全 文 ：地锦草水煎液对小鼠 IFN-γ的影响
陈福星 , 陈文英 , 褚景生 , 宫新城 , 钟秀会
(河北农业大学中兽医学院 , 河北 定州 073000)
中图分类号: S853. 9 文献标识码: B 文章编号: 0529-6005( 2007) 04-0046-01
地锦草为常用中药材 ,也是一种蒙药材和维吾尔
药材 ,在《内蒙古药材标准》和《中华人民共和国卫生
部药品标准维吾尔药材分册》均有记载。系大戟科植
物 ,一年生匍匐小草本 ,有白色乳汁 ,生于田野、路旁 ,
我国各地均有分布 [1 ]。在临床上主要用于治疗菌痢腹
泻 [2, 3 ] ,其针剂则用于治疗急性支气管炎和慢性支气
管炎 [4 ]。其单方用于治疗急慢性肝炎效果显著 [5 ]。具
有较好的保肝作用。在兽医临床上 ,薛志成 [6 ]用地锦
草复方治疗雏鸡白痢有效率达 92%。林家义 [7 ]用地锦
草治疗猪胃肠炎 ,疗效显著。但关于地锦草对机体非
特异性免疫的研究 ,文献未见报道。 本试验旨在通过
地锦草对小鼠γ-干扰素 ( IFN-γ)的影响以发现地锦草
对机体非特异性免疫的作用。
1 材料与方法
1. 1 地锦草 购自河北省定州市中药大药房 ,经河
北农业大学动物科技学院李树棠副教授鉴定为真品
后备用。
1. 2 供试动物 昆明系小鼠 200只 , 18～ 20 g ,雌雄
各半 ,购自河北医科大学实验动物中心 ,常规饲养 3
天 ,观察无异常备用。
1. 3 主要试剂 小鼠 IFN-γ ELISA试剂盒: 美国
T PI Inc.产品。 DG-3022A型酶联免疫吸附仪: 华东
电子管厂生产。
1. 4 方法 取小鼠 80只 ,随机分成 8组 ,每组 10只 ,
前 4组灌服生理盐水 0. 5 ml,连用 3天 ;后 4组灌服地
锦草水煎液 0. 5 ml,连用 3天 .于末次灌药后 10 min
给Ⅰ组、Ⅴ组分别腹腔注射生理盐水 0. 2 ml;Ⅱ组、Ⅵ
组分别腹腔注射大肠杆菌培养液稀释液 0. 2 m l;Ⅲ
组、Ⅶ 组分别腹腔注射沙门氏菌培养液稀释液 0. 2
m l;Ⅳ组、Ⅷ 组分别腹腔注射葡萄球菌培养液稀释液
0. 2 m l。 第 2天用眼科弯镊迅速摘除一侧眼球 ,既有
血液流出 ,收集血液 ,静置 ,取其血清 ,测OD值。
操作方法: ( 1)取出所需反应板 ,加入 100μl标准
品、血清于相应反应板孔中。 ( 2)轻轻混匀 30 s,封住
板孔 , 37℃孵育 20 min。 ( 3)甩尽板内液体 ,用洗涤液
洗涤反应板 (每孔内加入 350μl洗涤液 ) ,并除去水滴
(在厚叠吸水纸上拍干 )反复洗涤 5次。 ( 4)每孔加入
50μl Anti mouse IFN-γBio tin和 50μl mouse IFN-γ
HRP,轻轻混匀 30 s,封住板孔 , 37℃ 15 min。 ( 5)甩尽
板内液体 ,用洗涤液洗涤反应板 (每孔内加入 350μl
洗涤液 ) ,并除去水滴 (在厚叠吸水纸上拍干 )反复洗
涤 5次。 ( 6)每孔加入 50μl底物 A和 50μl底物 B,轻
轻混匀 10 s,室温避光温育 5 min。 ( 7)每孔加入 100μl
终止液 ,轻轻混匀 30 s; 30 min内在 450 nm处读 OD
值。以 OD值为纵坐标 ,以标准品浓度为横坐标 ,绘制
标准曲线。根据血清样品的 OD值可在标准曲线上查
出其浓度。
2 结果
通过试验 ,分别测得其 IFN-γ的含量 ,对其含量
进行均数显著性检验 ,结果表明: Ⅰ组Ⅴ组间、Ⅵ 组Ⅷ
组间比较差别有显著意义 ( P < 0. 05) , Ⅱ组Ⅵ 组间、
Ⅲ组Ⅶ 组间比较差别有极显著意义 ( P < 0. 01) ,详见
表 1。
表 1 地锦草对小鼠 IFN-γ(干扰素 )的影响 ( X-± S pg /μl)
组别 生理盐水 大肠杆菌 沙门氏菌 葡萄球菌
生理盐水对照组 ( 40只 ) Ⅰ 0. 23± 0. 08 Ⅱ 0. 28± 0. 02 Ⅲ 0. 26± 0. 07 Ⅳ 0. 32± 0. 05
地锦草水煎液 ( 40只 ) Ⅴ 0. 28± 0. 04* Ⅵ 0. 35± 0. 05* * Ⅶ 0. 30± 0. 03* * Ⅷ I0. 37± 0. 03*
* 表示与生理盐水对照组比较 ,差异显著 ( P < 0. 05) ; * * 表示与生理盐水对照组比较 ,差异极显著 (P < 0. 01)
3 讨论
IFN-γ主要来自活化的 T细胞、 NK细胞 ,属于
Th1型细胞因子 [8 ]。一方面 , IFN-γ可以活化 NK细
胞、Mφ、细胞毒 T细胞 ,使 NK细胞、Mφ、细胞毒 T细
胞具有杀伤活性 ,直接杀灭病原微生物 ;另一方面
收稿日期: 2005-04-04
作者简介: 陈福星 ( 1971-) ,男 ,讲师 ,硕士 ,从事预防兽医学教学
与研究。
通讯作者:钟秀会
IFN-γ可以活化 Mφ,产生 TN F-α。γ-干扰素 ( IFN-γ)
和肿瘤坏死因子在抗肿瘤方面的重要作用早已为人
们所熟悉 ,但同时 ,它在抗感染方面的作用也倍受青
睐。 在今天 ,感染性疾病虽非难以控制但仍有相当的
感染菌尤其是细胞内寄居的细菌、真菌、原虫等还时
而危机生命。 γ-干扰素 ( IFN-γ)在抗感染性疾病中 ,
可以增强机体的抗感染能力 ,大多学者认为这种抗感
染能力是通过单核巨噬细胞产生的 O-2 发挥对
胞内寄居的病原菌的杀灭作用 [9～ 11 ]。IFN-γ可以调
46 中国兽医杂志 2007年 (第 43卷 )第 4期 Chines e Journal of Veterinary M edicine
猪 /圆 /环 /病 /毒 /疫 /苗 /的 /研 /究 /进 /展
周绪斌 1, 2 , 许秀梅 1 , 张馨玉 1 , 赵亚荣 1
( 1.北京大北农集团动物医学研究中心 , 北京 海淀 100085;
2.西班牙海博莱生物大药厂股份公司北京代表处 ,北京 海淀 100086)
中图分类号: S858. 285. 3 文献标识码: B 文章编号: 0529-6005( 2007) 04-0047-02
猪圆环病毒 2型 ( PCV2)是引起猪断奶后多系统
衰竭综合征 ( PMWS)的主要病原。 自 1991年在加拿
大猪群中暴发以来 , PMWS给全世界养猪业造成了
巨大的经济损失。 PCV2还与增生性坏死性肺炎、母
猪繁殖障碍、猪皮炎与肾病综合征和猪呼吸道疾病综
合征相关 [1 ]。 据估计 , PCV 2相关性疾病 ( PCV D) ,主
要是 PMWS,在 2005年给欧洲造成的损失高达 6亿欧
元。 PCVD同样给我国养猪业造成了严重的经济损
失。到目前为止 ,对于 PCV D还没有特异性的疫苗用
于防制。 2005年欧洲兽医病毒学会于北爱尔兰召开
的“动物圆环病毒和相关性疾病”国际会议介绍了有
关猪圆环病毒疫苗的研究和试验进展 [ 2 ] ,本文将就会
议中 PCV 2疫苗研究以及部分田间试验概况以及其
他有关疫苗研究进展做一综述。
1 病毒的基因组结构与功能 PCV首先发现于受
收稿日期: 2006-04-10
作者简介:周绪斌 ( 1972-) ,男 ,助理研究员 ,博士 ,从事动物传染
病诊断与防治以及兽医生物制品研发工作
污染的猪肾传代细胞系 PK-15,不产生细胞病变 ,是
一种小的无囊膜二十面体对称病毒 ,基因组为单股
环状 DNA,全长约 1. 76kb[3 ]。其中源自污染 PK-15细
胞的 PCV,对猪无致病性 ,称为 PCV1,而引起 PMWS
的 PCV称为 PCV2。在 PCV中发现的至少 6个开放阅
读框架 ( O RF)中 , O RF1编码的两种复制酶蛋白
( Rep, Rep′)参与病毒复制 , ORF2编码核衣壳蛋白
( Cap) ,是病毒主要的免疫原性蛋白 ,最近鉴定出
PCV 2的 ORF3,编码一种小分子量蛋白 ,与 PCV 2诱
导的细胞凋亡作用相关 [4 ] ,其他 ORF的功能现在还
不清楚。
2 试验疫苗的种类 采用昆虫细胞表达的 PCV 2
O RF1和 ORF2亚单位试验疫苗显示对猪有保护作
用 [ 5]。此外 ,采用 PCV 2基因表达质粒作为 DNA疫苗
给小鼠或猪接种试验能够产生 PCV 2蛋白抗体 ,显示
出一定的应用前景 [6, 7 ]。最近 ,国内部分学者也利用病
毒载体进行 PCV 2试验疫苗的 研究 , 如采用
腺病毒载体表达 ORF2接种小鼠产生 ELISA抗体
节抗原的呈递和淋巴细胞的增殖与分化 ,可作用于抗
原呈递细胞 ( APC) ,如血管内皮细胞和巨噬细胞 ,使
其Ⅱ类 MHC分子表达增强 ,从而增强 APC对局部
CD
4+
T细胞抗原呈递效率 ,这是一种重要的诱导
DTH反应的放大机制 [ 11]。 IFN-γ还能活化多种细胞
产生 NO, NO调节着多种免疫活性介质 ,如 TN F、
PGE2、 IL、 IFN等的合成与分泌 ,从而更为广泛的影
响机体的免疫功能。另外 , IFN-γ对单核细胞浸润炎
症部位的作用是增进它排除抗原的能力 ,因为在所有
种类的测定中 , IFN-γ是最有效的激活巨噬细胞的
因子 ,也是 DT H最重要的介质 [12 ]。本试验是通过给
小鼠灌服地锦草水煎液 ,以期发现地锦草对小鼠
IFN-γ的影响 ,从结果可以看出地锦草水煎液可显著
增加小鼠血清 IFN-γ的浓度。 IFN-γ浓度的升高又可
以调节机体的免疫状态 ,提高抗感染的能力。
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