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白亮独活(藏药珠噶)的质量标准研究



全 文 :收稿日期:2014-07-16
基金项目:四川省藏药标准的制定(301-377)
作者简介:高必兴(1989-),男,在读硕士研究生,专业方向:中药品种质量与资源开发;Tel:18011401594,E-mail:laughgao@ foxmail. com。
* 通讯作者:邓晶晶,Tel:028-61800231,E-mail:dengjingjing-82@ 126. com。
白亮独活(藏药珠噶)的质量标准研究
高必兴,兰志琼,邓晶晶* ,李易坤,满孝奎,卢先明
(成都中医药大学药学院 /中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地 /中药材标准化
教育部重点实验室,四川 成都 611137)
摘要 目的:建立白亮独活(藏药珠噶)的质量标准。方法:以欧前胡素为对照品用硅胶 GF254薄层板进行薄层
色谱研究,以补骨脂素为对照品用紫外-可见分光光度法进行总香豆素含量测定,并对白亮独活药材性状、显微特
征、水分、总灰分、酸不溶性总灰分、浸出物含量进行描述及检测。结果:白亮独活药材性状、显微特征明显,薄层鉴
别方法分离度好。白亮独活药材水分范围为 8. 56% ~ 12. 82%(平均值为 9. 96%),总灰分范围为 5. 86% ~ 6. 88%
(平均值为 6. 39%),酸不溶性灰分范围为 1. 27% ~ 1. 99%(平均值为 1. 60%),30%乙醇作为溶剂浸出物范围为
31. 21% ~ 45. 73%(平均值为 34. 40%)。在 290 nm下测定吸光度,按干燥品计算,总香豆素含量以补骨脂素计范
围为 2. 29% ~ 4. 76%(平均值为 3. 49%)。结论:建立了白亮独活药材的质量标准规范,为白亮独活的临床安全合
理用药提供了参考。
关键词 白亮独活;质量标准;鉴别;含量测定
中图分类号:R282. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2015)05-0962-04
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2015. 05. 018
白亮独活为伞形科植物白亮独活 Heracleum
candicans Wall. ex DC. 的干燥根。藏文音译为“珠
噶”。别名:藏当归(西藏)、白羌活(云南);异名:珠
娃、帕珠嘎布(《度母本草》),珠加(《晶珠本草》),
独嘎间、诱大(《甘露明镜本草》)〔1〕。分布于西藏大
部分地区及青海、云南、四川等地,常野生于海拔
2 000 ~ 4 200 m的土坡杂木林下或草丛中。8 ~ 10
月份采收根,洗去泥土及杂质,晾干。《晶珠本草》
记载其功效有杀虫、止血、愈疮痈、治麻风〔2〕。
通过民间调查,发现白亮独活疗效好,资源丰
富。因此对白亮独活进行深入研究和开发具有重大
意义。但到目前为止,国内外对白亮独活的研究甚
少。为完善本品质量标准,为临床安全合理用药提
供科学依据,笔者对不同来源白亮独活药材的性状、
显微、薄层色谱、水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出
物及总香豆素含量测定进行了研究,为白亮独活药
材的质量评价提供科学依据。
1 材料、仪器与试剂
1. 1 材料 实验用药材共 10 批,采自四川省甘孜
州(产地见表 1),经笔者卢先明教授鉴定为伞形科
植物白亮独活 Heracleum candicans Wall. ex DC. 的
干燥根,洗去泥土及杂质,晾干,备用。
1. 2 仪器与试剂 UV-1100 型紫外-可见分光光度
仪(上海天美科学仪器有限公司);BP 121S 万分之
一电子天平、BP 211D 十万分之一电子天平(德国
Sartorius公司);UV-1600 型紫外分光光度计(日本
岛津公司);KQ5200E型超声波清洗器(昆山市超声
仪器有限公司)。欧前胡素(批号:110826-201214,
质量分数≥ 99. 5%)、补骨脂素(批号:130739-
201115,质量分数≥99%)对照品购自中国食品药品
检定研究院。试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 药材性状 根圆柱形,顶端有密集的环状叶
痕及横皱纹。根部扭曲,直径约 3 cm,下部分叉。
表面灰棕色至黑棕色,具不规则的纵沟纹及少数横
皱纹,可见稀疏细小皮孔及须根痕,较粗大者木部略
现朽蚀状。质坚硬,折断面不平坦,带裂片性。断面
皮部有油点,近形成层处显棕色,木部淡黄色,占整
个横切面的 1 /3。香气浓且特异,味甚苦带涩。
2. 2 显微鉴别
2. 2. 1 横切面:木栓层由数列扁平细胞组成。皮
层狭窄可见油室,裂隙多见。韧皮部宽广,有类圆形
油室排列成数轮,直径为 18 ~ 81 μm,周围分泌细胞
8 ~ 13 个,内含棕黄色分泌物;韧皮部射线由 1 ~ 2
列由类长方形细胞组成。形成层成环。木质部射线
宽 1 ~ 2 列细胞,导管多 2 ~ 3 个聚集,呈放射状排
列,直径约至 75 μm。薄壁细胞多含淀粉粒。见图
1、2。
2. 2. 2 粉末:黄棕色。淀粉粒众多,类圆形,无脐
点或偶呈点缝状,多单粒聚集成团,偶见复粒,直径
·269· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 5 期 2015 年 5 月
5 ~ 13 μm。油室大多破碎,可见众多油细胞。导管
多为螺纹及网纹,直径 16 ~ 80 μm,偶见梯纹,直径
50 ~ 90 μm。纤维单个或多个聚集,呈长梭状,直径
12 ~ 25 μm,壁厚,胞腔小。木栓细胞多角形,偶见
棕黄色分泌物。见图 3。
图 1 白亮独活药材横切面详图(×40)
1. 木栓层 2. 油室 3. 韧皮射线 4. 韧皮部 5. 形成层
6. 导管
图 2 白亮独活药材横切面简图(×40)
1. 木栓层 2. 皮层 3. 韧皮部 4. 韧皮射线 5. 油室
6. 木射线 7. 木质部 8. 形成层
2. 3 薄层鉴别 取白亮独活 1 ~ 10 号样品粉末 1
g,加甲醇 10 mL,超声(200 W,40 kHz)处理 15 min,
滤过,续滤液作为供试品溶液。取欧前胡素对照品,
加甲醇制成每 1 mL 含 0. 5 mg 的溶液,作为对照品
溶液。照薄层色谱法(2010 年版中国药典一部附录
ⅦB)试验,吸取上述两种溶液各 4 μL,分别点于同
一硅胶 GF254薄层板上,以石油醚(60 ~ 90 ℃)-乙酸
乙酯(7∶ 3)为展开剂,展开,取出,晾干。分别置紫
外光灯(254 nm)下检视,供试品色谱中,在与对照
品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。结
果见图 4。
图 3 白亮独活药材粉末图(×400)
1. 木栓细胞 2. 油细胞 3. 纤维 4. 导管 5. 淀粉粒
图 4 白亮独活药材薄层色谱图(T =22 ℃,RH =50%)
1 ~ 10. 1 ~ 10 号样品 11. 欧前胡素对照品
2. 4 检查
2. 4. 1 水分:按 2010 年版中国药典一部附录Ⅸ水
分测定法项下第二法(甲苯法)测定 10 批样品。测
定结果为 8. 56% ~ 12. 82%,平均为 9. 96%。结果
见表 2。
2. 4. 2 总灰分:按 2010 年版中国药典一部附录Ⅸ
总灰分测定法项下总灰分测定法测定 10 批样品。
测定结果为 5. 86% ~6. 86%,平均为 6. 39%。结果
见表 2。
2. 4. 3 酸不溶性灰分:按 2010 年版中国药典一部
附录Ⅸ灰分测定法项下酸不溶性灰分测定法测定
·369·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 5 期 2015 年 5 月
10 批样品。测定结果为 1. 27% ~ 1. 75%,平均为
1. 60%。结果见表 2。
2. 5 浸出物 按 2010 年版中国药典一部附录ⅩA
项下醇溶性浸出物测定法的热浸法,以 30%乙醇作
为溶剂,测定 10 批样品的浸出物含量。测定结果为
31. 21% ~45. 73%,平均为 34. 40%。结果见表 1。
2. 6 总香豆素含量测定
2. 6. 1 对照品溶液的制备:精密称取补骨脂素对
照品 10 mg,置于 50 mL 量瓶中,加甲醇适量,超声
使其溶解,放冷,用甲醇定容至刻度,摇匀,即得浓度
为 0. 190 mg /mL的补骨脂素对照品溶液。
2. 6. 2 供试品溶液的制备:精密称取白亮独活药
材粉末 0. 5 g,置具塞锥形瓶中,加甲醇 25 mL,静置
24 h,回流 90 min,放冷后,过滤至 50 mL量瓶中,残
渣用甲醇洗涤 2 次,每次 10 mL,用甲醇定容至 50
mL,然后取 1 mL加入 50 mL量瓶中,用甲醇定容至
50 mL。以空白溶剂甲醇作为参比,于 290 nm 下测
定吸光度,以标准曲线计算供试品溶液中总香豆素
的浓度。
2. 6. 3 线性关系考察:精密吸取对照品溶液 1、2、
3、4、5 mL,分别置于 50 mL 量瓶中,甲醇定容至刻
度,用甲醇作为空白溶剂。以空白溶剂作为参比,照
紫外-可见分光光度法(2010 年版中国药典一部附
录Ⅴ A),于 290 nm下测定吸光度,以浓度(X)为横
坐标,吸光度 A(Y)为纵坐标,绘制标准曲线。得回
归方程为 Y = 0. 0640X - 0. 0056,r = 0. 9986,补骨脂
素在 3. 8 ~ 19. 0 μg /mL 浓度范围内与吸光度呈良
好的线性关系。
2. 6. 4 精密度试验:精密量取对照品溶液 1 mL,置
于 50 mL 量瓶中。以空白溶剂甲醇作为参比,于
290 nm 下测定吸光度,连续测定 6 次,RSD 为
0. 72%。表明仪器精密度良好。
2. 6. 5 稳定性试验:精密称取白亮独活药材粉末
0. 5 g,按“2. 6. 2”项下方法制备供试品溶液,于 290
nm下测定吸光度,每 15 min测定 1 次,共 7 次,RSD
为 0. 24%。表明供试品溶液在 90 min 内稳定性良
好。
2. 6. 6 重复性试验:分别精密称取同一白亮独活
药材粉末 0. 5 g,6 份,按“2. 6. 2”项下方法制备供试
品溶液,于 290 nm下测定吸光度,并计算总香豆素
含量,RSD为 1. 63%。表明方法重复性良好。
2. 6. 7 加样回收率试验:分别精密称取同一白亮
独活药材粉末 0. 1 g,分别加入补骨脂素对照品溶液
适量,按“2. 6. 2”项下方法制备供试品溶液,于 290
nm下测定,计算总香豆素的加样回收率,结果平均
加样回收率为 100. 84%,RSD为 1. 22%。
2. 6. 8 样品测定:取各产地白亮独活药材粉末 0. 5
g,精密称定,按“2. 6. 2”项下方法制备供试品溶液,
于 290 nm下测定,计算总香豆素含量及平均值,结
果见表 1。
表 1 白亮独活样品水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物及总香豆素含量测定结果(%)
样品编号 产地 水分 总灰分 酸不溶性灰分 浸出物 总香豆素
1 道孚县八美乡 12. 82 5. 96 1. 69 31. 50 2. 99
2 炉霍县炉霍车站旁 9. 03 6. 88 1. 75 31. 21 3. 63
3 炉霍县斯木乡 8. 97 6. 18 1. 60 32. 16 3. 53
4 炉霍县宜木乡 9. 52 6. 52 1. 99 37. 01 3. 67
5 道孚县格西乡 10. 65 6. 43 1. 72 33. 26 2. 29
6 康定县塔公乡 8. 56 6. 53 1. 39 45. 73 3. 74
7 道孚县德加村 10. 12 6. 54 1. 56 32. 52 2. 57
8 理塘县赤尼乡 9. 91 6. 13 1. 50 34. 48 4. 76
9 道孚县龙灯乡 10. 12 6. 86 1. 27 33. 25 2. 96
10 炉霍县孔色乡 9. 86 5. 86 1. 52 32. 88 4. 76
平均值 9. 96 6. 39 1. 60 34. 40 3. 49
3 讨论
白亮独活(藏药珠噶)有治疗白癜风和止血等
作用,故选用具有光敏和止血活性的欧前胡素作为
薄层鉴别的对照品,结果显示各产地白亮独活均含
有此类化学成分,且含量有差异。
本研究考察了不同浓度醇溶性浸出物的差异和
水溶性浸出物冷、热浸出方法。从浸出物测定结果
可以看出,白亮独活药材 30%乙醇浸出物含量最
高。不同产地白亮独活药材按干燥品计算,浸出物
含量均高于 30%,最高达 45. 73%。其中以康定县
塔公乡所采样品含量最高,炉霍县炉霍车站旁所采
含量最低。
白亮独活所含成分以香豆素类为主,且呋喃香
豆素含量较高〔3,4〕,以测定单一活性物质的 HPLC法
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难以全面控制药材的质量;故以呋喃香豆素的基本
结构补骨脂素为对照品,以紫外-可见分光光度法测
定总香豆素含量,结果不同产地 10 批白亮独活样品
按干燥品计算,含量均高于 2. 20%,最高达 4. 76%。
其中理塘县赤尼乡最高,道孚县格西乡最低。
参 考 文 献
[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会 . 中华本草·藏
药卷[M].上海:上海科学技术出版社,2002:139-140.
[2]帝玛尔·丹增彭措 . 晶珠本草(藏文)[M].北京:北京
民族出版社,1986.
[3]孙汉董,林中文,钮芳娣 . 伞形科中药的研究———Ⅶ.
白亮独活根的化学成分(1)[J].云南植物研究,1984,6
(1):99-102.
[4]林中文,陈一平,孙汉董,等 . 白亮独活的香豆素成分
[J].云南植物研究,1993,15(3):313-314.
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