资源库
广东省华南药用
植物种质资源库
广东省华南药用
植物种质资源库
广东省华南药用
植物种质资源库
采集时间
2012.3.25
2012.3.25
2012.3.25
2012.3.25
标本号
JQE-022
JQE-023
JQE-024
JQE-021
Genbank号
JX404028
JX404029
JX404030
JX404031
1.2 试剂与仪器
植物基因组DNA提取试剂盒（北京天根生物技
术有限公司）；10×PCR Buffer缓冲液、Tris碱（上海
爱紫特生物科技有限公司）；Taq DNA聚合酶、
dNTPs（TaKaRa宝生物工程（大连）有限公司）；PCR
扩增引物合成（广州赢森生物科技有限公司）；
D-37520型台式离心机（德国 Eppendorf公司）；
PTC-100 型 PCR 仪（美国 M J Research 公司）；
DDY-Ⅲ型电泳仪（北京六一仪器厂）；凝胶成像系
统（美国BIO-RAD公司）。
2 方法
2.1 DNA的提取
材料收集后，用变色硅胶进行干燥。实验时取
约 10 mg植物组织，经液氮研磨后，用植物基因组
DNA提取试剂盒进行提取。
2.2 PCR扩增及测序
扩增引物序列及PCR反应体系参考文献报道[10]，
基于psbA-trnH序列鉴别溪黄草及其习用品的研究
★ 高蝶娜 范志高（广州中医药大学第一附属医院 广州 510405）
摘要：目的：利用叶绿体基因psbA-trnH序列探讨溪黄草及其习用品的分子鉴定方法。方法：分别提取线纹香茶菜、狭基线
纹香茶菜、纤花香茶菜及溪黄草的植物基因组DNA，经PCR扩增后测序，利用相关软件对序列进行分析。结果：线纹香茶
菜、狭基线纹香茶菜、纤花香茶菜的psbA-trnH序列长度为231bp，植物溪黄草的碱基为309bp，共存在碱基差异13bp，缺失
78bp，种间变异平均距离为0.029。从构建的系统分支树可知，各物种虽能明显分开，但其支持率不高。结论：psbA-trnH序
列不适用于鉴定溪黄草及其习用品。
关键词：溪黄草；习用品；psbA-trnH序列；分子鉴定
中图分类号：R282.5 文献标识码：A
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江西中医药2012年11月第11期总43卷第359期
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上游引物为5-GTTATGCATGAACGTAATGCTC-3，
下游引物为 5-CGCGCATGGTGGATTCACAATCC-
3，PCR反应体积为 50μL，PCR产物取 5μL进行琼
脂糖凝胶电泳检测亮带，之后将电泳检测出现合格
亮带的PCR原液直接送至广州赢森生物科技有限
公司进行测序。
2.3 数据处理
测序结果采用序列拼接软件CodonCode Align⁃
er V2.06（CodonCode Co，USA）校对拼接，去除低质
量序列及引物区，将所得各样品的 psbA-trnH序列
上传至Genbank中，获得Genbank登录号（表1）。利
用MEGA 5.0软件计算其遗传距离及系统发育分
析。以邻接法（neighbor joining，NJ）构建系统分支
树，利用支持率（bootstrap，1000次重复）检验各分支
置信度。
3 结果
3.1 种间序列差异比较
实验所得溪黄草及其习用品的 psbA-trnH序列
为植物叶绿体基因psbA-trnH序列的完整部分。植
物溪黄草的psbA-trnH序列长度为309bp，线纹香茶
菜、狭基线纹香茶菜和纤花香茶菜的 psbA-trnH序
列长度为 231bp，共存在碱基变异位点 13 bp，缺失
位点 78bp（见图 1）。其遗传距离（见表 2），从遗传
距离看，溪黄草及其习用品的种间平均距离为
0.029，其中线纹香茶菜、狭基线纹香茶菜和纤花香
茶菜三者之间遗传距离较近，与植物溪黄草的遗传
距离较远。
JX404028
JX404029
JX404030
JX404031
Rabdosia Lophanthoides
Rabdosia Lophanthoides var.Gerardiana
Rabdosia Lophanthoides var.Graciliflora
Rabdosia Serra
223
466677778 190
9235912480 372
TATCTCTTAG TTA
CC.
CC.
CCCTAAGAGA CCC
图1 溪黄草及其习用品psbA-trnH序列的变异位点
表2 溪黄草及其习用品psbA-trnH序列的遗传差异矩阵
JX404028
JX404029
JX404030
JX404031
JX404028
0.009
0.009
0.059
JX404029
0.000
0.049
JX404030
0.049
JX404031
3.2 系统发育树分析
以邻接法构建系统分支树，结果见图 2。由系
统分支树可见线纹香茶菜先与纤花香茶菜聚为 1
支，支持率达 52；然后再与狭基线纹香茶菜聚为 1
支，最后再与植物溪黄草聚为1支。


JX404028 Rabdosia Lophanthoides
JX404030 Rabdosia Lophanthoides var. graciliflora
JX404029 Rabdosia Lophanthoides var. Gerardiana
JX404031 Rabdosia sera

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图2 溪黄草及其习用品psbA-trnH序列的系统发育树分析
4 讨论
根据不同物种的基因序列特点进行中药鉴别
的方法很多，陈林姣等[11-12]曾利用RAPD技术对溪黄
草及其习用品进行鉴别。虽然RAPD技术快速简
便，对DNA模板要求低，但是RAPD技术实验结果
的重复性易受多种因素的影响，作为中药鉴别的效
果不佳。而 psbA-trnH序列是叶绿体基因组中进化
较快的片段[13]，其5端的psbA序列为编码基因，序列
保守，易于引物设计和扩增，该片段富含polyA/T结
构，且存在普遍的插入/缺失现象，使得不同植物长
度差异较大，可用于对中药基源的鉴别[14-15]。
从实验结果可知，线纹香茶菜、狭基线纹香茶
菜和纤花香茶菜三者之间的遗传距离较小，基源关
系较近，与植物溪黄草的遗传距离大，符合现代植
物分类学的观点。进一步探讨线纹香茶菜、狭基线
纹香茶菜和纤花香茶菜三者的序列差异，发现三者
的 psbA-trnH序列仅存在两个碱基的差异，其中狭
基线纹香茶菜和纤花香茶菜的 psbA-trnH序列完全
一致，无法区分。而植物溪黄草与线纹香茶菜、狭
基线纹香茶菜和纤花香茶菜等相比，则存在较多的
变异位点和插入位点，易于鉴别和区分。因此，ps⁃
bA-trnH序列仅可用于植物溪黄草的鉴别，而不适
合溪黄草及其习用品之间的鉴别，寻找更适合于鉴
别中药溪黄草及其习用品的DNA序列仍有待进一
步研究。
参考文献
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药材，1996，19（2）：73-75.
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JIANGXI JOURNAL OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
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维生素 C 注射液是维生素 C 的灭菌水溶液。
维生素C分子结构中的二烯醇结构具极强的还原
性，易被氧化为二酮基而生成去氢抗坏血酸。由于
维生素C的二烯醇结构在水溶液中极其不稳定，不
仅能与空气中的氧结合进行自氧化，在无氧情况下
仍能进行无氧降解 [1]，因此维生素C注射液中常加
入亚硫酸钠等作为抗氧剂，防止其在生产、贮藏过
程中降解。
我国目前对亚硫酸钠含量控制标准一般为
0.1%-0.2%，而发达国家的控制水平为 0.02%以
下。有人利用亚硫酸氢钠与品红作用生成无色的
品红醛，亚硫酸氢钠的浓度越大，品红褪色越多，且
浓度与使品红褪色能力成正比。一定量品红溶液
与亚硫酸盐溶液混合后，采用分光光度法测定剩余
品红在542 nm的吸光度，可得到溶液中亚硫酸盐的
含量。根据这一原理，建立了采用氧化还原-分光
光度法测定维生素C注射液中亚硫酸盐的含量的
方法[2]。
1 仪器与试剂
UV-2100紫外分光光度计（北京瑞利）；亚硫酸
氢钠（湖南尔康制药有限公司，批号 20110703）；其
他试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 碱性品红溶液的配制 取碱性品红适量，研细，
称取 20 mg，置 250 mL 量瓶中，加 pH6.2 的磷酸盐
缓冲液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，量取 50 mL
用pH6.2的磷酸盐缓冲液稀释至250 mL，即得。
pH6.2的磷酸盐缓冲液的配制：0.2mol/L磷酸
二氢钾溶液 1000 mL 与 0.2 mol/L 氢氧化钠溶液
200 mL混匀，即得。
2.2 精密称取亚硫酸氢钠对照品适量，加水制成每
1 mL 含亚硫酸氢钠 1.0、2.4、3.0、3.6、5.0mg 的溶
液。各精密量取 1 mL 分别置 25 mL 量瓶中，用
pH6.2的磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀。各精密
量取1 mL分别加至50 mL具塞试管中，加入碱性品
红溶液 25.0 mL ，轻轻摇匀，密塞，暗处放置 5.0分
维生素C注射液中亚硫酸盐的含量测定
★ 曹淑玲 郭秋云（江西赣南海欣药业股份有限公司 赣州 341000）
摘要：目的：通过对维生素C注射液中亚硫酸盐的含量测定，更好的控制抗氧剂的量，保证维生素C注射液的用药安全。
方法：采用氧化还原-分光光度法快速测定维生素C注射液中亚硫酸盐的含量，并探讨维生素C注射液中亚硫酸盐随时间变
化的趋势。结果：亚硫酸氢钠含量在0.039 0-0.194 8mg/ mL范围内线性关系良好，r = 0.999 0，平均回收率为95.72%，重复
性RSD为0.67%（n=6）。结论：该方法操作简便、灵敏度高、专属性好。
关键词：维生素C；注射液；亚硫酸盐；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标识码：A
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（收稿日期：2012-08-04责任编辑：曾文雪）
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