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水蓼对汞积累与分布的水培实验



全 文 :水蓼对汞积累与分布的水培实验*
钱建平
1**
江文莹
2,3
张 力
2
(1桂林理工大学地球科学学院,广西桂林 541004;2桂林理工大学环境科学与工程学院,广西桂林 541004;3福州南风环境
科技有限公司,福州 350001)
摘 要 通过水培实验,研究不同浓度的汞(0、0. 5、1、10、20 和 50 μg·L -1)对水蓼生长的
影响及水蓼的耐受性表现。结果表明:在所处理的浓度范围内,水蓼生长与生理表现未受
影响。水蓼根部具有最强的汞富集能力,富集系数高达 531. 5%。培养液中的汞浓度与水
蓼茎、叶和根中汞的富集量呈显著正相关。在同一浓度时,随着培养时间的增长,水蓼体内
汞含量不断增加。水蓼茎、叶和根亚细胞中的汞分布规律表现为:细胞壁 >细胞器 >细胞
液,细胞壁对进入植物体内的汞有很强的束缚作用,限制其进入细胞质内部。
关键词 水蓼;汞;累积;水培实验
中图分类号 Q948 文献标识码 A 文章编号 1000 - 4890(2012)8 - 2119 - 06
Mercury accumulation and distribution in Polygonum hydropiper:A hydroponic experi-
ment. QIAN Jian-ping1**,JIANG Wen-ying2. 3,ZHANG Li2 (1College of Earth Science,Guilin
University of Technology,Guilin 541004,Guangxi,China;2College of Environmental Science
and Engineering,Guilin University of Technology,Guilin 541004,Guangxi,China;3Fuzhou
Nanfeng Environmental Science and Technology Company,Fuzhou 350001,China). Chinese
Journal of Ecology,2012,31(8) :2119 - 2124.
Abstract:A hydroponic experiment was conducted to study the growth and tolerance performance
of Polygonum hydropiper exposed to different concentration mercury (0,0. 5,1,10,20,and 50
μg·L -1). In all treatments,the growth and physiological performances of P. hydropiper were
not affected. The root tissue of P. hydropiper had the greatest accumulation of mercury,with the
enrichment coefficient being 531. 5% . The mercury accumulation in P. hydropiper stem,leaf,
and root was significantly positively correlated with the mercury concentration in culture solution.
Under a given mercury concentration,the mercury level in P. hydropiper plants increased with
culture time. The subcellular mercury concentration in the stem,leaf,and root was in the order
of cytoderm > cytoplasmic organelles > cytolymph. Due to the strong mercury-binding effect of
cytoderm,the mercury translocation from cytoderm to cytoplasmic organelles and cytolymph was
limited.
Key words:Polygonum hydropiper;mercury;accumulation;hydroponic experiment.
* 国家自然科学基金项目(41073089)、广西自然科学基金项目(桂
财教[2008]36 号)和中国科学院地球化学研究所环境地球化学国家
重点实验室项目(SKLEG8009)资助。
**通讯作者 E-mail:jpqian@ 163. com
收稿日期:2012-01-11 接受日期:2012-02-29
汞及其化合物具有较强的生物毒性,由于微生
物作用易在环境中发生甲基化,并在食物链中富集,
对人类及生态环境极具威胁性(李宏伟等,2006)。
近年来,由于我国很多城市均采用沿岸直排方式处
置含汞工业废水和生活污水,造成水体汞污染越来
越严重。而对水环境中汞污染的治理一直是研究者
的难题。
作为水生态系统中主要的初级生产者之一,水
生植物不仅可以去除 N、P 等营养物质和有机污染
负荷,还可以吸附、吸收污水中的重金属和有毒元素
(郭静等,1995;颜昌宙和曾阿研,2009)。大量研究
表明,植物组织中的重金属含量与环境中的重金属
含量成正相关,因此,可通过分析植物体内的重金属
来指示环境中的重金属水平(Demirezen & Aksoy,
2004;Wang et al.,2009)。戴全裕(1983)从水生植
物的角度对太湖进行了监测和评价,认为水生植物
生态学杂志 Chinese Journal of Ecology 2012,31(8) :2119 - 2124
对湖泊重金属具有监测能力。不同的植物类型对重
金属的吸收能力也有显著差异,Demirezen 和 Aksoy
(2004)对 2 种水生植物窄叶香蒲和蓖齿眼子菜重
金属(Cd、Pb、Cr、Ni、Zn 和 Cu)的富集情况进行调
查,发现窄叶香蒲组织富集的重金属含量明显高于
蓖齿眼子菜。因此,可以选择合适的物种,利用植物
对重金属的富集程度,对环境中重金属污染状况进
行生物监测。
从国内外研究来看,植物对 Hg 的吸收、富集情
况已有部分报道,一般草本植物对汞的富集大于木
本植物,其中维管植物的富集能力较强(林治庆和
黄会一,1989;龙育堂等,1994) ,但尚未发现汞的超
积累植物(Horvat et al.,2000;田吉林等,2004)。水
蓼(Polygonum hydropiper)属于蓼科的 1 年生大型草
本植物,分布于我国南北各地,多生于湿地,河岸,浅
水沟、田边,是一种比较能适应水淹环境的物种(操
国兴等,2008)。已有研究表明,水蓼对 Mn 有很强
富集的能力,是 Mn 的超富集植物(王华等,2007)。
水生植物对重金属的代谢表现为吸收和富集作用、
降解作用以及沉降、吸附和过滤作用等方面(刘松
岩等,2006) ,通过植物挥发、吸收和吸附等途径,实
现对重金属的去除(唐建勋,2009)。而水蓼对汞的
耐受性未见报道,本次试图通过水培试验,研究水蓼
对汞的累积情况,并测定亚细胞组分中汞的分布,为
解释水蓼对汞的解毒机理提供新的实验证据。
1 材料与方法
1. 1 实验处理
水培实验所用的水蓼均采自桂林市漓江上游近
岸同一地点。所采集水蓼的植株大小相近,器官整
齐,生长状况良好。将采回的水蓼用蒸馏水冲洗干
净后,剪成长度大小一致的枝条。种植时用泡沫板
固定,采用 Hoagland营养液进行预培养,每 4 d更换
一次营养液,用 0. 1 mol·L -1 NaOH 或 0. 1 mol·
L -1 HCl调节营养液的 pH值在 6 ~ 7。预培养 15 d,
待水蓼茎节处长出一定量的根后,进行 Hg 处理。
用蒸馏水将分析纯 HgCl2配制成 100 mg·L
-1 Hg2 +
的 HgCl2溶液。共进行 3 组试验设计,考虑气象因
素,第 1 组实验周期 4 d,第 2 组实验周期 8 d,第 3
组实验周期 15 d。根据已有文献(高大翔等,2008)
和本次前期工作,每组共设 6 个浓度培养皿,汞含量
分别为 0、0. 5、1、10、20 和 50 μg·L -1。每个浓度设
3 组平行。实验环境始终保持植物能够获得充足的
通风和光照,培养条件为:温度为 20 ~ 25 ℃,光照为
(3000 ± 200)lx,光照时间为 10 h(8:00—18:00)。
1. 2 实验分析
1. 2. 1 植物中汞含量测定 按照设置的时间点采
集整株植物样本,分成根、茎和叶后,用蒸馏水冲洗
干净。在通风干燥的室内晾干或放入烘箱中烘干
(温度保持在 35 ~ 45 ℃) ,研磨,过 80 目筛,用样品
袋封存备测。
称取 0. 5000 g植物样于聚四氟乙烯样品杯中,
加入 5 mL HNO3,在电热板加热 30 min,温度控制在
65 ~ 70 ℃,再逐滴加入 2 mL H2O2,10 min 后,装入
消解外罐体,置于自控式压力密闭微波消解仪(上
海新仪微波化学科技有限公司)中,在选取的最佳
工作条件下进行消解。消解后的样品溶液用稀释液
(0. 2 g K2CrO7溶于 900 mL 超纯水中,加入硫酸 28
mL,冷却后定容至 1000 mL)定容到 25 mL 待测。
同时随机抽取 5%的样品做平行样以检测测定结果
的重现性,设定 5%的空白样和 5%的标样保证分析
结果的准确性。测得植物标准物质(GBW 10015)
的相对平均偏差为 4. 69%,回收率为 98. 9% ~
106. 0%。处理好的样品采用流动注射-冷原子吸收
光谱法测定(美国 PE公司 FI-AAS-700)。
1. 2. 2 培养液中汞含量测定 采用巯基棉富集法
对培养液中的 Hg进行预富集。根据 GB 7468-87 方
法制作巯基棉,并确保制备好的巯基棉对汞的回收
率 > 90%。富集前先用少量去离子水冲洗巯基棉,
再用 4 mL pH 3 ~ 4 的稀盐酸溶液润洗巯基棉。采
集培养 4 d后的营养液样品 500 mL,加入到巯基棉
富集装置中,水样流速控制在 8 ~ 10 mL·min -1。
待水样完全经过巯基棉后,取出巯基棉管,用吸耳球
吹干巯基棉上的残存溶液。
将 6 mL饱和的 NaCl-HCl洗脱液分 2 次加入巯
基棉管,并用一支 25 mL 具塞比色管,收集洗脱液。
洗脱液流完后用吸耳球吹出残留液,再用 2 mL左右
的去离子水洗净。然后在比色管中加 0. 5 mL 溴化
剂(0. 1 mol·L -1 KBrO3 + 10 g·L
-1 KBr) ,氧化 5
min以上,应有橙黄色溴析出,若颜色不明显,可适
量增加溴化剂用量。临测定前,边摇边滴加 50 g·
L -1盐酸羟胺溶液,至溶液澄清,最后用去离子水稀
释至 10 mL刻度处待测。同样用冷原子吸收光谱法
进行测定。测得的水样加标回收率为 108. 0%。
计算不同时间水蓼根对汞的富集系数及汞从水
蓼根向地上部分转移的转运系数(郑冬梅等,
0212 生态学杂志 第 31 卷 第 8 期
2009)。
富集系数 =植物体鲜重金属含量
介质中重金属含量
× 100%
转运系数 =植物茎叶部分重金属含量
植物根部重金属含量
× 100%
1. 2. 3 水蓼亚细胞结构中总汞测定 采用差速离
心法分离出不同的细胞组分(周建民等,2005)。将
培养后的水蓼洗净,用超纯水浸泡后晾干表面的水
滴。然后将根、茎、叶分开,剪碎,分别称取 1. 0000 g
鲜样,加入 20 mL 浸提剂(250 mmol·L -1蔗糖 + 50
mmol·L -1 Tris-HCl 缓冲液,pH = 7. 5,1. 0 mmol·
L -1二硫赤藓糖醇 DTE) ,冰浴研磨成浆。用 240 μm
的尼龙布(600 目)过滤匀浆液,残渣用浸提剂滤洗
1 次,2 次滤液合并。滤液在 4 ℃下,以 3000 r·
min -1速度离心 15 min,得到的残渣与经尼龙布过滤
的残渣合并,这部分主要包括细胞壁和细胞壁的碎
片,并称为细胞壁部分(cytoderm,Fb) (Weigel &
Jǎger,1980)。上清液在 4 ℃下,以 15000 r·min -1
速度离心 30 min,底层碎片为细胞器部分(cytoplas-
mic,Fq) ,上层清液为包括液泡在内的细胞质可溶
性部分(cytolymph,Fy)。
分离出的细胞壁、细胞器、细胞质可溶性部分采
用植物中汞含量测定的方法(1. 2. 1)进行测定。质
量控制的标样为 GBW 10015(GSB-6 菠菜) ,测得平
均偏差为 3. 38%,回收率 91. 8% ~97. 8%。
1. 3 数据处理
所有实验数据采用 Excel 统计分析软件中的双
因素方差方法进行显著性检验和相关系数计算。
2 结果与分析
2. 1 宏观形态表现
与对照组水蓼相比,各设计浓度汞处理的水蓼
15 d后均未出现受 Hg 胁迫的表现。其茎、叶颜色
无明显差异,也未见叶、茎的异常斑点;新出的叶子,
茎节间距及茎的粗细均与对照组相当,根健壮,浓
密,色泽正常。
2. 2 水蓼对培养液中汞的富集
由表 1 可见,随着汞处理浓度的增加或随培养
时间的增加,水蓼茎、叶和根汞含量均表现为明显增
加的趋势。在低汞浓度条件下,无论是茎、叶或根汞
含量均较低,且增加较平稳;在高汞浓度条件下,茎、
叶和根汞含量均较高,且增加显著。相关分析表明,
水蓼的根汞、茎叶汞含量与培养液汞浓度的相关性
表 1 不同培养周期和溶液浓度下水蓼茎叶和根对汞的吸
收量(μg·g -1)
Table 1 Hg concentrations in stems,leaves and roots of
Polygonum hydropiper in different culture periods and solu-
tion concentration
水蓼器官 培养液浓度
(μg·L -1)
4 d 8 d 15 d
茎叶 0 281. 5 321. 3 379. 3
0. 5 300. 2 365. 5 380. 3
1 321. 3 393. 0 407. 8
10 355. 0 422. 7 415. 2
20 385. 6 488. 5 778. 3
50 755. 6 883. 7 1564
根 0 58. 02 57. 45 63. 46
0. 5 1371 2508 2130
1 2743 4133 5344
10 21940 42790 61250
20 59460 121500 137900
50 114800 185600 207600
表 2 不同培养周期和溶液浓度下水蓼对汞吸收的显著性
检验结果
Table 2 Result of significance test of Hg intake content in
stems,leaves and roots of Polygonum hydropiper in different
culture periods and solution concentration
检验值 F F值 F0. 01(5,10)
临界值
显著性
不同汞浓度处理(茎叶) 8. 87 5. 46 **
不同培养周期(茎叶) 3. 72 7. 56
不同汞浓度处理(根) 30. 22 5. 46 ***
不同培养周期(根) 4. 23 7. 56
均达到显著水平,其相关系数分别为 r根,液 = 0. 993,
r茎叶,液 = 0. 976 均大于临界值 r0. 05,6 = 0. 811。
在培养时间 4 ~ 8 d,水蓼茎和叶汞含量相差不
大,当培养时间达到 15 d 时,水蓼茎和叶汞含量显
著升高;在培养时间 4 d 时,水蓼根汞含量较低,当
培养时间增加至 8 d时,水蓼根汞含量显著升高,培
养时间增至 15 d时,水蓼根汞含量与 8 d 相比变化
不大,表明培养时间增加至一定范围,水蓼根对汞的
持续富集能力将减弱。
由表 2 可知,培养液中的不同汞浓度处理实验
对水蓼的茎叶和根的汞吸收均有显著性影响,特别
对水蓼根部汞的吸收影响很大,这是因为汞与植物
根部蛋白质相结合的结果(李恬等,2008) ;而培养
周期的影响则比较小。这与相关性分析结果基本
一致。
2. 3 水蓼对培养液中汞的转运及去除
2. 3. 1 转运系数 由表 3 可知,一方面,随着汞处
理浓度的升高,水蓼中汞的转运系数呈明显降低趋
1212钱建平等:水蓼对汞积累与分布的水培实验
表 3 不同浓度下水蓼的转运系数和根富集系数(%)
Table 3 Translation coefficient and root’s enrichment coefficient of Polygonum hydropiper in different Hg concentrations
处理浓度
(μg·L -1)
转运系数
4 d 8 d 15 d 平均 标准差
根富集系数
4 d 8 d 15 d 平均 标准差
0. 5 21. 90 14. 60 17. 90 18. 10 3. 66 274. 17 501. 58 426. 01 400. 59 115. 82
1 11. 70 9. 51 7. 63 9. 62 2. 04 274. 31 413. 28 534. 44 407. 34 130. 17
10 1. 62 0. 99 0. 68 1. 10 0. 48 219. 36 427. 91 612. 50 419. 92 196. 69
20 0. 65 0. 40 0. 56 0. 54 0. 13 297. 28 607. 30 689. 91 531. 50 207. 00
50 0. 66 0. 48 0. 75 0. 61 0. 14 229. 51 371. 28 415. 13 338. 64 97. 02
势。平均转运系数由 18. 1%降至 0. 61%,这可能表
明,在高浓度条件下,汞在水蓼体内的迁移受到限
制,根对汞向茎、叶的迁移具有阻滞作用。另一方
面,随着培养时间的增长,转运系数减小或变化
不大。
水蓼根对汞离子富集能力较强。随着汞处理浓
度的升高(0. 5 ~ 20 μg·L -1) ,根富集系数逐步增
大。当汞处理浓度升高至 20 μg·L -1时,平均富集
系数最大,可达 531. 50%;当汞处理浓度升高至 50
μg·L -1时,平均富集系数降低为 338. 64%。说明
当汞对水蓼胁迫超过一定浓度时,根对汞富集能力
降低。随培养周期的增长,根富集系数逐步增大。
2. 3. 2 去除率 由表 4 可见,水蓼对培养液中的汞
具有很高的去除率,均达到 80% 以上,最高可达
94. 5%。随着汞处理浓度的增加,去除率有增大
趋势。
2. 4 水蓼的亚细胞结构中汞的分布
从表 5、图 1 和图 2 可见,水蓼茎叶和根细胞中
的汞分布规律基本一致,主要分布在细胞壁中,其汞
平均含量占总汞 60%左右(茎叶:59% ~ 62%;根:
58% ~68%) ;其次是细胞器,其汞平均含量约占总
汞 30%(茎叶:28% ~34%;根 24% ~35%) ;而细胞
液中汞含量最低,其汞平均含量占总汞 < 10%(茎
叶:4% ~10%;根:6% ~9%)。
作水蓼细胞各组分(Fb,Fq,Fy)的汞含量与处
理浓度的相关性分析可得,无论是茎叶或根部中的
表 4 实验前后培养液汞浓度的变化
Table 4 Variation of Hg contents in culture medium
实验前
(μg·L -1)
实验后
(μg·L -1)
去除率
(%)
0 0. 056 -
0. 5 0. 094 81. 2
1. 0 0. 133 86. 7
10 0. 661 93. 4
20 1. 10 94. 5
50 3. 08 93. 8
细胞各组分汞含量与培养液中浓度均呈显著正相关
关系(表 6)。
随着汞处理浓度的增加,无论是茎叶或根部,细
胞中各组分汞含量均增大。但细胞液(液泡)中的
汞含量比例增大(茎叶:4%→10%;根:7%→9%) ,
而细胞器的汞含量比例逐渐减少(茎叶:34% →
28%;根:33%→26%) ,细胞壁的汞含量比例变化
不明显。这是因为当细胞壁结合的重金属离子达到
饱和点时,进入细胞内的大部分金属离子被转运到
液泡中储藏起来,使金属离子在细胞内区室化,因此
表 5 汞在水蓼亚细胞结构中的分布
Table 5 Distribution of Hg in subcellular fractions of Po-
lygonum hydropiper
水蓼器官 处理浓度
(μg·L -1)
细胞壁汞
含量(鲜重,
ng·g - 1)
细胞器汞
含量(鲜重,
ng·g - 1)
细胞液汞
含量(鲜重,
ng·g - 1)
茎和叶 0 103. 8 57. 70 6. 275
0. 5 128. 7 69. 93 12. 88
1 146. 1 78. 25 15. 23
10 163. 1 89. 88 24. 55
20 180. 1 106. 8 28. 48
50 269. 0 117. 8 40. 63
根 0 244. 3 133. 2 30. 13
0. 5 393. 3 235. 7 38. 98
1 531. 5 319. 8 67. 08
10 2562 1244 309. 9
20 6057 2428 704. 8
50 9392 3772 1263
表 6 水蓼茎叶与根细胞各组分与处理浓度的相关性分析
Table 6 Correlation analysis of Hg content among treat-
ment concentration and subcellular fractions of Polygonum
hydropiper
水蓼器官 亚细胞组分 相关系数
茎和叶 细胞壁 0. 973*
细胞器 0. 892*
细胞液 0. 925*
根 细胞壁 0. 975*
细胞器 0. 975*
细胞液 0. 990*
* P < 0. 05。
2212 生态学杂志 第 31 卷 第 8 期
图 1 不同处理浓度下汞在水蓼茎叶亚细胞结构中的分布
Fig. 1 Distribution of Hg in subcellular fractions of stems and leaves of Polygonum hydropiper
图 2 不同处理浓度下汞在水蓼根亚细胞结构中的分布
Fig. 2 Distribution of Hg in subcellular fractions of roots of Polygonum hydropiper
细胞液在植物抗金属胁迫中承担着隔离金属作用
(周建民等,2005)。
有研究表明,茎叶和根中的细胞壁和细胞器中
汞含量与介质中的汞含量显著相关。细胞器和细胞
壁是水蓼对汞进行富集和解毒的关键部位,在 Hg2 +
的胁迫下,细胞壁通过蛋白质之间的交联和木质化
阻挡汞的侵害(母波等,2007)。越来越多的研究证
明,细胞壁中的果胶质成分、蛋白质分子等含有大量
的亲金属离子的配位基因,为结合重离子提供了大
量的离子交换点(黄玉山等,1992;陈同斌等,
2005)。Kramer 等(2000)证实,Cu、Zn、Cd进入蹄盖
蕨属植物(Athyrium yokoscense)后,大部分以离子形
态存在或结合储存在根细胞壁上。因此,水蓼细胞
壁结合了大量的汞,是抵抗汞毒害的第一道屏障。
至于细胞液中的汞含量比例增加,可能与细胞液泡
区隔化来降低重金属对植物的毒害有关(李会合和
杨肖娥,2009)。
3 结 论
从水培实验结果来看,水蓼对汞表现出很强的
3212钱建平等:水蓼对汞积累与分布的水培实验
吸收和积累能力。水蓼体内的汞含量随汞处理浓度
的增加而显著增加。水蓼体内的汞含量与汞处理浓
度显著相关。水蓼根部具有最强的汞富集能力。
在同一处理浓度下,随着培养时间的增加,水蓼
中汞含量增加,表明水蓼对汞有持续富集的能力,且
随着汞处理浓度的增加,表现更为明显。
水蓼亚细胞结构中的汞分布为:细胞壁 >细胞
器 >细胞液。细胞壁对进入植物体内的汞有很强的
束缚作用。
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作者简介 钱建平,男,1953 年生,硕士,教授,博士生导师。
主要研究方向为环境地球化学。E-mail:jpqian@ 163. com
责任编辑 魏中青
4212 生态学杂志 第 31 卷 第 8 期