全 文 ：安徽农学通报 , ,
头花寥愈伤组织诱导及分化
郭 彪 李雪松 李 政 杨静慧 李 凌`
西南大学园艺园林学院 , 重庆
摘 要 研究 了 种外植体 叶片 、 茎段 、 消毒方法 、 培养基种类 、 活性炭 、植物生长调节剂等因素对头花琴愈伤组织诱
导及分化的影响 。 结果表明 , 最佳消毒方法为 以 巧 消毒叶片 和 消毒茎段 不 同培养基
诱导愈伤组织发生率依次为 一 几 住 几有利于愈伤组织形成 一 留
住 几有利 于愈伤组织增殖 一 留 留 有利分化 , 分化率为 , 产生不定芽平均数为
个。 培养基中附加 留 活性炭 , 褐化率仅为 , 愈伤组织生长和分化效果较好 。
关键词 头花琴 叶片 茎段 愈伤组织
中图分类号 立献标识码 立童编号 一 一 一
勺瞥 脚 即了细 脚
。 , , 盯 ,
。 饰。 。 , 一 , , ,
脚 尸 月 川 脚
, 。
一 司 五 叩
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一 几 几 , 一 几 几 一 留 留
即
留 , ,
尸 月 川
花寥 昭刁门 二 月 二 一 别名 材料 供试材料头花寥采自重庆北暗墙云山 , 后栽植
四季红 、铜矿草 、 石辣寥 、 石莽草等 , 属寥科寥属多年生草本 于西南大学园艺园林学院园林植物与栽培育种实验室 , 进行
植物 , 我国主要分布于西藏 、 广东 、 四川 、 湖北 、广西 、 云南 、 常规管理 。
贵州等省区 , 印度 、 越南也有生长 , 其中在我国有 种 、 变 试验方法
种 , 资源十分丰富。 头花寥是一种理想的彩叶花卉植物 , 种外植体的最佳消毒方法筛选 摘取头花寥刚展
具有较高的观赏价值 , 可作为垂直绿化 、 边坡护理 、地被绿 开叶片和不带芽茎 , 在流水下冲洗 , 用蒸馏水反复冲洗
化和观花等的良好材料推广应用口, 也是一种重金属耐受植 次。 在超净工作台上 , 先用 酒精进行表面消毒处理
物 , 在废弃地的植物重建 、 修复中具有广泛的应用价值 同 , 分组后分别用 巧 溶液浸泡 、 、 、 、 , 以
时头花寥全草均可人药 , 有清热解毒 、 祛风止痛 、 去腐生肌 及 浸泡 、 、 、 。 外植体消毒后 , 用无菌水
的作用 。 冲洗 次 , 无菌滤纸吸干表面水分 , 用无菌刀将叶片切成
头花寥需求量大且野生资源有限 , 快速繁育体系可以有 耐的小块 , 茎段切成 左右的小段 , 在无菌的条件下
效解决原料供应不足的问题 。 头花寥组织培养方面 , 尤其是 接种在无激素的 培养基中。 每瓶接种 个外植体 , 接种
愈伤组织培育研究较少 。 毛堂芬 和龙祥友 分别以头花寥 瓶 , 每组设 次重复 。 每 记录外植体污染数和存活数
带节茎段 、 茎尖为外植体进行组培快速繁殖 。 笔者以头花寥 一次 , 以 例为周期统计其污染率和死亡率 。
的叶片 、茎段为外植体 , 通过组织培养手段建立无菌培养体 愈伤组织诱导
系 , 研究了不同类型外植体 、 消毒方法 、 培养基类型 、 活性炭 、 种培养基对愈伤组织诱导的影响 取已建立的无菌
植物生长调节剂等因素对其愈伤组织诱导的影响 , 为头花寥 体系苗 , 将切取好的叶片 、茎段分别接种于含有 一 留 ,
愈伤组织的培育提供理论依据 。 住 几的 、 、 的 种培养基上 。
材料与方法 悦 一 与 组合 对外植体愈伤 组 织诱 导的影
作者简介 郭彪 勺 ,男 ,重庆北暗人 , 硕士研究生 , 研究方向 园林植物生物技术与遗传育种 。 通讯作者 收稿日期 一 一
DOI :10.16377/j.cnki .issn1007-7731.2013.17.041
2 2 安徽农学通报 , ,
响 选择以上最佳培养基 , 分别 以 一 住 、 、 几 , 体接种数
、 住 几为外源激素采取两 因素完全随机组合设 外植体死亡率 外植体死亡数 外植体接种数
计 。 每瓶接种 个外植体 , 接种 瓶 , 每组设 次重复 。 每
观察记录一次 , 以 例为周期 , 统计不同外植体愈伤组织 愈伤组织诱导率 形成愈伤组织的外植体数接种
及生长状况 。 外植体总数
愈伤组织增殖 无菌条件下 ,选取头花寥生长旺盛的胚 分化率 形成不定芽的愈伤组织块数接种愈伤组
性愈伤组织 , 切取 自径大小约为 的块接种于 培养基 , 织总数
培养基附加外源激素 一 、 刀 、 几 , 住 留 。 平均芽数 产生芽数庐生芽的愈伤组织数
期间继代 次 后 , 称取愈伤组织的重量 , 在 ℃下进行烘 结果与分析
干 , 测得干物质含量 。 种外植体的最佳消毒方法筛选 由表 可知 , 对于
悦井 愈伤组织分化 住巧 处理的叶片 , 消毒 一 时 , 污染率急剧下降 ,
井 活性炭对愈伤组织诱导的影响 分别添加 。、 、 消毒 以后没有污染 , 消毒效果较好 消毒 一 时 ,
几活性炭 , 在 一 留 几的培养 叶片死亡率增加 明显 , 时叶片全部死亡 。 巧
基上诱导 , 观察并记录活性炭对愈伤组织诱导的影响 。 处理茎段 , 消毒 以后没有污染 消毒 一 时 , 死亡
不 同浓度 一 对不 定芽诱导的影响 无菌条件 率增加明显 , 时为 。 以 处理 种外植
下 , 将增殖的愈伤组织取出切成直径大小约为住 的块 , 体 , 经过实验分析也出现以上相似趋势 。 说明 , 采用 巧
分别转接到含有 一 、 刀 、 刀 、 、 、 几 , 几 和 处理头花寥叶片和茎段 种外植体时 , 随
培养基上 。 处理时间的增加 , 其污染数目逐渐减少 , 污染率在降低 其存
悦 培养条件 除基本培养基和激素浓度筛选试验外 , 活数目逐渐减少 , 死亡率在增加 。 综合分析 , 在头花寥愈伤
培养基均采用 固体培养基 。 培养基中含蔗糖 留 , 琼 组织培养过程中从外植体材料的低污染率和高成活率来考
脂 几 , 值为 , 于 ℃高温下灭菌 。 在光照强 虑 , 最佳消毒方法为 以 巧 处理叶片消毒 , 污
度 下光照 尼 , 培养温度 ℃ 。 染率为 , 死亡率为 以 处理茎段消毒
石 统计指标 外植体污染率 外植体污染数沙卜植 , 污染率和死亡率均为 。
表 不同处理对头花寥不同外植体的消毒效果
消毒 处理时间 叶片 茎段
药剂 处理数 个 污染数 个 污染率 死亡率 处理数 个 污染数 个 污染率 死亡率
刀
刀
刀
刀
石 刀 刀
刀 刀
巧八、
刀
刀
八、
刀
刀 石
石 刀
石
表 种培养基对愈伤组织诱导的影响
培养基 外植体 愈伤组织诱导率 生长状况
八、气
愈伤组织诱导
种培养基对愈伤组织诱导的影响 由表 可知 , 同
一培养基条件下 , 叶片外植体愈伤组织诱导率普遍低于茎段
愈伤组织诱导率 , 表明采用茎段作为外植体诱导愈伤效果较
好 。 观察发现 , 不同培养基中的愈伤组织多呈红褐色 , 少带
绿色 , 其中 培养基中愈伤组织生长状况较好 , 且有少量芽
点出现 。 在同等激素浓度下 , 头花寥 种外植体愈伤组织诱
导率最高的为 培养基 , 叶片和茎段诱导率分别为 和
培养基次之 最低为 培养基 。
类型
叶片
茎段
叶片
茎段
叶片
茎段
马
吕
愈伤呈红褐色 , 带少量绿色 , 质量
较好 , 结构较致密
愈伤呈红褐色 , 带部分绿色 , 质量
好 , 结构致密 , 有绿色生长点
愈伤呈红褐色 , 结构疏松
愈伤呈红褐色 , 带少量绿色 , 结构
致密
愈伤呈红褐色 , 带绿色 , 结构疏松
愈伤呈红褐色 , 带绿色 , 结构致密
19 卷 期 郭 彪等 头花寥愈伤组织诱导及分化
一 与 组合对外植体愈伤 组织诱 导的影 响
由表 可知 , 在以上最佳培养基 中 , 添加不同浓度的
一 和 酉己比 , 结果表明 在 浓度相同条件下 , 愈
伤组织诱导率随 一 浓度增加逐渐上升 , 但当激素浓度超
过最适数值时 , 愈伤组织诱导率有所下降。 说明低浓度的
一 处理有利于愈伤组织诱导 , 而高浓度又会抑制愈伤组
织形成 。 浓度随 一 浓度的变化 , 也出现以上类似规
律 。 愈伤组织诱导中 , 适宜浓度 一 和 共同作用将有
利于植物细胞脱分化 , 愈伤组织诱导率较高 。 编号 培养基
中 , 叶片 、 茎段 种外植体的愈伤组织诱导率最高 , 分别为
和 , 最佳配 比浓度为 一 几
住 留 。 编号 、 培养基愈伤组织诱导率最差。
表 一 与 组合对外植体愈伤组织诱导的影响
编号 激素水平 到一 外植体 接种数 愈伤组织 出愈率块 块
,胜气八、胜,八、
万
类型
叶片
茎段
叶片
茎段
叶片
茎段
叶片
茎段
叶片
茎段
叶片
茎段
愈伤组织的诱导观察 观察发现 , 不同编号培养基对
头花寥外植体愈伤组织的诱导存在较大差异 。 叶片和茎段
在接种 左右 , 基部稍有膨大 , 伤口处开始变成红褐色 , 产
生极少量愈伤组织 。 接种 后 , 外植体颜色加深 , 呈现出
红褐色 , 切 口变皱 , 愈伤组织显著膨大。 愈伤组织的形成过
程受植物外植体种类 、 培养基种类及成分和培养条件等诸多
因素的影响 , 合适的条件有利于愈伤组织诱导体系的建立 。
愈伤组织增殖 由表 可知 , 将愈伤组织接种到不同浓
度 一 的增殖培养基中 , 只添加 时 , 愈伤组织分化出
根 , 不表现出生长 同时添加 一 和 , 愈伤组织表现出
分化和生长状态 。 当 浓度为住 几不变时 , 愈伤组织
数量随 一 浓度增加呈现增加趋势 , 由 增加到 ,
愈伤组织生长强于分化 , 生长趋于正常。 说明仅有 时 ,
有利愈伤组织分化 , 分化出气生根 一 与 提高到合适
浓度时 , 有利于愈伤组织增殖 。 最佳增殖浓度配比为 一
留 住 几 ,增加率为 , 愈伤组织生长正常。
表 不同浓度 一 对愈伤组织增殖的影响
激素水平 到 生物量增加率
一 生长状况
愈伤组织不生长 ,生根
愈伤组织生长较缓慢 ,少量生根
愈伤组织生长正常
愈伤组织分化
井 活性炭对愈伤组织分化的影响 由表 可知 , 培养基
中添加活性炭对头花寥愈伤组织褐化起抑制作用 , 愈伤组织
褐变率随活性炭浓度的增加呈现先降低后升高趋势 。 未添
加活性炭时 , 褐化率为 , 且褐化出现在切 口周围 , 程
度严重 加 留 活性炭时 , 褐化率为 , 且褐化现象出
现较少 , 并且程度较轻 加 几 活性炭时 , 褐化率为
, 褐化较严重 , 部分出现枯萎 。 说明活性炭对头花寥
愈伤组织的褐变有一定的抑制作用 , 须选择适宜的浓度 。 结
果表明 , 加 几活性炭效果最佳 , 褐化率仅为 , 愈
伤组织生长和分化效果较好 。
表 活性炭对愈伤组织分化的影响
活性炭 到 褐化率 生长状况
褐化程度严重
褐化程度较轻
褐化较严重 ,部分出现枯萎
不 同浓度 一 对不定芽诱导的影响 由表 可知 ,
培养基中 一 和 配合添加将有利 于愈伤组织不定芽
分化 。 观察发现 , 一 浓度过低 , 愈伤组织会出现不定根
浓度过高时愈伤组织会褐化 。 浓度在 留 时 , 随着
一 浓度增加 , 不定芽分化指数呈现升高趋势 。 当 一 浓
度为 几时 , 不定芽分化率最高 , 为 一 几 、
几 时 , 不定芽分化率次之 , 分别为 和
一 几 时最低 , 分化率为 。 一 几 和
几时 , 愈伤组织分化成不定芽的平均数最高 , 分别为
个和 个 其次为 一 几 , 愈伤组织分化成不定
芽的平均数为 石个 。 综合考虑 , 头花寥愈伤组织不定芽
诱导的最佳配合 比为 一 几 留 , 分化率为
, 不定芽平均数为 个 。
表 不同浓度 一 对不定芽诱导的影响
激素水平 到 接种数 分化数 分化率 平均芽数
一 块 块 个
名
石
结论
头花寥外植体来源广泛 , 能作为材料长期用于诱导建立
愈伤组织无性系 。 最佳消毒方法为 巧 处理叶片消
毒 处理茎段消毒 , 且以茎段为外植体
诱导愈伤组织较叶片效果更好 。
材料自身差异导致培养条件存在略微不同。 实验发现
培养基为最佳培养基 , 这与蔡能呀及道相一致 。 在 中
添加 一 留 、 几有利于形成愈 下转 页…
19 卷 期 丁 胜等 安徽青峰薄壳山核桃基地建设探讨
华等 。 本项 目选用 “波尼 ” 、 “ 韦斯顿 ” 、 “ 马汉 ” 、 “ 茅山 号 ” 等
个优良薄壳山核桃品种 。 采用 生嫁接苗定植 , 苗高
, 地径 左右 。
整地 、 栽植 整地程序一般是清理圃地 、 浅根灭茬 、
耕翻土壤 、 耙地等 , 通过整地可以增加土壤孔隙度 , 改善土壤
中水 、 肥 、气 、 热的关系 , 同时可以消灭病菌和虫卵 , 减少病虫
害的发生 。 整地结合施绿肥 、 有机肥等提高土壤肥力 。 栽植
密度 株八耐 , 栽植时可按品种或无性系成行或成块排
列 , 同一种材料为一个小区 。
种植 区划 种植株行距 , 行状配置 , 同一品
种相对集中 , 便于分品种采穗 。
抚育管理 抚育管理工作包括深翻 、施肥 、 中耕 、 除
草 、 修枝 、 排水 、 灌溉及病虫害防治等 。 每年抚育 次 一
月 、 一 月 。
档案记载 档案记载内容主要包括 育苗地利用和
耕作情况 播种育苗和嫁接育苗及其苗木生长发育情况 , 以
及各阶段采取的技术措施等 各项作业的用工量和基肥 、 追
肥和防虫防病药物等的使用情况 薄壳山核桃品种数量及其
在圃地排列配置图表等 。
育苗基地
整地 、 作床 、 作垄 育苗前应细致整地 , 包括翻耕 、
耙地 、平整 、镇压 。 宜在秋末至冬初深翻 , 深度 以上 翌
年早春浅耕细耙 , 深度 以上 。 坡地育苗整地应在主要
杂草种籽成熟前翻耕 育苗地前茬是农作物的 , 整地前应浅
耕灭茬 。 作床 床面宽 一 , 步道宽 一 , 长度
随地形而定 , 床面高出步道 一 , 沙壤土低些 , 粘壤土
高些 , 床的两侧应拍实 , 与地面的夹角应小于 , 以保持土
壤的稳定性 。 作垄 垄间距 , 沟底宽 , 垄高
以上 , 垄面宽 , 每垄播 行 。
抚育管理 及时做好中耕除草 、 松土施肥 、修枝 、 病
虫害防治等工作 。 幼苗初期中耕深度 一 , 后期可逐步
加深 。 中耕次数可视具体情况进行 一 次 。 基地施肥可结
合除草 、松土同时进行 。 干旱天气要及时浇水 , 夏季多雨做
好排涝 。 薄壳山核桃苗木病虫害较少 , 主要是在高温高湿气
候条件下易发生根腐病 , 可用多菌灵可湿性粉剂 倍液防
治 。 苗木虫害主要是蟒槽 、 地老虎 、瘤蚜等 , 可用竹签在床面
插洞后灌人 敌敌畏 倍液防治 。
嫁接育苗技术 砧木以根径粗 一 为宜 。 接穗
选用优 良品种或无性系 。 采用芽接的应采集当年生长发育
较充实的强壮枝作接穗 , 芽接用 “ 字形芽接或块状芽接
一 月份 。 枝接宜在冬季树体休眠后或在早春萌芽前采
集 , 穗条采取低温冷藏或沙藏保鲜 , 枝接用切接 一 月份
或切腹接 一 月份 。 目前枝接苗成活率较高于芽接苗 ,
枝接是指先将砧木离地面 处剪断 , 削平剪 口后沿砧木
一侧 一 处竖切一刀 , 切 口长 一 , 随即将接穗插人
砧木切 口 中 , 使接穗长削面露出少许 露 白 , 并使两者形成
层 紧密对合 , 用塑料薄膜带自下而上绑紧 , 仅露 出接穗
主芽 。
井 扦插育苗技术 根插在薄壳山核桃种苗繁殖中已
成功运用 。 宜选择树龄较小的植株 , 粗度为 左右的根
段 。 剪成 的短段 , 在整好的圃地上像播种一样平铺于
沟内 , 覆土 一 。 根插可结合苗木移植于冬春季进行 。
间伐 薄壳山核桃对光照要求高 , 生长速度快 , 当
苗木长到一定密度时需要及时间伐 , 控制密度 , 保证其正常
生长 。
结语
安徽青峰薄壳山核桃基地的建成将为安徽省薄壳山核
桃产业发展提供示范和典型 , 对薄壳山核桃产业发展具有辐
射带动作用 , 同时为企业和当地老百姓带来一定的经济收
人 。 下一步 , 企业应按现代产业发展的规律和要求 , 实行品
种化栽培 、 规模化生产 、 标准化管理 、 集约化经营 , 做大做强
企业品牌 , 实现山核桃产业可持续发展 。
参考文献
肖斌 安徽山核桃生产现状与发展对策 经济林研究 , ,
一
张盼盼 , 李云 云南省薄壳山核桃良种基地建设工艺设计探讨
绿色科技 , 一
谢泅斌加强核桃基地建设 促进林业产业发展 湖北生态工程
职业技术学院学报 , 一 责编 徐世红
上接 页 伤组 织 , 同时发现 一 几
住 留 为最佳增殖配合比 。
活性炭对头花寥愈伤组织的褐变有一定的抑制作用 〔
附加 几活性炭效果最佳 , 褐化率仅为 , 愈伤组织
生长和分化效果较好 。 以 一 和 为激素配 比 , 发现头
花寥愈伤组织不定芽诱导的最佳配合 比为 一 几
留 , 分化率为 ,不定芽平均数为 个 。
参考文献
伟美玉 ,赵洪一种有潜力的野生花卉 中国花卉盆景 ,
杨剑虹 , 王成林 ,代亨林 土壤农化分析与环境监测【 北京 中国
大地出版社 , ·
任光友 , 常风岗 , 卢秦琳 ,等 石莽草的药理研究 中国中药杂志 ,
一 ,
李孟林 , 梁斌 , 姚强 , 等 苗药一头花寥研究综述 中国医院用药
评价与分析 , , 一
毛堂芬 , 朱英 药用植物头花寥的组织培养快速繁殖 贵州农业
科学 , , 一
龙祥友 , 孙长生 头花寥的组织培养与快速繁殖 植物生理学通
讯 , ,
蔡能 , 易自力 , 黄丽芳 安祖花离体培养快速繁殖技术的优化 中
南林学院学报 , , 一
刘用生 , 李有勇 植物组织培养中活性炭的使用 植物生理学通
讯 , , 一 责编 徐世红