全 文 ：第 2期 王 辉，等:碳纳米管对聚偏氟乙烯膜的共混改性研究
第 28卷第 2期
2016年 2月
化 学 研 究 与 应 用
Chemical Ｒesearch and Application
Vol．28，No．2
Feb．，2016
文章编号:1004-1656(2016)02-0243-04
红树林植物角果木内生真菌次级代谢产物
的分离鉴定
罗由萍，邓鹏飞* ，郑彩娟，杨文飞，吕世康，王 望，韩儆鹏
(海南师范大学化学与化工学院，教育部热带药用植物化学重点实验室 海南 海口 571158)
摘要:研究红树林植物角果木根部内生真菌 Fusarium sp．JG13 次级代谢产物。用硅胶柱层析、制备薄层层析
和重结晶等方法，从该菌发酵液的乙酸乙酯萃取相中分离获得 4个单体化合物，以及一对顺反异构体。运用
现代波谱技术以及文献数据对照，鉴定其结构分别为 physcion(1)、trans physcion bianthrone(2)、cis physcion
bianthrone(3)、asperflavin(4)、neoechinulin A(5)和 isodihydroauroglaucin(6)。所有化合物均为首次从角果木
根内生真菌 Fusarium sp．JG13发酵分离得到。
关键词:红树林内生真菌;Fusarium sp．JG13;次级代谢产物;分离鉴定
中图分类号:O629 文献标志码:A
Isolation and structure elucidation of secondary metabolites from
mangrove endophytic fungus Fusarium sp．JG13
LUO You-ping，DENG Peng-fei* ，ZHEN Cai-juan，YANG Wen-fei，LV Shi-kang，
WANG Wang，HAN Jing-peng
(College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University;
Key Laboratory of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Ministry of Education，Haikou 571158，China)
Abstract:The secondary metabolites of the medicinal mangrove endophytic fungus Fusarium sp．JG13 were firstly studied．Four com-
pounds and a cis-trans isomer were isolated from the ethyl acetate extract of the fermentation using silica gel column chromatogra-
phy，preparative thin-layer chromatography and recrystallization．The structures of these compounds were identified as physcion(1) ，
trans physcion bianthrone(2) ，cis physcion bianthrone(3) ，asperflavin(4) ，neoechinulin(5)and isodihydroauroglaucin(6) ，by
comprehensive spectroscopic characterizations and comparison with reported data．Compounds 1 to 6 were isolated from mangrove en-
dophytic fungus for the first time．
Key words:mangrove endophytic fungus;Fusarium sp．JG13;secondary metabolites;isolation and elucidation
植物内生菌(endophyte)是指一类在其部分或
全部生活史中存活于健康植物组织内部，而不使
宿主植物表现出明显感染症状的微生物［1］。红树
林植物内生真菌次级代谢产物具有结构多样性和
显著的生物活性等特征，红树林植物内生真菌已
成为寻找具有生物活性的先导化合物的重要资
源。国内外研究人员对很多红树林植物包括角果
木(Ceriops tagal)进行了化学成分研究［2-3］;戴好富
收稿日期:2015-08-10;修回日期:2015-10-10
基金项目:海南省自然科学基金项目(214023)资助;海南师范大学校青年基金项目(QN1244，QN1242)资助
联系人简介:邓鹏飞(1974-) ，男，副教授，主要从事药物化学研究。E-mail:dengpengfei@ gmail．com
化 学 研 究 与 应 用 第 28卷
课题组对角果木内生青霉菌次级代谢产物进行了
研究［4-5］。但截至目前角果木内生镰孢霉属真菌
次级代谢产物的研究未见报道。本论文选择海南
红树植物角果木根部内生真菌 Fusarium sp． JG13
作为目标菌株，从其发酵液乙酸乙酯萃取相中分
离得到 6个化合物(图 1)。
图 1 化合物 1-6的结构
Fig．1 Structures of compounds 1-6
1 实验部分
1. 1 仪器和试剂
X4型显微熔点仪(北京光电仪器厂) ，温度未
校正;Bruker400M 型核磁共振仪(瑞士 Bruker 公
司) ，G6300 型液-质联用仪(美国 Agilent 科技公
司)。石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇等为工业试
剂，使用前重蒸;葡萄糖(CＲ) ，粗海盐(微生物养
殖用) ;薄层层析硅胶 GF254和柱层析硅胶(青岛海
洋化工厂)。
1. 2 微生物培养
菌株于 2014 年 6 月分离自海南东寨港红树
林自然保护区的角果木根部，经形态学和分子生
物学鉴定该菌株为镰孢霉属真菌，该菌种现保存
于热带药用植物化学教育部重点实验室。无菌状
态下取角果木样品，用无菌水冲洗 3遍，1%升汞浸
泡 1 min，无菌水冲洗 3 遍，75%酒精浸泡 30 s，无
菌水冲洗 3 遍。将组织切块，置于 PDA(马铃薯
200 g、葡萄糖 20 g、琼脂 15 g、陈海水 1000 mL、pH
7. 2)培养基中，28℃恒温倒置培养。待菌丝长出
后，挑取尖端菌丝转接至新的培养基上，几次纯化
后得到共附生真菌并转接到试管斜面上保存备
用。发酵培养基为 PDA培养基，添加葡萄糖 25g·
L－1，粗海盐 36g·L－1，1 000 mL三角瓶内装 400 mL
培养液，经 121℃(0. 1 MPa)高温灭菌 25min 后，
在超净工作台上接种 100L，接种量为 5mL，28℃静
置培养 60d。
1. 3 提取与分离
将所得发酵液过滤得发酵液和菌丝体。发酵
液用乙酸乙酯充分萃提，萃取液经旋转蒸发仪浓
缩后柱色谱分离。以石油醚-乙酸乙酯(10 ∶ 1，5 ∶
1，3 ∶1，1 ∶1，1 ∶3，V /V)以及乙酸乙酯作淋洗剂过大
柱，收集各组分，再经反复柱层析、薄层层析、重结
晶等方法纯化得到化合物 1(850mg)、化合物 2
(600mg)、化合物 3(600mg)、化合物 4(200mg)、
化合物 5(500mg)以及化合物 6(400mg)。
1. 4 化合物的波谱数据
化合物 1:橙红色针状晶体。1H NMＲ(400MHz，
CDCl3)δ:12. 28(1H，s，ArOH) ，12. 08 (1H，s，
ArOH) ，7. 59(1H，s，H-4) ，7. 34(1H，s，H-5) ，7. 06
(1H，s，H-2) ，6. 69(1H，s，H-7) ，3. 93(3H，s，
OCH3) ，2. 44(3H，s，Ar-CH3)。
13 C NMＲ(100MHz，
CDCl3)δ:190. 8(C-9) ，181. 9(C-10) ，166. 6(C-6) ，
165. 2(C-8) ，162. 5(C-1) ，148. 5(C-3) ，135. 3(C-
11) ，133. 2(C-14) ，124. 5(C-2) ，121. 3(C-4) ，
442
第 2期 罗由萍，等:红树林植物角果木内生真菌次级代谢产物的分离鉴定
113. 7(C-13) ，110. 3(C-12) ，107. 4(C-5) ，106. 8
(C-7) ，56. 1(OCH3) ，22. 2(CH3)。
化合物 2:无色晶体。EI-MS(m/z):538(100%)。
1H NMＲ(400MHz，CDCl3)δ:12. 13(2H，s，OH-8，8
＇) ，11. 88(2H，s，OH-1，1＇) ，6. 70(2H，s，H-4，4＇) ，
6. 36(2H，d，J= 2. 4 Hz，H-5，5＇) ，6. 12(2H，s，H-2，
2＇) ，5. 97(2H，s，，H-7，7 ＇) ，4. 35(2H，s，H-10，10
＇) ，3. 82(6H，s，OCH3-6，6＇) ，2. 31(6H，s，CH3-3，3
＇)。13 C NMＲ(100MHz，CDCl3)δ:190. 3(C-9) ，
165. 3(C-6) ，164. 7(C-8) ，162. 0(C-1) ，146. 9(C-
3) ，143. 2(C-5a) ，140. 6(C-4a) ，120. 8(C-4) ，
117. 0(C-2) ，114. 3(C-1a) ，110. 9(C-8a) ，107. 8
(C-5) ，100. 2(C-7) ，56. 6(C-10) ，55. 6(6-OCH3) ，
22. 0(3-CH3)。
化合物 3:无色晶体。EI-MS(m/z):538(100%)。
1H NMＲ(400MHz，CDCl3)δ:12. 18(2H，s，OH-8，8
＇) ，11. 82(2H，s，OH-1，1＇) ，6. 68(2H，s，H-2，2＇) ，
6. 38(2H，d，J= 2. 4 Hz，H-7，7＇) ，6. 10(2H，s，H-4，
4＇) ，6. 00(2H，d，J = 2. 4 Hz，H-5，5＇) ，4. 35(2H，s，
H-10，10＇) ，3. 84(6H，s，OMe-6，6＇) ，2. 29(6H，s，
CH3-3，3＇)。
13C NMＲ(100MHz，CDCl3)δ:190. 3(C-
9) ，165. 2(C-6) ，164. 6(C-8) ，162. 0(C-1) ，146. 8
(C-3) ，142. 9(C-5a) ，140. 2(C-4a) ，120. 8(C-4) ，
117. 0(C-2) ，114. 3(C-1a) ，110. 9(C-8a) ，107. 7
(C-5) ，100. 2(C-7) ，56. 6(C-10) ，55. 6(6-OCH3) ，
22. 0(3-CH3)。
化合物 4:无色粉末。ESI-MS(m/z) :287［M-
H］-，289［M +H］+。1H NMＲ(400MHz，MeOD)δ:
6. 77(1H，s，H-10) ，6. 53(1H，d，J = 2. 2 Hz，H-5) ，
6. 46(1H，d，J = 2. 2 Hz，H-7) ，3. 93(3H，s，8-
OCH3) ，2. 99(2H，dd，J = 17. 0，2. 4 Hz，H-4) ，2. 76
(2H，dd，J = 17. 0，1 Hz，H-2) ，1. 37(3H，s，3-
CH3)。
13C NMＲ(100MHz，MeOD)δ:204. 1(C-1) ，
166. 5(C-9) ，162. 9(C-8) ，162. 0(C-6) ，143. 7(C-
10a) ，138. 4(C-4a) ，117. 7(C-10) ，110. 3(C-8a) ，
110. 2(C-9a) ，103. 5(C-5) ，98. 9(C-7) ，71. 3(C-
3) ，56. 3(8-OCH3) ，52. 5(C-2) ，44. 1(C-4) ，28. 9
(3-CH3)。
化合物 5:淡黄色粉末。ESI-MS(m/z) :324
［M+H］+。1H NMＲ(400MHz，CDCl3)δ:8. 52(1H，
s，H-1) ，7. 53(1H，brs，H-11) ，7. 36(1H，d，J = 7. 3
Hz，H-7) ，7. 27(1H，d，J= 7. 8 Hz，H-4) ，7. 19(1H，
s，H-8) ，7. 18(1H，dd，J = 7. 8，7. 5 Hz，H-5) ，7. 16
(1H，dd，J = 7. 5，7. 3 Hz，H-6) ，7. 13(1H，s，H-
14) ，6. 06(1H，dd，J = 17. 4，10. 8 Hz，H-16) ，5. 19
(1H，d，J= 10. 8 Hz，Ha-17) ，5. 16(1H，d，J = 17. 4
Hz，Hb-17) ，4. 30(1H，qd，J = 7. 2，1. 7 Hz，H-12) ，
1. 60(3H，d，J = 7. 2 Hz，H-20) ，1. 52(6H，s，H-18 /
19)。13C NMＲ(100MHz，CDCl3)δ:166. 02(C-13) ，
160. 19(C-10) ，144. 39 (C-16) ，143. 87 (C-2) ，
134. 43(C-7a) ，126. 11 (C-3a) ，124. 57 (C-9) ，
122. 31(C-6) ，121. 04(C-5) ，118. 9(C-4) ，113. 25
(C-17) ，111. 94(C-8) ，11. 35(C-7) ，103. 03(C-
3) ，51. 64(C-12) ，39. 25(C-15) ，27. 42(C-19) ，
27. 4(C-18) ，20. 97(C-10)。
化合物 6:淡黄色晶体。EI-MS(m/z) :323
(100%)。1H NMＲ(400MHz，CDCl3)δ:11. 94(1H，
s，2-OH) ，10. 23(1H，s，H-7) ，6. 90(1H，s，H-4) ，
6. 02(2H，m，H-4 ＇，5 ＇) ，5. 59(2H，m，H-3 ＇，6 ＇) ，
5. 34(1H，m，H-2 ＇) ，5. 28(1H，m，5-OH) ，3. 30
(2H，d，J= 7. 3 Hz，H-1＇a，1＇b) ，2. 98(2H，t，J = 7. 4
Hz，H-1＇＇) ，2. 35(2H，td，J = 7. 7，7. 4 Hz，H-2＇＇) ，
1. 76(3H，s，H-4＇) ，1. 73(3H，d，J= 6. 6 Hz，H-7＇＇) ，
1. 70(3H，s，H-5＇)。13 C NMＲ(100MHz，CDCl3)δ:
195. 4(C-7) ，155. 9(C-2) ，145. 1(C-5) ，133. 9(C-3
＇) ，132. 1(C-4＇ ＇) ，131. 1(C-5＇ ＇) ，130. 1(C-6＇ ＇) ，
129. 4(C-3) ，128. 9(C-3＇＇) ，128. 4(C-6) ，127. 4(C-
4) ，121. 1(C-2＇) ，117. 3(C-1) ，34. 2(C-2＇＇) ，27. 0
(C-1＇) ，25. 8(C-4＇) ，24. 1(C-1＇＇) ，18. 1(C-7＇＇) ，
17. 8(C-5＇)。
2 结果与讨论
化合物 1:1H-NMＲ(400MHz，CDCl3)谱中，δ
12. 28(1H，s)、12. 08(1H，s，)为两个与羰基缔合
的酚羟基质子信号，δ 3. 93(3H，s)为甲氧基质子
信号，δ 2. 44(3H，s)为甲氧基质子信号，δ 7. 59、
7. 34、7. 06、6. 69 为蒽醌母核上四个芳氢信
号［6］;1C-NMＲ(100MHz，CDCl3)谱中 δ 190. 8、
181. 9为两个羰基碳信号，δ 56. 1 为甲氧基信号，δ
22. 2为甲基信号。推测该化合物结构为大黄素甲
醚，经过与文献数据对照［6］，确定该化合物为大黄
素甲醚(physcion)。
化合物 2，3:1H-NMＲ 谱中，所有的峰都在相
542
化 学 研 究 与 应 用 第 28卷
邻位置成对出现，猜测为一对异构体。挑出其中
一半进行分析。其氢谱信号与大黄素甲醚相似;
碳谱信号也与 physcion 信号大致相似，但是该化
合物与 physcion 13C-NMＲ 相比，少了一个羰基信
号(δ 181. 9) ，但多了 CH信号(δ 56. 6) ，推测该化
合物是大黄素甲醚的二聚体，二个蒽醌母环在 10
号碳相连。经与文献对照［7］，其 NMＲ 数据与 phy-
scion bianthrones完全一致，确定该物质为 physcion
bianthrones外消旋体。该二聚体有两个蒽醌母核，
但是两种异构体蒽醌母核重叠程度不同，导致顺
式异构和反式异构质子的化学位移具有相对较大
的差别［8］，故可通过其氢谱来鉴别是顺式异构和
反式异构。经与文献数据对照，化合物 2 为 trans
physcion bianthrone，化合物 3 为 cis physcion bian-
throne。
化合物 4:1H-NMＲ(400MHz，MeOD)谱中，δ
6. 77(1H，s) ，6. 53(1H，d，J = 2. 2 Hz) ，6. 46(1H，
d，J= 2. 2 Hz)为三个芳质子信号，δ 3. 93(3H，s)为
甲氧基信号，δ 1. 37(3H，s)为甲基信号;13 C-NMＲ
(100MHz，MeOD)谱中，δ 204. 1 为羰基信号，δ
166. 5、162. 9、162. 0为三个连氧芳碳信号，δ 71. 3
为一个连氧碳，δ 56. 3 为一个甲氧基，δ 28. 9 为一
个甲基。经过与文献数据对照，鉴定该化合物为
asperflavin。
化合物 5:碳谱中 δ 166. 02、160. 19 为两个酰
胺羰基，与其对应的氢 δ 7. 53、7. 13，提示分子中
含有二酮哌嗪结构。氢谱中 δ 7. 36(1H，d，J = 7. 3
Hz)、7. 27(1H，d，J = 7. 8 Hz)、7. 18(1H，dd，J =
7. 8，7. 5 Hz)、7. 16(1H，dd，J = 7. 5，7. 3 Hz)为邻
二取代的苯环信号，δ 8. 52 为一个宽的单峰，这是
吲哚环的显著特征;碳谱中发现有 8 个芳碳信号，
也印证了吲哚片段的存在。氢谱中 δ 5. 19(1H，d，
J= 10. 8 Hz)、5. 16(1H，d，J= 17. 4 Hz)为典型的端
基烯氢信号，并与 δ 6. 06(1H，dd，J = 17. 4，10. 8
Hz)质子耦合。经与文献对照［10］，确定该化合物
为 neoechinulin A。
化合物 6:氢谱中，δ 6. 90(1H，s)为该化合物
中唯一的芳氢信号，δ 10. 23(1H，s)为醛氢信号，
判断该化合物为 5 取代的芳醛衍生物，δ 11. 94
(1H，s)、5. 28(1H，m)为两个酚羟基，δ 1. 76(3H，
s) ，1. 73(3H，d，J= 6. 6 Hz) ，1. 70(3H，s)为三个甲
基。经与文献数据对照［11］，判断该物质为 isodi-
hydroauroglaucin。
参考文献:
［1］黎万奎，胡之璧．内生菌与天然药物［J］．中国天然药
物，2005，3(4) :193-199．
［2］张炎，邓志威，高天翔．中国红树植物角果木的化学成
分［J］．药学学报 2005，40(10) :935-939．
［3］何磊，王友绍，王清吉．药用红树植物角果木化学成分
研究［J］．中国药学杂志 2006，41(5) :341-342．
［4］丘柳明，左文健，王辉．角果木内生真菌 Penicilliun sp．
J54代谢产物及活性研究［J］．中国海洋药物 2015，34
(2) :17-21．
［5］靳鹏飞，戴好富，左文健．角果木内生真菌的代谢产物
研究［J］．中国药物化学杂志 2013，23(4) :309-311．
［6］LU Yanhua，WANG Zhengtao，XU Luoshan．Three anthra-
quinones isolated from aster tataricus L．f［J］．Chin Pharm
Sci，2003，12(2) :112-113．
［7］DU Lin，ZHU Tianjiao，LIU Hongbin．Cytotoxic polyketides
from a marine-derived fungus aspergillus glaucus［J］． J
Nat Prod，2008，71:1 837-1 842．
［8］JI Naiyun，LIANG Xiaorui，SUN Ｒanran．A rule to distin-
guish diastereomeric bianthrones by1H NMＲ［J］．ＲSC Ad-
vances，2014，4:7 710-7 715．
［9］LI Yong，LI Xifeng，KIM Se-kwon． Golmaenone，a new
diketopiperazine alkaloid from the marine-derived fungus
aspergillus sp．［J］．Chem Pharm Bull，2004，52(3) :375-
376．
［10］王发左，黄智，史雪枫．南海沉积环境来源真菌 Euroti-
um sp．SCSIO F425 的次生代谢产物研究［J］．中国海
洋药物，2013，32(1) :7-12．
(责任编辑 罗 娟)
642