全 文 ：Drug Standards of China 2016，Vol. 17 No. 3 中国药品标准 2016 年第 17 卷第 3 期 171
作者简介:刘佳，副主任药师;研究方向:药品质量控制。Tel:13543244914;E-mail:84099921@ qq． com
·论 著·
山芝麻质量标准研究
刘佳，古炳明1，成佳玲2(1． 广东省梅州市食品药品监督检验所，梅州 514071;2． 广东省嘉应学院医学院，梅州 514000)
摘要 目的:提高山芝麻质量标准。方法:采用薄层色谱法对山芝麻中的 β-谷甾醇进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定
齐墩果酸含量。结果:薄层色谱斑点清晰，专属性强;齐墩果酸进样量在 0. 20 ～ 2. 54 μg范围内线性关系良好(r = 1)，平均回
收率为 99. 26%(n = 6)，其 ＲSD为 1. 08%。结论:所建方法简便、准确，重复性好，可用于山芝麻的质量控制。
关键词:山芝麻;质量标准;β-谷甾醇;齐墩果酸;薄层色谱法;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ 921. 2 文献标识码:A 文章编号:1009 － 3656(2016)－ 3 － 171 － 4
Study on the Quality Standard for Ｒadix Helicteris
Liu Jia1，Gu Bingming1，Cheng Jialing2(1． Meizhou Institute for Food and Drug Control，Meizhou 514071;2． Medical College of Jiaying U-
niversity，Meizhou 514000)
Abstract Objective:To improve the quality standard of Ｒadix Helicteris. Methods:β-Sitosterol was identified by TLC and the con-
tent of oleanolic acid was determined by HPLC. Ｒesults:The TLC spots developed were fairly clear and specific. As to the HPLC
method，a good linearity was shown in the range of 0. 20 － 2. 54 μg for oleanolic acid(r = 1)，the average recovery rate was 99. 26%
(n = 6)with ＲSD of 1. 08% . Conclusion:The established methods are simple，accurate and repeatable，and can be used for the quali-
ty control of Ｒadix Helicteris.
Key words:Ｒadix Helicteris;quality standard;β-sitosterol;oleanolic acid;TLC;HPLC
山芝麻为梧桐科植物山芝麻 Helicteresangusti-
folia L. 的干燥根，因其果实形似芝麻而得名。据文
献报道［1-5］山芝麻主要含有山芝麻酸甲酯、山芝麻宁
酸甲酯、山芝麻宁酸、白桦脂酸、β-谷甾醇、齐墩果酸
等三萜化合物和山芝麻内醇及山芝麻醌等香豆素类
化合物，临床上多用于治疗感冒、咽喉炎、扁桃体炎、
非特异性肠炎等疾病，应用于复方感冒颗粒、复方岗
梅冲剂、复方土牛膝颗粒、喉乐冲剂、莲芝消炎胶囊、
莲芝消炎片等制剂。该品种《中国药典》1977 年版
一部有收载［7］，此后历版药典未收载。目前，山芝
麻收载于《广东省中药材标准》中，其质量标准〔鉴
别〕项中仅收载显微鉴别［7］，对此，我们建立了薄层
色谱鉴别和含量测定方法，以进一步完善其质量
标准。
1 仪器与试药
Agilent1100 高效液相色谱仪;AB204-N 型电子
分析天平(万分之一，梅特勒-托利多公司);Sartorius
BP 211D 电子分析天平(十万分之一，赛托利斯公
司);KQ-250DE型超声波清洗器(昆山市超声仪器
有限公司);硅胶 G 自制板(硅胶 G，青岛海洋化工
有限公司，批号 0140616;玻璃板 10 cm × 20 cm，涂
布厚度 0. 5 mm)。
β-谷甾醇对照品(批号 110851-201407)、齐墩果
酸对照品(批号 110709-201206)、山芝麻对照药材
(批号 121088-201103)均购于中国食品药品检定研
究院;乙腈、磷酸为色谱纯(天津市科密欧化学试剂
有限公司)，其他试剂为分析纯。
山芝麻药材均釆自广东省梅州市，经梅州市食
品药品监督检验所中药室陈繁华副主任中药师鉴定
为梧桐科植物山芝麻 Helicteresangustifolia L. 的干
燥根，样品批号按照采收日期分别编号:20150410，
20150420，20150425，20150801，20150815，20150820，
20150903，20150904，20150925，20151203，20151205，
20151210。
2 薄层色谱鉴别
取供试品粉末(过四号筛)2 g，加甲醇 20 mL，
1
中国药品标准 2016 年第 17 卷第 3 期 172 Drug Standards of China 2016，Vol. 17 No. 3
超声处理 30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇
1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取山芝麻对照药
材 2 g，同法制成对照药材溶液。再取 β-谷甾醇对照
品，加甲醇制成每 1 mL含 0. 5 mg的溶液，作为对照
品溶液。吸取上述三种溶液各 5 μL，分别点于同一
以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 G 薄层板上，以
石油醚(60 ～ 90 ℃)-乙酸乙酯(7 ∶ 1)为展开剂，展
开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105 ℃
加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药
材色谱和对照品色谱相应位置上，分别显相同颜色
的斑点(见图 1)。
1 ～ 3. 样品(批号 20151203，20150410，20150425) ;4. 山芝麻对照药
材;5. β-谷甾醇对照品
图 1 山芝麻的薄层色谱图
3 含量测定
3. 1 色谱条件与系统适用性试验
VP-ODS色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ;流
动相为乙腈-0. 1%磷酸溶液(70∶ 30) ;柱温 30 ℃;流
量 1. 0 mL·min －1;检测波长 210 nm;进样量 10 μL。
在该色谱条件下，齐墩果酸峰分离良好，理论板数按
齐墩果酸峰计算应不低于 4 000，色谱图见图 2。
3. 2 溶液的制备
3. 2. 1 对照品溶液 精密称取齐墩果酸对照品适
量，加甲醇制成每 1 mL含 0. 1 mg的溶液，即得。
3. 2. 2 供试品溶液 取供试品粉末(过四号筛)约
2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇 20 mL和
盐酸 4 mL，加热回流 4 h，放冷，滤过，用甲醇 20 mL
分次洗涤容器和残渣，合并洗液和滤液，蒸干，残渣
加甲醇溶解并转移至 10 mL 量瓶中，用甲醇稀释至
刻度，摇匀，滤过，即得。
3. 3 线性关系考察
分别吸取对照品溶液 2，5，10，15，20，25 μL，依
法进样测定。以进样质量浓度(X)为横坐标，峰面
积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归，
A. 齐墩果酸对照品;B. 供试品
图 2 HPLC色谱图
回归方程为 Y = 526. 27X － 3. 283(r = 1)。结果表
明:齐墩果酸进样量在 0. 20 ～ 2. 54 μg 范围内与峰
面积线性关系良好。
3. 4 精密度试验
取对照品溶液，依法连续进样 6 次，结果齐墩果
酸峰面积的 ＲSD为 0. 35%，结果表明仪器进样精密
度良好。
3. 5 重复性试验
取同一批供试品(批号 20150410)6 份，分别按
“3. 2. 2”项下方法制备供试品溶液，依法进样测定，
按外标法计算含量，结果样品中齐墩果酸的平均含
量为 0. 54 mg·g －1，其 ＲSD为 0. 44%。
3. 6 稳定性试验
取同一份供试品溶液，分别于放置 0，4，8，12，
24，48，60 h进样测定，结果齐墩果酸峰面积的 ＲSD
为 0. 75%，说明供试品溶液在 60 h内稳定。
3. 7 回收率试验
取已知含量的供试品(批号 20150410)约
1 g，精密称定，共取 6 份，各精密加入齐墩果酸对
照品 溶 液 (0. 104 0 mg· mL － 1)5. 3 mL，按
“3. 2. 2”项下方法制备供试品溶液，依法进行测
定，按外标法计算含量，结果见表 1。表明本法回
收率较好，方法可行。
3. 8 样品测定
分别取采集到的样品，按“3. 2. 2”项下方法制
备供试品溶液，依法进样测定，按外标法计算样品中
齐墩果酸的含量，结果见表 2。
Drug Standards of China 2016，Vol. 17 No. 3 中国药品标准 2016 年第 17 卷第 3 期 173
表 1 回收率试验结果
取样量
/ g
测得值
/mg
平均测得值
/mg
样品中含量
/mg
加入量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
ＲSD
/%
1. 000 9 1. 140 1. 090 0. 540 5 0. 551 2 99. 36
1. 040 0. 55 12
1. 006 5 1. 090 1. 080 0. 543 5 0. 551 2 97. 41
1. 070 0. 551 2
1. 041 2 1. 110 1. 110 0. 562 2 0. 551 2 99. 83
1. 110 0. 551 2 99. 26 1. 08
1. 012 5 1. 100 1. 100 0. 546 8 0. 551 2 100. 12
1. 100 0. 551 2
1. 003 4 1. 090 1. 080 0. 541 8 0. 551 2 98. 66
1. 080 0. 551 2
1. 025 8 1. 110 1. 110 0. 553 9 0. 551 2 100. 21
1. 100 0. 551 2
表 2 山芝麻样品中齐墩果酸含量的测定结果
批号 样品采收期 含量 /mg·g － 1
20150410 2015 年 4 月 0. 54
20150420 2015 年 4 月 0. 51
20150425 2015 年 4 月 0. 52
20150801 2015 年 8 月 0. 35
20150815 2015 年 8 月 0. 36
20150820 2015 年 8 月 0. 35
20150903 2015 年 9 月 0. 37
20150904 2015 年 9 月 0. 37
20150925 2015 年 9 月 0. 41
20151203 2015 年 10 月 0. 27
20151205 2015 年 10 月 0. 27
20151210 2015 年 11 月 0. 28
4 讨论
4. 1 β-谷甾醇是一种植物甾醇类成分，研究表明其
抗炎作用类似于氢化可的松和羟基保松泰，且无可
的松类药物的副作用;还具有类似阿司匹林(乙酰
水杨酸)的退热作用［8］。因此选用 β-谷甾醇作为指
标成分，同时增加对照药材建立山芝麻薄层色谱鉴
别。曾祥腾、文东旭、李金红等［9-11］对山芝麻药材及
其制剂进行了薄层色谱研究，我们在其基础上进行
了优化，调整了提取方法。结果表明，色谱斑点清
晰，阴性对照无干扰。
经方法学考察，试用不同厂家品牌的薄层板、点
样方式及薄层展开时温度及相对湿度的变化均对该
方法影响较小，说明本法有良好的适用性。
4. 2 刘卫国等［12］从山芝麻中分离出 6 种成分，其
中 3 种为已知化合物:β-谷甾醇、白桦脂酸和齐墩果
酸。为此，含量测定选择齐墩果酸为目标成分，从表
2 中可看出:春夏采收的比冬季采收的含量高;按照
本次测定结果，暂建议含量限度控制在每 1 g 含齐
墩果酸不低于 0. 20 mg 为宜，下一步应从山芝麻不
同产地、不同采收期等研究其含量。
试验对提取方式(超声提取、加热回流、索氏提
取)、提取溶剂(甲醇、甲醇加盐酸)及用量、提取时
间(1，3，4，5 h)进行了考察，最终确定采用甲醇 20
mL和盐酸 4 mL，加热回流 4 h作为供试品溶液的制
备方法。
4． 3 为了保证含量测定方法有良好的分离度、适当
的保留时间，试验考察了不同的流动相组成、比例
［甲醇-0. 1%磷酸溶液(70 ∶ 30)、乙腈-0. 1%磷酸溶
液(75∶ 25)、乙腈-0. 2%磷酸溶液(70 ∶ 30)等］及洗
脱方式，最终确定以乙腈-0. 1%磷酸溶液(70∶ 30)为
流动相。另外，更换 Agilent 1200 高效液相色谱仪、
Shimadzu LC-20AT高效液相色谱仪进行试验，测定
结果重现性好。试验还用蒸发光散射检测器进行检
测，结果稳定性和重现性不如用紫外光谱测定。更
换了不同厂家的色谱柱:SHIMADZU 色谱柱(VP-
ODS，4. 6 mm × 150 mm)、Agilent ZOＲBAX 色谱柱
(SB-C18，4. 6 mm × 250 mm) ，SHISEIDO 色谱柱
(C18，4. 6 mm × 250 mm) ，齐墩果酸均能达到良好
的分离。
4. 4 山芝麻具有抗病毒、抗乙肝病毒、抗炎镇痛、抗
脂质过氧化及护肝作用、抗 HBV 病毒、抗肝纤维化
等多方面的药理作用［1-2］。本文所建薄层色谱鉴别
和含量测定方法简便、准确，重复性好，可用于山芝
麻的质量控制，希望有助于山芝麻这一岭南习用草
药的开发利用。
参考文献
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(收稿日期:2015-12-30)
* 基金项目:山东省自然科学基金课题———中成药质量控制技术及相关品种质量标准研究(ZＲ2013HM074)
作者简介:王玉团，主管药师;研究方向:药品质量控制。Tel:0531 － 81216522;E-mail:wytuan@ 163． com
ＲP-HPLC-DAD法在复方黄柏液涂剂质量控制方面的研究*
王玉团，许丽丽，徐丽华(山东省食品药品检验研究院，济南 250101)
摘要 目的:针对复方黄柏液涂剂现行标准存在的缺陷，提高和完善其质量控制方法。方法:采用 ＲP-HPLC-DAD法建立复方
黄柏液涂剂中连翘、黄柏、金银花、蒲公英统一的液相色谱条件，通过与对照药材和对照品的谱图比较，进行色谱峰的来源归
属及连翘苷和盐酸小檗碱的含量测定。结果:复方黄柏液涂剂中存在与连翘、黄柏、金银花、蒲公英的对照药材以及连翘苷和
盐酸小檗碱对照品相对应的色谱峰，可以实现上述药材的定性鉴别及上述对照品的含量测定。结论:该方法简便、准确，是复
方黄柏液涂剂质量评价的一种合理、有效的技术手段。
关键词:反相高效液相色谱-二极管阵列检测;复方黄柏液涂剂;定性;定量
中图分类号:Ｒ 921. 2 文献标识码:A 文章编号:1009 － 3656(2016)－ 3 － 174 － 5
Ｒesearch on Quality Controlof Fufang Huangbaiye Tuji by ＲP-HPLC-DAD
Wang Yutuan，Xu Lili，Xu Lihua(Shandong Institute For Food And Drug Control，Jinan 250101)
Abstract Objective:Aiming at the defects of the existing standard Fufan Huangbai Tuji，improve and perfect the quality control
method. Methods:AＲP-HPLC-DAD method was adopted and uniform liquid chromatography analysis conditions for Forsythiae fruc-
tus，Phellodendri chinensis cortex，Lonicerae japonicae flos and Taraxaci herba in FufangHuangbaiye Tuji were established By compa-
ring the spectraof control medicinal herbs and reference materials，the source and attribution of chromatographic peaks were studied，the
contents of phillyrin and berberine hydrochloride were determined. Ｒesults:There were corresponding chromatographic peaks between
the stand and materials and FufangHuangbaiye Tuji，it can be used to distinguish the above medical materials and assay of phillyrin and
berberine. Conclusion:The method is simple and accurate，it is an effective technical means of quality evaluation for FufangHuangbaiye Tuji.
Key words:ＲP-HPLC-DAD;FufangHuangbaiye Tuji;distinguish;determination
复方黄柏液涂剂(复方黄柏液)主要由连翘、黄
柏、金银花、蒲公英和蜈蚣五味药组成，具有清热解
毒、消肿祛腐的功能，用于治疗骨髓炎、疮疡溃后、伤
口感染等，是临床应用较广泛的外用制剂［1-3］。现行
质量标准收载于 2015 年版《中国药典》一部，主要
质控项目有薄层色谱法鉴别连翘苷、连翘、盐酸小檗
碱、黄柏、金银花和蒲公英，高效液相色谱法分别测
定连翘苷和盐酸小檗碱的含量［4］。该质量标准相
对其他中成药标准而言比较完善，但在按照该标准
检验过程中，我们发现主要存在以下五个方面的问