全 文 ：China Pharmacy 2015 Vol. 26 No. 19 中国药房 2015年第26卷第19期
Δ基金项目：国家自然科学基金资助项目（No.30973938）
＊硕士研究生。研究方向：中药炮制原理。E-mail：13478479869
@163.com
#通信作者：教授，博士生导师。研究方向：中药炮制原理。电
话：0411-89850135。E-mail：jiatzh@126.com
狗脊为蚌壳蕨科植物金毛狗脊Cibotium barometz的干燥
根茎，味苦、甘、性温，归肝、肾经，具有祛风湿、补肝肾、强腰膝
的功效[1]。生狗脊以祛风湿、利关节为主；砂烫狗脊质地疏松，
便于粉碎和煎出有效成分，且易于除去残存绒毛；蒸狗脊和酒
狗脊、盐狗脊具有增强“补肝肾、强腰膝”的作用[2]。本课题组前
期对狗脊不同炮制品的药效学作了大量的研究[3-7]，但尚未涉及
这5种样品水煎液中化学成分含量的变化情况。因此，本试验
同时对狗脊生品及其4种不同炮制品水煎液中水溶性总蛋白、
总酚酸、总多糖的含量进行比较研究，以期阐明炮制对狗脊化
学成分的影响，为临床合理用药提供依据。
1 材料
·制剂与工艺·
炮制方法对中药狗脊3种成分的影响Δ
赵敏杰 1，2，3＊，鞠成国 1，2，3，林桂梅 1，2，3，张 凡 1，2，3，贾天柱 1，2，3 #（1.辽宁中医药大学药学院，辽宁大连 116600；2.国
家中医药管理局中药炮制原理解析重点研究室，辽宁大连 116600；3.辽宁省中药炮制工程技术研究中心，辽
宁大连 116600）
中图分类号 R283 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2015）19-2692-03
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2015.19.31
摘 要 目的：比较生狗脊及其不同炮制品水煎液中水溶性总蛋白、总酚酸、总多糖的含量变化，阐明炮制方法对中药狗脊中3种
成分的影响。方法：采用紫外-可见分光光度法，分别在590、760、489 nm波长下测定生狗脊及砂烫狗脊、酒狗脊、盐狗脊、蒸狗脊等
4种不同炮制品水煎液中水溶性总蛋白、总酚酸、总多糖的含量。结果：5种样品中水溶性总蛋白含量分别为 4.03％、3.32％、
3.13％、3.33％、3.49％，总酚酸含量分别为 0.25％、1.34％、1.38％、2.34％、1.41％，总多糖含量分别为 28.56％、36.06％、45.21％、
49.60％、49.01％。结论：不同的炮制方法对狗脊中3种成分的含量均有一定的影响，其中水溶性蛋白质的含量在炮制后均呈现一
定程度的降低，总酚酸和总多糖的含量在炮制后均呈现一定程度的升高。
关键词 狗脊；炮制品；水溶性总蛋白；总酚酸；总多糖；含量
Effect of Processing Methods on 3 Kinds of Components of Cibotium barometz
ZHAO Min-jie1，2，3，JU Cheng-guo1，2，3，LIN Gui-mei1，2，3，ZHANG Fan1，2，3，JIA Tian-zhu1，2，3（1.School of Pharmacy，
Liaoning University of TCM，Liaoning Dalian 116600，China；2.The Key Laboratory for Principle Analysis of
Chinese Medicinal Herbs Processing，State Administration of TCM，Liaoning Dalian 116600，China；3.Chinese
Medicinal Herbs Processing Engineering Technology Research Center of Liaoning Province，Liaoning Dalian
116600，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To compare the differences in the contents of water-soluble total protein，total phenolic acid and total
polysaccharides among the water decoctions of crude Cibotium barometz and processed products and to illuminate the effect of pro-
cessing on 3 kinds of components of C. barometz. METHODS：UV-visible spectrophotometry was adopted to determine the con-
tents of water-soluble total protein，total phenolic acid and total polysaccharides in the water decoction of crude C. barometz and 4
processed products，namely sand-scorch C. barometz，yellow wine C. barometz，salt C. barometz and steamed C. barometz，at
wavelengths of 590，760 and 489 nm respectively. RESULTS：The contents of water-soluble total protein in 5 samples were
4.03％，3.32％，3.13％，3.33％ and 3.49％，those of total phenolic acid therein were 0.25％，1.34％，1.38％，2.34％ and
1.41％，and those of total polysaccharides therein were 28.56％，36.06％，45.21％，49.60％ and 49.01％，respectively. CONCLU-
SIONS：All above processing methods have an effect to some degree on the contents of the 3 kinds of components of C. barometz，
where the contents of water-soluble total protein are lower after processing，while those of total phenolic acid and total polysaccha-
rides are higher thereafter.
KEYWORDS Cibotium barometz；Processed products；Water-soluble total protein；Total phenolic acid；Total polysaccharides；
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中国药房 2015年第26卷第19期 China Pharmacy 2015 Vol. 26 No. 19
1.1 仪器
U-3010型紫外-可见分光光度计（日本日立公司）；电热恒
温水浴锅、101型电热鼓风干燥箱（北京市永光明医疗器械有
限公司）；AE240型十万分之一分析天平（瑞士梅特勒公司）；
FA1004B型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；HH-4型
恒温水浴锅（国华电器有限公司）；RE-52A型旋转蒸发器（上
海亚荣生化仪器厂）；SHZ-DⅢ型循环水式真空泵（上海予华仪
器有限公司）。
1.2 药品与试剂
D-无水葡萄糖（以下简称葡萄糖）对照品、原儿茶醛对照
品（中国食品药品检定研究院，批号：110833-200904、118010-
201007，纯度：＞98％）；牛血清白蛋白（北京索莱宝科技有限
公司，批号：711J053，纯度：＞98％）；考马斯亮蓝G250（以下简
称考马斯亮蓝，天津市大茂化学试剂厂）；苯酚、浓硫酸、乙醇、
丙酮、乙醚均为分析纯，水为超纯水。
1.3 药材
狗脊于2013年11月采自广西河池，经辽宁中医药大学王
冰教授鉴定为蚌壳蕨科植物金毛狗脊 Cibotium barometz的
根茎。
2 方法与结果
2.1 4种炮制品的制备
2.1.1 砂烫狗脊的制备 取净河砂400 g，置于炒制容器内，用
武火加热至180～190℃呈滑利状态时，加入净狗脊片50 g，不
断翻炒，6 min后取出[8]。
2.1.2 盐狗脊的制备 取净狗脊片 50 g，加入含盐量为 1 g的
盐水 40 ml，用保鲜膜密封，浸润 2 h，武火蒸制 3 h，停火闷润 4
h，取出干燥[9]。
2.1.3 酒狗脊的制备 取 7.5 g黄酒，用清水稀释至 40 ml，加
入50 g净狗脊片中拌匀，用保鲜膜密封，浸润2 h，放入锅内武
火蒸制4 h，停火后闷润4 h，取出干燥[10]。
2.1.4 蒸狗脊的制备 取净狗脊片50 g，加入清水40 ml并用
保鲜膜密封，浸润1 h，放入锅内武火蒸制4 h，停火闷润4 h，取
出干燥[11]。
将生品及以上4种炮制品粉碎，过三号筛，备用。
2.2 水溶性总蛋白的含量测定[12]
2.2.1 考马斯亮蓝溶液的制备 精密称取考马斯亮蓝 100
mg，加入95％乙醇50 ml，溶液变为蓝色，再加入85％（W/V）磷
酸溶液 100 ml，此时溶液变成血红色，最后用蒸馏水定容至
1 000 ml，混匀。
2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取牛血清白蛋白 0.010 05
g，用少量蒸馏水溶解，定容至100 ml，即得100.5 μg/ml的蛋白
质标准贮备液（4℃冰箱中保存）。
2.2.3 供试品溶液的制备 精密称取狗脊生品及不同炮制品
粉末各1 g，置于圆底烧瓶中，精密加入蒸馏水100 ml，称质量，
加热回流2 h，放凉后补足质量。
2.2.4 标准曲线的制备 取牛血清蛋白标准贮备液100、200、
300、400、500、600、800 μl，分别补加蒸馏水至 1 ml，再分别加
入 5 ml考马斯亮蓝溶液，显色 5 min。以 1 ml蒸馏水作空白，
在 400～800 nm波长处扫描，结果牛血清白蛋白在 590 nm波
长处有最大吸收。测定上述溶液在 590 nm波长处的吸光度。
以牛血清白蛋白质量浓度（x，μg/ml）为横坐标，以吸光度（y）为
纵坐标进行线性回归，得回归方程为y＝0.007 6x+ 0.081 5（r＝
0.999 9）。结果表明，牛血清白蛋白检测质量浓度线性范围为
10.05～80.40 μg/ml。
2.2.5 精密度试验 取牛血清白蛋白标准贮备溶液 1 ml，按
“2.2.4”项下操作，连续测定 6次。结果，吸光度的 RSD＝
0.56％（n＝6），表明方法精密度良好。
2.2.6 显色稳定性试验 取生狗脊供试品溶液，按“2.2.4”项
下相关方法操作，每隔 5 min测定 1次吸光度，连续测定 30
min。结果，吸光度的RSD＝3.23％（n＝7），表明供试品溶液中
总蛋白在30 min内显色基本稳定。
2.2.7 重复性试验 取生狗脊粉末6份，按“2.2.3”项下方法制
备，按“2.2.4”项下方法测定其含量。结果，含量的 RSD＝
1.65％（n＝6），表明方法重复性良好。
2.2.8 加样回收率试验 称取已知含量的生狗脊粉末 0.5 g，
共6份，精密称定，按“2.2.3”项下制备供试品溶液，分别加入牛
血清蛋白 20.15 mg，然后按“2.2.4”项下方法测定含量，计算得
总蛋白的平均回收率为101.1％（RSD＝3.52％，n＝6）。
2.3 总酚酸的含量测定[13]
2.3.1 对照品溶液的制备 精密称取原儿茶醛对照品 5.31
mg，置于50 ml量瓶中，加水使充分溶解并稀释至刻度，摇匀，
即得质量浓度为0.106 2 mg/ml的对照品溶液。
2.3.2 供试品溶液的制备 精密称取狗脊生品及不同炮制品
粉末各 0.1 g，置于圆底烧瓶中，精密加入蒸馏水 100 ml，称质
量，加热回流2 h，放凉后补足质量。
2.3.3 标准曲线的制备 精密吸取原儿茶醛对照品溶液 50、
100、200、300、400、500、600 μl，分别置于10 ml量瓶中，加甲醇
至2 ml，加0.3％十二烷基硫酸钠0.8 ml、0.6％FeCl3-0.9％K3[Fe
（CN）6]（1 ∶ 1）混合溶液 0.4 ml，混匀，暗处放置 5 min，加 0.1
mol/L盐酸溶液至 25 ml，摇匀，暗处放置 20 min。蒸馏水平行
做空白试验。以原儿茶醛对照品溶液质量浓度（x，mg/ml）为
横坐标，以760 nm波长处测定的吸光度（y）为纵坐标进行线性
回归，得回归方程为 y＝35 366x+0.175 7（r＝0.999 5）。结果表
明，原儿茶醛检测质量浓度线性范围为5.31～63.72 μg/ml。
2.3.4 精密度试验 取原儿茶醛对照品溶液0.5 ml，按“2.3.3”
项下方法操作，连续测定 6次。结果，吸光度的RSD＝0.45％
（n＝6），表明方法精密度良好。
2.3.5 显色稳定性试验 取生狗脊供试品溶液，按“2.3.3”项
下操作，每隔 5 min测定 1次吸光度，连续测定 30 min。结果，
吸光度的RSD＝4.36％（n＝7），表明狗脊供试品溶液中总酚酸
类化合物在30 min内显色基本稳定。
2.3.6 重复性试验 取生狗脊粉末6份，按“2.3.2”项下方法制
备，按“2.3.3”项下方法测定其含量。结果，含量的 RSD＝
2.26％（n＝6），表明方法重复性良好。
2.3.7 加样回收率试验 称取已知含量的生狗脊粉末 0.1 g，
共6份，精密称定，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，分别加
入原儿茶醛对照品0.25 mg，按“2.3.3”项下方法测定含量，计算
得总酚酸的平均回收率为99.6％（RSD＝2.97％，n＝6）。
2.4 总多糖的含量测定[14]
2.4.1 对照品溶液的制备 取 105℃干燥至恒质量的葡萄糖
约100 mg，精密称定，置于100 ml量瓶中，加入适量水溶解，并
稀释至刻度，摇匀，即得1.021 0 g/L的葡萄糖对照品溶液。
2.4.2 供试品溶液的制备 取狗脊生品及不同炮制品粉末各
0.5 g，精密称定，置于圆底烧瓶中，加入100 ml 80％乙醇，加热
回流，每次1 h，至无色，抽滤。滤渣在常温下挥干，将滤渣连同
滤纸置于圆底烧瓶中，加蒸馏水100 ml，加热回流1 h，2次，趁
热滤过，用少量水洗涤滤器，合并滤液和洗液，放冷，移入 250
ml量瓶中，稀释至刻度，即得。
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2.4.3 苯酚试液的制备 取苯酚 100 g，加铝片 0.1 g、碳酸氢
钠0.05 g，蒸馏，182℃收集馏分。称取该馏分5 g，置于100 ml
量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，滤过并置于棕色瓶中，即
得5％苯酚试液，备用。
2.4.4 标准曲线的制备 精密吸取葡萄糖对照品溶液 0.05、
0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 ml，分别置于具塞刻度试管中，加水至
1 ml，再分别加入5％苯酚溶液1 ml，混匀，加入浓硫酸5 ml，充
分混匀。另取1.0 ml的蒸馏水同上操作，作为空白对照。将上
述溶液置于沸水浴中反应 5 min，迅速放冷至室温，在 489 nm
波长处测定吸光度。以葡萄糖对照品溶液质量浓度（x）为横坐
标，以吸光度（y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程为 y＝7
642.088x+0.154（r＝0.999 3）。结果表明，葡萄糖检测质量浓度
线性范围为0.051 1～0.613 mg/ml。
2.4.5 精密度试验 取同一供试品溶液1.0 ml，按“2.4.4”项下
方法，连续测定6次。结果，吸光度的RSD＝1.03％（n＝6），表
明方法精密度良好。
2.4.6 显色稳定性试验 取生狗脊供试品溶液，按“2.4.4”项
下方法操作，每隔5 min测定1次吸光度，连续测定30 min。结
果，吸光度的RSD＝2.67％（n＝7），表明供试品溶液中总多糖
在30 min内显色基本稳定。
2.4.7 重复性试验 取生狗脊粉末6份，按“2.4.2”项下方法制
备供试品溶液，按“2.4.4”项下方法测定，结果总多糖的平均含
量为28.56％（RSD＝1.41％，n＝6），表明方法重复性良好。
2.4.8 加样回收率试验 称取已知含量的生狗脊粉末0.25 g，
共6份，精密称定，按“2.4.2”项下方法制备供试品溶液，分别加
入葡萄糖对照品71.4 mg，然后按“2.4.4”项下方法测定含量，计
算得总多糖的平均回收率为99.3％（RSD＝3.56％，n＝6）。
2.5 含量测定结果
取狗脊生品及不同炮制品分别按照“2.2.3”“2.3.2”“2.4.2”
项下方法制备供试品溶液，再分别按“2.2.4”“2.3.3”“2.4.4”项
下方法测定吸光度，计算供试品中水溶性总蛋白、总酚酸和总
多糖的含量，结果见表1。
表 1 狗脊生品及其不同炮制品中水溶性总蛋白、总酚酸、总
多糖含量测定结果（n＝6，％）
Tab 1 Determination results of water-soluble total protein，
total phenolic acid and total polysaccharides in crude
C. barometz and different processed products（n＝
6，％）
样品
生狗脊
砂烫狗脊
酒狗脊
盐狗脊
蒸狗脊
水溶性总蛋白
4.03
3.32
3.13
3.33
3.49
总酚酸
0.25
1.34
1.38
2.34
1.41
总多糖
28.56
36.06
45.21
49.60
49.01
由表 1结果可知，不同的炮制方法对狗脊中水溶性总蛋
白、总酚酸、总多糖含量均有一定的影响，水溶性总蛋白的含
量在炮制后均呈现一定程度的降低，总酚酸和总多糖的含量
在炮制后均呈现一定程度的升高。
3 讨论
本试验首次考察了狗脊不同炮制品水煎液中水溶性总蛋
白、总酚酸、总多糖的含量变化。炮制后水溶性总蛋白的含量
均较生品有所下降，可能是由于加热破坏了狗脊中的部分蛋
白质结构，从而使其含量有所下降，但是含量降低后所致生物
活性的变化尚不明确，有待进一步研究。酚酸类化合物是狗
脊中重要的活性成分，《中国药典》以原儿茶酸作为含量测定
的指标来评价药材的质量。狗脊中总酚酸的含量炮制后均有
所增加，是由于炮制加热致使糖苷键断裂生成酚酸所致，故炮
制后“补肝肾、强腰膝”作用的增强可能与总酚酸的含量增加
有关[15]。多糖是中药中普遍存在的一类化学成分，具有延缓衰
老、提高免疫功能等多方面的补益药理作用[16-18]，狗脊经炮制
后多糖含量的增加也符合制狗脊“补肝肾作用增强”的传统炮
制理论。但是狗脊发挥药效的活性成分尚不能明确，故还有
待进一步研究。
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（收稿日期：2014-09-17 修回日期：2014-12-17）
（编辑：刘 萍）
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