全 文 ：作者简介:程齐来 ,男 ,硕士研究生 ,讲师 Tel:(0797)5863591 E-mail:shinespring@126.com
·科研简报·
RP-HPLC分析生药六月雪中齐墩果酸
的含量
程齐来 , 程勇 , 范小娜 , 丁冶春 (赣南医学院药学系 ,
江西 赣州 341000)
关键词:反相高效液相色谱法;齐墩果酸;六月雪
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:
1001-2494 (2008)23-1832-02
六月雪系茜草科植物六月雪 [ Serissaserisoides
(DC.)Druce] 的干燥全草 。全国各地均产 , 江西
赣南地区资源丰富 , 为常用民间草药 , 早在 《本草
拾遗》 中就有记载;能活血 、 凉血 、疏肝泻湿 、消
肿止痛 。主要用于急慢性肝炎 、黄疸 、流行性腮腺
炎 、肾性水肿 、 血尿及高血压等症 [ 1] 。另据药理
及临床报道 , 六月雪对急性黄疸型肝炎及高血压有
明显疗效 , 并无毒性反应 [ 2 ] , 齐墩果酸 (oleanlia
acid)则是六月雪中治疗肝炎的主要有效成分 。目
前报道齐墩果酸含量分析方法主要有薄层色谱法和
高效液相色谱法 [ 3 ] , 考虑到薄层色谱法结果不直
观 、分离效果不理想 、定量不准确等缺点 , 故采用
高效液相色谱法分析六月雪中齐墩果酸含量 , 收到
了较为理想的效果 。该方法简便 、 快速 、 重现性
好 , 为该药材开发利用提供了可靠的理论依据 。
1 仪器与试药
美国 Agilent1100高效液相色谱仪 , DAD检测
器 , 色谱柱为 ZORBAXEclipseXDB-C18 (4.6
mm×150 mm, 5 μm), 20 μL手动六通阀微量进
样器;RE-52AA旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器
厂);AcademicMilepore超纯水发生器;FA2104
电子天平 (上海良平仪器仪表有限公司)。
六月雪生药购自江西樟树药材市场。齐墩果酸
对照品 (中国药品生物制品检定所 , 批号 110709-
200304), 使用超纯水 , 其余试剂均为分析纯。
1.1 样品分析条件
色 谱 柱 为 ZORBAX Eclipse XDB - C18
(4.6mm×150 mm, 5 μm);流 动 相 甲 醇 -水
(80∶20);流速 1.0mL·min-1;检测波长 210nm;
柱温室温 。
1.2 样品制备
将生药六月雪在 80 ℃下恒温干燥 12 h, 取适
量六月雪于高速粉碎机中粉碎 , 过筛 , 备用 。精密
称取六月雪粉末约 1 g, 置烧瓶内加 50 mL无水乙
醇水浴加热 90 ～ 95 ℃回流提取 1 h, 过滤 , 用 20
mL无水乙醇洗涤容器和残渣 , 过滤后合并滤液 ,
水浴蒸干 , 用三氯甲烷 50 mL和水 100 mL分次交
替溶解转移至 250 mL分液漏斗内 , 加入饱和氯化
钠溶液 20 mL, 振荡萃取 10 min, 分取氯仿层 , 同
法再用三氯甲烷 20mL萃取提取 1次 , 合并三氯甲
烷液 , 用水萃取洗涤 2次 , 每次 100 mL(每次另
加饱和氯化钠溶液 20 mL), 分取三氯甲烷层 , 水
浴蒸干 , 用流动相溶解后转移至 10mL量瓶中定容
作为供试品溶液备用。
2 结果与讨论
2.1 检测波长的选择
文献报道 [ 4] 的牛膝中齐墩果酸紫外检测波长
为 210 nm, 在此基础上 , 采用光电二极管矩阵
(DAD)检测器 , 在 190 ～ 500 nm内进行光谱扫
描 , 齐墩果酸在流动相中的最大吸收波长均为
202.2 nm, 但短波长处流动相有较强的末端吸收 ,
为避免流动相对检测结果的干扰 , 提高信噪比 , 保
证系统的灵敏度 , 选取 210nm为检测波长。
2.2 流动相的选择
检测齐墩果酸常用的流动相为甲醇 , 甲醇-水 ,
乙腈 -水 , 甲醇 -水 -冰醋酸 -三乙胺等。经过多次实
验 , 比较了采用以上不同流动相测定齐墩果酸含量
的差别 , 表明乙腈比甲醇出峰时间早 , 但峰型不理
想 , 且响应值相对较弱;虽然甲醇出峰时间晚 , 但
比乙腈毒性小 , 更经济 , 并且随着甲醇在流动相中
的比例越高 , 出峰时间越早 , 响应值也相对较高 ,
故本实验采用 80%甲醇-水溶液作为流动相 , 在此
流动相下 , 齐墩果酸出峰时间 13.80 min, 柱效和
峰型良好 。
2.3 方法的线性范围及检出限
精密称取齐墩果酸对照品适量用甲醇溶解制成
1.5 g·L-1对照品溶液贮备液。精密量取对照品溶
液 0.1, 0.2, 0.5 , 1.0, 2.0, 3.0 mL, 分别置于
·1832· ChinPharmJ, 2008December, Vol.43No.23 中国药学杂志 2008年 12月第 43卷第 23期
作者简介:冯旭赟 ,男 ,硕士研究生 Tel/Fax:(010)64448778 ＊通讯作者:陈建峰 ,男 ,教授 E-mail:chenjf@mail.buct.edu.cn
10 mL量瓶中 , 甲醇定容摇匀 , 进样 20 μL测定 。
以进样量 (X, μg)对峰面积 (Y)进行线性回
归 。回归方程为:Y=4.35 ×105 X+5.21, r=
0.999 8, 线性范围 0.30 ～ 9.00 μg。
取以上齐墩果酸对照品贮备液不断稀释 , 稀释
1次进样 20 μL。当齐墩果酸的检测信号为 10倍噪
音信号时 , 不再稀释 , 并根据此时进样量确定其最
小检出量并计算最低检出浓度 。测得齐墩果酸最小
检出量为 0.8 ng, 最低检出浓度为 0.04mg·L-1。
2.4 精密度测定
精密吸取 0.30 g· L-1齐墩果酸标准液 , 连续
进样 5次 , 每次 20 μL, 齐墩果酸峰面积 RSD为
1.43%。
2.5 稳定性实验
将对照品溶液和样品溶液在室温下贮存 , 于
0, 1.0, 2.0, 4.0, 8.0 h测定 , 对照品溶液和样
品溶液在 8 h稳定 , 齐墩果酸峰面积 RSD分别为
2.84%和 2.21%。
2.6 重复性实验
取同一批号样品 , 按 “2.3” 项下方法分别制
备 5份供试液 , 依法测定 , 测得该批号样品的齐墩
果酸含量平均值为 0.822 1 mg· g-1 , RSD为
2.90%, 表明方法的重复性良好 。
2.7 加样回收率实验
精密称定上述已知含量的同一批号样品 6份
(每份约 5g), 分别精密加入已知浓度的齐墩果酸
对照品溶液 (0.30 g· L-1)0.5, 1.0, 2.0 mL,
按 “2.3” 项下方法制备 , 进样 20 μL测定峰面
积 , 代人回归方程计算样品中的齐墩果酸含量 , 平
均回收率 99.79%, RSD为 2.40%。
2.8 生药六月雪中齐墩果酸含量的测定
按照样品的制备和分析条件 , 测定了 6批生药
六月雪样品 , 结果见表 1。本方法简便 、快速 、重
现性好 。
表 1 六月雪样品中齐墩果酸含量测定结果
Tab.1 ContentsofoleanliaacidinSerissaserissoides
Sample Content/mg· g-1 Sample Content/mg· g-1
1 0.792 4 4 0.814 3
2 0.851 5 5 0.843 2
3 0.851 6 6 0.833 1
REFERENCES
[ 1] XUGJ, XULS, JINRL.ChinaPharmacognosy(中国药材
学)[ M] .Beijing:ChinaMedicinePress, 1996:1600.
[ 2] WANGSF, LIG Y, YANGGH.Studyonthechemical
componentsinSerissaserisoides[ J] .ChinaJChinMaterMed
(中国中药杂志), 1989, 14(9):33-34.
[ 3] QINGLS, ZHANGH, LVGH, etal.Determinationofoleanolic
acidinCaulisclemaddisamsandibyHPLC[ J].WestChinaJ
PharmSci(华西药学杂志), 2006, 21(3):273-274.
[ 4] ZHAOPX, WANGSW, WANGJB.Studyonextraction
techniqueofoleanlicacidfromAchyranthesbidentata[ J] .Shanxi
JTraditChinMed(陕西中医), 2005, 26(10):1099-1100.
(收稿日期:2007-12-29)
HPLC测定超细头孢氨苄的含量
冯旭赟 , 康旭亮 , 王洁欣 , 邵 磊 , 陈建峰＊ (中新
国际纳米技术工程研究中心 , 北京化工大学纳米材料先进制备技术
与应用科学教育部重点实验室 , 北京化工大学教育部超重力工程研
究中心 , 北京 100029)
关键词:超细头孢氨苄;高效液相色谱法
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:
1001-2494 (2008)23-1833-02
头孢氨苄 (Cefalexin)又称先锋Ⅳ, 属 β-内酰
胺类广谱抗生素 , 对革兰阳性菌的抗菌作用较第
二 、 三代头孢菌素强 , 是临床上常用的抗生素之
一。北京化工大学超重力中心采用反应结晶耦合反
溶剂的方法已成功制备得到了超细及纳米级的药
物[ 1-2] , 并且该方法操作条件弹性大 , 颗粒形貌 、
晶型可控 , 能耗低 , 易于工业化生产。本实验利用
高效液相色谱法对其含量测定进行了研究。
1 仪器及试药
Watersaliance2695高效液相色谱仪 , Waters
2996二极管阵列检测器 , Empower2色谱工作站 ,
自动进 样器 , 在 线脱气装置 , HPLC色 谱柱
(SunFireC18 , 4.6 mm×150 mm, 5 μm), 天平
(Metler-ToledoInternationalInc, AB135-S)。
头孢氨苄对照品 (中国药品生物制品检定所
130408-200209);自制超细头孢氨苄 (070705, 北
京化工大学超重力中心);甲醇 , 无水醋酸钠 , 醋
酸 , 超纯水。
2 方法与结果
2.1 超细头孢氨苄的制备
将一定量头孢氨苄原料药溶于盐酸中 , 过滤后
收集得到滤液 1;按比例将三乙胺溶于丙酮中得溶
·1833·中国药学杂志 2008年 12月第 43卷第 23期 ChinPharmJ, 2008December, Vol.43No.23