全 文 ：·科技简报 ·
[基金项目] 山东省教育厅科研基金资助项目(编号:J04E07)　[ 作者简介] 齐永秀 , 女 ,硕士 ,副教授 , 电话:0538-6229751 , E-m aiL:yxqi@
t smc.edu.cn
高效液相色谱法测定白花丹参根 、茎 、
叶中丹参素和原儿茶醛的含量
齐永秀 ,曹明亮 ,万建建 ,刘春霞 ,高允生　(泰山医学
院药学院 ,山东 泰安 271000)
[ 摘要] 　目的:采用 HPLC 法对白花丹参根 、茎 、叶中丹参素
和原儿茶醛含量进行分析。方法:采用乙醇超声提取法提取
白花丹参中水溶性成分丹参素和原儿茶醛 , H PLC 法进行测
定 ,色谱柱为Water s symmet ry shieldT M RP 18(150 mm×3.9
mm , 5μm);以 A(水-二甲基甲酰胺-冰醋酸=94∶4.2∶2.1)-B
(甲醇)(90∶10)为流动相 , 流速0.8 mL·min-1 , 检测波长 281
nm。结果:丹参素在 2～ 100 mg·L-1范围内质量浓度与峰面
积线性关系良好 , 线性方程为 A丹参素 =1.13×104 C丹参素 -
4.27×104 , r=0.999 9(n=6);原儿茶醛在1.1 ～ 44 mg·L-1
范围内质量浓度与峰面积线性关系良好 , A原儿茶醛 =9.73×
104C原儿茶醛-1.44 ×105 , r=0.999 0(n =6)。结论:建立的
HPLC 法灵敏度高 , 方法准确 , 测定结果重复性好。白花丹
参根和叶中含有较丰富的丹参素和原儿茶醛 ,提示丹参叶具
有一定的药用价值。
[ 关键词] 　白花丹参;丹参素;原儿茶醛;高效液相色谱法
[中图分类号] R283.4　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-
5213(2007)12-1772-02
　　白花丹参(S alvia mi ltiorrhiza bge.f .alba)为唇形科植
物丹参(S alv ia mi ltiorrhiza bge)的白花变型 ,主要分布于山
东境内 ,其他地区较为少见 , 属珍稀濒危药用植物[ 1] 。通常
以根部入药 ,味苦 , 性微寒 ,具有活血化淤 , 通经止痛 , 清热安
神的功效[ 2] 。研究表明[ 3] , 丹参能改善心功能 , 改善血液流
变性 ,调节前列环素(PGI2)/血栓烷素 A 2(T×A 2)平衡 , 调
节脂质代谢 ,抑制血管平滑肌细胞 SMC 增值迁移等 , 在心脑
血管疾病的防治中应用甚广。白花丹参除具有丹参的生物
活性和用途外 ,对治疗血栓性脉管炎具有独特疗效[ 4] 。文献
报道[ 5-6]丹参地上部分含有丰富的有效成分。本试验建立了
同时测定丹参素和原儿茶醛的 H PLC 法 , 并对白花丹参根 、
茎 、叶中的两种成分含量进行了分析 , 为白花丹参根 、茎 、叶
药用价值的进一步开发提供实验依据。
1　材料
Water s600 高效液相色谱仪 , Wate rs2996 二极管阵列检
测器;Waters symmetry shieldTM RP18色谱柱;循环水式多用
真空泵(郑州长城科工贸有限公司);丹参素对照品(中国药
品生物制品检定所 , 批号 110855);原儿茶醛对照品(中国药
品生物制品检定所 , 批号 110810);甲醇为色谱纯;其余试剂
为分析纯;水为二次纯化水。白花丹参于秋季采自泰山东麓
(经泰山医学院苏延友教授鉴定), 用水洗去浮土 , 再用去离
子水冲洗 2～ 3 次 , 于 60 ～ 70 ℃条件下烘干 ,粉碎备用。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱:Wate rs symmetry shieldTM RP18
(150 mm×3.9 mm , 5 μm);流动相:A(水-二甲基甲酰胺-冰
醋酸=94∶4.2∶2.1)-B(甲醇)(90∶10);流速:0.8 m L·min -1 ;
检测波长:281 nm。
2.2　溶液的制备
2.2.1　贮备液　精密称取丹参素钠对照品 10 mg , 用甲醇
溶解并定容至 20 mL 量瓶中 , 得 500 mg·L-1的丹参素贮备
液。精密称取原儿茶醛对照品5.5 mg ,用甲醇溶解并定容至
100 mL 量瓶中 ,得 55 mg·L-1的原儿茶醛贮备液。
2.2.2　标准溶液　丹参素钠与原儿茶醛混合标准溶液的配
制 精密量取丹参素贮备液0.1 , 0.2 , 0.5 , 1.0 , 2.0 , 5.0 mL和
原儿茶醛贮备液0.5 , 1.0 , 2.5 , 5.0 , 10 , 20 m L 置于 25 m L量
瓶;用甲醇定容 , 得丹参素标准溶液质量浓度分别为 2.0 ,
4.0 , 10 , 20 , 40 , 100 mg·L -1 。原儿茶醛标准溶液质量浓度分
别为1.1 , 2.2 , 5.5 , 11 , 22 , 44 mg·L -1 。
2.3　丹参素和原儿茶醛的提取　称取白花丹参的根 、茎 、叶
各 20 g , 分别粉碎 ,过 6 号筛 , 精密称取研磨粉碎的白花丹参
的根 、茎 、叶 1 g ,各 3 份 , 分别置于 10 mL 刻度试管中 , 准确
加入 2%氨水 10 mL ,浸泡 , 超声振荡提取 60 min , 抽滤 ,然后
在沸水浴中加热提取 40 min ,赶走大部分氨 , 冷却至室温 ,用
冰醋酸调 pH 3 ～ 3.5 , 用纯化水定容至 25 mL 量瓶中 , 混匀 ,
静置 2 h ,用滤纸滤过 ,取上清液3 000 r·min-1离心 10 min ,
并用0.45 μm 微孔滤膜滤过 ,滤液进行 HPLC 分析。
2.4　系统性试验　取“ 2.2.2”项下 3 种标准溶液和“ 2.3”项
下的样品溶液 ,在色谱条件下 , 10 μL 进样 , 记录色谱图。色
谱峰与干扰物质色谱峰分离完全 , 峰形较好 , 按丹参素色谱
峰计算理论塔板数分别为2 012。丹参素与原儿茶醛的分离
度为3.8 ,丹参素保留时间为4.4 min , 原儿茶醛保留时间为
7.6 min ,空白溶液 、丹参素与原儿茶醛标准溶液色谱图见图
1 ,样品白花丹参根 、茎 、叶样品溶液的色谱图如图 2。
图 1　高效液相色谱图
A.空白溶液;B.丹参素与原儿茶醛标准溶液;1-丹参素;2-原儿茶
醛
Fig 1　HPLC ch romatograms
A.blank;B.dansh ensu and protocatechuic aldehyde reference sub-
s tance;1-danshensu;2-p rotocatechuic aldehyde
2.5　线性关系试验　取“ 2.2.2”项下丹参素和原儿茶醛混
合标准溶液 10 μL 进样 ,以峰面积为横坐标 , 浓度为纵坐标 ,
丹参素在 2～ 100 mg·L-1范围内质量浓度与峰面积线性关
系良好 ,线性方程为 A丹参素 =1.13×104C丹参素 -4.27×104 , r
=0.999 9(n=6);原儿茶醛在 1.1 ～ 44 mg·L-1内质量浓度
与峰面积线性关系良好 , A原儿茶醛 =9.73×104 C原儿茶醛 -1.44
×105 , r=0.999 0(n=6)。
2.6　加样回收率试验　分别取已知含量的样品溶液 , 精密
·1772· 中国医院药学杂志 2007年第 27卷第 12期 C hin H osp Pharm J , 2007 Dec , Vol 27 , No.12
加入相应的对照品溶液 ,依法测定 , 结果如表 1 , 丹参素平均
回收率为99.13%, RSD≤0.87%。原儿茶醛的平均回收率
为100.3%, RSD≤0.45%。
图 2　白花丹参溶液色谱图
A.根;B.茎;C.叶;1-丹参素;2-原儿茶醛
Fig 2　HPLC ch romatograms of Salvia mi l tior rhiza bge.f .alba
A.root;B.stem;C.leaf;1-dansh ensu;2-protocatechuic aldehyde
表 1　丹参素和原儿茶醛回收率测定结果(n=3)
Tab 1 　Recovery o f danshensu and pro tocatechuic aldehyde
(n=3)
样品 含量/mg·L-1
加入量
/mg·L-1
测得量
/mg·L -1
回收率
/ %
RSD
/ %
丹参素 45 10 54.84 98.40 0.17
45 25 70.30 101.2 0.87
45 40 84.12 97.80 0.24
原儿 4 2.5 6.54 101.6 0.24
茶醛 4 5.5 9.56 101.1 0.45
4 15 18.73 98.20 0.27
2.7　精密度试验　取回收率测试样品溶液 , 分别在 1 d内重
复测定 3 次和 5 d 内重复测定 5 次 , 以测定的丹参素浓度计
算测定方法的精密度 ,结果日内 RSD≤0.82%, 日间 RSD≤
1.68%。
2.8　稳定性试验　取“ 2.2.2”项下丹参素和原儿茶醛混合
对照溶液 10 μL 进样 ,连续重复 5 次(n=5), 峰面积 RSD为
1.08%。
2.9　样品的含量测定　取“2.3”项下样品溶液 , 在相应的色
谱条件下进样 ,每份样品平行测定 3次 , 结果见表 2。
表 2　白花丹参根 、茎 、叶中丹参素与原儿茶醛含量测定结果
(n=3)
Tab 2　Content of the danshensu in ro ot , stem and leaf of
Salvia miltiorrhiz a bge.f .alba(n=3)
样品名称 丹参素/ % 原儿茶醛/ %
白花丹参叶 0.43±0.10 0.018±0.000 9
白花丹参茎 0.10±0.11 0.008±0.002
白花丹参根 0.58±0.09 0.125±0.11
[基金项目] 广西科技攻关基金资助项目(编号:桂科攻 9920017)　[ 作者简介] 陆益 ,男 ,学士 ,主管药师 ,电话:0771-5333622 , E-mai l:luyi6168
@163.com
3　讨论
本试验对测定白花丹参根 、茎 、叶中丹参素和原儿茶醛
的色谱条件进行筛选 ,通过丹参素和原儿茶醛的光谱图可以
看出丹参素在 281 nm 处有最大吸收 , 原儿茶醛在 281 nm 和
311.8 nm 处有最大吸收 , 确定检测波长为 281 nm。 对不同
流动相配比进行了实验 ,选择 A(水-二甲基甲酰胺-冰醋酸=
94∶4.2∶2.1)-B(甲醇)(90∶10)为流动相 , 在此条件下 , 丹参
素 、原儿茶醛与样品中其他组分分离完全 , 色谱峰峰形良好。
建立的 H PLC 法可同时测定丹参素和原儿茶醛 ,方法灵敏度
高 、准确 、测定结果重复性好 ,可用于白花丹参水提物的质量
控制。
采用超声提取方法提取白花丹参根 、茎 、叶中丹参素和
原儿茶醛 , 实验中对 2%氨水的用量进行了考察 , 分别选用
5 , 10 , 15 , 20 m L 2%氨水提取 ,结果表明使用 2%氨水 10 mL
提取率最高。
采用 H PLC 法对白花丹参不同部位的丹参素和原儿茶
醛含量进行测定 , 根 、茎 、叶均含有两种有效成分 ,根中含量
较高 ,丹参素和原儿茶醛为0.58%和0.125%, 白花丹参叶中
也含有丰富的丹参素和原儿茶醛 , 本试验为白花丹参茎 、叶
的进一步开发利用提供了实验依据。
参考文献:
[ 1] 　周凤琴 , 李建秀 , 张照荣.山东珍惜濒危野生药用植物的调查
研究[ J] .中草药 , 1998 , 29(1):46-49.
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中医药大学学报 , 1998 , 14(4):255-256.
[ 3] 　林琦 ,陆金国.丹参抗动脉粥样硬化的研究进展[ J] .山西中医 ,
2002 , 18(4):56-59.
[ 4] 　李志田.白花丹参化学成分的研究[ J] .药学学报 , 1991 , 2(3):
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[ 5] 　李磊 ,胡广林 , Frank S.C.lee ,等.丹参抗氧化成分及其分布特
性[ J] .江西农业大学学报 , 2001 , 23(4):487-491.
[ 6] 　倪学斌 ,苏静.丹参地上部分有效成分的初步分析[ J] .中国药
学杂志 , 1995 , 30(6):336-338.
[收稿日期] 2007-02-12
高效液相色谱法测定复方华蟾胶囊中
黄芪甲苷的含量
陆益 ,黎远冬 ,梁宁生 ,杨帆 ,李艳 ,蒙子卿　(广西医
科大学附属肿瘤医院 ,广西 南宁 530021)
[ 摘要] 　目的:建立高效液相色谱法测定复方华蟾胶囊中黄
芪甲苷含量的方法。方法:采用 Zo rbax ODS C18(250 mm×
4.6 mm , 5 μm)色谱柱 , 以乙腈-水(30∶70)为流动相 , 流速为
1.0 mL·min -1 ,检测波长为 205 nm。结果:黄芪甲苷在 2.66
～ 26.60 mg·L -1(r=0.999 92 , n=5)范围内线性关系良好。
结论:本方法简便快捷 , 准确度高 , 重复性好的优点 , 可用于
复方华蟾胶囊的质量控制。
[ 关键词] 　高效液相色谱法;复方华蟾胶囊;黄芪甲苷
[中图分类号] R927.2　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-
5213(2007)12-1773-02
　　复方华蟾胶囊由蟾蜍干皮 、黄芪和蒲葵子等中草药组成
的复方制剂 , 具有活血祛淤 , 解毒消肿 , 散结止痛 ,益气养血
之功效。用于血淤证之肝癌 、胃癌 、肠癌 、食道癌等消化道肿
瘤的辅助治疗。前期研究表明 ,复方华蟾胶囊对小鼠移植性
肝癌 、肉瘤 180 具有明显抑制作用[ 1] ;对免疫低下小鼠的免
疫功能具有明显的增强作用[ 2] ;在临床应用安全[ 3] , 具有较
好的应用前景。黄芪甲苷是该方主药黄芪的主要有效成分
之一 ,黄芪甲苷的含量测定方法比较多[ 4-6] , 结合制剂的特
点 ,本实验建立了高效液相色谱(H PLC)法测定该制剂中黄
·1773·中国医院药学杂志 2007年第 27卷第 12期 Chin H osp Pharm J , 2007 Dec , Vol 27 , No.12