全 文 ：收稿日期:2006-11-24;　修订日期:2007-03-15
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No. 30672596);
广东省自然科学基金重点项目(No. 036575)
作者简介:林朝展(1979-),男(汉族),广东揭阳人 ,现为广州中医药大学
中药学院在读博士研究生 ,硕士学位 ,主要从事天然药物化学和新药开发
研究工作.
*通讯作者简介:祝晨蔯 (1967-), 女(汉族),辽宁沈阳人 , 现任广州中医
药大学药学院研究员 ,博士学位 ,主要从事天然药物化学和新药开发研究
工作.
反相高效液相色谱法测定
溪黄草中二萜类成分的含量
林朝展 , 祝晨蔯* , 杨金燕
(广州中医药大学中药学院 ,广东 广州　510006)
摘要:目的 通过溪黄草中二萜成分含量测定方法的建立及商品药材质量分析 ,为溪黄草质量标准的制定提供依据。方
法 采用 RP-HPLC法测定 6, 7-去氢罗伊林酮和(15S)-12, 16-环氧-11, 14-二羟基-8, 11, 13-松香烷-7-酮的含量;流动相:0.
05%三氟乙酸-乙腈(25∶75), 检测波长:210 nm;理论塔板数按 6, 7-去氢罗伊林酮计算应不低于 6 000, 按(15S)-12, 16-
环氧-11, 14-二羟基-8, 11, 13-松香烷-7-酮计算应不低于 5 000。结果 11批次的测试样品中 6, 7-去氢罗伊林酮的含量范
围在 91. 5 ～ 182. 5 μg g- 1 , (15S) - 12, 16-环氧-11, 14-二羟基-8, 11, 13-松香烷-7-酮的含量范围在 35. 4 ～ 84. 2 μg g - 1 ,
建议药材中 6, 7 -去氢罗伊林酮和(15S) - 12, 16-环氧-11, 14-二羟基-8, 11, 13-松香烷-7-酮的含量限度分别不得低于
113. 4 μg g - 1和 52. 3 μg g- 1。结论 经过系统的方法学考察 , 所建立的测定方法具有操作简便 、稳定 、专属 、可重复的
特点 , 可用于溪黄草药材及含溪黄草的复方制剂的质量控制。
关键词:溪黄草;　6, 7-去氢罗伊林酮;　(15S)-12, 16-环氧-11, 14-二羟基 - 8, 11, 13-松香烷-7-酮;　含量测定;　反相
高效液相色谱法
中图分类号:R284. 1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)07-1549-02
Determ ination of Two Ent-Kaurane D iterpenoids in Isodon lophanthoides var. gerardia-
nus
L IN C hao-zhan, ZHU C hen-chen* , YANG J in-yan
(S chool of Pharmacy , GuangzhouUniversity of TCM , Guangzhou 510006 , China)
Abstract:Objective To estab lish am e thod fo r dete rm ina tion o f d iterpeno ids in differen t batches o f the ae rial pa rt o f Isodon lo-
phanthoides va r. gerardianus. Methods An RP-HPLC m ethod w as estab lished for the dete rm ina tion of 6, 7-Dehydro roy leanone
and (15S)-12, 16-Epoxy-11, 14-d ihyd roxy-8, 11, 13-ab ietatrien-7-one by using K romasil RP-C18(250 mm ×4. 6mm , 5μm) co l-
um n, w ith am ix ture o f 0. 05% trifluo ro-ace tic acid-A ce tonitrile (25∶75) as m obile phase a t the flow rate o f 0. 80 m l m in- 1
and detection w aveleng th o f 210 nm. Resu lts The conten ts o f the above two dite rpeno ids showed g rea t difference among the 11 pa t-
ches of tested sam ples. The content of 6, 7-Dehydro roy leanone ranged from 91. 5 to 182. 5μg g - 1 and tha t of(15S)-12, 16-Ep-
oxy-11, 14-dihydroxy-8, 11, 13-abieta trien-7-one ranged from 35. 4 to 84. 2 μg g- 1. The suggested content lim ita tion of 6, 7 -
Dehydroroy leanone shou ld be 113. 4μg g - 1 , and tha t of(15S)-12, 16-Epoxy -11, 14-dihydroxy-8, 11, 13-abie ta trien-7-one be
52. 3 μg g -1 in the crude Isodon lophanthoides var. gerardianus. Conc lu sion The established m ethod has been proved to be sim-
p le, stab le and repea tab le, and can be app lied fo r quality control of the c rude Isodon lophan thoides var. gerard ianus and compound
prescriptions contained crude Isodon lophanthoides va r. gerardianus.
Key words:Isodon lophanthoides var. gerard ianus;　 6, 7-Dehyd roroy leanone;　(15S)-12, 16-Epoxy-11, 14-d ihyd roxy-8, 11,
13-abieta trien-7-one;　Con tent determ ina tion;　RP-HPLC
　　溪黄草为唇形科香茶菜属植物狭基线纹香茶菜 Isodon serra
(M ax im)H ara的干燥全草 , 具有清热利湿 、退黄 、凉血散淤之功
效 , 是我国南方地区治疗乙型肝炎的常用草药 [ 1] , 临床应用广
泛 , 疗效确切 ,目前已有较多的以其为主要原料的养肝护肝中药
制剂及保健品。 该植物主要含有松香烷型二萜类 (Abie tane
type)及乌索烷型三萜类成分(Ursane type) [ 2] , 迄今为止国内外
学者报道已从中分离得到 13种二萜和 4种乌索烷型三萜 , 其中
6个松香烷型二萜(Ab ietane type)分别为狭基线纹香茶菜甲素 、
乙素 (Lophantho id in A、 B), 11β-hydroxy l-8, 15-isopim arad iene -3-
one、Gerard ianin A, Gerard ianin B , Lophanic acid, 1个半日花烷型
二萜(Labdane type)即 8(17), 12, 14-Labda triene-19-o ic acid及 6
个二萜醌分别为 16-Ace toxy-7-O-acety l ho rm inone, 16-Ace toxy-12-
O-ace ty lho rm inone, Roy leanone, 6, 7 - Dehydro roy leanone, H orm i-
none, 16-A ce toxy-7α-m ethoxy-roy leanone;Urso lic ac id, O lean acid,
2α-hydroxy lU rso lic acid, 2α, 19α-dihydroxy l U rso lic acid等成分。
有关溪黄草三萜类成分如熊果酸 、2α-羟基熊果酸 [ 3, 4]的含量测
定 , 我们已有报道。然而对其所含成分种类众多 、抗肿瘤活性作
用 [ 5, 6]成分的测定 ,国内外尚无文献报道。我们通过前期系统的
化学成分研究 ,分离纯化了两个二萜化合物 6, 7-去氢罗伊林酮和
(15S)-12, 16-环氧-11, 14-二羟基-8, 11, 13-松香烷-7-酮 , 并收集
了广东地区市售商品药材 , 测定这两个二萜化合物的含量 , 以期
为溪黄草质量体系的建立和完善提供科学依据。
1　器材
依利特 P230双泵高效液相色谱仪 (大连伊利特 ), EC2000
色谱工作站;Sa to rius电子分析天平 (北京 Sa to rius公司)。所用
试剂均为分析纯 ,液相用乙腈为色谱纯 , 水为市售纯净水。溪黄
草均为市售(见表 1),并经广州中医药大学陈建南研究员鉴定学
名为 Isodon lophan thoides var. gerardianus(Ben than)H. H ara。
6, 7-去氢罗伊林酮和(15S)-12, 16-环氧-11, 14-二羟基-8, 11,
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LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2007 VOL. 18 NO. 7 时珍国医国药 2007年第 18卷第 7期
13-松香烷-7-酮对照品为自制 , 并经光谱学鉴定及色谱法检测其
纯度为 99%以上。液相色谱纯试剂为 MERCK公司出品 , 其余试
剂均为国产分析纯。
表 1　溪黄草药材样品资料
编号 药材名 采集(收集)地 基源
1 溪黄草 清远 I. serra
2 溪黄草 博罗 I. serra
3 溪黄草 饶平 I. serra
4 溪黄草 湛江 I. serra
5 溪黄草 韶关 I. serra
6 溪黄草 梅州 I. serra
7 溪黄草 英德 I. serra
8 溪黄草 肇庆 I. serra
9 溪黄草 茂名 I. serra
10 溪黄草 广州 I. serra
11 溪黄草 汕头 I. serra
2　方法与结果
2. 1　色谱条件 Krom asil RP-C
18
色谱柱 (4. 6 mm ×250 mm, 5
μm);流动相:乙腈-0. 05%三氟乙酸 (75∶ 25);流速::0. 8 m l /
m in;检测波长:210 nm;进样量:5 μl;理论塔板数按 6, 7-去氢罗
伊林酮计算应不低于 6 000, 按(15S)-12, 16-环氧-11, 14-二羟基
- 8, 11, 13-松香烷-7-酮计算应不低于 5 000。 6, 7-去氢罗伊林酮
和(15S)-12, 16-环氧-11, 14-二羟基-8, 11, 13-松香烷-7-酮的保留
时间分别为 18. 20 m in和 48. 38 m in并且与其它组分分离良好。
对照品和样品的高效液相色谱图见图 1 ～ 2。
a:6, 7-去氢罗伊林酮(6, 7-Dehydroroy leanone)
b:(15S)-12, 16-环氧-11, 14-二羟基-8, 11, 13-松香烷-7-酮((15S)-12,
16-Epoxy-11, 14-d ihyd roxy-8, 11, 13-ab ietatrien-7-one)
图 1　6, 7-去氢罗伊林酮和(15S)-12, 16-环氧-11, 14-
二羟基 - 8, 11, 13-松香烷-7-酮的 HPLC分离图谱
图 2　溪黄草药材的 HPLC分离图谱
2. 2　标准曲线的制备及线性范围考察 精密称取 6, 7-去氢罗伊
林酮和(15S)-12, 16-环氧-11, 14-二羟基-8, 11, 13-松香烷-7-酮对照
品适量 ,加甲醇溶解并定溶 ,制成浓度分别为 420 μg /m l, 360 μg /
m l的储备液。分别精密量取一定体积的储备液于量瓶中 ,稀释成
系列浓度的对照品溶液, 6, 7-去氢罗伊林酮稀释体积为 0. 05→
10m l, 0. 1→ 2 m l, 0. 15→ 2 m l, . 2→ 2 m l, 0. 3→ 2 m l, 0. 4→ 2 m l, 0. 5
m l→ 2 m l,加甲醇稀释到刻度 ,摇匀;XHC -5稀释体积为 0. 05 m l
→ 10 m l, 0. 05→ 2m l, 0. 1→ 2 m l, 0. 2→ 2 m l, 0. 3→ 2 m l, 0. 4→2 m l,
0. 5 m l→2 m l, 加甲醇稀释到刻度 , 摇匀 ,备用。分别精密吸取上
述系列浓度的对照品溶液各 5 μl,依选定色谱条件进行测定 , 以峰
面积(Y)对对照品质量(X)进行线性回归 ,得回归方程分别为:6,
7-去氢罗伊林酮:Y =53. 128X-17. 037, r=0. 999 3, 线性范围:10. 5
～ 525 ng;(15S)-12, 16-环氧-11, 14-二羟基-8, 11, 13-松香烷-7-酮:
Y =43. 54X +27. 618, r=0. 999 9, 线性范围:9 ～ 450 ng。
2. 3　样品溶液的制备 精密称取溪黄草药材 1. 0 g,加甲醇 80 m l
索氏提取至馏出液为无色(约 3. 5 h),提取液水浴蒸干 ,残渣以甲醇
溶解并定容至 10 m l,备用,进样前以 0. 20μm的微孔滤膜过滤。
2. 4 　稳定性实验 精密吸取样品溶液 10μl,分别于 0, 1, 2, 4, 8,
12, 24 h进行测定。结果见表 2。
表 2　稳定性实验结果
时间 t /h 6, 7-去氢罗伊林酮峰面积
(15S)-12, 16-环氧 - 11, 14-
二羟基-8, 11, 13-松香烷-7-酮峰面积
0 1 826. 8 853. 2
1 1 806. 9 841. 6
2 1 784. 3 847. 2
4 1 834. 2 837. 9
8 1 874. 6 858. 1
12 1 829. 4 834. 6
24 1 873. 2 838. 4
RSD(%) 1. 66 0. 95
结果表明样品溶液放置 24 h内稳定 , 故宜在 24 h内完成
测定。
2. 5　精密度实验 精密吸取样品溶液 10 μl, 连续进样 5次 。结
果见表 3。
表 3　精密度实验结果
进样
次数
6, 7-去氢罗伊林
酮峰面积
(15S)-12, 16-环氧-11, 14-二羟基-
8, 11, 13-松香烷-7-酮峰面积
1 1 826. 8 853. 2
2 1 806. 9 841. 6
3 1 834. 3 827. 2
4 1 796. 6 839. 4
5 1 834. 2 807. 9
RSD(%) 0. 84 1. 84
　　n=5
2. 6　重现性实验 精密称取溪黄草样品 5份 , 余同 2. 3项下操
作 , 进样前以 0. 20 μm微孔滤膜过滤。结果见表 4。
表 4　重现性实验结果
编号 6, 7-去氢罗伊林酮峰面积
(15S)-12, 16-环氧-11, 14-二羟基-8
, 11, 13-松香烷-7-酮峰面积
1 1 715. 3 762. 3
2 1 812. 3 821. 3
3 1 863. 6 857. 9
4 1 826. 2 786. 8
5 1 768. 3 806. 4
RSD(%) 2. 59 3. 65
2. 7　加样回收率 精密称取同一已知 6, 7-去氢罗伊林酮和
(15S)-12, 16-环氧-11, 14-二羟基-8, 11, 13-松香烷-7-酮含量的溪
黄草样品适量 ,再准确加入 6, 7-去氢罗伊林酮和(15S)-12, 16-环
氧-11, 14-二羟基-8, 11, 13-松香烷-7-酮对照品 , 余同 2. 3项下操
作 , 进样 10 μl, 记录色谱图并计算结果。结果见表 5。
表 5　6, 7-去氢罗伊林酮和(15S)-12, 16-环氧-11, 14-
二羟基-8, 11, 13-松香烷-7-酮加样回收率结果
对照
物质
加入量
m /μg
检出量
m /μg
回收率
(%)
RSD
(%)
100 194. 37 96. 57+3. 42 3. 57
6, 7-Dehyd roroy leanone 200 386. 64 95. 28+4. 85 4. 24
300 604. 85 98. 34+4. 43 4. 23
(15S)-12, 16-Epoxy-11, 14 60 116. 48 96. 67+4. 06 3. 49
-d ihyd roxy-8, 11, 13 120 243. 54 97. 35+3. 94 4. 02
-ab ietatrien-7-one 180 376. 34 102. 45+5. 35 4. 83
　　n=3
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时珍国医国药 2007年第 18卷第 7期 LISH IZHEN MED IC INE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2007 VOL. 18 NO. 7　
2. 8　样品含量测定 精密称取 11批次溪黄草 1 g,余下操作同 2. 3
项下操作,进样 10 μl,记录色谱图并计算结果。结果见表 6。
表 6　溪黄草中 6, 7-去氢罗伊林酮和(15S)-12, 16-环氧-11, 14-
二羟基-8, 11, 13-松香烷-7-酮含量测定结果 μg g - 1
编
号
6, 7-去氢罗伊林酮
含量 平均含量
(15S)-12, 16-环-11, 14-二羟基-8, 11, 13-松香烷-7-酮
含量 平均含量
1 135. 1 68. 5
2 168. 3 72. 1
3 105. 2 35. 4
4 91. 5 84. 2
5 172. 1 141. 6±28. 2 68. 3 66. 2±13. 9
6 132. 8 74. 2
7 158. 4 83. 1
8 182. 5 66. 8
9 132. 2 59. 3
10 127. 4 51. 8
11 152. 4 64. 2
　　n =3
3　讨论
有关溪黄草的质量分析 , 多为对其中三萜类成分的含量测
定 [ 3, 4] , 然而大量文献报道该药材主要含有二萜类成分 , 且该类
成分也是其抗肿瘤活性的主要有效成分。因此 ,建立以有效成分
群二萜类成分为溪黄草的质量控制体系 ,更能真实客观地反映其
内在质量。我们在化学成分研究的基础上 ,建立针对溪黄草中的
二萜成分的含量测定方法 , 并对所收集的 11批次商品药材进行
质量分析 , 以期为建立专属 、可行的溪黄草质量标准提供科学
依据。
采用 RP-HPLC法 , 对 11批次的溪黄草提取物中的 6, 7-去氢
罗伊林酮和 (15S)-12, 16-环氧-11, 14-二羟基 - 8, 11, 13-松香烷
- 7 -酮进行测定 , 11批次的测试样品中 6, 7 -去氢罗伊林酮的
含量范围在 91. 5～ 182. 5 μg g - 1 , (15S)-12, 16-环氧-11, 14-二
羟基-8, 11, 13-松香烷-7-酮的含量范围在 35. 4 ～ 84. 2μg g - 1。
通过对 6, 7-去氢罗伊林酮和(15S)-12, 16-环氧-11, 14-二羟
基-8, 11, 13-松香烷-7-酮的紫外全波长扫描 , 可知两个对照品的
紫外最大吸收均在 210 nm。因此 , 本实验选择 210 nm 作为 6, 7-
去氢罗伊林酮和(15S)-12, 16 -环氧-11, 14-二羟基-8, 11, 13-松香
烷-7-酮的检测波长 ,以保证这两个化合物在 H PLC中有较高的响
应值及灵敏度。
对流动相系统经过反复多次的试验和摸索 , 曾尝试用
甲醇 -水 、乙腈-水 、甲醇-0. 1%醋酸 、乙腈-0. 1%醋酸 、乙腈-0.
05%三氟醋酸等系统 , 发现在 210 nm下 , 甲醇 -水系统的基线噪
音较严重 ,而乙腈系统较好。乙腈-水系统基线漂移较严重 , 加 0.
1%醋酸有所改善 , 但 6, 7-去氢罗伊林酮在此条件下很难洗脱
(约需 85 m in), 换成 0. 05%三氟醋酸 ,两组分的峰形得到较好改
善 , 也有较好的分离度。最终确定乙腈-0. 05%三氟醋酸为溪黄
草提取物中二萜成分含量测定的流动相系统。 经过系统的方法
学考察 ,所建立的方法具有稳定 、简便 、可重复的特点 , 可用于溪
黄草提取物工艺的质量控制。
参考文献:
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含量的动态研究 [ J] .中草药 , 2004, 31(1):81.
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收稿日期:2006-11-28;　修订日期:2007-02-12
基金项目:中国博士后科学资助基金(No. 2004035254)
作者简介:方明月 (1953-),女(汉族),河南开封人 ,现任河南大学天然药物
研究所实验师 ,硕士学位 ,主要从事天然活性成分研究及新药开发工作.
*通讯作者简介:康文艺 (1971-),男(汉族),黑龙江尚志人,现任河南大学天
然药物研究所副教授 ,博士学位 ,主要从事天然产物研究与开发工作.
荆芥挥发油化学成分研究
方明月 , 康文艺* , 姬志强 , 王金梅
(河南大学天然药物研究所 ,河南 开封 　475004)
摘要:目的 采用水蒸气蒸馏法从荆芥中提取挥发油。方法 用 GC-MS对其化学成分进行鉴定。结果 共鉴定了 58个成
分 , 占挥发油的 86. 23%以上。结论 通过对荆芥挥发油的分析 ,为其进一步开发作为药食两用植物提供科学依据。
关键词:荆芥;　挥发油;　气相色谱-质谱
中图分类号:R284. 1;Q946. 91　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)07-1551-02
Study on Chem ical Constituentes of the E ssentialO il from Nepeta cataria L.
FANG M ing-yue, KANG W en-yi* , JI Zhi-qiang, WANG Jin-mei
(Institu te ofNatura lP roducts, HenanUn iversity, Ka ifeng 475004, China)
Abstract:Objective The essen tial o ils from Nepeta cataria L. we re ex tracted by steam distillation.M ethods The chem ica l con-
stituents w ere ana ly zed byGC-MS. Then the pe rcentag e conten t o f com position o f essen tia l oilw as de te rm ined by GC no rm alization
m ethod. R esu lts The constituen ts we re identified by GC-MS. 58 com ponents we re separated , identified and accounted for over
86. 23%. C onclusion By ana lyzing the essentia l o il ofNepeta cataria L. , the scientific founda tionsw ere prov ided fo r fur ther de-
ve lopm ent of the p lant no t only as a kind of food bu t also a kind o fm edicine.
Key words:Nepeta cataria L. ;　E ssentia l oil;　 GC-M S
　　荆芥 Nepeta cataria L. 为唇形科荆芥属多年生草本植物 , 产
于河南 、山西 、陕西 、甘肃 、新疆 、山东 、湖北 、四川 、贵州 、云南等省
区 , 阿富汗 、印度 、日本 、美洲南部也有分布 [ 1] 。荆芥在河南主要
以鲜嫩的茎叶供作蔬菜食用 ,也可作佐料 , 具有特殊的香味 ,富含
营养价值和药用价值 ,是重要的药食两用蔬菜。荆芥在整个生长
期间几乎不会受病虫危害 , 是一种经济效益高 、很有发展前途的
无公害 、保健型辛香蔬菜 , 多为人工栽培 ,在伏牛山区和太行山区
也有野生。 在我国东北地区多以多裂叶荆芥 Sch izonepeta
tenuifoia B rig的地上干燥部分作为荆芥入药 ,广西各地以同科的
荠苎属 (M osla)及香薷属 (E lsho ltzia)多种植物的干燥地上部分
“土荆芥”为名代替荆芥 [ 2] 。
1551
LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2007 VOL. 18 NO. 7 时珍国医国药 2007年第 18卷第 7期