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紫萁贯众抗炎有效部位的研究



全 文 :基金项目:北京中医药大学中药先导化合物发现与开发创新团队项目
通信作者:高增平,女,博士,教授,硕士生导师,研究方向:中药有效物质基础及质量研究,E - mail:gzp6560@ hotmail. com
紫萁贯众抗炎有效部位的研究
穆丽莎 崔 文 费 烨 付深振 王 晶 高增平
(北京中医药大学中药学院,北京,100102)
摘要 目的:确定紫萁贯众抗炎作用有效部位,为进一步研究紫萁贯众抗炎作用的活性成份奠定基础。方法: 通过二甲苯致小
鼠耳廓肿胀实验研究紫萁贯众各极性部位的抗炎活性。结果:紫萁贯众各极性部位对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响均具抑制作
用,乙酸乙酯低剂量及正丁醇高剂量与地塞米松的抗炎效果相近。结论:中药紫萁贯众的乙酸乙酯部位和正丁醇部位为抗炎有
效部位。
关键词 紫萁贯众;抗炎;有效部位
Study on the Effective Component of Japanese Flowering Fern Rhizome with Anti-inflammatory Action
Mu Lisha,Cui Wen,Fei Ye,Fu Shenzhen,Wang Jing,Gao Zengping
(School of Chinese Meteria Medica,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100102,China)
Abstract Objective:To determine the effective component of JapaneseFloweringFernRhizome with anti-inflammatory action.Methods:
Anti-inflammatory activities of the diffident parts of JapaneseFloweringFernRhizomewere studied on the swelling mice ear induced by xy-
lene. Results:All the polar parts of JapaneseFloweringFernRhizome had inhibitory effects on the xylene-induced mice ear swelling. N-
butyl alcohol high dose group and ethyl acetate low dose group showed the similar anti-inflammatory action to that of DXM (Dexametha-
sor). Conclusion:Japanese Flowering Fern Rhizome has anti-inflammation effect. Ethyl acetate low dose part and N-butyl alcohol part
are the effective components with anti-inflammation action.
Key Words Japanese Flowering Fern Rhizome;Anti-inflammation;Effective component
中图分类号:R285. 6 文献标识码:A doi:10. 3969 / j. issn. 1673 - 7202. 2014. 03. 036
紫萁贯众为紫萁科紫萁属植物紫萁(Osmunda ja-
ponica Thunb)的干燥根茎和叶柄残基[1],是传统中药
贯众的主要流通商品之一。目前已经从紫萁贯众中分
离鉴定出坡那甾酮 A、脱皮酮、脱皮甾酮、β -谷甾醇等
甾体化合物,紫萁内酯、棕榈酸乙酯、棕榈酸甲酯、甲基
(2S,5S)- 5 -羟 - 3 -(β - D -吡喃葡萄糖氧基)己
酸酯、紫萁酮等酯类化合物,紫萁苷、花秋酸苷、β - D
-吡喃糖苷等苷类化合物,以及多糖等成分[2]。
现代药理研究结果表明,紫萁贯众具有抗菌、抗病
毒、抗癌、提高机体免疫力等作用[3],但对其抗炎作用
报道很少,且其研究多与抗菌、抗病毒作用相联系[4]。
本文以紫萁贯众的抗炎作用为切入点,通过小鼠耳廓
肿胀实验对紫萁贯众抗炎活性部位进行筛选,为进一
步研究紫萁贯众抗炎活性成分提供依据。
1 仪器与试药
1. 1 药材 紫萁贯众药材(购买地点:湖南沅陵;购买
时间:2011 年 3 月 7 日;由北京中医药大学中药学院高
增平教授鉴定为紫萁贯众)。
1. 2 药品制备 紫萁贯众药材 9. 5 kg,粉碎后用 90%
乙醇回流提取两次,保留药渣。将所得提取液合并,过
滤取上清液进行减压浓缩得到浓缩液。将浓缩液加水
稀释后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,萃取液
分别浓缩干燥得到石油醚部位收率为 0. 002 2%、乙酸
乙酯部位收率为 0. 066 8%、正丁醇部位收率为
0. 043 8%。
乙醇提取后的药渣晾干,加水煎煮两次,将所得水
煎液合并。水煎液浓缩后加乙醇使含醇量达到 65%,
放置过夜后过滤得到滤液,滤液再加乙醇进行第二次沉
淀,收集两次的沉淀得水提醇沉部位收率0. 740 2%。
得到四个极性部位:水提醇沉部位、正丁醇部位、
乙酸乙酯部位、石油醚部位。
1. 3 实验动物 ICR小鼠 120 只(雄性),平均体重 21
g(北京维通利华实验动物技术有限公司提供)。
1. 4 主要仪器设备及试剂 仪器:DK - S 24 型电热
恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司);旋转蒸发
仪 RE52CS(上海亚荣生化仪器厂);SHZ - D(III)循环
水式多用真空泵(河南巩义市予华仪器有限责任公
司);KQ -400KDE型高功率数控超声波清洗器(昆山
市超声仪器有限公司);离心机 LDZ4 - 0. 8(北京医用
离心机厂);电子分析天平(北京塞多利科技仪器有限
公司);电子秤(批号 MP2001,上海第二天平仪器厂);
角膜环钻(北京天泽企业发展有限责任公司王府井医
·273· WORLD CHINESE MEDICINE March. 2014,Vol. 9,No. 3
疗器材服务部);小鼠灌胃器(1 mL),小镊子,剪刀。
试剂:无水乙醇、甲醇、去离子水、乙酸乙酯、石油
醚(60 ~ 90℃)、正丁醇、氯仿,均为分析纯;二甲苯(批
号 20120105,北京化工厂);地塞米松片 (批号
12030611,天津力生制药股份有限公司)。
2 方法与结果
2. 1 实验方法 按随机的原则将小鼠分成 10 组,每
组 12 只。分别为:空白组,地塞米松阳性对照组,正丁
醇部位高、低剂量组,乙酸乙酯部位高、低剂量组,石油
醚部位高、低剂量组,水提醇沉部位高、低剂量组。每
组小鼠重量平均值相等约 21 g,给药量 0. 2 mL /g。地
塞米松给药剂量为 2 mg /kg,根据《中华人民共和国药
典》(2010 年版)记载紫萁贯众成人每天用量为 9 g,实
验中小鼠的低剂量等于成人生药量,高剂量组为低剂
量组的 5 倍,见表 1。
表 1 小鼠耳肿胀实验给药剂量
各提取部位 低剂量组(mg /kg) 高剂量组(mg /kg)
正丁醇部位 0. 657 3. 285
乙酸乙酯部位 1. 002 5. 010
石油醚部位 0. 033 0. 165
水提醇沉部位 11. 103 55. 515
每只小鼠每天灌胃给药 1 次,连续给药 7 d。于末
次给药后 30 min 将二甲苯 0. 05 mL /只均匀涂在小鼠
右耳前后两面,左耳不涂做对照。致炎 1 h 后将小鼠
断颈处死,剪下左右两耳廓,用直径 8. 0 mm 打孔器于
左右耳同一部位打下圆耳片,于分析天平上称重,以右
耳片重量减去左耳片重量为肿胀度,并按以下公式求
得肿胀率(%),肿胀率(%)=肿胀度 /左耳片重量 ×
100%,结果见表 2。
表 2 小鼠耳廓肿胀实验结果
实验组别 剂量 /mg·kg -1 肿胀度 /mg 肿胀率 /%
空白对照 - 5. 321 ± 2. 930 57. 94 ± 31. 87
地塞米松 2. 000 1. 895 ± 1. 674 24. 59 ± 22. 04**
水提醇沉高剂量 55. 515 3. 017 ± 1. 605 31. 52 ± 17. 27*
水提醇沉低剂量 11. 103 2. 827 ± 1. 464 31. 60 ± 20. 28*
正丁醇高剂量 3. 285 2. 145 ± 1. 792 21. 99 ± 24. 58**
正丁醇低剂量 0. 657 2. 010 ± 1. 828 54. 65 ± 33. 79
乙酸乙酯高剂量 5. 010 3. 064 ± 1. 273 30. 81 ± 14. 89*
乙酸乙酯低剂量 1. 002 2. 109 ± 2. 115 19. 79 ± 18. 34**
石油醚高剂量 0. 165 5. 962 ± 3. 882 54. 85 ± 35. 17
石油醚低剂量 0. 033 3. 829 ± 3. 508 38. 96 ± 37. 38*
注:与模型组比较,**P < 0. 01,* P < 0. 05。
2. 2 统计学方法 应用 SPSS 13. 0 for windows 统计软
件分析数据,采用单因素方差分析(one - way ANOVE)进
行 LSD - t检验,多组间比较用 q检验;非正太分布资料采
用非参数统计分析。所得数据结果均以(珋x ± s)表示。
2. 3 实验结果 由表 2 可以看出,除正丁醇低剂量
组、石油醚高剂量组以外,其他各组对二甲苯致小鼠耳
廓肿胀的影响均具有明显的抑制作用。正丁醇高剂量
组、乙酸乙酯低剂量组的耳片重量差与空白对照组比
较,差异具有统计学意义(P < 0. 01),并且与地塞米松
阳性组肿胀率相近。说明紫萁贯众能抑制二甲苯所致
小鼠耳廓肿胀,提示紫萁贯众对极性炎性肿胀具有抑
制作用。从而确定正丁醇部位和乙酸乙酯部位为抗炎
有效部位。
3 小结与讨论
炎症是机体的组织细胞对各种致炎因子损伤所发
生的复杂的防御反应,是致炎因子刺激所引起的机体
主动反应的过程。本实验通过观察典型的二甲苯致炎
小鼠耳廓肿胀实验筛选紫萁贯众提取物中的抗炎有效
部位。结果表明,紫萁贯众各极性部位对二甲苯致小
鼠耳廓肿胀具有明显抑制作用,但由于给药剂量不同
作用强弱也不同;其中正丁醇高剂量组与乙酸乙酯低
剂量组肿胀率最小,抑制作用与阳性对照地塞米松组
相近,具有极明显的抗炎作用;而正丁醇低剂量组与石
油醚高剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀无抑制作用。
从而确定正丁醇部位及乙酸乙酯部位为抗炎有效部
位。
贯众另一药用品种东北贯众具有清热解毒、抗炎
镇痛的作用。有研究表明[5],东北贯众醇提物经大孔
树脂洗脱,得到的各组洗脱部位具有对二甲苯致小鼠
耳廓肿胀抑制作用,其中 30%乙醇洗脱部位作用显
著;并且该部位经分离得到黄酮苷、木脂素苷元、木脂
素苷类成分。本实验所得不同极性部位经检验显示,
正丁醇萃取液主要含有苷类成分,乙酸乙酯部位主要
含有酯类成分。由此可推断,紫萁贯众抗炎有效部位
为极性较大的苷类及酯类。
综上所述,紫萁贯众具有显著的抗炎作用,正丁醇
和乙酸乙酯萃取部位为抗炎有效部位,为其有效活性
成分研究及临床应用奠定了良好的基础。
参考文献
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出版社,2010:附录 321.
[2]蒋亚生,杨宁. 贯众的药理研究进展[J]. 药学实践杂志,2000,18
(1):17 - 18.
[3]戴金凤,李磊,刘辉,等.紫萁的研究进展[J]. 中草药,1999,30(9):
717 - 719.
[4]刘金成,张娟.贯众的药理研究[J]. 黑龙江医药,2008,21(4):78 -
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[5]张丽霞. 东北贯众中活性成分的研究[D]. 哈尔滨:黑龙江大学,
2009.
( 2013 - 10 - 13 收稿 责任编辑:曹柏)
·373·世界中医药 2014 年 3 月第 9 卷第 3 期