全 文 ：RP － HPLC同时测定冠心宁注射液中丹参素、原儿茶醛、
阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸 B的含量*
唐登峰，祝明＊＊，陈勇，李正，罗镭，俞建平，方翠芬，郑成
(浙江省食品药品检验所，杭州 310004)
摘要 目的:建立反相高效液相色谱法同时测定冠心宁注射液中丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸 B 的含量。
方法:采用 Kromasil C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱，流动相为乙腈(A)－ 0. 05%三氟乙酸(B) ，梯度洗脱(0 ～ 65 min，
2% A→30% A) ，流速 0. 8 mL·min － 1，检测波长 288 nm，柱温 40 ℃。结果:丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸 B
进样量分别在 0. 352 ～ 7. 032 μg(r = 0. 9999) ，0. 080 ～ 1. 594 μg(r = 0. 9999) ，0. 016 ～ 0. 322 μg(r = 0. 9999) ，0. 057 ～ 1. 133
μg(r = 0. 9999) ，0. 122 ～ 2. 446 μg(r = 0. 9999)范围内呈现良好的线性关系;平均回收率(n = 6)分别为 100. 9%(RSD =
1. 5%) ，102. 4%(RSD = 0. 9%) ，103. 6%(RSD = 0. 9%) ，102. 6%(RSD = 2. 0%) ，102. 0%(RSD = 2. 1%) ;重复性试验，5
个成分含量的 RSD(n = 6)均小于 2. 5%。结论:所建立的方法简便、准确，具有良好的重复性和稳定性，可用于冠心宁注射
液的质量控制。
关键词:冠心宁注射液;丹参素;原儿茶醛;阿魏酸;迷迭香酸;丹酚酸 B;反相高效液相色谱法;多组分分析;中药注射剂;标准
改进
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254 － 1793(2012)01 － 0144 － 04
RP － HPLC simultaneous determination of danshensu，protocatechuic
aldehyde，ferulic acid，rosmarinic acid，and salvianolic
acid B in Guanxinning injection*
TANG Deng － feng，ZHU Ming＊＊，CHEN Yong，LI Zheng，
LUO Lei，YU Jian － ping，FANG Cui － fen，ZHENG Cheng
(Zhejiang Institute for Food and Drug Control，Hangzhou 310004，China)
Abstract Objective:To develop an HPLC method for simultaneous determination of danshensu，protocatechuic al-
dehyde，ferulic acid，rosmarinic acid，salvianolic acid B in Guanxinning injection． Methods:Analysis was per-
formed on a Kromasil C18(4. 6 mm ×250 mm，5 μm)analytical column with gradient elution(0 － 65 min，2% A→
30%A)of acetonitrile(A)－ 0. 05% trifluoroacetic acid(B)at the flow rate of 0. 8 mL·min －1 ． The detection
wavelength was 288 nm，and the column temperature was maintained at 40 ℃ ． Results:Danshensu，protocatechuic
aldehyde，ferulic acid，rosmarinic acid，salvianolic acid B had good linearity in the ranges of 0. 352 － 7. 032 μg(r =
0. 9999) ，0. 080 －1. 594 μg(r =0. 9999) ，0. 016 － 0. 322 μg(r = 0. 9999) ，0. 057 － 1. 133 μg(r = 0. 9999) ，0. 122 －
2. 446 μg(r =0. 9999) ，respectively;The average recoveries were 100. 9%(RSD =1. 5%) ，102. 4%(RSD =0. 9%) ，
103. 6%(RSD = 0. 9%) ，102. 6%(RSD = 2. 0%) ，102. 0%(RSD = 2. 1%) ，respectively;Repeatability experiments
showed that RSD values of their contents were less than 2. 5% ． Conclusion:The method developed is simple，accu-
rate with high repeatability and stability，which is helpful to control the quality of Guanxinning injection．
Key words:Guanxinning injection;danshensu;protocatechuic aldehyde;ferulic acid;rosmarinic acid;salvianol-
ic acid B;RP － HPLC;multicomponent assay;TCM injection;standard improvement
冠心宁注射液为《中华人民共和国卫生部药品 标准·中药成方制剂》第 17 册收载的品种。本品
—441— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(1)
＊
＊＊
“十一五”科技支撑项目(编号:2009ZX09308 － 004)
通讯作者 Tel:(0571)86459425;E － mail:zhumingd@ hotmail． com
为丹参和川芎经水提醇沉等步骤制成的中药注射
剂，具有活血化瘀、通脉养心的功能，临床上主要用
于冠心病心绞痛的治疗［1］。随着临床对该注射液
的应用和报道不断增加，冠心宁注射液在治疗其他
心血管疾病、脑血管疾病、呼吸系统疾病、肾病等方
面也有很多应用［2］。但冠心宁注射液现行质量标
准中仅测定原儿茶醛的含量，关于冠心宁注射液多
指标的含量测定文献报道比较少［3 ～ 5］，本课题小组
对冠心宁注射液进行了深入研究，建立了在同一色
谱条件下，同时测定其中丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、
迷迭香酸和丹酚酸 B 的含量，各色谱峰均得到很好
的分离。该方法采用一个梯度洗脱程序，冠心宁注
射液中丹参和川芎的主要色谱峰基本上达到基线分
离，方法准确，专属性好，操作简单，为冠心宁注射液
的质量评价提供依据。
1 仪器与试药
Agilent 1200 系列高效液相色谱仪(G 1322A 脱
气机、G 1311A 四元泵、G 1329A 自动进样仪、G
1316A柱温箱、G 1315D二极管阵列检测器)和 Agi-
lent ChemStation工作站;METTLER TOLEDO AG 285
型电子天平(瑞士 METTLER公司)。
对照品丹参素钠(批号 110855 － 200809，供含
量测定用)、原儿茶醛(批号 110810 － 200506，供含
量测定用)、阿魏酸(批号 110773 － 200611，供含量
测定用)、丹酚酸 B(批号 111562 － 200807，供含量
测定用)均由中国食品药品检定研究院提供，迷迭
香酸(批号 100526，含量 98. 0%以上)由上海友思生
物技术有限公司提供。
乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂为分析纯。
冠心宁注射液样品:企业甲(批号:091108，
090406，100604 ) ;企 业 乙 (批 号:10020541，
10013141，10110173) ;考察用样品为企业甲的样品，
批号为 091108。
2 方法与结果
2. 1 溶液制备
2. 1. 1 对照品溶液 分别精密称取丹参素钠、原儿
茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸 B 的对照品适量，
精密称定，加含 0. 2%冰醋酸的 10%甲醇溶液制成
每 1 mL 含丹参素钠 0. 3906 mg(相当于丹参素
0. 3516 mg)、原儿茶醛 79. 68 μg、阿魏酸 16. 112
μg、迷迭香酸 56. 64 μg和丹酚酸 B 0. 1223 mg 的混
合溶液，即得。
2. 1. 2 供试品溶液 精密量取冠心宁注射液
2 mL，置 10 mL量瓶中，加含 0. 2%冰醋酸的 10%甲
醇溶液稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0. 45 μm)滤
过，取续滤液，即得。
2. 1. 3 阴性样品溶液 按处方比例，依据冠心宁
注射液处方分别制备不含丹参以及不含川芎的阴性
样品，依“2. 1. 2”项下方法操作，得缺丹参阴性样品
溶液和缺川芎阴性样品溶液，备用。
2. 2 色谱条件 色谱柱:Kromasil C18(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ;流动相:乙腈(A)－ 0. 05%三氟
乙酸溶液(B) ，梯度洗脱(0 ～ 65 min，2% A→30%
A) ;流速:0. 8 mL·min － 1;检测波长:288 nm;柱
温:40 ℃;进样量:5 μL。对照品及样品色谱图见
图 1。样品中丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香酸
和丹酚酸 B 色谱峰的保留时间分别为 14. 99，
22. 26，41. 78，53. 43，58. 27 min;峰纯度均大于 999
(阈值为 995。最大值为 1000) ，说明测定的色谱峰
纯度高。
2. 3 专属性试验 取缺丹参的阴性样品溶液和缺
川芎的阴性样品溶液，在上述色谱条件下分别进行
分析测定。结果表明各阴性样品溶液的色谱中，在
与上述 5 个对照品色谱峰的相同保留时间处，均无
色谱峰出现，方法专属性好。
2. 4 线性关系考察 精密量取“2. 1. 1”项下对照
品溶液 1，3，5，8，10，15，20 μL，注入液相色谱仪，以
色谱峰峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X，μg)为横坐
标绘制标准曲线，得丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭
香酸和丹酚酸 B的回归方程分别为:
Y = 644. 4X + 12. 65 r = 0. 9999
Y = 4. 958 × 103X － 11. 83 r = 0. 9999
Y = 4. 745 × 103X － 0. 8526 r = 0. 9999
Y = 2. 379 × 103X － 3. 286 r = 0. 9999
Y = 1. 469 × 103X － 5. 109 r = 0. 9999
进样量分别在 0. 352 ～ 7. 032 μg、0. 080 ～ 1. 594
μg、0. 016 ～ 0. 322 μg、0. 057 ～ 1. 133 μg 和 0. 122 ～
2. 446 μg的范围内呈良好的线性关系。
2. 5 精密度试验 精密吸取对照品溶液 5 μL，按
“2. 2”项下色谱条件连续进样 6 次，测定丹参素、
原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸 B 峰面积
的 RSD 分 别 为 0. 2%，0. 1%，0. 1%，0. 1%，
0. 3%。
2. 6 溶液稳定性的考察 取批号为 091108 的冠心
宁注射液的供试品溶液按“2. 2”项下色谱条件分别
在 0，5，12，27，36，41 h进样测定，求得丹参素、原儿
茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸 B 峰面积的 RSD
分别为 1. 4%，0. 5%，1. 8%，1. 3%，2. 6%，表明供
—541—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(1)
图 1 冠心宁注射液 HPLC色谱图
Fig 1 HPLC chromatograms of Guanxinning injection
A．溶剂(solvent) B．缺丹参的阴性样品(negative sample without Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma) C．缺川芎的阴性样品(negative sample
without Chuanxiong Rhizoma) D．混合对照品(mixture of chemical reference substances) E．样品(sample，Lot No． 091108)
1．丹参素(danshensu) 2．原儿茶醛(protocatechuic aldehyde) 3．阿魏酸(ferulic acid) 4．迷迭香酸(rosmarinic acid) 5．丹酚酸 B(salvianolic
acid B)
试品溶液在 41 h内稳定。通过峰面积的分析，认为
5 个化合物均在一定范围内波动。
2. 7 重复性试验 分别精密称取同一批号的冠心
宁注射液(批号 091108)2 mL，共 6 份，依法制备供试
品溶液，测定峰面积并计算含量和 RSD。结果丹参
素、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸 B的平均含
量(n = 6)分别为 1. 82，0. 36，0. 10，0. 25，0. 42 mg·
mL －1;RSD分别为 0. 9%，0. 5%，2. 3%，0. 9%，1. 4%。
2. 8 回收率试验 精密量取已知含量的冠心宁注
射液(批号 091108)6 份各 1 mL，加入与样品中各成
分含有量相当的对照品的溶液，按“2. 1. 2”项下方
法制备供试溶液，依法测定峰面积并计算回收率，结
果丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸 B
的平均回收率(n = 6)分别为 100. 9%，102. 4%，
103. 6%，102. 6%，102. 0%;RSD 分别为 1. 5%，
0. 9%，0. 9%，2. 0%，2. 1%。
2. 9 样品含量测定 取各批次冠心宁注射液，按
“2. 1. 2”项下方法制备供试品溶液，依法进样测定，
用外标法计算丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香酸
和丹酚酸 B的含量，结果见表 1。
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表 1 冠心宁注射液中丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸 B的含量测定结果(mg·mL －1，n =2)
Tab 1 Contents of danshensu，protocatechuic aldehyde，ferulic acid，rosmarinic
acid，salvianolic acid B in Guanxinning injection
批号 (Lot No．) 丹参素(danshensu)
原儿茶醛
(protocatechuic
aldehyde)
阿魏酸(ferulic
acid)
迷迭香酸
(rosmarinic acid)
丹酚酸 B
(salvianolic
acid B)
091108 1. 64 0. 36 0. 10 0. 25 0. 42
090406 1. 56 0. 39 0. 07 0. 29 0. 32
100604 1. 60 0. 36 0. 07 0. 17 0. 30
10020541 1. 43 0. 57 0. 19 0. 43 0. 40
10013141 1. 81 0. 60 0. 21 0. 51 0. 62
10110173 1. 79 0. 49 0. 21 0. 48 0. 54
3 讨论
3. 1 测定波长的选择 经 DAD 扫描(波长 200 ～
400 nm)显示冠心宁注射液中丹参素、原儿茶醛、阿
魏酸、迷迭香酸和丹酚酸 B 的最大吸收波长不一
致，但它们在波长 288 nm 左右处均有较大的吸收，
根据 DAD检测的三维色谱图、等吸收图综合考虑 5
个被测成分的吸收系数，样品中相应成分含量，干扰
峰以及检测器灵敏度，选择 288 nm作为检测波长。
3. 2 色谱柱及流动相的选择 因被测样品冠心宁
注射液的组成成分较复杂，等度洗脱难以在较短时
间内同时测定多个成分。此外又考虑到色谱柱普遍
适用性和方法推广等问题，确定使用 C18柱梯度洗脱
分析测定冠心宁注射液中丹参素、原儿茶醛、阿魏
酸、迷迭香酸和丹酚酸 B 5 个成分的含量。在相关
文献［4］中，有报道以甲醇 － 5%醋酸为流动相进行
梯度洗脱的方法，但在实际操作过程中，发现样品中
丹参素和原儿茶醛的出峰时间较早，在0 ～ 5 min之
内，该色谱峰受到杂峰的干扰，不能得到很好的分
离。实验分别考察了以甲醇 － 0. 1%三氟乙酸、乙腈
－ 0. 03%磷酸以及乙腈 － 0. 05%三氟乙酸等为流动
相的梯度洗脱系统，结果后者分离效果较好，故本文
选择乙腈(A)－ 0. 05%三氟乙酸(B)为流动相，梯
度洗脱(0→65 min，2%A→30%A)。
3. 3 耐用性考察 曾分别考察柱温(30，35，40，
45 ℃)、流动相不同酸浓度(0. 04%，0. 05%，0. 06%
的三氟乙酸)、不同流速(0. 6，0. 7，0. 8，0. 9，1. 0
mL·min －1)以及来自 5 个厂家的不同色谱柱［Ulti-
mate AQ C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm;Agilent Zorbax
Extend － C18(250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ;Shim － pack
VP － ODS(250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ;Agilent Zorbax
SB － C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ;Kromasil 100 － 5
C18(250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ］，结果显示在本文试
验条件下不同柱温、流动相不同酸度、不同流速以及不
同品牌色谱柱均能较好分离冠心宁注射液中主要色谱
峰，表明本法耐用性良好。
3. 4 小结 使用本法对 2 家企业 6 批冠心宁注射
液中丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸
B的成分进行含量测定，结果 6 批样品中各成分含
量波动不大，表明本方法能够在同一色谱条件下测
定冠心宁注射液中多个主要成分的含量，有利于控
制产品的质量。
参考文献
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(本文于 2011 年 3 月 9 日收到)
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