全 文 ： 制剂与炮制
收稿日期:2010-01-28;　修订日期:2010-05-10
基金项目:国家科技支撑计划项目 (No.2006BAI06A17-10);
贵州省科技厅科技计划项目(No.[ 2009] 4001);
贵州省贵阳市科技技术计划项目([ 2009] No.9-3-04)
作者简介:何　迅(1969-),男(汉族),贵州金沙人 ,现任贵阳医学院药学
院副教授 ,学士学位 ,主要从事中药新药研究及质量控制工作.
＊通讯作者简介:兰燕宇(1958-), 女(汉族),贵州贵阳人 , 现任贵阳医学
院药学院教授 ,学士学位 ,主要从事中药新药研究开发工作.
壳聚糖用于头花蓼水提液澄清工艺的研究
何　迅 , 庞秀清 , 李勇军 , 王爱民 , 兰燕宇＊ , 王永林
(贵阳医学院药学院 ,贵州 贵阳　550004)
摘要:目的 探讨壳聚糖澄清剂用于头花蓼水提液的絮凝澄清工艺。方法 以总黄酮和槲皮苷的含量为考察指标 , 采用正
交实验优选壳聚糖的最佳澄清条件 ,并与传统的水煮醇沉工艺相比较 , 评价壳聚糖澄清工艺的可行性。 结果 优选出的
最佳澄清工艺条件是:提取液浓缩至 1∶6(生药 g∶药液 ml),提取液 pH为 5, 每升药液加入 1%的壳聚糖冰醋酸溶液
100ml。结论 壳聚糖可作为头花蓼水提液的除杂澄清工艺 , 该工艺优于传统的水煮醇沉工艺。
关键词:壳聚糖;　头花蓼;　絮凝澄清工艺
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.12.110
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)12-3260-02
ResearchontheClarificationProcessofChitweanfortheAqueousExtractofPolygonum
HEXun, PANGXiu-qing, LIYong-jun, WANGAi-min, LANYan-yu＊ , WANGYong-lin
(SchoolofPharmacologyGuiyangMedicalColege, Guiyang550004 , China)
Abstract:ObjectiveTodiscusstheflocculationprocessofChitosanforclarifyingtheaqueousextractofPolygonum.Methods-
Withthecontentofflavonoidsandquercitrinasevaluationindex, orthogonaltestwasadoptedtoselectthebestclarifyconditionsof
Chitosanandwascomparedwiththetraditionalprocessofboiledandalcoholprecipitation.ThefeasibilityofChitosanclarification
processwasevaluated.ResultsThebestconditionswere:theextractwasconcentratedto1∶6(Pharmacognosy:liquid), pH=5,
mixedin1% Chitosanaceticacidsolution100 ml/LLiquid.ConclusionChitosanclarificationprocessissuperiortothetradi-
tionalprocessofboiledandalcoholprecipitation.
Keywords:Chitosan;　Polygonum;　Flocculationprocess
　　头花蓼为蓼科植物头花蓼 PolygonumcapitatumBuch.-
Ham.exD.Don的干燥全草或地上部分 , 具有清热解毒 、利尿通淋
等功效。临床广泛用于泌尿系统疾病的治疗 [ 1] , 是贵州省重点
发展的 “六大苗药”之一 , 以其为原料的单方或复方制剂已上市
多年 , 疗效显著。研究发现头花蓼的主要有效成分为黄酮类化合
物等水溶性成分 [ 2, 3] 。现有产品中 , 头花蓼大多采用传统的水煮
醇沉工艺 ,乙醇用量大 , 能耗也较大 , 有效成分损失严重 , 特别是
一些对免疫功能有重要调节作用的成分往往被除去 ,可能致使疗
效降低 [ 4] 。为保证疗效 、简化工艺 、节省成本 , 我们探索用吸附
澄清剂代替乙醇沉淀的新工艺 ,在保证有效物质不受损失的前提
下 , 选择性地除去水提液中的树脂 、蛋白质 、鞣质等大分子物质。
力求达到既充分保留有效物质成分 、同时又除去大量杂质的目
的 , 为头花蓼的二次开发提供试验依据。
1　仪器与试药
岛津 LC-10Avp高效液相色谱系统 ,包括二元梯度泵 、紫外
-可见光检测器 、7725i手动进样阀 、WML色谱工作站(广西威玛
龙色谱科技公司);岛津 UV-2401PC紫外 -可见光分光光度计;
槲皮苷对照品 (中国药品生物制品检定所 、批号:111538 -
200403)、芦丁对照品(中国药品生物制品检定所 、批号:100080 -
200306);头花蓼药材由贵州本草堂药业有限公司提供;壳聚糖
(浙江玉环县海洋生物化学有限公司);ZTC1+1天然澄清剂(天
津振天成科技有限公司生产);101果汁澄清剂(上海沃逊生物工
程有限公司生产);明胶(上海鲁博明胶有限公司生产)。甲醇为
色谱纯(美国 TEDIA公司)、水为纯净水。
2　方法与结果
2.1　槲皮苷含量测定 照高效液相色谱法 《中国药典》 2005年版
Ⅰ部(附录Ⅵ D)测定。
2.1.1　色谱条件与系统适用性试验 以 ExlipseXDB-C18(5
μm, 150mm×4.6 mm)色谱柱;以甲醇 -0.1%磷酸(35∶ 65)为
流动相 , 流速 1 ml/min;检测波长为 360 nm;柱温为 40℃,理论板
数按槲皮苷计算应不低于 5 000。
2.1.2　对照品溶液的制备 精密称取槲皮苷对照品适量 ,加甲醇
制成每毫升含 0.05mg的溶液 , 摇匀 ,即得。
2.1.3　供试品溶液的制备 精密吸取试验样品适量 , 用滤膜
(0.45μm)滤过 , 即得。
2.1.4　测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 10
μl,注入液相色谱仪 ,测定 ,即得。见图 1。
2.2　总黄酮含量测定
2.2.1　对照品溶液的制备 精密称取 120℃减压干燥至恒重的
芦丁对照品 12.96 mg, 置 50 ml量瓶中 , 加甲醇适量 , 使溶解 , 加
甲醇至刻度 ,摇匀(每毫升中含无水芦丁 0.259 2 mg)。
2.2.2　测定波长的选择
对照品溶液:取芦丁对照品溶液 3 ml, 置 25 ml容量瓶中 , 再
补加甲醇 3ml, 摇匀 ,加 5%亚硝酸钠溶液 1ml, 摇匀 ,放置 6min,
加 10%硝酸铝溶液 1 ml, 摇匀 , 放置 6 min, 加氢氧化钠试液 10
ml, 再加甲醇至刻度 , 摇匀 , 放置 15 min。以试剂作为空白溶液。
于 360 ～ 700 nm波长范围扫描 , 结果芦丁显色后在 504 nm处有
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最大吸收(图 2-a)。
供试品溶液:精密量取头花蓼提取液 20 ml, 置分液漏斗中 ,
用醋酸乙酯萃取 3次 , 每次 10 ml,充分振摇 , 合并醋酸乙酯液 ,水
浴蒸干 , 残渣甲醇溶解 , 转移至 10 ml量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇
匀。精密吸取样品两份 , 按对照品项下操作 , 以最后不加氢氧化
钠试液为空白对照 , 于 300 ～ 700 nm波长范围内扫描 , 结果提取
液显色后在 504 nm处有最大吸收峰(图 2-b)。
a-对照品　b-样品;　c-阴性;　 1.槲皮苷
图 1　槲皮苷含测系统适用性试验HPLC图
a-对照品溶液　　　　　　b-供试品溶液
图 2　总黄酮测定吸收光谱图
2.2.3　样品测定 取提取液按供试品项下制备供试液 , 分别于
504nm处测定吸光度值 ,计算含量。
2.3　头花蓼提取液的制备 称取经粉碎成粗粉的头花蓼 500 g,
加水煎煮 3次(14, 10, 10倍),滤过 , 合并滤液 ,浓缩至 1∶6(药材
g∶药液 ml),备用。
2.4　絮凝剂的选择 将 “ 2.3”项下的提取液 , 平均分成 5份 , 1份
取样测定总黄酮 、槲皮苷 、大车前苷的含量。其余 4份分别按比
例加入壳聚糖 、ZTC1+1、101果汁澄清剂 、明胶等 4种常用的吸
附澄清剂 , 搅拌 ,放置过夜 , 抽滤 ,准确量取滤液体积 ,取滤液测定
总黄酮 、槲皮苷含量和总固体物。以三指标的转移率为评价指标
进行评价 , 结果以壳聚糖的澄清效果最好 , 故选择壳聚糖作为头
花蓼水提液的吸附澄清剂。结果见表 1。
表 1　不同吸附澄清剂筛选试验结果
评价指标
实验项目
槲皮苷提
取率(%)
经处理后槲皮
苷转移率(%)
总黄酮提
取率(%)
经处理后总
黄酮转移率(%)
总固体提
取率(%)
水煎药液 60.17 71.24 16.97
101果汁澄清剂 77.36 69.56 12.08
壳聚糖吸附 85.63 91.34 11.09
明胶 64.38 70.12 9.87
ZTC1+1 80.13 76.36 10.92
　　n=3
2.5　壳聚糖吸附除杂的工艺优化
2.5.1　正交实验设计 根据上述试验结果 , 用壳聚糖处理综合效
果较好 , 故采用正交实验对其吸附除杂的各影响因素进行考察。
通过预试验 , 药液的浓缩比例 、壳聚糖加入量 、药液的 pH值是影
响壳聚糖吸附效率的主要因素。故对主要影响因素进行 4因素
3水平 L9(34)正交实验设计。见表 2。
表 2　因素水平
水平 A药液浓缩比例 ml/g生药 B壳聚糖加量 g/L药液 C药液 pH值
1 2 0.5 4
2 4 1 5
3 6 2 6
2.5.2　评价指标选择 以总黄酮 、槲皮苷和总固体物转移率为评
价指标进行评价 ,权重系数分别为 0.4、 0.4、0.2。综合评分值 =
(总黄酮转移率 /最大总黄酮转移率)×40 +(槲皮苷转移率 /最
大槲皮苷转移率)×40+(总固体转移率 /最大总固体转移率)×
20。结果见表 3。
表 3　L
9
(34)正交实验安排及结果
实验
号
A
C/g· ml-1
B
C/g· ml-1
C
pH
D 总黄酮转
移率(%)
槲皮苷转
移率(%)
固体物转
移率(%)
综合
评分
1 1 1 1 1 58.48 51.36 7.21 61.39
2 1 2 2 2 66.22 78.23 9.87 81.48
3 1 3 3 3 69.16 64.25 9.56 75.84
4 2 1 2 3 72.44 79.69 12.78 89.51
5 2 2 3 1 88.91 81.06 12.27 96.76
6 2 3 1 2 78.96 75.25 10.01 86.05
7 3 1 3 2 76.85 70.63 11.89 85.90
8 3 2 1 3 81.58 83.17 9.98 90.85
9 3 3 2 1 82.74 86.34 11.24 94.81
　　原药液 pH=5
2.5.3　试验结果分析 将实验结果用 SPSS软件处理。结果见表
4 ～ 5。
表 4　方差分析
来源 Ⅲ型平方和 自由度 均方 F值 显著性
CorectedModel 942.048(a) 6 157.008 153.667 .006
Intercept 64 615.945 1 64 615.945 63 240.809 .000VAR0000A 629.748 2 314.874 308.173 .003
VAR0000B 176.907 2 88.454 86.571 .011
VAR0000C 135.393 2 67.696 66.256 .015
Eror 2.043 2 1.022Total 65560.037 9
CorectedTotal 944.092 8
表 5　一次性子集
水平 A
1 2
1.00 72.9033
3.00 90.5200
2.00 90.7733
Sig. 1.000 .788
水平 B
1 2 3
1.00 78.933 3
3.00 85.566 7
2.00 89.696 7
Sig. 1.000 1.000 1.000
水平 C
1 2
1.00 79.430 0
3.00 86.166 7
2.00 88.600 0
Sig. 1.000 .098
从表 4方差分析及表 5一致性子集分析结果表明 , A、B、C3
因数均有显著性差异(P<0.01;P<0.05;P<0.05), 在所选因素
范围内 ,各因素作用顺序为 A>B>C, 最佳工艺条件为 A2B2C2。
即药液浓缩至 1∶6(生药 g∶药液 ml), pH=5, 每升药液里面加
入 1%的壳聚糖冰醋酸溶液 100 ml。静置 24 h, 抽滤 , 收集滤液 ,
备用。
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2.6　壳聚糖吸附除杂工艺和醇沉工艺比较研究 根据上述试验
结果 , 将壳聚糖吸附除杂的最佳工艺和原醇沉工艺进行对比试验
研究 , 结果见表 6。
表 6　壳聚糖吸附除杂和醇沉工艺研究结果
评价指标
实验项目
槲皮苷提
取率(%)
经处理后槲皮
苷转移率(%)
总黄酮
提取率(%)
经处理后总黄
酮转移率(%)
总固体提
取率(%)
水煎药液 58.45 67.59 16.97
醇沉处理 67.23 70.74 10.85
壳聚糖吸附处理　 86.97 89.76 11.09
　　n=3
试验结果表明 , 头花蓼水煎煮液采用乙醇沉淀处理 , 各项指
标成分损失较大;采用壳聚糖吸附处理 , 各项指标成分损失较小;
两种处理方法所得总固体物和水煎液比较都降低了 30%以上 ,
达到了除杂纯化的目的。 采用壳聚糖处理 , 避免了使用大量乙
醇 、降低成本 , 并有利于安全生产和节约厂房 、设备投资等优势。
综上 , 头花蓼水提液采用壳聚糖处理较为合理。
3　讨论
鉴于中成药水提醇沉法日益暴露出的缺点 ,探索一种能替代
醇沉法的新工艺显得十分重要和迫切。 吸附澄清剂用于中药提
取液的精制 , 是近十多年来发展起来的一项新技术 , 主要是通过
絮凝剂高分子的电中和 、吸附架桥 、网捕和卷扫作用 ,使体系中粒
度较大的颗粒及具有斯托克沉淀趋势的悬浮颗粒絮凝沉淀 [ 5] ,
从而除去大量无效的大分子物质。不同吸附澄清剂具有不同的
去除杂质的能力 ,选择好吸附澄清剂可以专属性地除去无效杂质
成分 、保留所需有效物质。
本试验选用常用的四种有机吸附澄清剂 ,预试验中对各种澄
清剂的配制 、用量以及 pH及温度等因素进行了详细的考察。 本
试验优选出的壳聚糖无毒无味 , 生物相容性好 [ 6] , 且用量极少 ,
是一种比较理想的天然阳离子吸附澄清剂。
选择头花蓼中的总黄酮以及含量较高的槲皮苷作为考察指
标 , 能较为客观地评价其水提液纯化工艺 , 试验中我们分别对两
指标的含测进行了方法学考察 ,结果方法稳定 , 重现性好 ,平均回
收率分别为 98.9%(RSD=3.2%)、99.7%(RSD=2.4%)。
参考文献:
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年版)[ S].贵阳:贵州科技出版社 , 2003:147.
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2005, 7(4):26.
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国药学杂志 , 2000, 35(5):300.
[ 4 ] 　周进东 ,罗兴洪 ,吴　静 ,等.吸附澄清剂在纯化中药制剂中的应用
[ J] .时珍国医国药 , 2001, 12(8):738.
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河北中医药学报 , 2003, 18(2):27.
[ 6 ] 　王龙虎 ,吴国良 ,程冀宇.壳聚糖及其衍生物在中药制药工业中的
应用 [ J] .中国中药杂志 , 2004, 29(4):289.
收稿日期:2009-11-25;　修订日期:2010-03-23
基金项目:国家 “十一五 ”科技支撑计划项目(No.2006BAI55B02)
作者简介:刘圣金(1978-),男(汉族),安徽金寨人 ,现任南京中医药大学讲师 ,在读博士研究生 ,主要从事中药鉴定及中药质量评价工作.
＊通讯作者简介:吴德康(1951-),男(汉族),江苏宜兴人 ,现任南京中医药大学药学院教授 ,主要从事中药鉴定及中药质量评价工作.
矿物药青礞石的炮制考证
刘圣金 1 ,吴德康 1＊ ,孔庆友2 ,林瑞超 3
(1.南京中医药大学 药学院 ,江苏 南京　210046;　2.南京大学 ,江苏 南京　210093;　
3.中国药品生物制品检定所 ,北京　100050)
摘要:国家对中药的安全性越来越重视 ,对矿物药的炮制考证及研究尤为重要。青礞石为常用矿物药 ,为理清矿物药青
礞石的炮制方法 , 增强临床疗效及减少临床用药的安全隐患 , 该文通过查阅古代相关本草及现代专著等 , 分析考证青礞
石的炮制方法 , 表明历代本草文献中所记载的青礞石炮制方法与现代炮制方法基本一致。青礞石多煅制或火硝制 ,与目
前炮制方法相吻合。
关键词:矿物药;　青礞石;　炮制考证;　黑云母片岩;　绿泥石化云母碳酸盐片岩
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.12.111
中图分类号:R283　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)12-3262-03
TextualReseachofChineseMineralDrugLapisChloritiaboutProcessesofPreparation
LIUSheng-jin1 , WUDe-kang1＊ , KONGQing-you2 , LINRui-chao3
(1.NanjingUniversityofChineseMedicine, Nanjing210046, China;2.NanjingUniversity, Nanjing210046,
China;3.NationalInstitutefortheControlofPharmaceuticalandBiologicalProducts, Beijing100050, China)
Abstract:ObjectiveTostudyLapisChloritiaboutprocessesofpreparation.MethodsColcetandresearchmateriamedicaand
modernliteraturesindiferentperiodsrelatedtoitsprocessesofpreparation.ResultsTheprocessesofpreparationaboutLapis
Chloritirecordedinmateriamedicabasicallyconformtothemodernones.ConclusionProcessesofpreparationaboutLapisChlori-
timostlybymeansofcalcineorsaltpetreconformtothemethodsatpresent.
Keywords:Mineraldrug;LapisChloriti;　Textualreseachonprocessesofpreparation;　BiotiteSchist;　MicaCarbonate
SchistbyChloritization
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 12期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.12